真皮间充质干细胞治疗皮肤缺损创面的研究进展

大面积深度烧伤、严重创伤及外科手术切除体表恶性组织等均会造成体表皮肤组织的广泛缺损。在目前的临床医疗手段治疗后,创面虽然愈合,但丧失了皮肤的正常结构和外观,严重影响患者的生存质量。近年来,组织工程化人工皮肤的构建和应用为临床的大面积皮肤缺损的修复治疗提供了新的途径和方法。组织工程化皮肤的关键技术之一是种子细胞的选择,目前研究较多的种子细胞有骨髓间充质干细胞、表皮干细胞和真皮间充质干细胞（dermis-delved mesenchymal stem cells,DMSC）。本文就真皮间充质干细胞治疗皮肤缺损的研究进展作一综述。     

人工真皮支架早期修复特重烧伤手足深度创面

目的 与传统的切削痂自体中厚皮移植术相比,探讨切削痂人工真皮支架植入术+自体刃厚皮移植术修复特重烧伤患者手足深度创面的疗效.方法 选择2012年3月至2015年3月第二军医大学长海医院烧伤外科收治的有手足深度创面的特重烧伤患者作为研究对象.符合纳入标准的28例患者按手术方法不同分为两组,观察组(14例)在伤后第4～7天行四肢深度创面切削痂、生物敷料覆盖+手足创面切削痂、人工真皮支架植入术,伤后第21～28天行手足创面自体刃厚皮移植术;对照组(14例)在伤后第4～7天行四肢深度创面切削痂、生物敷料覆盖术,手足深度创面以保痂换药为主,第28～35天行手足深度创面切削痂自体中厚皮移植术.记录每次手术持续时间、植皮成活情况、皮片坏死的原因、供皮区愈合时间、能否再次供皮、随访手足瘢痕增生情况.结果 观察组第1次手术持续时间(h)与对照组比较差异无统计学意义[(4.50±0.76) vs(4.14±0.86),P＞0.05];第2次手术持续时间(h)少于对照组[(2.11±0.35) vs (3.39±0.49),P＜0.001].植皮术后第8天打开换药时,观察组皮片全部成活者占97.37％(37/38),创面出现感染者占2.63％(1/38);对照组皮片全部成活者占73.68％(28/38),部分成活者占23.68％(9/38),创面感染者占2.63％(1/38).观察组供皮区愈合时间(d)少于对照组[(6.07±0.83) vs(14.64±0.93),P＜0.001].经评估观察组可再次供皮者占78.57％(11/14),对照组可再次供皮者占14.29％(2/14,P＜0.05).随访1年,根据温哥华瘢痕量表评分(分)观察组手足瘢痕增生情况好于对照组[(5.07±1.21) vs (8.07±1.14),P＜0.001].结论应用人工真皮支架能早期修复特重烧伤手足深度创面,不需额外增添手术操作时间,植皮成活情况及远期活动功能可,对供皮区损伤小.     

脱细胞真皮联合骨髓间充质干细胞修复糖尿病大鼠皮肤全层缺损创面的研究

目的研究以骨髓间充质干细胞为种子细胞、脱细胞真皮为支架的组织工程皮肤对糖尿病大鼠皮肤全层缺损创面愈合的影响。方法 36只大鼠随机分为3组,A组：骨髓间充质干细胞＋脱细胞真皮实验组;B组：脱细胞真皮对照组;C组：空白对照组。观察创面愈合及5-BrdU阳性细胞表达角蛋白的表达情况。结果 A组第3、5、7及14 d创面愈合率分别为（19.10%±3.52%）、（29.80%±4.10%）、（56.71%±8.07%）与（88.12%±5.31%）,明显快于B、C两组（P〈0.05）。A组新生皮肤的细胞结合有序,排列紧密,真皮层较厚,有大量皮肤附属器及血管形成,明显多于B、C两组。免疫组化检测BrdU阳性细胞表达角蛋白。结论骨髓间充质干细胞联合ADM可有效促进糖尿病大鼠创面的愈合。     

