雷帕霉素对DDC诱导小鼠原发性硬化性胆管炎的治疗效果研究

目的 探讨雷帕霉素对3,5-diethoxycarbonyl 1,4-dihydrocollidine(DDC)诱导的小鼠原发性硬化性胆管炎(PSC)的治疗作用,并探讨其潜在的作用机制.方法 将6～8周龄雌性C57BL/6J小鼠随机分为正常饮食组、DDC饮食(0.1％DDC)造模组和DDC造模+雷帕霉素(RAPA)治疗...     

雷帕霉素对中枢炎症小鼠学习记忆功能的影响

目的 评价腹腔注射雷帕霉素对中枢炎症小鼠学习记忆功能的影响.方法 C57雄性成年小鼠126只,随机分为对照组(C组,n=42)、LPS脑室注射组(L组,n=42)、雷帕霉素腹腔注射组(R组,n=42),L组、R组侧脑室单次注射2 μg脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)建立中枢炎症的学习记忆障碍模型,R组建模前3天每天给予腹腔注射雷帕霉素0.5 mg/kg,术后l,2,3天利用条件恐惧实验检测小鼠学习记忆功能,ELISA检测小鼠海马组织炎症因子IL-1β、TNF-α蛋白表达水平.结果 LPS侧脑室注射术后第1,2,3天,L组与C组比较,小鼠的僵直比下降(P＜0.01),R组与L组比较,小鼠的僵直比R组高于L组(P＜0.01);LPS侧脑室注射术后第1,2,3天,L组与C组比较,小鼠海马组织IL-1β、TNF-α含量明显升高(P＜0.01),但R组与L组比较,小鼠海马组织IL-1β、TNF-α含量升高程度低于L组(P＜0.01).结论 雷帕霉素可以抑制C57小鼠的中枢炎症反应,改善小鼠的学习记忆功能.     

雷帕霉素对哮喘小鼠CD4+CD25+调节性T细胞的作用

目的：建立哮喘小鼠动物模型并给予吸入雷帕霉素治疗,观察雷帕霉素治疗哮喘的效果及其对CD4+CD25+调节性T细胞（regulatory T cells,Treg）比例及扩增能力的影响,探讨雷帕霉素治疗哮喘的相关机制。方法：采用随机数字表法将30只雌性BALB/c 小鼠分成3组,每组10只,分别为：对照组、模型组和雷帕霉素治疗组。采用Underwood方法对小鼠肺组织进行评分;采用流式细胞术观察小鼠外周血和肺组织中CD4+CD25+Treg细胞比例;不同浓度（50、100 nmol/L）雷帕霉素处理小鼠CD4+ T细胞后,采用流式细胞术和RT-PCR方法分别检测CD4+CD25+Treg细胞形成比例和Foxp3 mRNA表达情况,观察雷帕霉素对小鼠的影响。结果：与模型组相比,雷帕霉素治疗能够显著改善小鼠肺组织病理评分情况;雷帕霉素治疗后,与模型组相比,外周血单个核细胞和肺组织中CD4+CD25+Treg均显著升高（P<0.01）;50、100 mol/L雷帕霉素处理小鼠CD4+T细胞后,CD4+CD25+Treg细胞比例分别为（7.47±1.84）%和（10.93±2.74）%,与对照组［（4.84±0.76）%］相比,雷帕霉素处理可显著促进CD4+CD25+Treg细胞增殖（P<0.01）;RT-PCR结果与流式细胞结果一致,雷帕霉素处理可显著促进CD4+T细胞中Foxp3的表达（P<0.01）。结论：雷帕霉素可能通过促进CD4+CD25+Treg细胞增殖,增加哮喘小鼠外周血和肺组织中CD4+CD25+Treg细胞比例,进而对小鼠哮喘发挥治疗作用。     

