mfn2基因转染对非酒精性脂肪肝细胞线粒体功能的影响

目的:研究线粒体融合蛋白基因2(mfn2)对非酒精性脂肪肝细胞线粒功能的影响。方法:利用脂质体lipofectamine2000将mfn2基因荧光表达载体(pEGFP-mfn2)转染肝细胞株L02,并采用油酸诱导L02建立非酒精性脂肪性肝细胞模型,RT-PCR及Western blotting检测细胞mfn2mRNA和蛋白的表达;荧光素酶ADP/ATP发光法检测各组细胞内ATP水平,荧光探针DCFH-DA测定细胞活性氧(ROS)生成水平;JC-1标记细胞线粒体,流式细胞仪检测线粒体跨膜电位(Δψm)的变化。结果:转染mfn2基因的L02可以稳定高表达mfn2mRNA及蛋白,转染后L02内ATP浓度及线粒体跨膜电位显著升高(P0.05),而ROS生成水平则显著下降(P0.05);经油酸诱导肝细胞脂肪变性后,L02mfn2表达受抑制,各组细胞内ATP浓度及线粒体跨膜电位均显著下降(P0.01),而ROS生成水平较前均显著升高(P0.01),但转染组细胞内ATP下降水平以及线粒体跨膜电位下降幅度均显著低于未转染组,而未转染组ROS升高程度则显著高于转染组(P0.01)。结论:外源性mfn2基因转染可以抑制油酸诱导的肝细胞内ATP浓度和线粒体跨膜电位的下降以及ROS生成的增加。     

新风胶囊对关节炎模型大鼠PTEN / PI3K / AKT 信号通路及血小板活化的影响

目的:观察新风胶囊对佐剂关节炎(AA)大鼠PTEN/PI3K/AKT通路及血小板活化的影响。方法:将大鼠随机分为正常对照(NC)组、模型对照(MC)组、PI3K阻滞剂LY294002(LY294002)组、新风胶囊(XFC)组,每组6只构建AA大鼠模型,每组给药30 d(NC、MC组给予等体积生理盐水),流式细胞术检测血小板微粒标志物,电镜观察血小板超微结构,ELISA法检测血清细胞因子水平,免疫组化、RT-qPCR法检测腹主动脉PDGF,免疫印迹法检测血小板细胞PTEN/PI3K/AKT蛋白变化。结果:电镜观察发现,NC组血小板超微结构完整,胞质α颗粒、线粒体均匀散在分布;MC组血小板结构破坏明显,欠规整,胞质α颗粒、线粒体显著减少;LY294002组血小板细胞外形不规整,少量伪足伸出,胞质可见α颗粒、线粒体分布; XFC组血小板呈椭圆形,状规整,胞质中α颗粒、线粒体较MC组明显增多。与NC组相比,MC组血小板活化物PMPs及血小板参数(PLT、PCT)显著升高(P0.01);血清VEGF、HIF-1α、TNF-α表达明显升高,ES、IL-10表达降低(P0.01);MC组腹主动脉PDGF及PDGF mRNA表达升高(P0.01);血小板细胞PI3K、AKT、p-AKT、BCL-2蛋白表达升高,PTEN、BAD蛋白表达降低(P0.01)。与MC组相比,LY294002组、XFC组PMPs、PLT、PCT、VEGF、HIF-1α、TNF-α、PDGF及血小板细胞PI3K、p-AKT、BCL-2蛋白水平显著降低,血清ES、IL-10水平及PTEN、BAD蛋白升高(P0.05或P0.01)。与LY294002组相比,XFC组血清TNF-α水平降低(P0.05)。结论:新风胶囊通过调节PTEN/PI3K/AKT信号通路平衡改善AA大鼠血小板活化。     

