麻杏石甘汤对哮喘大鼠气道上皮STAT6和黏蛋白表达的调控

目的研究麻杏石甘汤对哮喘大鼠气道上皮STAT6及黏蛋白表达的影响,探讨其在哮喘中的作用及可能机制。方法将55只SPF级雄性SD大鼠随机分为5组：对照组（A组）、哮喘组（B组）以及高、中、低剂量麻杏石甘汤＋哮喘组（C组、D组、E组）。留取支气管肺泡灌洗液（BALF）,运用ELISA法检测其中IL-12、IL～13浓度;留取肺组织标本行HE染色观察气道炎症,免疫组化法检测STAT6表达,AB—PAS染色法分析气道黏蛋白表达。结果（1）麻杏石甘汤能降低哮喘组BALF中IL-13浓度,升高IL-12含量且高、中剂量组与哮喘组相比均有统计学意义（P〈0．05）。（2）麻杏石甘汤剂量依赖性减少哮喘组气道平滑肌及血管肌层增生,减少周围炎性细胞（嗜酸性粒细胞、淋巴细胞和中性粒细胞）浸润。（3）STAT6蛋白在哮喘大鼠各级气道上皮均有表达,麻杏石甘汤组STAT6含量高于对照组,且高、中剂量组STAT6表达较哮喘组显著降低（P〈0．05）。（4）哮喘组存在气道黏液高分泌,麻杏石甘汤组较对照组黏蛋白表达增多,但较哮喘组明显减少。结论麻杏石甘汤可能通过IL-13／STAT6／黏蛋白途径减轻哮喘大鼠炎症反应、气道黏液高分泌,为哮喘的临床治疗提供新的思路。     

麻杏石甘汤对咳嗽变异型哮喘大鼠IL-6/STAT3信号通路及TRPV1感受器的影响

【目的】探讨麻杏石甘汤对咳嗽变异型哮喘（CVA）大鼠的治疗作用及机制。【方法】将60只大鼠随机分为正常组,模型组,麻杏石甘汤低、高剂量组,麻杏石甘汤高剂量+信号转导和转录激活因子3(STAT3)激活剂Colivelin(Col)组,每组12只。除正常组外,其他各组大鼠采用腹腔注射卵清蛋白结合艾条熏蒸法构建CVA模型。对应治疗后,观察大鼠体征和咳嗽次数,肺功能仪检测气道阻力（RE）,Diff-Quik染色计数嗜酸性粒细胞（EOS）,苏木素-伊红（HE）染色法观察肺、支气管组织病理学特征,酶联免疫吸附分析（ELISA）检测肺组织单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量,Western Blot法检测肺组织白细胞介素6(IL-6)、STAT3、瞬时受体电位香草酸亚型1(TRPV1)蛋白表达水平。【结果】与正常组比较,模型组大鼠出现明显哮喘症状,肺组织可见炎性细胞浸润严重,支气管上皮细胞坏死、纤毛粘连、黏液多,RE,EOS数目,MCP-1、TNF-α含量,以及IL-6、STAT3、TRPV1蛋白表达水平均升高（P<0.05）;与模型组比较,麻杏石甘汤低、高剂量组...     

川芎嗪对哮喘大鼠Th2型细胞因子作用的研究

目的 探讨川芎嗪对哮喘大鼠白细胞介素-4（IL-4）、白细胞介素-13（IL-13）水平的影响及其防治哮喘的作用机制。方法 60只SD大鼠随机分为正常对照组、哮喘模型组、地塞米松组、小剂量及大剂量川芎嗪组、联合用药组，以卵蛋白致敏和激发制备大鼠哮喘模型，用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测支气管肺泡灌洗液（BALF）中IL4、IL—13的水平。结果 哮喘模型组BALF中IL-4、IL—13水平均高于正常对照组（P〈0．001）；地塞米松组和川芎嗪治疗各组均显著低于哮喘模型组（P〈0．001）；川芎嗪大剂量组和联合用药组降低IL-4和IL—13的作用与地塞米松组无显著性差异（P〉0．05）；川芎嗪大剂量组降低IL-4的作用与川芎嗪小剂量组无显著性差异（P〉0．05），川芎嗪大剂量组降低IL—13的作用优于川芎嗪小剂量组（P〈0．05）；BALF中IL-4和TL—13水平呈显著正相关（r=0．714，P〈0．01）。结论 川芎嗪通过抑制IL-4和IL—13的水平而抑制哮喘气道炎症。     