雷帕霉素对大鼠主动脉瓣膜间质细胞增殖的影响

目的利用雷帕霉素靶向抑制mTOR并探讨其对大鼠心瓣膜间质细胞增殖的影响。方法体外分离大鼠瓣膜间质细胞后 培养并鉴定;细胞随机分为两组：雷帕霉素组与对照组;MTT法检测并绘制大鼠瓣膜间质细胞用药前后的生长曲线;流式细胞 仪检测雷帕霉素对细胞周期的影响;RT-PCR 检测细胞中S6、P70S6K的mRNA表达水平;Western blotting 检测细胞中S6、 P70S6K、P-S6、P-P70S6K蛋白的表达水平。结果体外分离获得的大鼠瓣膜间质细胞分离培养成功;对照组细胞活性显著高于 加药组细胞（P<0.05）,加药组细胞生长变缓。流式细胞术检测发现加药组和对照组细胞的各周期占比均没有明显差别;加药组 细胞的S6蛋白与P70S6K蛋白的磷酸化水平降低（P<0.05）。结论雷帕霉素能抑制瓣膜间质细胞的增殖其原因,可能不是通过 改变细胞周期而是通过抑制mTOR后下调其靶蛋白S6和P70S6K的磷酸化水平引起的。     

林蛙油对哮喘缓解期模型小鼠气道炎症的影响

[目的]探讨林蛙油对哮喘缓解期模型小鼠气道炎症的作用及其可能机制.[方法]给予林蛙油小、大剂量组0.05,0.50g/kg林蛙油匀浆液.采用酶联免疫吸附法检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中白细胞介素(IL)-4,IL-5及γ-干扰素(IFN-γ)水平的变化,观察BALF中炎性细胞和肺组织病理学改变.[结果]与正常对照组比较,哮喘模型组小鼠BALF中炎性细胞计数、IL-4,IL-5水平均显著增高(P<0.05),IFN-γ水平显著降低(P<0.05).与哮喘模型组比较,林蛙油小、大剂量组小鼠BALF中炎性细胞计数、IL-4,IL-5水平均明显降低(P<0.05),IFN-γ水平显著增高(P<0.05).林蛙油小、大剂量组哮喘小鼠肺组织病理学改变明显减轻.[结论]林蛙油对哮喘模型小鼠具有保护作用,其机制可能与调节Th1/Th2平衡失调、减轻炎性细胞浸润有关.     

SB203580与雷帕霉素联合对人子宫内膜癌Ishikawa细胞的体外抗肿瘤作用

目的 观察体外P38MAPK信号通路抑制剂SB203580单独及SB203580联合mTOR(哺乳动物雷帕霉素靶蛋白)信号通路抑制剂雷帕霉素(Rapamycin)对Ishikawa细胞生长、细胞凋亡以及细胞侵袭能力的作用.方法 一定浓度梯度的SB203580单独或联合运用雷帕霉素,MTT(四甲基偶氮唑蓝)法检测细胞抑制牵、软琼脂克隆形成实验检测肿瘤细胞体外成瘤性、流式细胞仪检测细胞凋亡、Transwell法检测Ishikawa细胞体外侵袭力的改变.结果 SB203580对Ishikawa细胞有抑制生长、降低体外成瘤性、诱导凋亡和降低细胞侵袭能力的作用;在相同条件下,SB203580与雷帕霉素联合的抗肿瘤作用要明显优于SB203580单用.结论 SB203580与雷帕霉素可协同抑制人子宫内膜癌细胞Ishikawa的生长、诱导细胞凋亡,并同时抑制Ishikawa细胞的侵袭性,具有良好抗肿瘤前景.     

雷帕霉素对肥胖小鼠卵巢功能的影响

目的：研究雷帕霉素对母源性肥胖导致的卵巢功能异常的干预作用以及药物的安全性评估。方法：建立一种高脂饮食的雌性肥胖小鼠模型,然后随机分为注射雷帕霉素的处理组和注射PBS的对照组,24周后统计其排卵数目,收集卵母细胞进行纺锤体免疫荧光染色,以评估雷帕霉素对肥胖小鼠排卵功能及卵母细胞质量的影响,并通过蛋白免疫印迹分析和RT?qPCR分析检测卵巢相关基因在蛋白和mRNA表达水平的变化。结果：雷帕霉素处理的肥胖小鼠体重下降,其卵巢磷酸化核糖体蛋白（phosphorylated ribosomal protein 6,P?rps6）和磷酸化起始因子4E结合蛋白（phosphorylated 4E binding protein 1,P?4EBP1）的表达明显降低,且超排的卵母细胞数目与对照相比有增加趋势,但卵母细胞纺锤体染色结果显示卵母细胞质量无明显差异;处理后的卵巢肿瘤坏死因子（tumor necrosis factorα,TNF?α）的mRNA表达水平增加;血清中雌激素和促卵泡激素都无明显变化。结论：雷帕霉素有改善排卵功能的趋势,尚未发现对卵母细胞质量有明显影响,为未来研究雷帕霉素对肥胖女性生育力的影响提供了实验基础。     