桔梗皂苷D介导PI3K/AKT/mTOR信号通路调控子宫内膜癌细胞株ECC-1增殖、侵袭和迁移

目的 探讨桔梗皂苷D介导磷酸肌醇-3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B(AKT)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR信号通路调控子宫内膜癌细胞株ECC-1增殖、侵袭和迁移作用。方法 将人子宫内膜癌细胞株ECC-1分为对照组,桔梗皂苷D低、中、高剂量组（9μmol/L、18μmol/L、36μmol/L）,PI3K抑制剂（PQR309）组（1μmol/L）,PI3K激动剂（IGF-1）组（100 mg/L）。培养48 h后,四甲基偶氮唑蓝、侵袭小室和划痕实验分别检测细胞增殖、侵袭和迁移活性;实时定量聚合酶链反应和蛋白免疫印迹法检测细胞PI3K、AKT、mTOR、c-Myc、细胞周期蛋白激酶6(CDK6)、E-钙黏蛋白（E-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）、锌指转录因子（Snail）信使核糖核酸（mRNA）和蛋白表达及p-PI3K、p-AKT、p-mTOR水平。结果 与对照组比,IGF-1组细胞侵袭细胞数和细胞划痕愈合率上升,PI3K、AKT、mTOR mRNA和蛋白表达及p-PI3K、p-PI3K/PI3K、p-AKT、p-AKT/AKT、p-mTOR、p-mTOR/mTOR水...     

槲皮素抑制鱼藤酮诱导的PC12细胞凋亡

目的: 探讨槲皮素对鱼藤酮诱导的PC12细胞凋亡的影响及其作用机制。方法: 运用鱼藤酮诱导损伤PC12细胞,经300 μmol/L槲皮素预处理后,观察细胞形态学改变,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blotting检测Bax和Bcl-2蛋白的表达,JC-1染色检测细胞线粒体膜电位,比较各组的差异。结果: 与鱼藤酮组相比,槲皮素加鱼藤酮处理组细胞形态明显改善,凋亡率降至6.3%(P<0.01),Bcl-2表达增加(P<0.01),Bax表达降低(P<0.01),线粒体膜电位上升(P<0.01)。结论: 槲皮素对鱼藤酮诱导的PC12细胞凋亡具有抑制作用,上调Bcl-2和下调Bax蛋白的表达,维持线粒体膜电位可能是其作用的机制之一。     

线粒体凋亡途径在槲皮素诱导U937 细胞凋亡中的作用研究

目的:观察槲皮素对人急性髓系白血病U937 细胞增殖、凋亡、线粒体膜电位(Δφm),、人B 细胞淋巴瘤因子- 2、人Bcl-2 相关X 蛋白、细胞色素c 表达及半胱氨酸蛋白酶鄄3、半胱氨酸蛋白酶鄄9 活性的影响,探讨线粒体凋亡途径在槲皮素 诱导U937 细胞凋亡中的作用。方法:体外培养U937 细胞,分别以0、10、20、40、80、160μmol/ L 浓度的槲皮素处理24、48 和 72 h,采用细胞计数试剂盒(Cell counting kit-8,CCK-8) 检测槲皮素对U937 细胞增殖的抑制作用;实验随机分为对照组 (Control)、槲皮素10、20 组和40 μmol/ L 组。采用流式细胞仪AnnexinV-FITC/ PI 双染法检测U937 细胞凋亡情况;采用荧光染 料3,3‘-二己基含氧碳菁碘代物[3,3‘-dihexyloxacarbocyanine iodide,DiOC6(3)]染色,流式细胞仪检测U937 细胞的变化; 采用Western blot 检测U937 细胞Bcl-2、Bax、Cytc 表达;采用比色法检测U937 细胞Caspase-3、Caspase-9 活性。结果:槲皮素可 抑制U937 细胞的增殖,抑制率显著升高,且呈时间-剂量依赖性。槲皮素亦可显著抑制U937 细胞凋亡率,与对照组比较(P< 0.01)。槲皮素显著降低U937 细胞驻鬃m,与对照组比较(P<0.01)。槲皮素显著下调U937 细胞Bcl-2 表达,上调Bax 表达,下 调Bcl鄄2/ Bax 比值及上调Cyt c 表达,与对照组比较(P<0.01)。槲皮素显著升高U937 细胞Caspase-3、Caspase-9 活性,与对照 组比较(P<0.01)。结论:槲皮素可显著抑制U937 细胞增殖,线粒体凋亡途径激活是槲皮素诱导U937 细胞凋亡的途径之一。     

