硫化氢对大鼠内毒性急性肺损伤炎性反应及单免疫球蛋白白介素-1相关蛋白表达的影响

目的 探讨吸入硫化氢（hydrogen sulfide,H₂S）对脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）诱导人肺泡上皮A549细胞炎性反应及单免疫球蛋白白介素-1受体相关蛋白（single immunoglobin IL-1 receptor related protein,SIGIRR）表达的影响。方法 雄性SD大鼠40只分4组,每组10只。正常小鼠组;H₂S吸入组：仅吸入H₂S 80mg/m³ 6h;ALI模型组：腹腔注射15mg/kg LPS;ALI+H₂S吸入组：腹腔注射15mg/kg LPS 1h后即吸入H₂S 80mg/m³ 6h,实验结束处死大鼠,观察肺组织病理学改变;ELISA法测肺组织匀浆及血浆中TNF-α及IL-1β水平;Western blot法检测肺组织SIGIRR蛋白表达水平。结果 与正常大鼠及吸入H₂S组比较,ALI模型组大鼠出现典型急性肺损伤病理改变,肺损伤评分升高（P<0.05）,肺组织匀浆及血浆中TNF-α及IL-1β水平增加（P <0.05）;而给予吸入H₂S后,可减轻大鼠肺损伤程度（P<0.05）,肺组织匀浆及血浆中TNF-α及IL-1β水平下降（P<0.05）,且与ALI模型组相比,给予吸入H₂S后可上调肺损伤大鼠肺组织内SIGIRR的表达。结论 吸入H₂S对内毒素性急性肺损伤大鼠具有保护作用,抑制肺组织匀浆及血浆中炎性因子产生,促进负调控分子SIGIRR表达是可能的分子机制。     

全氟化碳对脂多糖诱导肺微血管内皮细胞表达ICAM-1的影响

目的 观察全氟化碳(PFC)对脂多糖(LPS)诱导肺微血管内皮细胞(pulmonary microvascular endothelial cells, PMVEC)表达细胞间黏附分子-1(intercellular adhesion molecule-1, ICAM-1)的影响,探讨PFC的抗炎作用及其对PMVEC的保护机制.方法 采用组织块法培养大鼠PMVEC,将细胞接种于Transwell小室,按随机数字表法分为空白对照组(C)、PFC干预组(F)、LPS刺激组(L)、LPS刺激 PFC干预组(LF),以处理0 h为空白对照,各处理组分别给予PFC或100 μg/L LPS共孵育3、8、24 h,通过MTT法观测PFC作用后正常大鼠PMVEC细胞活力变化,应用逆转录PCR(RT-PCR)和流式细胞术(FCM)分别检测各组各时相点大鼠PMVEC ICAM-1 mRNA和蛋白表达量.结果 PFC作用后,正常大鼠PMVEC的细胞活力未见明显改变.各组各时相点ICAM-1 mRNA表达的变化规律与蛋白质水平基本一致,F组各时相点ICAM-1的表达量与C组比较均无显著性差异(P＞0.05);L组各时相点细胞的ICAM-1表达均较C组显著增强(P＜0.05,P＜0.01);LF组与L组同时相点比较,3 h组ICAM-1表达量无明显差异(P＞0.05),但8 h和24 h组均有显著降低(P＜0.01,P＜0.05).结论 PFC通过抗炎效应直接下调LPS诱导PMVEC表达ICAM-1,发挥PMVEC保护作用.     

多索茶碱对脂多糖诱导肺泡上皮细胞炎性损伤及NLRP3/IL-1β通路的影响

目的 探讨多索茶碱对脂多糖诱导肺泡上皮细胞炎症损伤及NOD样受体蛋白3(NLRP3)/白细胞介素-1β(IL-1β)通路的影响.方法 体外培养人肺泡上皮细胞(AEC),将细胞分为对照组(不做处理)、LPS组(10 μg/mL LPS处理)、LPS+低剂量多索茶碱组(10 μg/mL LPS+5 mg/L多索茶碱处理)、...     

SIGIRR对HMGB1诱导的A549细胞炎性反应的影响

目的 观察单免疫球蛋白白细胞介素1受体相关蛋白(SIGIRR)对高迁移率族蛋白B1( HMGB1)诱导的人肺泡上皮细胞株A549炎性反应的影响.方法 构建含有SIGIRR cDNA全长的真核表达载体pCDNA3.1(+),瞬时转染人Ⅱ型肺泡上皮细胞来源的A549细胞,使SIGIRR在A549细胞中过表达,采用Weste...     

