小鼠卵母细胞的OPS法玻璃化冷冻保存技术

目的以小鼠卵母细胞为模型,利用开放式拉长细管(open pulled straw,OPS)法研究在不同条件下冷冻、解冻对其发育能力的影响,为家畜、濒危动物乃至人类探索一种简易、高效的卵母细胞冷冻保存提供理论与技术参考。方法在室温(25℃±0.5℃)条件下,以乙二醇(EG)、DMSO为主体抗冻保护剂配制成的玻璃化溶液(EFS、EDFS),采用OPS法对卵母细胞进行玻璃化冷冻保存。实验一:操作台温度分别为25℃±0.5℃和37℃±0.5℃时,卵母细胞在10%EG 10%DMSO或10%EG溶液中预处理30 s,移入EDFS或EFS中平衡15 s~45 s进行冷冻保存;实验二:操作台为37℃±0.5℃条件下,采用三种方法(卵母细胞在A:0.5 mol/L和0.3 mol/L的蔗糖中分别处理2 min和5 min;B:0.3 mol/L和0.15 mol/L的蔗糖中分别处理5 min和2 min;C:0.5 mol/L的蔗糖处理5 min)对EDFS30和EDFS40冷冻保存的卵母细胞进行解冻;实验三:解冻后的卵母细胞在SrCl2溶液中进行孤雌激活。结果与结论实验一中卵母细胞解冻后的形态正常率分别高达92.1%(25℃±0.5℃)和92.5%(37℃±0.5℃),均与对照组(98.9%)无显著性差异(P>0.05);实验二中卵母细胞解冻以C法效果最佳(形态正常率分别为92.5%和67.5%);实验三中解冻后在mCZB中培养0.5 h的卵母细胞激活效果优于未培养组(卵裂率和囊胚发育率分别为80.0%vs.57.7%;18.2%vs.0),均有显著或极显著差异(P<0.05或P<0.01);而培养组与新鲜对照组卵母细胞激活后卵裂率和桑椹胚发育率与对照组(80.0%vs.77.8%;52.8%vs.61.9%)均无显著性差异(P>0.05)。     

高浓度玻璃化冷冻剂对卵子冷冻复苏及发育潜能的影响

目的:探讨卵子暴露于高浓度玻璃化冷冻剂中的时间对卵子冷冻复苏及其后续发育潜能的影响.方法:收集79例未受精的成熟卵子290枚进行玻璃化冷冻及解冻,根据卵子在高浓度玻璃化冷冻剂中暴露的时间将其分为A组(147枚卵子,暴露时间10 ～20 s)及B组(143枚卵子,暴露时间40 ～50 s),比较两组卵子复苏率、受精率、卵...     

玻璃化冷冻人卵母细胞体外受精－胚胎移植9例临床分析

目的：探讨人卵母细胞玻璃化冷冻在体外受精－胚胎移植（ IVF-ET）中的应用效果。方法行IVF-ET 治疗、因取卵日男方因素无法进行受精的患者9例,对其成熟卵子进行玻璃化冷冻保存,解冻后进行卵胞浆内显微授精（ICSI）,记录卵子复苏、受精、卵裂及移植后妊娠情况。结果9例患者共解冻复苏58枚卵子,复苏率68．2％（58／85）;复苏后进行ICSI的成熟卵子中,受精40枚,形成胚胎34枚,受精率69．0％,卵裂率85．0％。7个移植周期共移植胚胎15枚,临床妊娠3例,临床妊娠率42．9％。结论人卵母细胞玻璃化冷冻可以获得一定的临床妊娠率,在IVF-ET中可作为临床治疗的选择之一。     