麻黄水提物对哮喘豚鼠气道炎症和气道上皮细胞STAT1信号传导影响

目的探讨麻黄水提物对哮喘豚鼠气道炎症和气道上皮细胞信号转录因子与转录活化因子1（STAT1）表达水平及其信号传导途径的调控作用。方法将36只豚鼠随机分为三组：哮喘组、麻黄煎剂组及生理盐水组（正常对照组）,每组各12只。用卵蛋白腹腔注射致敏及雾化吸入激发建立哮喘模型,给予麻黄水煎剂干预治疗。用ELISA法测定其支气管肺泡灌洗液（BALF）中白细胞介素-5（IL-5）浓度,用SABC免疫组化测定气道上皮细胞STAT1表达,同时观察BALF炎性细胞数及豚鼠肺组织病理学改变,分析其相关性。结果麻黄煎剂组豚鼠肺内炎症改变明显减轻,其BALF中白细胞总数、嗜酸性粒细胞数、IL-5浓度,明显低于哮喘组,两组比较差异有显著性,哮喘组BALF中IL-5含量与支气管上皮细胞STAT1表达均明显升高,且呈正相关关系,但麻黄煎刺组STAT1的表达与哮喘组比较差异无显著性。结论麻黄水提物对哮喘豚鼠气道炎症有明显的调控作用,其作用机制可能与抑制IL-5的表达和炎性细胞聚积有关,但麻黄不能有效抑制STAT1的表达和信号传导异常。     

神经生长因子及其受体在哮喘大鼠肺组织的变化以及对气道炎症的影响

目的：探讨神经生长因子（NGF）和其受体酪氨酸激酶受体A (trkA)和总神经营养因子受体( p75)变化对哮喘大鼠气道炎症的影响。方法：通过鸡卵蛋白致敏激发建立哮喘模型,并将32只SD大鼠随机分为4组：正常对照组、哮喘组、外源性NGF干预组（NGF组）及抗NGF抗体干预组（抗NGF组）。各组测定支气管肺泡灌洗液(BALF)总细胞及细胞分类计数,并行支气管肺组织切片HE染色观察病理改变;通过逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）半定量检测哮喘组和对照组肺组织NGF mRNA,4组肺组织trkA和p75 mRNA表达变化。结果：哮喘组与对照组比较,BALF总细胞计数、嗜酸性粒细胞（Eos）计数及淋巴细胞（Lym）计数显著增多（均P<0.001）,支气管肺组织炎症表现显著;肺组织NGF mRNA及trkA和p75 mRNA表达明显增强（均P<0.01）;哮喘组NGF mRNA与BALF细胞总数、Lym数呈正相关（均P<0.001）。NGF组与哮喘组比较,BALF总细胞、Eos及Lym计数均显著增多（均P<0.01）,支气管肺组织炎症表现更为显著,p75和trkA mRNA表达明显增强（均P<0.05）。抗NGF组与哮喘组比较,BALF总细胞、Eos及Lym计数显著减少（均P<0.001）,支气管肺组织炎症表现显著减轻,p75和trkA mRNA表达明显减弱（均P<0.01）。结论：致敏哮喘大鼠肺组织内NGF mRNA表达水平显著增高,并与气道炎症密切相关;NGF上调trkA和p75 mRNA表达,从而增强NGF的功能效应,共同参与哮喘的气道神经源性炎症。     