全氟化碳对肿瘤坏死因子攻击下肺泡上皮细胞产生IL-8水平的影响

全氟化碳（perfluorocarbon ,PFC）是碳氢化合物中的氢原子被氟原子取代后形成的一类化合物,常温下PFC为无色无味的透明液体,挥发速度略快于水,理化性质极为稳定,与水、血液、脂类及其他介质不相溶.PFC具有气体溶解度高,携带和释放快（对O2、CO2的溶解和释放时间分别为血红蛋白的1/3和1/7）、表面张力低、比重高、挥发性适中、组织相容性好、在体内基本不吸收不代谢等特点,是目前较为理想的液态呼吸介质,已经被应用于完全液体通气（TLV）和部分液体通气（PLV）用来治疗急性肺损伤（ALI）/急性呼吸窘迫综合征（ARDS）.目前PFC的确切治疗机制尚不清楚,大多认为与其特殊的理化性质和抗炎效应有关.IL-8是肺泡II型上皮细胞（ATII细胞）分泌的重要炎性分子,作为趋化性细胞因子超家族的一员,它对多形核白细胞（PMN）具有强力的趋化作用和激活作用.本文将观察PFC在体外是否可以保护肿瘤坏死因子α（TNF-α）对ATII细胞的攻击,减少其炎性分子IL-8的释放.……     

表面活性蛋白A不同亚型在脂多糖诱导肾小管上皮细胞IL-8表达中的作用

目的探讨表面活性蛋白A(surfactant protein A,SP-A)不同亚型(SP-A1,SP-A2)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的人近曲肾小管上皮细胞(HK-2)IL-8表达的影响。方法体外培养HK-2细胞,分别转染SP-A1、SP-A2及阴性对照siRNA,实时定量PCR检测SP-A1及SP-A2 mRNA表达水平,并给予1μg/ml LPS刺激8h,ELISA观察转染不同siRNA后IL-8蛋白表达变化。结果转染SP-A1、SP-A2 siRNA可分别显著下调转染SP-A1、SP-A2的mRNA表达水平(P<0.05);1μg/ml LPS刺激8h可引起HK-2细胞IL-8蛋白表达显著增加(P<0.05),低表达SP-A2可下调LPS诱导的IL-8表达(P<0.05)。结论 LPS刺激下肾小管上皮细胞IL-8表达增加与SP-A2的表达有关,SP-A2可能在肾脏炎性反应中发挥重要作用。     

SIGIRR在人正常肺组织及脂多糖诱导的肺泡上皮细胞急性损伤中的表达

目的 检测单一免疫球蛋白白细胞介素1受体相关蛋白(SIGIRR)在正常肺组织及脂多糖(LPS)诱导的肺泡上皮细胞急性损伤中的表达.方法 收集手术切除的正常肺组织标本20例,分别采用免疫组织化学、Western blot、RT-PCR法检测SIGIRR的表达.以终浓度10 μg/mL的LPS刺激人Ⅱ型肺泡上皮细胞来源的A549细胞,于刺激前,刺激后3、6、12及24 h分别以Western blot法检测SIGIRR表达的变化.将含有SIGIRR cDNA全长的表达载体瞬时转染A549细胞,使SIGIRR在A549细胞过表达.通过MTY法检测LPS对A549细胞的损伤作用.结果 不同检测方法 发现SIGIRR在正常肺组织中均有表达;免疫组织化学检测可见SIGIRR表达于肺泡上皮细胞.LPS刺激后3、6及12 h时SIGIRR表达较刺激前均下调,24 h后回升至刺激前水平.MTY试验表明过表达SIGIRR的A549细胞在接受LPS刺激后生长抑制率显著低于对照组.结论 SIGIRR能够表达于正常肺组织,且能够减轻LPS刺激导致的肺泡上皮细胞损伤.提示SIGIRR可能参与了LPS诱导的Au的调节.     

紧密连接蛋白在脂多糖致急性肺损伤大鼠肺组织的表达

目的 观察脂多糖致急性肺损伤大鼠肺泡上皮细胞Occludin和Zo-1蛋白表达的变化。方法将30只SD雄性大鼠随机分为正常对照组和脂多糖致伤组。气管切开后滴注脂多糖0．5mL／kg（0．2mg／mL）复制急性肺损伤模型,分别于伤后4h和24h取材,采用免疫组化染色法测定肺组织Occludin和Zo-1蛋白的表达。结果脂多糖致急性肺损伤后4h肺泡上皮细胞Occludin和Zo-1蛋白表达明显下降（P〈0．05）,24h后有所恢复,但仍比对照组表达减少。结论急性肺损伤早期即出现紧密连接蛋白表达减少,Occludin和Zo-1表达与急性肺损伤发生密切相关,急性肺损伤后紧密连接蛋白表达与肺水肿的发生和发展密切相关。     