雷帕霉素对胰腺癌PC-2细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨雷帕霉素(RPM)对体外培养的胰腺癌PC-2细胞增殖和凋亡的影响。方法以10～50 nmol/L不同浓度RPM处理PC-2细胞,四甲基偶氮唑盐法检测不同浓度、不同时间RPM处理后的PC-2细胞生长情况;AnnexinV-FITC/PI双标记染色,流式细胞术检测肿瘤细胞凋亡情况;反转录-聚合酶链反应方法检测mTOR mRNA表达。结果不同浓度的RPM作用于PC-2细胞0～96 h后,对PC-2细胞的生长有明显的抑制作用,呈时间和浓度依赖性;流式细胞仪检测结果显示,10～50 nmol/L RPM均能诱导不同程度的细胞凋亡,且10～30 nmol/L RPM组以早期凋亡细胞为主,随着RPM浓度的增高,晚期凋亡细胞明显增多;反转录-聚合酶链反应结果显示,与空白对照组相比,药物处理组mRNA相对表达量均有不同程度的抑制效应,而且随着RPM浓度增高,mTOR mRNA水平表达逐渐降低,RPM与mTOR mRNA表达间表现出较好的剂量依赖性关系(P<0.05)。结论 RPM可有效抑制胰腺癌PC-2细胞增殖,并诱导细胞凋亡,其作用机制可能与下调mTOR基因表达有关。     

阿奇霉素对哮喘小鼠气道炎症和Th2细胞因子的影响

目的观察不同浓度阿奇霉素对哮喘小鼠气道炎症细胞和辅助性T细胞2(Th2)型细胞因子IL-4、IL-5的影响。方法BALB/c小鼠40只随机分为5组:A组(哮喘模型组,8只)、B组(小剂量阿奇霉素治疗组,8只)、C组(中剂量阿奇霉素治疗组,8只)、D组(大剂量阿奇霉素治疗组,8只)、E组(正常对照组,8只)。A、B、C、D组小鼠于第1、13天分别给予卵清蛋白(OVA)20μg和氢氧化铝1mg的混悬液腹腔注射致敏,于第21～30天每天给予雾化吸入2%OVA生理盐水溶液建立哮喘模型,第14～30天,A组每天激发前30min给予生理盐水0.2ml腹腔注射作为阳性对照组,B、C、D组每天激发前30min分别给予阿奇霉素50、100、150mg.kg-1.d-1腹腔注射,均为每天1次。E组以生理盐水代替OVA致敏和激发。所有动物于第31天处死,收集支气管肺泡灌洗液(BALF),制备肺组织石蜡切片,用计数板检测BALF中炎症细胞总数及嗜酸性粒细胞(EOS)数,用酶联免疫吸附法(ELISA)检测BALF中IL-4、IL-5水平。结果A、B、C、D组的BALF中炎症细胞总数、EOS数及IL-4、IL-5水平较E组明显增高,HE染色显示A、B、C、D组支气管黏膜周围有EOS、淋巴细胞等炎症细胞浸润,EOS分别与IL-4、IL-5呈显著正相关。阿奇霉素可明显降低哮喘小鼠的气道炎症和IL-4、IL-5水平。结论阿奇霉素具有明显抗哮喘气道炎症的作用,可通过抑制Th2反应,减轻慢性气道炎症。     