大鼠真皮多能间充质干细胞的分离培养

目的 探讨发育成熟高等动物真皮组织中是否存在多能间充质干细胞,对其进行分离培养并初步研究其基本生物学性状。方法 以新生大鼠为研究对象,依据间充质干细胞的黏附特性采用酶消化法对其分离,通过传代培养进行筛选;流式细胞技术检测细胞周期,MTT法检测细胞对生长因子的反应性,免疫组织化学法检测细胞表达分子的表达。结果 早期贴壁的大鼠真皮细胞经过连续传代培养至第3代,细胞形态较为均一,超过88％的细胞处于G0／G1期,细胞表面波形蛋白表达阳性,但Ⅷ因子和角蛋白表达阴性;体外培养细胞增殖旺盛,对bFGF有良好反应性,但对EGF和KGF反应不明显;地塞米松诱导分化实验证实该细胞可向成骨细胞、软骨细胞和脂肪细胞分化,具有多向分化潜能。结论 本实验证实发育成熟大鼠真皮组织中存在多能干细胞,成功地分离得到真皮来源的间充质干细胞并通过其基本生物学特性进行了鉴定。上述结果提示真皮有可能是间充质干细胞的又一重要来源途径。这为深入研究真皮间充质干细胞在组织修复与再生中的意义与应用提供了基础。     

大鼠脂肪间充质干细胞向成肌细胞诱导分化的研究

目的探索在不使用5-氮杂胞苷的情况下,体外诱导大鼠脂肪间充质干细胞向成肌细胞的分化。方法取SD大鼠附睾处脂肪垫组织,酶消化分离获间充质干细胞,传至第3代,加入成肌细胞诱导液,在体外诱导8周,应用间接免疫荧光法、激光共聚焦显微镜进行成肌细胞的鉴定。结果大鼠脂肪组织来源的间充质干细胞经诱导5d后,显微镜下见细胞形态发生变化。2～8周的诱导细胞Myosin染色阳性。逆转录聚合酶链反应检测诱导3周的细胞有MyoD1和Myosin表达。结论大鼠脂肪组织来源的间充质干细胞在体外经诱导具有向成肌细胞分化的潜能。     

小鼠真皮间充质干细胞的体外培养和标记

【目的】分离、纯化新生小鼠真皮间充质干细胞（mdMSCs），在体外培养、鉴定并标记，为MSCs的细胞学治疗开拓实用、简便的纯化方法。【方法】采用低血清培养基，消化-贴壁-传代法体外培养mdMSCs，并对第3代mdMSCs从形态学、细胞生长曲线、流式细胞仪检测细胞周期和表面标记、细胞纯度等方面进行鉴定。CM—DiI红色荧光蛋白标记所获取的mdMSCs。【结果】培养的第3代mdMSCs细胞形态比较均一，主要为多角形、扯布状：生长曲线显示前5d mdMSCs细胞数呈指数递增，倍增时间约为22h，第7天后进入生长平台期；流式细胞仪检测大部分mdMSCs处于静止期（G0／G1期：87．25％）；第3代mdMSCs CD44^＋，CD29^＋双阳性细胞为92％；CM—DiI标记mdMSCs的细胞密度、大小与光镜下所见基本一致。【结论】组织消化-细胞贴壁-传代培养法能有效培养小鼠真皮MSCs，培养体系简便、稳定。红色荧光蛋白CM-DiI对mdMSCs细胞能进行有效的标记。     

小鼠真皮间充质干细胞的体外培养和标记

 [目的] 分离、纯化新生小鼠真皮间充质干细胞(mdMSCs)，在体外培养、鉴定并标记，为MSCs的细胞学治疗开拓实用、简便的纯化方法。[方法] 采用低血清培养基，消化-贴壁-传代法体外培养mdMSCs，并对第3代mdMSCs从形态学、细胞生长曲线、流式细胞仪检测细胞周期和表面标记、细胞纯度等方面进行鉴定。CM-DiI红色荧光蛋白标记所获取的mdMSCs。 [结果] 培养的第3代mdMSCs细胞形态比较均一，主要为多角形、扯布状；生长曲线显示前5天mdMSCs细胞数呈指数递增，倍增时间约为22小时，第7天后进入生长平台期；流式细胞仪检测大部分mdMSCs处于静止期（G0/G1期：87.25%）；第3代mdMSCs CD44＋, CD29＋双阳性细胞为92％；CM-DiI标记mdMSCs的细胞密度、大小与光镜下所见基本一致。[结论] 组织消化-细胞贴壁-传代培养法能有效培养小鼠真皮MSCs，培养体系简便、稳定。红色荧光蛋白CM-DiI对mdMSCs细胞能进行有效的标记。     