千金藤素通过调控PI3K/AKT/mTOR信号通路诱导卵巢癌SKOV3细胞自噬

目的:研究千金藤素(cepharanthine)对人卵巢癌SKOV3细胞自噬的诱导作用,并探讨其可能的作用机制。方法:体外培养SKOV3细胞,CCK-8法检测cepharanthine(0、2、4、8、16和32μmol/L)对SKOV3细胞活力的影响;吖啶橙染色观察细胞酸性自噬泡;Western blot法检测cepharanthine作用后自噬相关蛋白LC3及PI3K/AKT/mTOR信号通路蛋白表达的变化。结果:Cepharanthine抑制卵巢癌SKOV3细胞活力,呈一定的剂量依赖关系(P0.05)。Cepharanthine能显著增加SKOV3细胞内酸性自噬泡数量。Western blot结果表明在8和16μmol/L的cepharanthine作用下,卵巢癌SKOV3细胞中LC3-Ⅱ蛋白表达水平显著升高(P0.01)。信号通路蛋白研究表明,cepharanthine显著降低p-AKT和p-mTOR的蛋白水平(P0.01),AKT和mTOR总蛋白水平均无明显变化。自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤可增强cepharanthine对SKOV3细胞活力的抑制作用(P0.01)。结论:Cepharanthine可诱导人卵巢癌SKOV3细胞自噬,其作用机制可能与抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路有关。     

白茅苷抑制AKT 的活化对宫颈癌细胞增殖、凋亡和线粒体膜电位的影响

目的:本文旨在研究白茅苷对宫颈癌细胞增殖、凋亡和线粒体膜电位的影响。方法:采用CCK-8法检测不同剂量白茅苷对宫颈癌SiHa细胞活力的影响,选用无显著毒性的0、25、50、100μmol/L剂量白茅苷将细胞随机分为四组,克隆形成法检测各组细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡;逆转录-聚合酶链反应检测Ki67、PCNA、Bcl-2/Bax mRNA水平;流式分选检测细胞线粒体膜电位的变化;蛋白免疫印迹检测AKT磷酸化情况;免疫荧光检测AKT的细胞定位情况。结果:与Imperatorin 0μmol/L组相比较,Imperatorin 50、100μmol/L组细胞增殖率显著降低(P0.05),凋亡率显著升高(P0.05),Ki67、PCNA、Bcl-2/Bax mRNA水平显著降低(P0.05),线粒体膜电位明显降低,p-AKT/AKT比值显著降低(P0.05),荧光表达显著降低(P0.05)。结论:白茅苷通过抑制AKT的活化抑制宫颈癌SiHa细胞增殖,促进细胞凋亡,降低线粒体膜电位。     

过表达SIRT1基因通过PI3K/AKT信号通路抑制高糖刺激心肌H9c2细胞凋亡和活性氧水平

目的:探讨过表达沉默信息调节因子1(SIRT1)对高糖刺激心肌H9c2细胞凋亡和活性氧簇(ROS)水平的影响。方法:分别用空载质粒(pcDNA3.1-NC)和SIRT1过表达质粒(pcDNA3.1-SIRT1)转染心肌细胞,并进行高糖诱导。实验分为对照组、高糖组、高糖+pcDNA3.1-NC组和高糖+pcDNA3.1-SIRT1组,用qPCR和Western blot法分别检测各组心肌H9c2细胞的SIRT1表达,噻唑蓝(MTT)法检测细胞的活力,流式细胞术检测细胞凋亡,DCFH-DA检测细胞内ROS水平,Western blot检测细胞中磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、磷酸化PI3K、AKT和磷酸化AKT的蛋白水平。结果:与对照组相比,高糖诱导的心肌H9c2细胞中SIRT1表达显著降低,细胞活力显著下降,ROS水平和细胞凋亡率增加,PI3K和AKT磷酸化蛋白水平下调(P0.05);过表达SIRT1可诱导高糖刺激的心肌H9c2细胞活力增加,ROS水平和凋亡率降低,PI3K和AKT磷酸化蛋白水平上调(P0.05)。结论:过表达SIRT1可通过调控PI3K/AKT信号通路逆转高糖刺激心肌H9c2细胞活力的降低及凋亡率和氧化应激的增加。     