不同冷冻载体对小鼠成熟卵母细胞玻璃化冷冻的影响

目的:探讨玻璃化冷冻小鼠成熟减数第二次分裂中期(MⅡ期)卵母细胞的最佳冷冻载体及冷冻方法。方法:用乙二醇和蔗糖为玻璃化冷冻保护剂,将小鼠成熟MⅡ期卵母细胞分为冻融、暴露和对照组。冻融组分别采用普通麦管、封闭式拉细麦管(CPS)和开放式拉细麦管(OPS)作载体,采用玻璃化快速冷冻和快速复温的方法冻存小鼠成熟卵母细胞;暴露组卵母细胞仅暴露在冷冻和复苏液中,不进行冷冻;对照组卵母细胞不接触冷冻和复苏液。观察各组处理后卵子回收、受精、卵裂等情况。结果:冻融组普通麦管、CPS和OPS处理的卵母细胞回收率分别为92.0%、92.3%和72.3%,OPS处理卵母细胞的回收率显著低于普通麦管和CPS处理的卵母细胞(P<0.001);普通麦管、CPS和OPS处理的卵母细胞复苏存活率分别为43.5%、72.2%和76.5%,CPS和OPS处理卵母细胞的复苏存活率显著高于普通麦管组处理的卵母细胞(P<0.001)。冻融、暴露和对照组的卵裂率分别为38.6%、69.2%和73.5%,冻融组显著低于暴露和对照组(P<0.001)。结论:CPS法在玻璃化冷冻保存成熟的卵母细胞方面有价值。     

不同浓度冷冻保护剂乙二醇在人扩张囊胚玻璃化冷冻中的应用

目的研究不同浓度冷冻保护剂乙二醇(ethlene glycol,EG)在人扩张囊胚玻璃化冷冻中的应用。方法不同浓度EG 15%,30%,40%,联合15%二甲基亚砜(dimethylsulphoxide,DMSO),0.5 mol/L蔗糖(sucrose),采用两步法,利用改制半麦管为冷冻载体,玻璃化冷冻人扩张囊胚。比较解冻后囊胚存活率,扩张率及孵出率;并比较微吸管吹吸、辅助孵化针刺破胞膜辅助脱水及未辅助脱水对冷冻扩张囊胚的影响。结果由1原核(pronucleus, PN)发育而来的扩张囊胚玻璃化冷冻解冻后囊胚存活率15%EG组明显高于30%及40%EG组(P<0.05)。由2PN 发育成的扩张囊胚玻璃化冷冻解冻后囊胚孵出率15%EG组明显高于30%及40%EG组(P<0.05)。在冷冻过程中给予人工辅助脱水组解冻后囊胚孵出率明显高于未辅助脱水组(P<0.05)。微吸管吹吸组与辅助孵化针刺破胞膜辅助脱水组囊胚孵出率差异无显著性(P>0.05)。结论15%EG为人扩张囊胚玻璃化冷冻中有效和合适浓度。玻璃化冷冻中给予人工辅助脱水,能提高解冻后囊胚的发育潜能。     

冷冻载体对小鼠卵母细胞玻璃化冷冻效果影响的研究

目的探讨不同冷冻载体对小鼠卵母细胞快速玻璃化冷冻回收率、复苏率和解冻后胚胎发育潜能的影响。方法以小鼠卵母细胞为实验材料,以玻璃化冷冻方法冻存小鼠卵母细胞,分别以冷冻叶片（A）组、冷冻小钩（B）组、电镜铜环（C）组、自制冷冻叶片（D）组为冷冻载体冷冻小鼠卵母细胞,通过对解冻后卵子回收率、复苏率、卵子受精率及早期胚胎发育率等分析判断冻存效果。结果回收率D组明显低于其他3组,差异有统计学意义（P〈0.01）;D组与其他3组卵母细胞冷冻保存后卵子复苏率、胚胎受精率、继续发育潜能的比较,差异无统计学意义（P〉0.05）。结论 4种玻璃化冷冻载体都是小鼠卵母细胞快速玻璃化冷冻保存中可行的冷冻载体,自制叶片组的卵子回收率明显低于其他3组,需更进一步熟练叶片制作的技术和实验人员操作技能。     