腺病毒E1A基因对吸烟所致肺泡上皮细胞IL-8表达的影响

目的探讨腺病毒E1A基因对吸烟所致肺泡上皮细胞IL-8表达的影响.方法通过脂质体转染的方法,将腺病毒E1A基因转染肺泡上皮细胞(A549细胞),经G418筛选、Western blot鉴定E1A阳性表达A549细胞单克隆,不同浓度的香烟提取物(CSE)活化,测定细胞IL-8 mRNA表达和上清液中IL-8浓度.结果与未转染和对照质粒转染A549细胞相比较,经CSE活化后E1A阳性表达A549细胞IL-8mRNA表达和蛋白释放显著增加.结论腺病毒E1A基因显著增加吸烟所致的肺泡上皮细胞IL-8表达,提示腺病毒潜伏感染可能通过放大吸烟所致的气道炎症反应在慢性阻塞性肺疾病的发病中发挥重要作用.     

上调FoxM1增强骨髓间充质干细胞抗脂多糖诱导肺泡上皮细胞凋亡

【目的】本研究旨在探讨上调骨髓间充质干细胞（BMSC）的FoxM1表达水平对其抗脂多糖诱导肺泡上皮细胞凋亡作用的影响,并初步探索其可能机制。【方法】采用全骨髓细胞贴壁培养法分离获取大鼠BMSC,通过慢病毒转染技术使BMSC过表达FoxM1,利用Transwell小室构建BMSC与肺泡上皮细胞共培养体系,使用TUNEL法与Annexin V法检测不同FoxM1表达水平BMSC的抗脂多糖诱导肺泡上皮细胞凋亡作用,采用MILLIPLEXMAP液相芯片检测共培养体系中多种细胞因子的表达水平。【结果】TUNEL与Annexin V检测结果显示,相较于野生型BMSC,与过表达FoxM1的BMSC共培养的肺泡上皮细胞受脂多糖刺激后凋亡水平更低,差异均有统计学意义（P<0.05）。MILLIPLEXMAP液相芯片检测显示,上调BMSC的FoxM1表达水平可使其与肺泡上皮细胞的共培养体系中IL-13、IL-21、IL-23、MIP-1a、MIP-1b表达水平升高,而使MIP-3a表达水平降低。【结论】上调FoxM1表达水平可增强BMSC抗脂多糖诱导肺泡上皮细胞凋亡作用,可能与其改变肺泡上皮细胞某些炎症因子的释放水平有关。     

脂多糖诱导大鼠肺泡II型上皮细胞凋亡的机制研究

目的研究脂多糖诱导大鼠肺泡II型上皮细胞(AT-II)凋亡的机制。方法体外原代培养的AT-II分为对照组和脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)损伤组(LPS浓度10μg/mL),培养24h后分别进行两组细胞的Fas蛋白免疫组织化学检测和Annexin V/PI双染法流式细胞仪细胞凋亡检测。结果LPS组Fas阳性率(35.16±2.37)%明显高于对照组(9.01±1.62)%(P<0.05);LPS组的细胞凋亡率(24.98±1.41)%明显高于对照组(6.16±1.03)%(P<0.05);坏死率(14.85±0.99)%亦明显高于对照组(4.00±0.72)%(P<0.05)。结论Fas/FasL途径可能是LPS诱导AT-II细胞凋亡的重要途径。     

脂多糖诱导大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡的机制研究

目的 研究脂多糖诱导大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(AT-Ⅱ)凋亡的机制.方法 体外原代培养的AT-Ⅱ分为对照组和脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)损伤组(LPS浓度10μg/mL),培养24 h后分别进行两组细胞的Fas蛋白免疫组织化学检测和Annexin V/PI双染法流式细胞仪细胞凋亡检测.结果 LPS组Fas阳性率(35.16±2.37)%明显高于对照组(9.01±1.62)%(P《0.05);LPS组的细胞凋亡率(24.98±1.41)%明显高于对照组(6.16±1.03)%(P《0.05);坏死率(14.85±0.99)%亦明显高于对照组(4.00±0.72)%(P《0.0s).结论 Fas/FasL途径可能是LPS诱导AT-Ⅱ细胞凋亡的重要途径.     