天麻素保护过氧化氢诱导的神经元氧化损伤的研究

目的:探究天麻素对过氧化氢引起的神经细胞氧化损伤的保护作用及其作用机制。方法:培养SH-SY5Y细胞,并分为3组:对照组、氧化损伤组和天麻素处理组。用流式细胞术检测细胞凋亡率及细胞活性氧(ROS)水平,用ELISA检测细胞内超氧化物歧化酶(SOD)表达水平,用蛋白质免疫印迹实验检测细胞内PI3K、AKT磷酸化水平。结果:过氧化氢处理引起细胞凋亡率升高,胞内ROS平上升,SOD表达下调以及PI3K、AKT磷酸化水平下降;天麻素处理后可以显著抑制过氧化氢引起的细胞凋亡、ROS水平上升及SOD表达下调,并缓解氧化损伤对PI3K/AKT磷酸化的抑制作用。结论:天麻素通过激活PI3K/AKT信号通路保护过氧化氢诱导的神经细胞氧化损伤。     

人参皂苷Rg1介导PI3K/AKT/FOXO3通路缓解高糖诱导的肾小球系膜细胞氧化应激反应

目的 探究人参皂苷Rg1通过PI3K/AKT/FOXO3通路对高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞氧化应激反应的调控作用。方法 首先将细胞分为对照组、HG组、低浓度Rg1组(HG+20 ng/ml Rg1)、中浓度Rg1组(HG+50 ng/ml Rg1)、高浓度Rg1组(HG+100 ng/ml Rg1),通过MTT法、Hoechst 33258染色和Western blot分别检测Rg1对高糖作用下HBZY-1细胞存活率、凋亡率和凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、caspase-3、caspase-9表达的调控作用。其次,通过试剂盒检测Rg1对高糖作用下HBZY-1细胞中氧化应激标志物ROS、MDA、SOD、Gpx浓度的影响。并通过Western blot检测在Rg1作用下,PI3K/AKT/FOXO3通路中各蛋白的磷酸化及表达情况。最后,验证在AKT被抑制的情况下Rg1对高糖作用下HBZY-1细胞的调控作用。结果 与对照组相比,HG组中细胞存活率、Bcl-2表达量、SOD、Gpx含量显著下降(P0.05),而凋亡率、Bax、caspase-3、caspase-9的表达量、ROS、MDA含量显著上升(P0.05);与HG组相比,低、中、高浓度Rg1组中细胞存活率、Bcl-2表达量、SOD、Gpx含量显著上升(P0.05),而凋亡率、Bax、caspase-3、caspase-9的表达量、ROS、MDA含量显著下降(P0.05)。其次,与HG组相比,低、中、高浓度Rg1组细胞中抑制剂之后,与HG组相比,HG+MK-2206组中p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT比值显著下降(P0.05),而FOXO3蛋白表达量显著升高(P0.05)。最后,与HG+MK-2206组相比,HG+Rg1+MK-2206组中p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT比值显著升高(P0.05),而FOXO3蛋白表达量显著降低(P0.05)。结论 人参皂苷Rg1可以通过活化PI3K/AKT/FOXO3通路缓解高糖对HBZY-1细胞的诱导作用,减少HBZY-1细胞的凋亡,并缓解氧化应激反应。     

天麻素对乙醇诱导肝细胞株L02细胞损伤的影响

目的:探讨天麻素对乙醇诱导肝细胞株L02损伤的影响。方法:将人肝细胞株L02培养,加入不同浓度的乙醇,采用MTT比色法确定乙醇作用的浓度。用流式细胞仪测定细胞活性氧簇(ROS)及线粒体膜电位的改变;采用反相高效液相色谱(RP-HPLC)分析法检测细胞ATP含量。结果:乙醇(25 mL/L)作用36 h可损伤肝细胞,细胞内ROS的水平明显增加;而细胞线粒体膜电位及肝细胞中ATP的含量则显著降低(P0.01)。天麻素具有减轻细胞损伤的作用,并可降低损伤的肝细胞内ROS的含量,增加细胞线粒体膜电位和ATP的水平。结论:天麻素可抑制乙醇诱导的肝细胞损伤及脂质过氧化反应,改善线粒体功能,增加能量合成,发挥保护肝细胞的作用。     