人卵子玻璃化冷冻原因及其技术在辅助生殖中的应用

目的探讨人卵子玻璃化冷冻的原因及其技术在辅助生殖中的可行性和临床应用价值。方法回顾性研究2008年1月~ 2018年10月在南方医科大学南方医院生殖医学中心行卵子玻璃化冷冻的26例患者共27个取卵周期,分析卵子玻璃化冷冻原 因、卵子解冻后受精情况及临床妊娠结局。结果26例患者27个取卵周期共冷冻卵子274枚,卵子冷冻原因主要包括取卵日男 方精子数量及质量差无可用精子、男方处于各种疾病急性期不适宜取精及男方因各种原因未能到场取精等。共19个周期行卵 子解冻,该19个周期共冻存卵子217枚,解冻后存活176枚,卵子解冻存活率81.11%,其中131枚卵子解冻后行卵胞浆内单精子 注射,正常受精98枚,正常受精率74.81%;卵裂88枚,卵裂率89.80%（88/98）;共形成可移植胚胎53枚,其中优质胚胎36枚,优 质胚胎率36.73%（36/98）。15个移植周期共移植胚胎27枚,临床妊娠率为53.33%（8/15）,活产率为33.33%（5/15）。随患者年龄 增加,与<35岁组相比,≥35岁组患者卵子复苏率（82.76% vs 74.42%,P=0.211）、临床妊娠率（77.78% vs 16.67%,P=0.041）及活 产率（55.56% vs 0,P=0.044）均呈下降的趋势。结论卵子玻璃化冷冻可作为不孕夫妻取卵当日因男方因素不能提供精子患者 的临床补救措施;卵子玻璃化冻融后的受精率、临床妊娠率结局良好,卵子复苏率与年龄存在相关性,女性≤35岁者冻卵能够获 得满意的临床妊娠结局。     

小鼠卵母细胞玻璃化冷冻的研究

目的　对小鼠卵母细胞玻璃化的方法和冷冻液进行研究。方法　用两种玻璃化冷冻液EFS4 0 (高钠 )、DEFS4 0 (低钠 )对ICR、C57BL 6J小鼠卵母细胞进行冷冻 ,0 5mol L蔗糖液解冻 ,体外授精前对部分解冻后的C57BL 6J小鼠卵母细胞进行透明带切割。结果　DEFS4 0冷冻液冷冻效果明显高于EFS4 0冷冻液 ,ICR小鼠卵母细胞解冻后成活率达 75 2 %、体外授精率 (2 4 6 % )与对照组相比差异无显著性 ,C57BL 6J小鼠卵母细胞解冻后成活率为 87 1%、卵母细胞切割后体外受精率 (36 0 % )与对照组相比差异也无显著性。结论　冷冻液中钠离子浓度影响小鼠卵母细胞冷冻效果 ,用DEFS4 0 (低钠 )冷冻液进行玻璃化冷冻可以取得理想的冷冻效果。     

卵母细胞玻璃化冻融获成功妊娠1例

目的 探讨玻璃化冷冻方法在冷冻保存卵母细胞中的临床应用价值.方法 2015年3月在我中心行卵母细胞玻璃化冷冻1例,于2015年7月行玻璃化解冻,行卵胞浆内单精子注射受精,获得胚胎后进行移植和冷冻.结果 共冷冻13枚卵母细胞,解冻后存活12枚(92.3％),对12枚成熟卵母细胞行单精子卵浆内显微注射,9枚(75.0％)正常受精,8枚(88.9％)卵裂,再次解冻移植获单胎妊娠,现正在妊娠中.结论 玻璃化冻融卵母细胞是一种方便可行的方法,在特殊情况下发挥着不可替代的作用,可以获得临床妊娠.     

鼠成熟卵母细胞冷冻与复苏的实验研究

目的 探讨不同的植冰温度和冷冻保护剂中蔗糖浓度对小鼠MⅡ期卵子冷冻复苏后形态结构及发育潜能的影响.方法 共收集小鼠MⅡ期卵子372个,随机分为A、B、C三组冷冻.A组冷冻保护液含0.1 mol/L蔗糖,在-6℃植冰;B组冷冻保护液中蔗糖浓度同A组,在-7℃植冰;C组冷冻保护剂中蔗糖浓度为0.2 mol/L,在-7℃植冰.分别对冷冻复苏后的卵子进行质量评估、受精及胚胎培养,观察并比较其受精及卵裂情况.结果 MⅡ期卵子复苏后存活率以及优质卵率A组较B组好,但差异无统计学意义(P>0.05);A组卵子冻融后的受精卵卵裂率(82.35%)高于B组(38.46%),其差异有统计学意义(P<0.05);而受精率和优质胚胎率虽然A组高于B组,但无统计学差异(P>0.05).C组的卵子冻融后存活率(82.61%)、优质卵率(78.26%)、受精卵卵裂率(76.92%)均分别高于B组(68.24%,52.94%,38.46%),其差异有统计学意义(P<0.05);受精率和优质胚胎率C组与B组相比较无统计学差异(P>0.05). 结论 植冰温度升高不影响MⅡ期卵子的冻融效果,而且可能有助于保护卵子的发育潜能;在冷冻保护液中,0.2mol/L蔗糖浓度比0.1mol/L更适合于MⅡ期卵子的冷冻.     