不同配比麻杏甘石汤对哮喘大鼠Th1／Th2类细胞因子分泌的影响

目的：观察不同配比麻杏甘石汤对哮喘大鼠Th1/Th2类细胞因子分泌的影响。方法：选取Wistar大鼠,随机分为正常对照组、哮喘模型组、地塞米松组、麻杏甘石汤1高剂量组（简称麻1组）、麻杏甘石汤2高剂量组（简称麻2组）。观察不同配比麻杏甘石汤对哮喘大鼠BALF中IL-4、IFN-γ水平及IL-4/IFN-γ比值比较、外周血中IL-4、IFN-γ水平及IL-4/IFN-γ比值比较、肺组织中IFN-γ、IL-4和内参照激动蛋白cDNA扩增后半定量和电泳结果的影响。结果：与哮喘模型组比较,不同配比的麻杏甘石汤组大鼠BAIF和外周血中IL-4水平下降（P〈0.05,P〈0.01）,效果与地塞米松组相似（P〉0.05）、IL-4/IFN-γ比值也相应降低,IFN-γ水平升高。麻杏甘石汤组大鼠RT-PCR结果显示,IFN-γmRNA表达水平明显高于地塞米松组的IFN-γmRNA（P〈0.05）,而地塞米松组IL-4 mRNA与正常组相比表达减少（P〈0.05）,与哮喘组相比IL-4 mRNA的表达明显减少（P〈0.01）。IFN-γmRNA的表达与正常组相比表达无明显差异（P〉0.05）,与麻杏甘石汤组相比IFN-γmRNA的表达明显减少（P〈0.01）。麻1、2高剂量组间比较无显著差异（P〉0.05）。结论：不同配比麻杏甘石汤可能通过抑制IL-4水平及提高IFN-γ水平,使Thl/Th2失衡得到一定程度的纠正,从而控制气道炎症,减缓哮喘发作。不同配比比较无显著差异（P〉0.05）。     

大鼠哮喘模型肺组织信号转导子和转录激活子4及mRNA的表达及其意义

目的 研究大鼠哮喘模型肺组织信号转导子和转录激活因子4（STAT4）蛋白及其mRNA表达的变化，探讨其在哮喘性气道炎症形成中的作用。方法 复制大鼠哮喘模型，采用免疫组织化学和组织原位杂交法检测哮喘组及对照组大鼠肺组织STAT4蛋白及其mRNA的表达。结果 STAT4蛋白及其mRNA在两组大鼠气道平滑肌细胞和肺细小动脉的血管平滑肌细胞及内皮细胞上均呈不同强度的阳性表达。对照组STAT4蛋白及其mRNA含量均高于哮喘组（均P〈0．01）。结论 哮喘大鼠气道平滑肌细胞、血管平滑肌细胞及内皮细胞STAT4蛋白及其mRNA的表达被抑制。     

金龙固本合剂对哮喘模型大鼠气道重塑及肺组织ET1、TFF2、IL-13表达水平的影响

目的 观察金龙固本合剂对哮喘气道重塑大鼠肺组织内皮素1(ET1)、三叶因子2(TFF2)及白细胞介素-13(IL-13)表达水平的影响,并探讨抑制气道重塑的机制。方法 将50只雄性大鼠随机分为中药低剂量组（A）、中药高剂量组（B）、地塞米松组（C）、模型对照组（D）、空白对照组（E）,共5组,每组10只。腹腔注射卵蛋白致敏液构建大鼠气道重塑模型,观察各组大鼠症状及肺组织病理学形态改变。Western blot法检测肺组织ET1,ELISA法检测各组大鼠支气管肺泡灌洗液（bronchoalveolar lavage fluid,BALF）上清液中TFF2含量,实时荧光定量Q-PCR法检测各组大鼠肺组织IL-13 mRNA表达情况。结果 各组大鼠肺组织ET1蛋白相对表达水平：与模型对照组比较,中药低剂量组ET1蛋白表达稍降低,中药高剂量组和地塞米松组ET1蛋白表达呈下降趋势,但差异均无统计学意义。各组大鼠BALF上清液中TFF2含量：与模型对照组比较,中药高剂量组和地塞米松组大鼠BALF上清液中TFF2含量显著降低（P<0.01）,中药低剂量组大鼠BALF上清液中TFF2含量呈一定下...     