过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活因子1β对乳腺癌干细胞干性表达的调控北大核心

背景:研究表明,过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活因子1β(peroxisome proliferator-activated receptor gamma coactivator 1beta,PGC-1β)通过PI3K/AKT/mTOR信号通路影响乳腺癌细胞的增殖、迁移及凋亡。而PGC-1β能否通过PI3K/AKT/mTOR信号通路影响乳腺癌干细胞的干性及其影响机制还不清楚。目的:探究PGC-1β对乳腺癌干细胞干性的影响及调控机制。方法:将PGC-1β空载体、过表达载体(Lv-PGC-1β)、干扰载体(Sh-PGC-1β)分别转染乳腺肿瘤MCF-7细胞,荧光显微镜观察转染效果;qRTPCR及Western blot验证慢病毒转染后PGC-1βmRNA和蛋白的相对表达。在干性培养基中分别培养未转染组、PGC-1β空载体组、PGC-1β过表达组及PGC-1β干扰组的MCF-7细胞使其成为乳腺癌干细胞,显微镜下观察并记录干细胞球体的形成过程,Western blot验证干性标志物(ABCG2、ALDH1、OCT4)、上皮-间充质转化标记物(E-Cadherin、N-Cadherin、Vimentin、Slug和ZEB1)及PI3K/AKT/mTOR通路核心蛋白的相对表达。结果与结论:①MCF-7贴壁细胞经干性培养基培养形成了折光性好、中间密度高的致密球干细胞;②乳腺癌干细胞干性蛋白的表达明显高于其贴壁细胞(P<0.01);③与未转染组、空载体组相比,PGC-1β过表达组乳腺癌干细胞的形成时间缩短,细胞球体数目增多、球体直径增大(P<0.01),而PGC-1β干扰组细胞球体数目减少、球体直径减小(P<0.01);④PGC-1β过表达组干性相关蛋白的表达高于未转染组、空载体组(P<0.01),上皮-间充质转化相关蛋白E-Cadherin表达低于未转染组、空载体组(P<0.01),而N-Cadherin、Vimentin、Slug和ZEB1的表达高于未转染组、空载体组(P<0.01);PI3K/AKT/mTOR相关蛋白及其磷酸化相关蛋白表达高于未转染组、空载体组(P<0.01),PGC-1β干扰组结果则与PGC-1β过表达组相反;⑤结果提示,PGC-1β能够通过激活PI3K/AKT/mTOR信号通路影响乳腺癌干细胞上皮-间充质转化,从而促进乳腺癌干细胞的形成及干性相关标志物的表达。     

细胞外半胱氨酸/胱氨酸氧化还原电位对NAFLD肝细胞线粒体功能的影响

目的:研究细胞外半胱氨酸/胱氨酸氧化还原电位(EhCys/Cy SS)对非酒精性脂肪肝(NAFLD)肝细胞线粒体功能的影响。方法:用EhCys/Cy SS分别为0 m V(氧化)、-80 m V(正常)和-150 m V(还原)的氧化还原培养基培养肝细胞株LO2并采用油酸诱导细胞建立NAFLD模型。荧光探针DCFH-DA和Mito SOX分别检测细胞整体水平和线粒体活性氧簇(ROS)生成,使用apocynin(NADPH氧化酶抑制剂)和Mito Q10(靶向线粒体抗氧化剂)、rotenone(线粒体呼吸链复合体I抑制剂)和antimycin A(线粒体呼吸链复合体Ⅲ抑制剂)作用细胞检测线粒体复合体活性从而探究ROS的来源,JC-1检测细胞线粒体膜电位。结果:油酸诱导的NAFLD细胞模型使肝细胞内ROS增多,线粒体膜电位下降;氧化的EhCys/Cy SS加剧了NAFLD肝细胞ROS的生成以及线粒体膜电位的下降,而还原的EhCys/Cy SS能清除ROS并逆转线粒体膜电位的下降。线粒体ROS清除剂Mito Q10能显著地减少氧化的EhCys/Cy SS所增加的ROS,而apocynin效果不明显。Rotenone作用于细胞后,ROS的增长率与细胞外EhCys/Cy SS有关,氧化状态下ROS增长率最小且复合体I活性减弱,即氧化的EhCys/Cy SS能通过抑制线粒体复合体I增加ROS的生成。结论:氧化的EhCys/Cy SS能通过抑制线粒体复合体I,从而加剧NAFLD肝细胞ROS的生成,并使线粒体膜电位进一步下降,而还原的EhCys/Cy SS能减少高脂所致ROS生成并减轻线粒体损伤。     