三磷酸腺苷对脂多糖诱导内皮祖细胞表达炎症因子的影响及其机制

目的：分析三磷酸腺苷(adenosine triphosphate,ATP)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导内皮祖细胞 (endothelial progenitor cells,EPCs)表达炎症细胞因子的影响,并探讨其机制。方法：采用密度梯度离心法分离人脐 血单个核细胞,用RT-PCR检测LPS(1 mg/mL)诱导EPCs表达炎症细胞因子的情况,低浓度的ATP(5 μmol/L)对LPS诱 导EPCs表达细胞炎症因子的影响,不同浓度(5,50 μmol/L)的ATP对EPCs中TLR4,MyD88和CD14 mRNA表达的影 响;Western印迹检测LPS(1 mg/mL)对EPCs表达TLR4调节蛋白MyD88和CD14的影响以及信号通路的活化情况,低浓 度ATP(1,5 μmol/L)对LPS诱导EPCs表达TLR4,MyD88和CD14的影响以及信号通路的活化情况。结果：EPCs高表达 TLR4,其配体LPS(1 mg/mL)显著上调IL-1β,MCP-1和ICAM-1的mRNA表达(均P<0.01),并呈时间依赖性上调MyD88和 CD14蛋白的表达,同时活化ERK和NF-κB信号通路。低浓度ATP抑制LPS诱导的IL-1β,MCP-1和ICAM-1 mRNA的表达 (均P<0.05),同时也下调LPS诱导的TLR4,MyD88和CD14蛋白的表达(P<0.01或P<0.05),并抑制LPS诱导的NF-κB信号 通路的活化(P<0.05)。结论：ATP在低浓度时通过负性调节TLR4信号通路而抑制LPS诱导的炎症细胞因子在EPCs中的 表达。     

姜黄素抑制脂多糖诱导视网膜色素上皮细胞炎症反应

目的：探讨姜黄素（curcumin）对脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）诱导视网膜色素上皮细胞（retinal pigment epithelial cells, RPE）炎症反应的抑制作用。方法：体外培养人RPE细胞株ARPE-19,CCK-8测定不同浓度姜黄素（5、10、20、30、40 ?滋mol/L）或不同浓度姜黄素和脂多糖（5 ?滋g/mL）刺激后细胞的活性,以此确定姜黄素的最适作用浓度。实时荧光定量（real-time poly－merase chain reaction, RT-PCR）检测白细胞介素（interleukin,IL）-8和IL-6的mRNA表达变化,酶联免疫吸附测定法（enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）测定IL-6和IL-8的蛋白表达水平。Western blot检测IκB-α、p-IκB-α蛋白表达变化。结果：CCK-8：不同浓度姜黄素对ARPE-19细胞活性无影响（P5 ?滋mol/L=0.998,P10 ?滋mol/L=1.000,P20 ?滋mol/L=0.124,P30 ?滋mol/L=0.092,P40 ?滋mol/L=0.078）,预先作用不同浓度的姜黄素对细胞活性有保护作用,20 ?滋mol/L保护作用明显（P=0.041）。PCR：姜黄素+LPS组IL-8的mRNA相对表达量（4.965±3.863）比LPS组（106.331±37.314）明显降低（P=0.000）,姜黄素+LPS组IL-6的mRNA相对表达量（0.992±0.374）比LPS组（2.175±0.560）明显降低（P=0.005）。ELISA：姜黄素+LPS组IL-8的蛋白表达量[（191.600±18.773） pg/mL]比LPS组[（589.025±38.880） pg/mL]明显降低（P=0.000）,姜黄素+LPS组IL-6的蛋白表达量[（113.906±27.947） pg/mL]比LPS组[（243.380±38.001） pg/mL]明显降低（P=0.000）。Western blot：与LPS组相比较,姜黄素+LPS组的p-IκB-α蛋白的表达水平降低（P=0.001）。结论：姜黄素通过抑制NF-κB活性抑制了脂多糖诱导视网膜色素上皮细胞的炎症反应,保护视网膜色素上皮细胞。     

体外培养肺泡Ⅱ型细胞Flk-1受体表达的研究

目的:研究体外培养的肺泡Ⅱ型细胞(AECⅡ)VEGF,F lt-1,F lk-1,SP-B的表达。方法:体外培养AECⅡ,采用免疫组织化学方法和电镜鉴定细胞,然后应用SABC法检测AECⅡ的VEGF,F lt-1,F lk-1,SP-B的表达。结果:AECⅡ培养72 h,F lt-1,F lk-1,VEGF阳性表达,SP-B阴性表达。结论:体外培养的AECⅡ,表达F lt-1、F lk-1等受体,人工干预应用VEGF可能发生一系列信号转导,为医学研究应用VEGF提供理论依据。     

槲皮素对人肺泡上皮细胞（A549）中ICAM-1表达的影响

目的 研究槲皮素对人肺泡上皮细胞(A549)中的细胞间粘附因子-1(ICAM-1)的表达影响.方法 用IL-1β构建人肺泡上皮细胞炎症模型,用RT-PCR和Western Blot技术检测ICAM-1的mBNA水平和蛋白水平的表达变化.结果 槲皮素对ICAM-1具有下调作用,且具有一定的浓度依赖性.结论 槲皮素通过抑制IL-1β而抑制ICAM-1,具有抗感染作用.     