不同人羊膜间充质干细胞冻存液冻存细胞效果比较

目的:筛选冻存人羊膜间充质干细胞效果较好的冻存液.方法:①不同配方的细胞冻存液对细胞冻存效果的影响.人羊膜问充质干细胞培养至第三代后分为10组,分别加入以下10种不同组成的冻存液.A组:70%DMEM/F12+20%胎牛血清+10%DMSO;B组:60%DMEM/F12+30%胎牛血清+10%DMSO;C组:40%DMEM/F12+50%胎牛血清+10%DMSO;D组:90%胎牛血清+10%DMSO;E组:70%DMEM/F12+20%胎牛血清+10%甘油;F组:60%DMEM/F12+30%胎牛血清+10%甘油;G组:40%DMEM/F12+50%胎牛血清+10%甘油;H:90%胎牛血清+10%甘油;I组:90%DMEM/F12+10%DMSO;J组:90%DMEM/F12+10%甘油.调整细胞密度为5×106mL-1,放入程序降温盒中,入-80℃低温冰箱保存.1个月后复苏,MTT法筛选出吸光光度值较高的一种冻存液.②相同血清含量细胞冻存液对细胞冻存效果的影响.含体积分数为50%胎牛血清的细胞冻存液分3组保存细胞.K组:45%DMEM/F12+50%胎牛血清+5%DMSO;L组:40%DMEM/F12+50%胎牛血清+10%DMSO;M组:35%DMEM/F12+50%胎牛血清+15%DMSO;复苏冻存的细胞后.将细胞按冻存前的数量调整至5×1O5mL-1,台盼蓝染色后,计算细胞的成活率.在倒置相差显微镜下观察细胞的生长状况.结果及结论:配方为45%DMEM/F12+50%胎牛血清+5%DMSO的冻存液冻存复苏人羊膜间充质干细胞后细胞的成活率最高(P<0.05);冻存复苏后细胞的生长状况较好.     

人类卵子改良程序化冷冻和玻璃化冷冻的比较研究

【】目的：研究两种冷冻方法对人类卵子冻融结果的影响。方法：分为程序化冷冻卵子与玻璃化冷冻卵子两组,对于卵子冻融后的复苏率、受精率以及优质胚胎率等指标进行比较。结果：程序化冷冻组卵子的复苏率(71.05%,108/152)显著低于(P<0.05)玻璃化冷冻组(81.75%,103/126),但优质胚胎率(41.07%,23/56)显著高于(P<0.05)玻璃化冷冻组(30.23%,13/53),而受精率、卵裂率及囊胚形成率无统计学差异。结论：玻璃化冷冻卵子可以获得较高的复苏率,但使用改良程序化冷冻试剂盒冻融卵子,可能较玻璃化冷冻获得更好发育潜能。     

解剖、生理和组胚学

060327两种玻璃化液冻存小鼠桑椹胚的研究/郑伏甫…∥生殖与避孕.—2005,25(8).—456～459,473将NIH小鼠优质桑椹胚,先用两种玻璃化溶液EDS-40(40%乙二醇 18%葡聚糖 0.5mol蔗糖)和EFS-40(40%乙二醇 18%聚蔗糖 0.5mol蔗糖)行毒性测试;再在20℃±5℃室温下,将小鼠桑椹胚分别加入到两种玻璃化溶液,玻璃化后装管并迅速投入液氮中,冻存2～3个月。各组均在25℃的水浴中复温,胚胎用解冻液(S-PBS)和培养液反复洗涤后移入含Ham s F12培养液培养48h,观察胚胎形态及发育。部分胚胎体外培养12～14h后行胚胎移植,观察妊娠及产仔情况。结果:两种玻璃…     

