Sanger法检测分析非小细胞肺癌患者组织EGFR

目的探讨Sanger法检测非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）患者组织表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor,EGFR）基因突变情况,为肺癌病人“个体化靶向分子治疗”提供依据。方法收集63例NSCLC患者组织标本（石蜡切片）,提取组织DNA,用EGFR外显子18、19、20和21四位点的分子扩增（PCR）试剂盒进行外显子扩增,扩增产物先后进行电泳鉴定、酶解,酶解产物PCR扩增、纯化,纯化产物用ABI-3130型基因分析仪检测得出EGFR外显子18、19、20、21的野生或突变状态结果,并分析EGFR基因突变和患者临床病理生理特征、临床靶向用药疗效的关系。结果测试显示肺腺癌患者EGFR基因19、21外显子的突变率为33．3％（21／63）,而EGFR基因的突变与患者的病理组织学类型、吸烟状态有关（P〈0．05）。同时EGFR突变患者能从临床靶向用药获益。结论Sanger法检测NSCLC突变情况可为临床靶向用药提供技术支持。     

湖南地区238 例非小细胞肺癌EGFR 基因突变状态分析

目的：评价湖南地区非小细胞肺癌患者EGFR基因突变状态及其与临床特征之间的关系。方法收集2012年1月至2013年6月中南大学湘雅医学院附属肿瘤医院手术切除的非小细胞肺癌石蜡包埋组织238例,采用PCR扩增结合直接基因测序的方法,对组织DNA中EGFR基因第18-21外显子突变进行检测。结果在238例非小细胞肺癌中,EGFR突变的检出率为35.3％（84/238）。其中,第18、19、20、21号外显子突变占总突变的比例分别为2.4％（2/84）、67.9％（57/84）、3.6％（3/84）、26.2％（22/84）。19号外显子的突变均为第746-753密码子的碱基缺失,以Del E746-A750为主;21号外显子突变类型以L858R为主。女性EGFR基因的突变率显著高于男性,不吸烟者显著高于吸烟者（P〈0.05）。而EGFR基因的突变率与非小细胞肺癌患者的年龄、临床分期和淋巴结转移均无相关性（P〉0.05）。结论湖南地区的非小细胞肺癌EGFR基因突变以19、21外显子为主,且19外显子的突变率高于21外显子,多见于女性、腺癌、不吸烟患者。     

非小细胞肺癌表皮生长因子受体基因19、21外显子突变情况及其与患者临床病理特征、吉非替尼治疗后疗效相关性探讨

目的:探讨非小细胞肺癌表皮生长因子受体基因19、21外显子突变情况及其与患者临床病理特征、吉非替尼治疗后疗效相关性。方法:选取2015年1月~2015年3月到某院接受治疗的60例患者作为研究对象,所有患者入院后经过各项详细检测以及组织病理学部门诊断确实为非小细胞肺癌。采用直接测序法检测60例患者的表皮生长因子受体基因19、21外显子突变情况。结果:男性和女性患者有统计学意义(P0.05);腺癌与鳞癌两种突变率有统计学意义(P0.05);吸烟患者和不吸烟患者两者突变率有统计学意义(P0.05)。结论:EGFR基因突变状态与患者的性别、病理类型以及是否吸烟有关,EGFR基因突变状态到目前还不能作为化疗疗效以及远期生存的预测因子。     

实时荧光PCR检测非小细胞肺癌外周血EGFR基因突变的临床应用

目的 分析非小细胞肺癌表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)基因突变的特征,为EGFR基因检测及靶向治疗提供指导.方法 选取本院2018年7月至2019年6月收治并行外周血EGFR突变检测的46例晚期非小细胞肺癌患者,采用突变阻滞扩增系统(amplification refractory mutation system,ARMS)法检测其血浆EGFR基因突变的特征,并应用SPSS 19.0软件进行统计学分析.分析其外周血EGFR突变与临床病理特征的关系.结果 46例非小细胞肺癌患者中EGFR突变11例,总体突变率为23.9％.突变类型以19号外显子缺失(19Del)(3例,27.2％)和21号外显子突变(L858R)(4例,36.3％)为主.腺癌突变率为33.3％,女性突变率为47.10％,不吸烟患者突变率为32.2％,分别与非腺癌突变率(6.2％)、男性突变率(10.3％)、吸烟患者突变率(6.6％)比较,差异均有统计学意义(P<0.05);EGFR基因突变与年龄无明显相关性(P>0.05).结论 非小细胞肺癌中,腺癌、女性和不吸烟患者EGFR基因突变率较高,临床特征可作为EGFR基因突变的预测指标.     