芩荑合剂对哮喘大鼠STAT6表达的影响

目的：观察芩荑合剂对哮喘大鼠肺组织模型信号转导子和转录激活子（STAT6）蛋白含量及其mRNA表达影响,探讨芩荑合剂对支气管哮喘的作用机理。方法：用卵清蛋白建立大鼠哮喘模型,将48只SD大鼠随机分为正常对照组、哮喘模型组、地塞米松组、芩荑合剂低剂量组、芩荑合剂中剂量组、芩荑合剂高剂量组,其中正常对照组、哮喘模型组给予生理盐水灌胃,芩荑合剂高、中、低剂量分别按生药量5.4、2.70、1.35 g/（kg·d）灌胃,地塞米松按1.4 mg/（kg·d）灌胃,采集肺组织标本,分别采用实时荧光定量PCR（Realtime PCR）法和免疫组化法检测哮喘大鼠模型STAT6m RNA及其蛋白表达。结果：中、高剂量组STAT6 mRNA及蛋白表达较哮喘组显著减弱,有显著差异（P〈0.01）,与地塞米松组比较无统计学意义。结论：芩荑合剂通过降低哮喘大鼠STAT6蛋白含量以及减弱STAT6 mRNA在气道上皮细胞的表达,来干预气道炎症,从而达到治疗支气管哮喘的目的。     

咪喹莫特对小鼠哮喘模型气道炎症和STAT6表达的影响

目的：观察咪喹莫特对小鼠哮喘模型气道炎症和肺组织信号转导与转录激活因子1（STAT1）和STAT6表达的影响．方法：建立哮喘模型,自14d时雾化吸入OVA前0．5h,干预组分别雾化吸入咪喹莫特30min及ip地塞米松．OVA雾化结束后24h取左上叶肺组织做HE染色观察肺组织炎症改变;收集肺泡灌洗液进行细胞计数和分类;用免疫组化和West blot方法检测肺组织STAT1和STAT6的表达;用逆转录-聚合酶链反应半定量检测肺组织STAT1,STAT6,IL-4,eotaxin和IFN-1 mRNA表达水平．结果：①HE染色示地塞米松组和咪喹莫特组小鼠肺组织炎症程度较哮喘小鼠减轻．②哮喘组小鼠BALF中细胞总数及各种炎症细胞较正常组显著增加,咪喹莫特治疗组嗜酸性粒细胞、淋巴细胞比哮喘组明显减少（P〈0．01）．③STAT1和STAT6均在气道上皮细胞表达,哮喘组肺组织STAT1和STAT6表达较正常组增强,咪喹莫特组STAT1表达与哮喘组无明显区别,较正常组增加．④哮喘组小鼠肺组织STAT1,STAT6,eotaxin,IL-4 mRNA表达较正常组增强（P〈0．01）,IFN-γ mRNA表达减少,咪喹莫特组STAT1 mRNA表达与哮喘组无明显区别,STAT6,eotaxin和IL-4 mRNA的表达较哮喘组降低,较正常组增加,IFN-γ mRNA表达较哮喘组增加,但低于正常组．结论：雾化吸入咪喹莫特可在一定程度上减轻哮喘小鼠的气道炎症,抑制肺组织STAT6蛋白和mRNA的过度表达．     

原因不明复发性自然流产患者绒毛组织中STAT4和STAT6的表达

目的:探讨原因不明复发性自然流产(URSA)患者绒毛组织中STAT4和STAT6蛋白的表达.方法:采用免疫组化技术检测正常早期妊娠妇女(20例)和URSA患者(20例)绒毛组织中STAT4、STAT6蛋白的表达,并分析两者的相天性.结果:正常妊娠组和URSA组绒毛组织中STAT4和STAT6均呈阳性表达,主要表达于绒毛滋养细胞的胞质,胞核多数无明显着色.URSA组绒毛组织中sTAT4阳性信号平均灰度值(148.00±24.38)高于正常妊娠组的(116.75±9.26)(t'=5.730,P＜0.001).URSA组绒毛组织中STAT6阳件信号平均灰度值(121.50±7.98)低于正常妊娠组的(161.60±17.78)(t'=10.392,P＜0.001).URSA组和正常妊娠组绒毛组织中STAT4与STAT6的表达水平均呈负相关(r=-0.589,-0.647,P均＜0.001).结论:URSA患者绒毛组织中STAT4的高表达和STAT6的低表达可能诱导T辅助淋巴细胞1/2失衡,进而导致URSA的发病.     