和厚朴酚抑制CFP-10、ESAT-6诱导的人肺泡Ⅱ型上皮细胞炎症因子表达

目的 研究和厚朴酚(HNK)对早期分泌抗原靶蛋白6(ESAT-6)和培养滤液蛋白10(CFP-10)作为特异性抗原刺激人肺泡Ⅱ型上皮细胞(A549)炎症因子表达的抑制作用,探讨抗炎在结核病治疗中的潜在价值.方法 用MTS法检测HNK(0～80μmol/L)对A549细胞的毒性反应,确定合适的药物实验浓度.用ELISA法检测以CFP-10、ESAT-6(0～40μg/ml)为抗原刺激的A549表达IL-8水平,选择最适刺激浓度.将A549细胞与CFP-10,ESAT-6及不同浓度的HNK(0～20μmol/L)共同培养24h后收集培养上清液和细胞,用ELISA法检测各组培养上清液中IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α及Rantes的表达水平,分析HNK对细胞因子的剂量依赖抑制.结果 20μmol/L及以下的HNK浓度对A549细胞无明显毒性反应.抗原最适刺激浓度为5μmol/L.CFP-10,ESAT-6刺激可显著诱导A549细胞炎症因子IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α及Rantes的产生.HNK(0～20μmol/L)剂量依赖性地抑制CFP-10,ESAT-6诱导的炎症因子的表达.结论 HNK能有效抑制CFP-10,ESAT-6诱导的人肺泡Ⅱ型上皮细胞炎性细胞因子的表达.     

腺病毒E1A基因对吸烟所致肺泡上皮细胞IL-8表达的影响

目的 探讨腺病毒E1A基因对吸烟所致肺泡上皮细胞IL-8表达的影响。方法 通过脂质体转染的方法，将腺病毒E1A基因转染肺泡上皮细胞(A549细胞)，经G418筛选、Western blot鉴定E1A阳性表达A549细胞单克隆，不同浓度的香烟提取物(CSE)活化，测定细胞IL-8 mRNA表达和上清液中IL-8浓度。结果 与未转染和对照质粒转染A549细胞相比较，经CSE活化后E1A阳性表达A549细胞IL-8 mRNA表达和蛋白释放显著增加。结论 腺病毒E1A基因显著增加吸烟所致的肺泡上皮细胞IL-8表达，提示腺病毒潜伏感染可能通过放大吸烟所致的气道炎症反应在慢性阻塞性肺疾病的发病中发挥重要作用。     

LPS和PMA对人眼晶状体上皮细胞增殖和EGFR表达的影响

目的：观察人晶状体上皮(HLE)细胞表皮生长因子受体（EGFR）的表达，探讨脂多糖（LPS）和佛波醇酯（PMA）对HLE细胞增殖及EGFR表达的影响。方法：应用免疫组织化学方法检测年龄相关性白内障的HLE细胞组织及培养的胎儿HLE细胞EGFR蛋白表达,RT-PCR方法检测EGFR mRNA表达； 0.5、1.0、2.0 mg•L^-1的LPS及25、50、100 nmol•L^-1 PMA作用培养的HLE 细胞48 h后，MTT法检测细胞增殖率，RT-PC方法检测EGFR mRNA表达。结果：免疫组织化学和RT-PCR检测结果显示,年龄相关性白内障的HLE细胞及培养的胎儿HLE细胞中EGFR蛋白及mRNA呈阳性表达；0.5、1.0和2.0 mg•L^-1 LPS对HLE细胞的增殖率分别为（3.21±0.42）%、（12.25±1.34）%和（36.67±3.65）%，2.0 mg•L^-1LPS组与其他两组比较差异有显著性（F=7.709，P<0.01），并使EGFR mRNA表达增加；25、50和100 nmol•L^-1PMA各组组间比较，PMA对HLE细胞的增殖率差异无显著性（P>0.05），对EGFR mRNA表达无影响。结论:LPS通过促进EGFR表达使HLE细胞增殖从而促进后发性白内障（PCO）的发生。  