非小细胞肺癌患者EGFR检测的临床意义分析

目的探讨非小细胞肺癌患者外周血EGFR检测的临床意义。方法回顾性分析49例经病理证实为非小细胞肺癌患者的临床资料,患者均通过高通量测序法行外周血EGFR检测,分析有无EGFR突变与性别、年龄、吸烟史、病理分型和分期以及药物治疗后病情的关系。结果不同性别、年龄组的EGFR突变率比较差异均无统计学意义（P〉0.05）;吸烟组的EGFR突变率高于不吸烟组（P〈0.05）。不同病理分型及分期肺癌的EGFR突变率比较,差异均有统计学意义（P〈0.05）。EGFR无突变组服药后进展率高于EGFR突变组,差异有统计学意义（P〈0.01）。结论 EGFR突变与患者的性别、年龄无关,与吸烟、病理分型及分期有关,EGFR突变者服药后疗效高于无突变者。     

突变体富集PCR法检测非小细胞肺癌病理组织EGFR基因突变

目的：建立突变体富集PCR法检测非小细胞肺癌病理组织中的EGFR基因突变。方法：选取55例细支气管肺泡癌和59例非小细胞肺癌病理组织蜡块，提取基因组DNA，采用不同的突变体富集PCR法（PCR-PAGE和PCR-RLFP）检测EGFR基因常见的19和21外显予突变，并经过直接测序验证。结果：在59例非小细胞肺癌中共检测出EGFR基因突变22例,突变率为37．3％（22／59）。55例细支气管肺泡癌中共检测出24例基因突变，突变率为43．6％（24／55）。经直接测序验证，EGFR19外显予有3种类型缺失突变。EGFR21外显予的错义突变为L858R。结论：突变体富集PCR法准确、快速、经济，便于临床筛查非小细胞肺癌病理组织中的EGFR基因突变。     

非小细胞肺癌中EGFR基因突变和扩增的检测及其临床意义

目的探讨非小细胞肺癌中EGFR基因突变和扩增的检测方法及其临床意义。方法收集200例肺癌组织,通过聚合酶链反应扩增DNA直接测序法检测肺癌DNA中EGFR基因突变和扩增,重点是检测肺癌中EGFR外显子19～21在性别不同中的突变和扩增情况以及在分化不同的癌症中的突变和扩增情况,同时分析其在临床中的意义。结果经聚合酶链反应扩增DNA直接测序法检测发现,非小细胞肺癌中EGFR基因总的突变和扩增数为68例,突变和扩增率为34%,肺癌中EGFR外显子20无明显突变和扩增情况发生,外显子19突变和扩增情况最多有49例,占总数的72.1%,外显子21突变和扩增情况较多有19例,占总数的27.9%,其中女性肺癌患者的EGFR基因突变和扩增情况多于男性肺癌患者,同时基因突变和扩增在腺癌和腺鳞混合癌中发生情况最多,其他次之。结论非小细胞肺癌中EGFR基因突变和扩增多发生于女性肺癌患者,其中又以外显子19和21发生较多,多发生伴有腺癌和腺鳞混合癌的情况下,同时聚合酶链反应扩增DNA直接测序法技术稳定可靠,为临床研究提供有效的依据。     