人STAT4基因真核表达载体构建和在HEK293细胞中表达

目的 构建STAT4基因的真核表达载体,在人胚肾细胞系HEK293中表达.方法 设计引物、采用RT-PCR方法从人外周血单个核细胞中获得STAT4的cDNA全长序列,在PCR产物两端加上SalI和BamHI限制性内切酶识别序列,将pEGFP-C1载体和PCR产物用SalI和BamHI进行双酶切,将STAT4 cD-NA定向克隆到pEGFP-C1中,从而构建了重组质粒pEGFP-STAT4;经酶切和测序鉴定正确后,将pEGFP-STAT4体外转染HEK293细胞,瞬时表达带有GFP标签的STAT4融合蛋白;采用荧光显微镜技术和免疫印迹技术检测融合蛋白的表达.结果 RT-PCR扩增了2 247 bp的STAT4 cDNA全长,经测序分析与GenBank中已知序列一致;重组质粒pEGFP-STAT4转染HEK293细胞中,可检测到瞬时表达的GFP-STAT4融合蛋白.结论 成功构建重组质粒pEGFP-STAT4,在真核细胞HEK293中能被表达.     

哮喘大鼠血单个核细胞中STAT5b mRNA和IL-4 mRNA的表达及布地奈德的影响

目的研究哮喘大鼠血单个核细胞中信号转导和转录激活因子STAT5bmRNA和IL-4mRNA的转录表达及布地奈德(BUD)对其表达的影响。方法30只体重为140￣200g清洁级SD雌性大鼠,随机分为3组:哮喘组(A组)、BUD组(B组)、正常对照组(C组)。对血中嗜酸性粒细胞(EOS)计数;应用双抗体夹心ELISA测定血浆中IL-4和IFN-γ水平;采用SYBRGREENI荧光定量PCR法测定STAT5bmRNA和IL-4mRNA的相对含量。结果(1)A组血中单个核细胞STAT5bmRNA和IL-4mRNA的表达均高于B组和C组(P<0.01);B组与C组之间差异无统计学意义(P>0.05)(。2)STAT5bmRNA与IL-4mRNA的表达呈正相关(P<0.01),且两者的表达分别与血浆中的IL-4水平、EOS绝对值呈正相关(P<0.01),与血浆中IFN-γ水平呈负相关(P<0.01)。结论哮喘大鼠血中单个核细胞STAT5bmRNA和IL-4mRNA的表达增强且呈正相关;布地奈德可以下调STAT5bmRNA和IL-4mR-NA的表达,可能是其抑制哮喘气道炎症形成的重要机制之一。     

STAT4rs3024877单核苷酸多态性与ANCA相关性血管炎的关系

目的:分析STAT4rs3024877多态性与原发性中性粒细胞胞浆抗体（ANCA）相关性血管炎（AAV）易感性及肾损害病理特点的关联。方法:研究对象为2005年1月—2018年12月于广西医科大学第二附属医院就诊的AAV患者（AAV组,145例）和健康体检者（对照组,216名）,比较AAV组不同性别、基因型间实验室指标的差异。基因分型采取多重聚合酶链式反应-高通量测序（MPCR-HTS）的方法,比较两组间基因型、等位基因的分布频率差异。根据肾脏穿刺结果,分析不同基因型、等位基因与AAV患者肾脏病理类型的相关性。结果:AAV组中,女性比男性患者具有较低的白细胞（t=-2.00,P=0.04）、红细胞计数（t=-2.00,P=0.04）,较高的免疫球蛋白M水平（t=-1.99,P=0.04）。AAV组TT和CC基因型、T等位基因频率高于对照组,CT基因型、C等位基因频率低于对照组,分布差异均无统计学意义（基因型:χ2=0.764,P=0.682;等位基因:χ2=0.064,P=0.801）;AAV肾损害不同病理类型间的基因型、等位基因频率差异均有统计学意义（基因型:χ2=16.017,P=0.001;等位基因:χ2=14.306,P=0.003）,Logistic回归分析提示,T等位基因为新月体型（OR=7.273,95%CI:1.897~28.145,χ2=8.258,P=0.004）、混合型（OR=4.364,95%CI:1.060~17.961,χ2=4.165,P=0.041）的危险因素;TT基因型为新月体型（OR=16.000,95%CI:2.558~127.925,χ2=6.833,P=0.009）、混合型（OR=16.000,95%CI:2.001~17.961,χ2=4.165,P=0.041）的危险因素。结论:STAT4rs3024877基因多态性与AAV易感性不相关,与肾损害病理类型关联。     