不同浓度保护剂及渗透平衡时间对慢速冷冻小鼠卵母细胞活力的影响

目的探讨不同的冷冻保护剂浓度、渗透平衡时间对小鼠卵母细胞冷冻后存活率及存活卵母细胞ICSI受精后胚胎发育潜能的影响。方法小鼠卵母细胞来自用HMG/HCG刺激的性成熟小鼠,依据预平衡液浓度,即1.0M或1.5M丙二醇(PROH),将卵母细胞分为A、B组,依据装载液蔗糖浓度(0.1、0.2、0.3M)的不同将A、B两组分为A1、A2、A3、B1、B2、B36组;依卵母细胞在平衡液中的渗透平衡时间不同(<10min、>20min)分为C、D两组;依装载液中的渗透平衡时间不同(<10min、>30min)分为E、F两组。卵母细胞在预平衡液中渗透平衡10~20min,在装载液中渗透平衡5~30min后进入慢速程序化冷冻并保存,快速解冻后观察卵母细胞存活率I、CSI受精率和优质胚胎形成率。结果A、B组间冻存卵母细胞存活率差异有非常显著性统计学意义(43.7%vs 23.5%);A2组的卵母细胞存活率最高(52.5%),A3组次之(42.9%);C、D两组间冻存卵母细胞存活率、透明带破裂率差异无统计学意义。E、F两组间存活率、透明带破损率差异有统计学意义(52.5%vs6.3%;6.6%vs 75.0%);新鲜组和冷冻组卵母细胞受精率、卵裂率、优质胚胎率差异均有统计学意义(81.8%vs 40%;77.3%vs 100%;90.9%vs 83.3%)。结论(1)在慢速冷冻中,平衡液较低的PROH浓度(1.0M)和装载液较高的蔗糖浓度(0.2M)有益于卵母细胞冻存存活率的提高。(2)小鼠卵在平衡液中的渗透平衡时间以10min为宜;在装载液中室温下的渗透平衡时间以5~10min为宜,最好不要超过15min。(3)冻存复苏后的存活卵经ICSI受精后受精率下降,但受精后胚胎的发育潜能似乎未受多大影响。     

玻璃化冷冻对小鼠窦前卵泡体外培养及卵子骨架的影响

目的分析玻璃化冷冻对小鼠窦前卵泡体外生长、发育及成熟后卵子细胞骨架的影响。方法超薄型开口拉细麦管(super open pulled straw,SOPS)玻璃化冷冻12~14日龄小鼠窦前卵泡,解冻复苏后,将卵泡移入α基础培养液(αmini mumessential medium,α-MEM) 10%胎牛血清(fetal calf serum,FCS) 0.075I U/mL卵泡刺激素 胰岛素-转铁蛋白-硒 10mI U/mL人绒毛膜促性腺激素(human chorionic gonadotrophin,HCG)中培养,隔日换一半培养液。第12d将卵泡转入α-MEM 10?S 1I U/mL HCG 5ng/mL表皮细胞生长因子,16~18h后收集卵子。免疫荧光技术测定卵子纺锤体和染色体结构。结果卵泡解冻后成活率为92.0%,卵泡体外生长速率、卵泡腔形成与新鲜卵泡相比均没有明显改变(P>0.05)。冷冻对卵泡成熟后卵子骨架和染色体没有显著影响(P>0.05)。结论SOPS玻璃化冷冻技术是一种高效可靠的卵泡冷冻方法。     

佛手茎尖玻璃化超低温保存和植株再生

目的 为佛手种质资源的保存提供一条新途径。 方法 对佛手茎尖进行了玻璃化超低温保存,并对保存后的茎尖进行微嫁接试验,获得再生植株。 结果 佛手茎尖在含5%DMSO和5%蔗糖的MS培养基上预培养48 h后,切取3～4 mm的茎尖,室温(25 ℃)下装载液(60%PVS2)预处理30 min,0 ℃下玻璃化液PVS2处理80 min,投入液氮保存24 h后取出,在40 ℃水浴快速化冻,室温下分别用1.2 mol/L蔗糖和MT基本培养基洗涤2次,每次10 min。保存后的茎尖经TTC法检测,成活率达81.25%;将茎尖嫁接到黑暗培养基的砧木上,再生率可达52.94%,且再生植株生长和分化正常,经PCR检测不含黄龙病病原。 结论 玻璃化超低温保存方法可用于佛手种质资源保存。     

玻璃化冷冻人成熟卵母细胞的临床应用

目的 探讨玻璃化冷冻在人成熟卵母细胞冻存中的临床应用效果.方法 运用cryoleaf进行人类成熟卵母细胞玻璃化冷冻保存,冻融后成功复苏的卵母细胞行胞质内单精子注射一胚胎移植(ICSI-ET),观察复苏后卵母细胞受精、卵裂以及生化妊娠、临床妊娠情况.结果 15例共81枚成熟卵母细胞冻融后进行卵胞浆内单精子注射或者体外受精-胚胎移植(IVF-ET),有69枚卵母细胞成功复苏.52枚卵母细胞受精,39枚卵母细胞卵裂,移植后4例患者获得临床妊娠.结论 玻璃化冷冻人成熟卵母细胞方便、快捷、成本低下、冷冻损伤小,有极大的临床应用价值.     