非小细胞肺癌的EGFR突变与ERCC1表达水平的关系探讨

目的探讨非小细胞肺癌（NSCLC）患者的表皮生长因子受体（EGFR）突变与切割修复交叉互补基因1（ERCC1）表达水平的关系,从而为非小细胞肺癌患者的临床用药提供指导。方法收集132例经病理诊断证实为NSCLC肿瘤组织标本,用实时荧光定量的聚合酶链反应-高分辨率溶解曲线分析技术（PCR-HRM）法检测EGFR基因18、19、20、21外显子突变,同时用逆转录定量PCR（qRT-PCR）检测ERCC1的mRNA的表达水平。对两者的关联性进行分析。结果41例EGFR突变型中,ERCC1基因高表达10例,低表达31例;91例EGFR野生型中,ERCC1基因高表达31例,低表达60例。EGFR基因突变状态与ERCC1的mRNA表达水平无明显关联（P〉0.05）。结论 NSCLC患者肿瘤组织中EGFR基因突变状态与ERCC1的mRNA表达水平无关联性。     

23例非小细胞肺癌患者肺癌组织和血浆中EGFR外显子21的基因突变检测

目的证明可以从非小细胞肺癌患者血浆中检测到表皮生长因子受体(epidermal growth factorreceptor,EGFR)突变,且与肿瘤组织的突变情况相一致,建立一种从外周血液中快速、经济、准确检测EGFR外显子21基因突变的方法。方法同时取得23例非小细胞肺癌患者的肺癌组织和血浆,采用突变富集PCR方法检测外周血液中EGFR外显子21的基因突变,并将检测结果与肺癌组织的检测结果进行对比。结果 23例非小细胞肺癌患者的肺癌组织中共检测到8例EGFR外显子21突变,其中7例突变可以从患者的外周血液中检测到。结论可以从非小细胞肺癌患者外周血液中检测到EGFR突变,通过本方法,可以从外周血液中检测EGFR外显子21基因突变。     

非小细胞肺癌EGFR基因突变阳性的临床意义

目的：探讨非小细胞肺癌表皮生长因子受体（EGFR）第19、21号外显子突变与其临床病理特征、家族史的关系,以及对突变阳性患者使用表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂（EGFR-TKIs）靶向治疗的效果。方法采用扩增阻滞突变系统聚合酶链反应技术对EGFR第19、21号外显子进行检测。结果162例非小细胞肺癌患者发生EGFR突变阳性63例,突变阳性率为38.89%。腺癌、女性、非吸烟者、有肺癌及其他恶性肿瘤家族史的非小细胞肺癌患者EGFR突变率明显升高,差异有统计学意义（P0.05）。非小细胞肺癌发生EGFR突变阳性使用EGFR-TKIs靶向治疗患者的中位生存期明显长于未治疗及其他药物化疗患者,差异有统计学意义（P〈0.01）。结论非小细胞肺癌患者EGFR突变筛查应作为常规临床检测指标,特别是对于有肿瘤家族史患者更具有临床意义。     

肺癌中棘皮动物微管相关蛋白4-间变型淋巴瘤激酶融合基因及表皮生长因子受体基因突变分析

目的检测非小细胞肺癌(NSCLC)中棘皮动物微管相关蛋白4-间变型淋巴瘤激酶(EML4-ALK)融合基因和表皮生长因子受体(EGFR)基因突变情况,从而指导有效的个体化靶向治疗。方法采用扩增阻滞突变系统(ARMS)-聚合酶链反应(PCR),检测200例NSCLC患者EML4-ALK融合基因和EGFR基因表达情况。结果 200例NSCLC患者中,EML4-ALK融合基因扩增阳性为16例(8%),EGFR基因突变为64例(32%),18外显子(G719X)突变1例,19外显子突变32例,20外显子突变4例,21外显子突变25例,19外显子和20外显子联合突变1例20外显子和21外显子联合突变1例。本组EML4-ALK融合基因阳性患者中均无EGFR基因突变发生。结论NSCLC患者中,EML4-ALK融合基因和EGFR基因突变检测对有效的个体化靶向治疗至关重要。     

肺癌表皮生长因子受体基因突变分型特征及临床意义研究

目的 探讨肺癌患者表皮生长因子受体(EGFR)基因突变分型特征和临床意义.方法 回顾性分析2019年7月至2021年2月获取的895例河南省各地市肺癌患者的EGFR基因突变高通量测序技术检测结果,包括点突变、小片段插入和缺失、拷贝数扩增等突变类型.按照临床诊断、性别、病理分型等临床特征对患者进行分组,临床诊断分组为肺占...     