PI3K/AKT/mTOR在姜黄素抑制食管癌细胞增殖中的作用

目的探讨PI3K/AKT/mTOR在姜黄素(Curcumin,Cur)抑制食管癌细胞(Ec-9706)增殖中的作用。方法食管癌Ec-9706细胞给予0、5、10和20μmol/L姜黄素培养24 h、48 h和72 h后,细胞计数CCK-8法检测食管癌Ec-9706细胞的存活率;流式细胞仪法检测Ec-9706细胞凋亡发生;Real-time法和Western blot法检测食管癌Ec-9706细胞中磷酸化蛋白p-PI3K、p-AKT、mTOR、NF-κB和cleaved-Capase-3 m RNA和蛋白表达水平。结果姜黄素可以显著抑制食管癌Ec-9706细胞的增殖和生长,显著降低Ec-9706细胞的存活率,促进食管癌Ec-9706细胞的凋亡,显著升高Ec-9706细胞的凋亡率,且呈时间剂量反应关系,差异有统计学意义(P0.05)。姜黄素可以显著降低食管癌Ec-9706细胞PI3K、AKT、mTOR m RNA表达和蛋白含量,显著升高NF-κB和cleaved-Capase-3m RNA表达和蛋白含量,且呈时间剂量反应关系,差异有统计学意义(P0.05)。结论姜黄素可有有效抑制食管癌细胞(Ec-9706)增殖,PI3K/AKT/mTOR信号通路在此过程中起到重要的调节作用。     

紫草素抑制非小细胞肺癌A549 侵袭和迁移能力

目的:肺癌是全球发生率和死亡率最高的癌症。本文旨在探索紫草素对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞A549运动能力的影响及其分子机制。方法:CCK-8检测细胞活力。Transwell分析细胞侵袭能力。划痕试验检测细胞迁移能力。蛋白印迹分析血管内皮细胞生长因子(VEGF)、基质金属蛋白酶14(MMP-14)、纤维连接蛋白(FN)、波形蛋白Vimentin、PI3K、pAKT和p53的表达。结果:紫草素可减弱A549细胞活力。与对照组相比,紫草素(20、50、100 mmol/L)组细胞侵袭和迁移能力明显降低(P0. 05)。紫草素(20、50、100 mmol/L)组VEGF,MMP-14,Fn和Vimentin的表达明显低于对照组(P0. 05)。与A549组相比,PI3K/AKT通路激活剂IGF-1组PI3K和p-AKT表达升高,p53表达减弱(P 0. 05)。与IGF-1组相比,紫草素(20、50、100 mmol/L)组PI3K和p-AKT表达降低,p53表达升高(P0. 05)。结论:紫草素可通过PI3K/AKT信号通路抑制NSCLC细胞A549侵袭和迁移能力。     

尿酸对大鼠肾细胞线粒体损伤及Pgam5/Drp1表达的影响

目的:探讨尿酸干预大鼠肾细胞对其线粒体损伤及磷酸甘油酸变位酶家族成员5(Pgam5)和发动蛋白相关蛋白1(Drp1)表达的影响。方法:0. 6 mmol/L尿酸干预大鼠肾细胞NRK-52E,采用MTT法检测细胞活力,Hochest 33258染色观察细胞形态,流式细胞术检测细胞凋亡水平,透射电镜观察线粒体形态结构,免疫荧光染色观察Pgam5和Drp1阳性表达情况,RT-qPCR检测线粒体中Pgam5 m RNA的表达水平,Western blot检测细胞质基质中Pgam5和Drp1蛋白表达水平。结果:与正常细胞比较,尿酸干预组细胞活力显著降低,凋亡率显著升高,线粒体肿胀、空泡化,嵴断裂,线粒体中Pgam5的m RNA表达显著降低,而细胞质基质中Pgam5和Drp1的蛋白表达水平显著升高(P0. 01)。结论:尿酸可破坏肾细胞线粒体结构,上调细胞质基质中Pgam5/Drp1表达,诱导细胞凋亡。     