瑞舒伐他汀抑制小鼠哮喘模型慢性气道炎症反应的实验研究

目的 评价瑞舒伐他汀对小鼠哮喘模型气道炎症反应的影响.方法 30只雄性BALB/C小鼠随机平均分为3组,即空白组（Control组）、卵清蛋白＋瑞舒伐他汀组（OVA＋ RUS组）和卵清蛋白组（OVA组）.在干预81天后处死小鼠获取支气管灌洗液（BALF）并使用ELISA测定IL-4、IL-5、IL-13和TNF-α含量,同时测定BALF中细胞总数、嗜酸性粒细胞、中性粒细胞、淋巴细胞和巨噬细胞数;并获得肺组织标本,进行HE染色和PAS染色及粘蛋白糖原表达测量.结果 HE染色发现,OVA致敏和激发81天后BALF中IL-4、IL-5、IL-13和TNF-α以及细胞总数、嗜酸性粒细胞、中性粒细胞、淋巴细胞和巨噬细胞数均明显增加（均P＜0.05）;同时小鼠肺组织出现明显的病理改变,且OVA组较OVA＋RUS组更加明显（均P＜0.05）.PAS染色和粘蛋白糖原表达分析发现,OVA干预后小鼠粘蛋白糖原表达明显增加,且OVA组较OVA＋RUS组增加更显著（均P＜0.05）.结论 瑞舒伐他汀可以减轻OVA诱导的慢性哮喘导致的气道炎症反应和气道粘液高分泌,为进一步临床应用奠定了基础.     

二甲双胍抑制哮喘模型大鼠气道重塑的研究

目的 观察二甲双胍对哮喘气道重塑的影响及其可能作用机制.方法 28只B/N大鼠随机分为对照组、哮喘组、二甲双胍干预组和雷帕霉素干预组;制备哮喘模型,以二甲双胍、雷帕霉素进行干预;末次激发48小时后测定大鼠气道阻力及气道反应性,收集肺组织标本,采用组织病理学方法观察气道炎症细胞浸润、气道壁杯状细胞增生、气道壁纤维化和重塑...     

早期应用孟鲁司特对哮喘小鼠气道炎症及气道重构的影响

目的观察早期应用孟鲁司特(MON)对支气管哮喘(简称哮喘)小鼠气道炎症及气道重构的预防作用。方法24只小鼠分为三组(n=8):鸡卵白蛋白(OVA)致敏/激发组(A组),生理盐水对照组(B组),MON治疗组(C组)。小鼠于第1和14 d以OVA致敏,从第一次致敏后第24 d开始雾花吸入2.5%OVA激发并持续18 d建立气道重构模型;于OVA激发前1 d开始应用MON(6 mg/kg)灌胃。观察三组小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)、外周血、骨髓灌洗液中嗜酸粒细胞(EOS)计数、上清液白细胞介素-5(IL-5)和γ干扰素(IFNγ-)水平的变化;同时对肺组织切片行苏木素-伊红(HE)、过碘酸雪夫(AB-PAS)及Masson三色染色,测定支气管壁周围EOS计数,定量杯状细胞百分比及黏液分泌评分,测定气道平滑肌增厚高度及胶原面积。结果经过反复抗原激发,A组小鼠BALF、外周血、骨髓EOS数分别为[(45.09±4.08)×104/mL]、[(2.41±0.31)×105/mL]、[(1.51±0.18)×106/股骨],B组分别为[(0.08±0.03)×104/mL]、[(0.62±0.09)×104/mL]、[(0.63±0.09)×106/股骨],两组比较差异有统计学意义(P均<0.01),A组BALF、外周血中IL-5水平分别为(57.86±2.72)pg/mL和(18.76±0.84)pg/mL,BALF中IFNγ-水平为(36.55±1.71)pg/mL,B组BALF、外周血中IL-5水平分别为(18.68±2.46)pg/mL、(12.11±0.51)pg/mL,BALF中IFNγ-水平为(64.53±5.72)pg/mL,两组比较差异均有统计学意义(P均<0.01);A、B组支气管壁周围EOS数分别为(912.12±65.97)个/mm2和(8.79±2.61)个/mm2,杯状细胞占上皮细胞百分比分别为(51.12±3.50)%和(1.92±0.67)%,黏液分泌评分分别为(3.48±0.12)分、(0.17±0.08)分,气道平滑肌增生分别为(25.99±0.89)μm2/μm、(13.06±0.60)μm2/μm,基底膜胶原沉积面积分别为(29.69±2.02)μm2/μm、(5.56±0.35)μm2/μm,两组比较差异均有统计学意义(P均<0.01)。C组早期应用孟鲁司特时BALF、外周血、骨髓EOS数分别为[(6.25±0.79)×104/mL]、[(0.71±0.11)×105/mL]、[(0.77±0.10)×106/股骨],A、C两组比较差异有统计学意义(P<0.01);C组BALF、外周血、骨髓中IL-5水平分别为(25.96±1.79)pg/mL、(13.14±0.55)pg/mL、(11.62±0.51)pg/mL,IFNγ-水平为(52.70±2.15)pg/mL,A、C两组比较差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01),C组支气管壁周围EOS数为(102.01±12.05)个/mm2,杯状细胞占上皮细胞百分比分别为(35.44±2.81)%,黏液分泌评分为(1.82±0.12)分,气道平滑肌增生分别为(14.33±0.6)μm2/μm,基底膜胶原沉积面积分别为(17.52±0.93)μm2/μm,A、C两组比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论早期应用孟鲁司特不但能抑制哮喘时气道炎症反应,并且能预防气道重构的发生。     