非小细胞肺癌58例表皮生长因子受体突变状态

目的 探讨非小细胞肺癌(NSCLC)表皮生长因子受体(EGFR)突变状态及其对预测酪氨酸激酶抑制剂(TKIs)疗效的价值.方法 提取58例NSCLC患者肿瘤组织和正常肺组织的DNA,用巢式PCR扩增,直接测序法检测EGFR外显子19和21基因突变.结果 正常肺组织中EGFR基因均为野生型.肿瘤组织EGFR基因突变率为32.8％(19/58),外显子19和21突变率分别为73.7％(14/19)和26.3％00(5/19).腺癌、女性、不吸烟患者突变率要高于鳞癌、男性、吸烟患者(P＜0.05).随访3.0-29.3个月;58例患者的中位生存时间为23.5个月.19例EGFR基因突变者中,3例应用TKIs治疗,均健在.结论 NSCLC患者中,19外显子是EGFR基因突变的主要类型,女性、腺癌、不吸烟患者突变率较高.检测EGFR基因突变状态可用于预测NSCLC患者对TKIs治疗的敏感性.     

EGFR基因突变与肺非小细胞肺癌临床病理特征的关系探讨

目的 分析评估新分类中肺腺癌各组织学亚型与EGFR基因突变及临床病理特征之间的关系.方法 收集我院2012-2014年确诊的肺癌患者标本194例,其中手术标本139例均依据2015年新WHO分类方法进行组织学分类,采用扩增阻滞突变系统(ARMS)方法对所有标本EGFR基因外显子18-21 (E18-21)进行检测.分析EGFR基因状态与临床病理特征及病理组织学分类之间的关系.结果 有116例标本发生EGFR基因突变,新分类中各组织学亚型之间突变情况不同,EGFR突变率在以贴壁为主型肺腺癌中高,含贴壁成分的肺腺癌比不含此成分的肺腺癌突变率高,含腺泡成分比不含腺泡成分的肺腺癌突变率高,差异均有统计学意义(P＜0.05),而含乳头成分的肺腺癌比不含此成分的肺腺癌EGFR突变率高,但差异无统计学意义(P＞0.05).结论 在肺腺癌中,EGFR基因突变状态与性别、吸烟史及组织学亚型有关联.女性、不吸烟者、以贴壁成分为主及含贴壁、腺泡成分的肺腺癌有较高的EGFR基因突变率.     

CT引导下穿刺活检检测EGFR、ALK基因临床价值分析

目的：探讨CT引导下肺癌穿刺活检表皮生长因子受体（ EGFR）、间变淋巴瘤激酶（ ALK）基因检出率及阳性率,并对其临床应用价值进行分析。方法选取临床确诊的肺癌患者280例,保留CT引导下穿刺活检标本,分为2组：观察组（ n ＝200,应用粗针穿刺）和对照组（ n ＝80,应用细针穿刺）,2组对临床病理特征与基因突变相关性、阳性率、检出率、肿瘤细胞数量及术后并发症情况比较。结果女性患者EGFR基因突变率为66．04％,男性基因突变患者28．74％,两者比较差异有统计学意义（P ＜0．05）,非吸烟患者 EGFR 基因突变率为57．24％,吸烟患者29．63％,差异有统计学意义（P＜0．05）;年龄、病理学分期EGFR基因突变率区别差异无统计学意义（P＞0．05）。腺癌患者EGFR基因突变率显著高于其他类型肺癌（P＜0．05）;ALK基因表达在不同性别、年龄、病理学分化程度,差异无统计学意义（P＞0．05）。其Ⅳ期患者ALK基因突变率较其他期患者高,差异有统计学意义（P＜0．05）。 EGFR、ALK基因检出率、阳性率比较,观察组较对照组高,差异有统计学意义（P＜0．05）,观察组检测出平均肿瘤细胞个数多于对照组,差异有统计学意义（P＜0．05）。对照组并发症总发生率高于观察组,差异有统计学意义（P＜0．05）。结论EGFR、ALK基因粗针检出率高于细针检出率,但细针检出率仍有一定临床诊断意义,且并发症发生发生率低于粗针,可以根据患者实际情况进行选择不同的针型,均具有一定的临床诊断价值。     