白细胞介素12促血管平滑肌细胞增殖的实验研究

目的 观察白细胞介素12/信号传导子及转录激活子4(IL-12/STAT4)信号途径激活对体外培养的人脐动脉平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMC)增殖的影响.方法 不同浓度(2.5、5、10和20ng/mL)IL-12刺激后,用MTT法、Hoechst 33258染色法观察VSMC增殖和凋亡情况,RT-PCR、Westernblot分别检测STAT4的mRNA表达和STAT4、磷酸化STAT4(P-STAT4)的蛋白表达变化.结果 IL-12呈剂量和时间依赖促VSMC增殖,同时抑制VSMC凋亡.RT-PCR 检测发现STAT4的mRNA表达随IL-12浓度增高而增加、Western blot检测发现STAT4、P-STAT4的蛋白表达随IL-12浓度增高而增加.结论 IL-12可促进VSMC增殖,该作用可能与激活IL-12/STAT4途径有关.     

探讨沉默信号转导与转录激活因子-4及细胞因子信号负调控因子-3对辅助性T细胞分化的影响

目的 探讨沉默信号转导与转录激活因子4(STAT4)及细胞因子信号负调控因子-3(SOCS3)后对白细胞介素(IL)-12及IL-4诱导的辅助性T(Tn)淋巴细胞分化中的影响以及对于Th1及Th2细胞亚群分泌细胞因子的影响.方法 以IL-12和IL-4分别诱导初始Th细胞(Th0细胞)分化为Th1或Th2细胞;通过RNA干扰技术分别沉默ThO,Th1和Th2细胞中的STAT4和SOCS3的表达,然后继续给予相应的IL-12或IL-4刺激培养细胞.采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和酶联免疫吸附分析(ELISA)分别检测Th1/Th2特异性细胞因子的mRNA及蛋白质的变化,通过比较沉默前后Th1/Th2细胞特异性细胞因子量的变化以评价沉默STAT4或SOCS3对于Th0细胞分化方向的影响以及对Th1/Th2细胞分泌细胞因子的影响.结果 沉默STAT4使Th0和Th1细胞的Th1型细胞因子明显减少,而Th0和Th2细胞的Th2型细胞因子增多;沉默SOCS3后,Th0,Th1和Th2细胞的Th1及Th2型细胞因子均无明显改变.结论 STAT4介导IL-12诱导的Thl分化、维持Th1细胞分泌细胞因子,并推测其可能具有直接抑制Th2分化的作用;而SOCS3在IL-12及IL-4诱导的Th0细胞分化中不具有关键性作用.     

STAT1和STAT2在磷脂酰乙醇胺诱导肝癌HepG2细胞生长抑制中的作用

目的探讨磷脂酰乙醇胺(PE)诱导肝癌HepG2细胞生长抑制中STAT1和STAT2的作用。方法实验以人肝癌细胞系HepG2为材料,分别设置了空白对照组、0.125、0.25、0.5和1 mmol/L PE处理组。应用MTT法检测细胞生长,荧光免疫组化检测细胞内STAT1和STAT2表达。结果与对照组相比,PE各处理组对HepG2细胞生长的抑制作用具有剂量依赖性,并可诱导STAT1和STAT2高表达,而AG490可以部分逆转PE的效应。结论 STAT1和STAT2参与了PE诱导HepG2细胞的生长抑制过程。     

STAT3与肿瘤个体化治疗

STAT3蛋白是一种重要的转录因子,由多种氨基酸组成,其结构中的主要功能部分是SH2结构域和DNA结合区.在多数人类肿瘤中都发现有STAT3蛋白的表达,尤其是激活状态的STAT3蛋白即磷酸化的STAT3(p-STAT3).p-STAT3在促进肿瘤细胞增殖、抑制肿瘤细胞凋亡以及促进肿瘤组织血管生成方面发挥巨大的作用,并且与肿瘤的临床生物学行为如肿瘤浸润深度、淋巴结转移及肿瘤细胞的耐药性等相关.文中就此进行综述,并讨论了STAT3在肿瘤个体化治疗中的地位.