过氧化物酶增殖物激活受体γ在哮喘气道重构中的作用

目的探讨过氧化物酶增殖物激活受体γ(PPARγ)在哮喘小鼠气道重构中的作用。方法40只小鼠随机分为对照组、哮喘组、PPARγ激动剂组和PPARγ拮抗剂组。后三组以卵蛋白致敏激发建立慢性哮喘模型并按组别分别给予不同药物。以免疫组织化学、RT-PCR和Western blot技术检测PPARγ的定位及其表达水平,比较各组小鼠的气道炎症和重构的程度及其与PPARγ含量的关系。结果哮喘组支气管肺泡灌洗液(BALF)中炎症细胞计数和白细胞介素-4(IL-4)水平、肺组织中炎症细胞评分、杯状细胞百分数、气道平滑肌厚度和胶原纤维面积均较对照组明显提高。PPARγ激动剂能明显降低上述指标,而PPARγ拮抗剂则加重气道炎症反应,但对结构改变不明显。组织学发现实验组肺组织内有明显的PPARγ表达,主要分布于气道上皮细胞和炎症细胞。实验组PPARγ的转录水平较对照组明显增高(P<0.01);但各实验组间差异无统计学意义(F=0.609,P=0.551)。PPARγ激动剂能明显提高核内PPARγ的表达水平,而PPARγ拮抗剂则不影响其核内表达水平。在实验组内,核内PPARγ的表达水平与气道炎症评分、气道平滑肌厚度和胶原纤维面积呈负相关(r分别为-0.690、-0.726和-0.851,P均<0.01)。结论PPARγ激动剂能够抑制哮喘的气道炎症和气道重构。     

信号转导分子与支气管哮喘气道炎症

支气管哮喘(简称哮喘)是一种以气道慢性炎症为特征的异质性疾病.气道结构细胞和炎症细胞分泌的多种炎症介质和细胞因子的相互作用构成了一个复杂的网络,最终导致气道慢性炎症.信号转导通路中的关键分子在气道炎症反应中起着分子开关的作用,参与调控细胞内外的信息传递及气道炎症反应持续的时间和强度.探讨这些信号转导分子在哮喘气道炎症网络中的作用对于阐明哮喘发病机制、研发新型抗炎药物有着重要意义.     