双层人工真皮移植在关节深度烧伤创面的早期修复效果

目的 探讨双层人工真皮早期应用于关节深度烧伤创面的治疗效果。 方法 选择40例伴关节部位深度烧伤的特重度烧伤患者作为研究对象,按治疗方式随机分为观察组和对照组（各20例）,观察组关节深度烧伤创面于受伤后3~5 d行切/削痂术后植入Lando双层人工真皮覆盖创面,待真皮血管化良好后去除硅胶层,植入自体刃厚皮片。对照组关节部位深度烧伤创面于伤后3~5 d行切/削痂术后自体刃厚皮片移植术。记录两组自体刃厚皮植入后7 d皮片成活率、21 d创面愈合率。创面愈合后指导康复性训练,统计关节部位水泡、疼痛、瘙痒发生率,随访并评估关节部位瘢痕增生及烧伤后患者生活质量。 结果 植皮术后7 d换药时,观察组皮片成活率高于对照组,术后21 d,观察组创面愈合率高于对照组,观察组水泡、疼痛、瘙痒发生率低于对照组,差异有统计学意义（P＜0.05）。随访12个月,根据温哥华瘢痕量表量表评分,观察组瘢痕增生情况好于对照组,根据BSHS-B评分,观察组烧伤后生活质量情况优于对照组,差异有统计学意义（P＜0.05）。 结论 双层人工真皮早期移植修复关节部位深度烧伤创面,植皮成活率高,创面不良事件发生率低,关节部位瘢痕增生不明显,烧伤患者生活质量高。     

骨髓和脂肪源多潜能间充质干细胞的比较研究

①目的比较骨髓源间充质干细胞和脂肪源间充质干细胞的生物学特性。②方法分离人的骨髓源间充质干细胞和脂肪源间充质干细胞进行体外培养，通过绘制生长曲线，比较细胞的增殖能力；利用流式细胞仪分析细胞表型，并与诱导培养比较细胞的分化潜能进行比较。③结果脂肪源间充质干细胞与骨髓源间充质干细胞具有相当的生物学特性，且在增殖能力方面优于骨髓源间充质干细胞。④结论人脂肪组织可能成为一种新的间充质干细胞来源。     

复合牙龈间充质干细胞的脱细胞真皮基质修复 SD 大鼠皮肤缺损实验

目的：：探讨牙龈间充质干细胞(GMSCs)复合脱细胞真皮基质(ADM)修复皮肤缺损的实验。方法：以纯化3代 GMSCs 作为种子细胞接种于 ADM,构建组织工程化皮肤替代物。实验分组：18只 SD大鼠随机分成3组：GMSCs 复合 ADM 移植组、单纯 ADM 组和空白对照组。将3组相应材料分别移植于 SD 大鼠背部皮肤缺损处,观察比较创面修复效果。结果：GMSCs 复合 ADM 移植组、单纯 ADM 组和空白对照组皮肤缺损创面愈合时间分别为(15.1±1.3)d、(18.5±2.1)d 和(22.6±2.6)d,差异有显著性意义(P <0.05)。组织学观察显示,GMSCs 复合 ADM 移植组成纤维细胞、新生小血管、胶原纤维均较单纯 ADM 移植组和空白对照组明显增多。结论：GMSCs 复合 ADM 移植构建组织工程化皮肤替代物移植后促进了新生血管形成、缩短了皮肤创面的修复。实验显示 GMSCs 作为种子细胞复合 ADM,移植构建组织工程化皮肤替代物可用于皮肤缺损的修复治疗。     