氯喹对人宫颈癌细胞系HeLa增殖、凋亡及自噬的影响

目的 探讨氯喹(CQ)对人宫颈癌细胞系HeLa增殖、凋亡及自噬的影响,并初步探讨其作用机制。方法 将HeLa细胞分为对照组(不加药物)和实验组(氯喹-1组至氯喹-5组,分别用25、50、75、100、150μmol/L CQ处理)。细胞均培养24和48 h; CCK-8法和集落形成实验检测细胞增殖;活性氧检测试剂盒检测细胞内ROS产生;流式细胞测量术检测细胞凋亡率。蛋白免疫印迹检测自噬蛋白p62、LC3和Beclin1,凋亡蛋白Bax、Bcl-2和PARP以及PI3K/AKT/MDM2通路蛋白的表达水平。结果 CQ呈时间和浓度依赖性抑制细胞增殖(P<0.05);CQ显著抑制细胞自噬活性,诱导胞内ROS的产生,诱导细胞凋亡(P<0.05)。与对照组相比,CQ可明显抑制PI3K/AKT/MDM2信号通路的激活(P<0.05)。结论 氯喹可能通过PI3K/AKT/MDM2通路抑制人宫颈癌HeLa细胞的增殖,诱导细胞凋亡。     

PTTG抑制PI3K/AKT信号通路诱导皮肤鳞状细胞癌细胞凋亡的机制

目的探讨垂体肿瘤转化基因(pituitary tumoRtransforming genes,PTTG)对皮肤鳞状细胞癌细胞活力、凋亡及PI3K/AKT信号通路的影响。方法将设计合成的PTTG特异性siRNA(si-PTTG)转染人皮肤鳞癌细胞系A431(si-PTTG组),无干扰作用siRNA(NC组)及未转染的空白细胞(空白组)作为对照组,LY294002作为PI3K/AKT信号通路的抑制剂。通过MTT法、Annexin V-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒及ROS检测试剂盒分别检测细胞活力、凋亡率和ROS含量。Western blot法检测PTTG、AKT、p-AKT、Cyclin D1和Bax蛋白表达。结果si-PTTG转染A431细胞后,PTTG表达明显降低(P<0.05)。与空白组比较,si-PTTG组和LY294002组细胞活力明显降低,凋亡率明显升高,si-PTTG组ROS含量明显升高,p-AKT和Cyclin D1蛋白表达明显降低,Bax蛋白表达明显升高(P<0.05)。A431细胞转染si-PTTG,并用LY294002处理,细胞活力明显低于LY294002组,凋亡率高于LY294002组(P<0.05)。结论沉默PTTG表达可抑制皮肤鳞状细胞癌细胞活力,诱导细胞凋亡,其机制与细胞ROS水平增高及PI3K/AKT通路抑制有关。     

槲皮素通过激活PTEN抑制PI3K/AKT及JNK信号通路诱导人乳腺癌细胞凋亡

目的 研究槲皮素对乳腺癌MCF-7细胞增殖活性以及对第10号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白同源物/磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B (PTEN/PI3K/AKT)和c-Jun氨基末端激酶(JNK)信号通路的影响。方法 采用CCK-8法检测(0、20、40、60、80、100)μmol/L槲皮素对MCF-7细胞增殖的影响;Hochesst33342染色观察细胞核数量以及核型的变化,流式细胞术检测细胞凋亡;免疫荧光细胞化学染色检测PTEN和磷酸化的JNK(p-JNK)表达,Western blot法检测PTEN、磷酸化的PI3K (p-PI3K)、p-JNK、磷酸化的AKT (p-AKT)蛋白水平;加入PI3K/AKT通路抑制剂LY294002处理后,再次采用以上方法检测对细胞凋亡和相关蛋白表达的影响。结果 随着槲皮素浓度的升高,细胞活性下降,细胞生长受到抑制,且具有浓度依赖性;细胞核浓缩增强、细胞凋亡增加;高浓度槲皮素显著增强PTEN蛋白表达和分布,降低p-PI3K、p-AKT蛋白水平,并抑制p-JNK蛋白的核表达。加入PI3K/AKT信号抑制剂LY294002处理细胞后,LY294002和槲...