生酮饮食对癫痫大鼠海马的保护作用及机制研究

目的探讨生酮饮食（KD）对戊四氮（PTZ）点燃大鼠海马损伤及哺乳动物雷帕霉素钯蛋白（mTOR）通路表达的作用机制。方法将55只雄性SD大鼠隔日腹腔注射PTZ制作癫痫动物模型直至完全点燃,另5只大鼠（空白对照组）腹腔注射0.9%氯化钠溶液。完全点燃后的44只大鼠随机分成4组,即正常食物（ND）+PTZ组、ND+PTZ+雷帕霉素（RAP）组、KD+PTZ组、KD+PTZ+RAP组,每组11只,均予侧脑室置管并再次给予隔日腹腔注射PTZ,共5次;其中ND+PTZ+RAP组、KD+PTZ+RAP组给药前30min侧脑室注射RAP,ND+PTZ组、KD+PTZ组予以等量人工脑脊液。观察并比较5组大鼠癫痫发作等级,海马区神经元密度,海马区pS6、S6、pAkt、Akt、pAMPK、AMPK的表达（采用Westernblot法检测）。结果KD+PTZ组大鼠癫痫发作等级明显低于ND+PTZ组（P＜0.01）;KD+PTZ+RAP组发作等级明显低于ND+PTZ组及ND+PTZ+RAP组（均P＜0.05）。海马CA1区神经元密度：KD+PTZ组明显大于ND+PTZ组（P＜0.05）,KD+PTZ+RAP组大于ND+PTZ+RAP组（P＜0.05）,ND+PTZ+RAP组大于ND+PTZ组（P＜0.05）。与空白对照组相比,ND+PTZ组pS6/S6、pAkt/Akt蛋白表达增加（均P＜0.05）,其余4组pAMPK/AMPK蛋白表达均增高（均P＜0.05）;与ND+PTZ组相比,KD+PTZ组pS6/S6、pAkt/Ak蛋白表达均降低（均P＜0.05）,pAMPK/AMPK蛋白表达增高（P＜0.05）;与ND+PTZ组相比,ND+PTZ+RAP组pS6/S6、pAkt/Akt蛋白表达均明显降低（均P＜0.05）;与KD+PTZ组相比,KD+PTZ+RAP组pS6/S6、pAkt/Akt蛋白表达明显降低（均P＜0.05）;与ND+PTZ+RAP组相比,KD+PTZ+RAP组pS6/S6蛋白表达明显下降（P＜0.05）,pAMPK/AMPK增高（P＜0.05）。结论KD具有抗癫痫发作、减少神经元丢失的作用,这种保护作用可能与其对mTOR通路的抑制有关,且其上游可能通过抑制Akt通路的磷酸化、激活AMPK通路的磷酸化来调节mTOR通路。     

鞘内注射雷帕霉素对小鼠神经病理性痛行为的影响

目的 探讨鞘内注射雷帕霉素对小鼠神经病理性痛行为的影响.方法 选择鞘内置管成功无运动障碍及严重体重减轻的成年雄性C57/BL6小鼠48只,随机分为两组:假手术组(sham组,n=24)和慢性坐骨神经损伤模型组(CCI组,n=24).建立模型后将各组随机分为3组,组-不做任何处理,组二在术后1～6 d鞘内注射雷帕霉素1μg/5μl,组三鞘内给予溶媒20％ DMS0 5μl(sham,sham+R,sham+V,CCI,CCI+R,CCI+V,n=8).在手术前1d,手术后1d,3d,5d,7d,10d,14 d,17d,21d,28 d检测小鼠双侧足底机械缩足阈值( Mechanical Withdraw Threshold,WMT)和热辐射缩足潜伏期(Thermal Withdraw Latency,TWL).结果 与sham组相比,CCI组小鼠手术侧足底MWT和TWL均明显降低[第7天,MWT:( 1.02±0.12)g,(0.42±0.12)g,F=51.01,P＜0.05;TWL:(7.03±0.71)s,(3.26±0.66)s,F=38.27,P＜0.05].而CCI后1-6d鞘内注射雷帕霉素1μg/5μL,使小鼠的MWT明显升高[第7天,(0.42±0.18)g,(0.86±0.25)g,F=6.56,P＜0.05],并且至少持续至术后10d.与之相对的,雷帕霉素对CCI小鼠的热痛觉过敏也有缓解趋势,但差异无统计学意义.sham组和对侧足底痛行为未见明显改变(P＞0.05).结论 鞘内注射雷帕霉素可以明显缓解CCI小鼠的机械痛觉异常,但对热痛觉过敏无显著作用.     

阿司匹林性哮喘的呼吸道炎症在其发病机制中的作用

阿司匹林性哮喘(aspirin—induced asthma，AIA)在呼吸道中表达5脂氧化酶(5-LO)的嗜酸性粒细胞和肥大细胞数增加；白三烯C4(LTC4)合成酶，半胱氨酰白三烯合成通路中的终端酶，在大部分AIA患者呼吸道活检组织中的过度表达等构成了AIA独特的呼吸道炎症，在一定程度上也阐明了AIA的发病机制。