复合皮移植在关节部位深度烧伤中的临床应用

目的观察J-1型脱细胞异体真皮＋自体刃厚皮片（复合皮）移植治疗关节功能部位深度烧伤中的应用效果。方法我科近几年采用J-1型脱细胞异体真皮＋自体刃厚皮片复合移植治疗关节功能部位深度烧伤创面病人11例,其中包括颈部、手部、腕部、肘部、膝部、踝部共26处。结果11例病人26处部位通过复合皮移植,全部成活,无排异反应,创面收缩轻,外观平整,色素成着轻,质地较软,关节功能恢复良好,供区无增生疤痕。结论J-1型脱细胞异体真皮＋自体刃厚皮片复合移植修复深度烧伤创面不失为一种较理想的材料。     

保留变性真皮并移植大张自体皮的方法修复颈部深度烧伤27例

目的：回顾研究我院过去9年间27例颈部深度烧伤三种治疗方法的疗效。方法：自然愈合组,普通换药而愈;切除真皮植皮组,切除全层烧伤皮肤至正常组织,再移植自体大张全厚皮片或中厚皮片;保留变性真皮植皮组,用削痂或刮痂的方法,清除创面上的坏死组织,再移植自体大张断层皮片。结果：自然愈合组全部有不同程度瘢痕增生,严重影响外观及功能;切除真皮植皮组中移植全厚皮片的外观功能恢复较好,移植的中厚皮片收缩显著,外观功能恢复较差;保留变性真皮植皮组皮片收缩不明显,外观功能恢复较好。结论：用削痂时保留变性真皮并移植大张自体皮的方法修复颈部深度烧伤能够获得较好的临床效果。     

糖尿病大鼠深二度烫伤创面血管化现象

目的建立糖尿病大鼠深二度烫伤模型,研究创面愈合过程中血管化现象及其与创面愈合的关系。方法60只清洁级SD大鼠,随即分为正常组(对照组,n=30)和以链脲霉素(STZ)诱导的速发型糖尿病组(糖尿病组,n=30)。制备占总体表面积(TBSA)20%的深二度烫伤模型,分别取伤后1、3、7、10、14、21 d创面皮肤组织样本,行组织学观察并计算创面愈合率;荧光显微镜下观察创面组织的血管化;免疫组化法检测创面组织中CD31抗原表达,以了解微血管内皮细胞的改变。结果伤后14 d,糖尿病组大鼠创面愈合较对照组显著延迟,为(31.5±1.0)%vs(59.4±4.2)%(P<0.01)。伤后1、3、7、14、21 d,糖尿病组新生血管化荧光密度值分别为1±0.1、7±0.8、12±1.4、15±2.1和17±1.8,对照组分别为8.5±0.5、35±1.5、60±3.0、72±3.4和72±3.4。各时间点糖尿病组创面血管化均较对照组显著降低(P<0.01)。各时间点两组创面组织中CD31抗原表达无显著差异(P>0.05),但糖尿病组大鼠仅少量血管内皮细胞周边有代表血管化的蓝色荧光微球。结论糖尿病深二度烫伤难愈创面存在血供不良特征,表现为血管内皮细胞增殖活跃与血管化低下的分离现象,其本质是新生血管形成障碍。     

人工真皮加超薄皮片修复复杂性骨外露创面临床应用

目的应用人工真皮加超薄皮片修复复杂性骨外露创面并评价其疗效。方法选取安徽医科大学第二附属医院整形外科10例非功能部位的骨外露患者,采用人工真皮加超薄皮片移植修复,骨外露面积最大约10 cm ×8 cm,最小约3 cm ×2 cm。结果10例皮片均成活良好,骨外露创面有效修复,愈合良好,供区瘢痕不明显。结论人工真皮加超薄皮片移植修复复杂性骨外露创面,为非功能部位骨外露创面提供一种新的治疗方法。     

早期应用脱细胞异体真皮治疗深度烧伤的临床研究

目的使用脱细胞异体真皮和自体皮片对深度烧伤的患者进行皮肤移植修复治疗,并对其临床治疗效果进行探讨。方法选择2011年12月～2013年4月高州市人民医院烧伤外科诊治的18例深度烧伤患者为研究对象,将其随机分为观察组和对照组,每组各9例。观察组患者给予脱细胞异体真皮和自体皮片皮肤移植修复治疗,对照组患者仅给予自体皮片移植修复治疗。对比分析两组患者创面成活率、术后1、6月创面情况（水疱和破溃）、关节活动、温哥华评分。结果观察组自体皮片一次成活率为88．9％,显著性高于对照组（66．7％）,差异有统计学意义（x。=4．192,P=O．01）;术后1个月,观察组的创面水疱和破溃情况、关节活动、温哥华评分与对照组比较,差异无统计学意义（P〉0．05）;术后6个月,观察组的创面水疱和破溃情况、关节活动、温哥华评分则优于对照组,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论脱细胞异体真皮和自体皮片联合移植术能有效的对深度烧伤进行皮移植治疗,并能减少患处瘢痕的增生以及改善创面的外观和功能。     