不同胚胎冷冻方法对人类早期胚胎解冻后的复苏效果及临床结局的影响

目的 比较玻璃化冷冻与程序化冷冻对人类早期胚胎解冻后复苏效果及临床结局的影响.方法 辅助生殖技术获取的剩余可利用人类胚胎2 884枚,其中采用玻璃化冷冻复苏666个周期,解冻胚胎1 516枚、复苏1 383枚、移植胚胎1 375枚;程序化冷冻复苏506个周期,解冻胚胎1 368枚、复苏1 090枚、移植1 077枚.比较两种方法的复苏效果及临床结局.结果 玻璃化冷冻组胚胎复苏率、胚胎完整率分别为92.02％、92.11％,高于程序化冷冻组的79.68％、69.63％(P＜0.05);两组种植率、临床妊娠率、周期取消率、多胎妊娠率、早期流产率、新生儿胎龄、早产率、新生儿出生体重、出生缺陷率比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 玻璃化冷冻较程序化冷冻有更高的胚胎复苏率及胚胎完整率,胚胎利用率高,两种冷冻方法的临床结局相似,适用于人类胚胎的冷冻.     

不成熟卵母细胞的体外成熟培养及玻璃化冷冻

目的 比较显微授精治疗周期中剩余的生发泡(GV)期不成熟卵母细胞的体外成熟培养及玻璃化冷冻效率.方法 将显微授精(ICSI)周期剩余的GV期卵母细胞随机分为3组:①在GV期玻璃化冷冻,解冻后进行体外成熟培养;②体外成熟培养至MII期后行玻璃化冷冻;③对照组:直接进行体外成熟培养(IVM).观察体外培养成熟卵母细胞及不同成熟阶段卵母细胞冷冻后的受精和发育潜力.结果 对照组的成熟率为71.6%(53/74),其中16枚行显微授精(ICSI),受精率为87.5%(14/16),卵裂率为85.7%(12/14),囊胚形成率为14.3%(1/7);组1与组2的存活率分别为97.5%(39/40)和87.5%(35/40),差异没有显著性;但是组1的成熟率28.2%(11/39)显著低于(P<0.01)对照组的成熟率71.6%(53/74);组2的受精率74.1%(20/27)与对照组的受精率87.5%(14/16)相比,差异没有显著性.结论 ICSI周期剩余的GV期卵母细胞能在体外培养成熟并具有良好的发育潜力,将GV期卵母细胞体外成熟培养至MⅡ期更适合于玻璃化冷冻保存.     

改良Hemi straw与Cryoleaf法对人卵和胚胎玻璃化保存效果的比较

目的比较改良的Hemi straw与Cryoleaf法对人卵子和胚胎的玻璃化保存效果。方法 将接受体外受精-胚胎移植周期中剩余的98枚未受精卵和76枚废弃胚胎，分别采用Cryoleaf(A组)与改良的Hemi straw（B组）为载体进行玻璃化冷冻，复苏后观察并计算两种玻璃化载体的卵子存活率，24?h继续存活率与卵裂率；胚胎存活率，24?h继续存活率及囊胚形成率。结果Cryoleaf与改良的Hemi straw法保存人未受精卵分别为43、55枚，复苏存活分别为29（67.4%）、31（56.4%）枚，24?h继续存活分别为23（53.5%）、25（45.5%）枚，卵裂分别为3（7.0%）、1（1.8%）枚，两种载体差异不明显（P＞0.05）。Cryoleaf与改良的Hemi straw法保存废弃胚胎分别为39、37枚，复苏存活分别为29（74.4%）、33（89.2%）枚，24?h继续存活分别为28（71.8%）、33（89.2%）枚，形成囊胚分别为5（12.8%）、1（2.7%）枚，两种载体差异不明显（P＞0.05）。结