异体皮覆盖深Ⅱ度烧伤刮痂创面实验研究

目的通过实验研究刮痂术及新鲜异体皮覆盖烧伤创面在深Ⅱ度烧伤早期创面组织进行性损伤中的积极作用。方法对48只SD大白鼠86处深Ⅱ度烧伤创面行刮痂术及新鲜异体皮覆盖,用组织病理学观察真皮层、炎性反应、上皮生长、愈后瘢痕情况。结果伤后8h内行刮痂术及新鲜异体皮覆盖创面,淤滞区有逆转,创面变浅,上皮生长快,愈后瘢痕轻;而未行刮痂术组,淤滞区无逆转,创面逐渐加深,炎性反应较重,上皮生长相对慢,愈后瘢痕较重。结论刮痂术及新鲜异体皮覆盖烧伤创面能使淤滞区逆转,创面变浅,渗出及炎性反应减少,对防止深Ⅱ度创面组织进行性损伤有积极意义。     

深Ⅱ度烧伤早期削痂促进创面愈合的临床研究

目的 :探讨深 度烧伤创面伤后 4 8h内削痂促进创面愈合的临床效果。方法 :烧伤总面积在 15 %～4 0 %、以深 度为主的住院病人 79例在伤后 4 8h内削痂 ,烧伤严重程度相似 5 6例在伤后 5～ 7天削痂作为对照组。观察患者创面愈合时间及有无并发症 ,并对两组创面取材进行组织学研究。结果 :伤后 4 8h内削痂病人创面平均愈合时间为 2 2 .32± 4 .5 7天 ,对照组为 2 8.71± 6 .39天 ,两组比较差异有显著性 (P<0 .0 5 ) ;组织学观察表明伤后 4 8h内削痂后创面局部组织未见进一步损害。结论 :深 度烧伤创面伤后 4 8h内削痂对烧伤总面积在 4 0 %以下的成年患者是安全可行的 ,并能促进创面的愈合。     

中性粒细胞在深Ⅱ度烧伤早期创面进行性损伤中的作用

目的:探讨中性粒细胞在深Ⅱ度烧伤创面早期进行性损伤中的作用。方法:分析360例烧伤患者的血常规检查报告中性粒细胞的变化,观察烧伤深Ⅱ度创面的愈合时间。结果:入院时中性粒细胞均高于正常,很快降至正常的创面愈合快,下降慢的深Ⅱ度创面愈合时间延长。结论:中性粒细胞导致的创面损伤可能烧伤后即发生,入院后应使用抗氧化剂及蛋白酶抑制剂。     

早期切痂植皮治疗深度手烧伤的临床研究

目的为解决手部深度烧伤的难题,探讨早期切痂植皮治疗的临床效果。方法总结性回顾2010年5月—2012年5月在该院施行切痂植皮手术手部深度烧伤患者100例,分析临床资料,将其随机分为早期切痂植皮组和延迟切痂植皮组,早期切痂植皮组50例患者,延迟切痂植皮组50例患者,观察两组恢复的效果,针对患者术后出现功能障碍感染、创面愈合时间、植皮成活率不同进行比较,得出结论。结果手术后,早期切痂植皮组患者功能障碍感染出现例数6例,感染率12%,创面愈合时间为(12±5.5)d,植皮成活例数为49例,成活率为98.%,这三项数据均优于延迟组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论对手部深度烧伤患者实施早期切痂植皮手术治疗,可减少瘢痕增生,可有效促进手部功能的恢复,保护手功能,重视按摩、理疗等综合性康复治疗,减少并发症,缩短创面愈合时间和住院时间,对患者早期康复有一定的影响。