EGFR基因突变直接测序检测方法的建立

目的 建立一种适用于临床表皮生长因子受体（EGFR）基因直接测序突变检测方法.方法 以EGFR基因突变热点19、21外显子为突变检测靶位点设计特异性扩增、测序引物,以已知19、21外显子野生型、突变型样品分别做为阴、阳性对照品,建立EGFR基因突变直接测序检测方法,进行方法学评估.结果 成功建立了EGFR基因突变直接测序检测方法,该方法检测灵敏度为4.7 ng/μl,重复性良好.检测30例结非小细胞肺癌样品,突变率为26.7％.结论 本研究建立了可用于临床样品检测的EGFR基因突变直接测序检测方法.     

非小细胞肺癌胸腔积液与小活检标本中EGFR基因突变检测的比较

目的：探讨非小细胞肺癌胸腔积液与小活检标本中EGFR基因突变检测结果的一致性,评价胸腔积液标本检测EGFR基因突变的应用价值。方法：收集中南大学湘雅医学院附属肿瘤医院非小细胞肺癌患者胸腔镜下活检标本46例,配对收集相同患者胸腔积液43例,抽提肿瘤细胞DNA,采用焦磷酸测序的方法,对DNA中EGFR基因第18～21外显子突变进行检测。结果：活检标本和胸腔积液标本中EGFR基因突变检出率分别27．9％（12／43）和25．6％（11／43）,两者差异无统计学意义（P〉0．05）。结论：恶性胸腔积液可以作为无法获得肿瘤组织的晚期非小细胞肺癌EGFR基因检测的替代标本。     

高分辨率熔解曲线分析法检测非小细胞肺癌／结直肠癌患者KRAS和EGFR基因突变

目的采用高分辨率熔解曲线分析法检测非小细胞肺癌／结直肠癌中KRAS、EGFR基因突变,探索其应用于临床检测的可行性。方法首先采用高分辨率熔解曲线分析法检测5例非小细胞肺癌和5例结直肠癌患者KRAS基因第2外显子及EGFR基因第18-21外显子的突变情况,并以直接测序法对结果进行验证。结果通过高分辨率熔解曲线分析法,确认5例非小细胞肺癌和5例结直肠癌患者中有1例非小细胞肺癌发生了EGFR19外显子突变,其余检测均为野生型。突变患者的基因型为2236-2250del。经直接测序对以上10例标本进行验证,证实所有患者的突变情况与高分辨率熔解曲线分析法的结果一致。结论应用高分辨率熔解曲线分析法检测临床样本KRAS和EGFR突变与直接测序法相比较具有操作简便、快速、结果准确的优点,适合在临床开展。     

非小细胞肺癌EGFR基因胚系突变研究现状

EGFR（表皮生长因子受体）信号通路在非小细胞肺癌（Non small cell lung cancer NSCLC）的发生和发展中起重要的作用,激活后可促进肿瘤细胞的增生、分化、转移、血管生成及凋亡抑制。大约80%的NSCLC存在EGFR的表达、过度表达和突变,因此EGFR是治疗NSCLC的理想靶点。通过检测EGFR的表达和突变状态能预测EGFR酪氨酸激酶抑制剂（EGFR-TKI）治疗的疗效,成为指导晚期NSCLC临床靶向治疗的重要生物标志物。EGFR基因的体细胞突变（somatic mutation）研究为肺癌的个体化治疗提供有力的支持,但EGFR基因胚系突变（germline mutation）的研究却开展的较少。本文在于总结国际上关于EGFR基因18～21号外显子的胚系突变的研究。     

非小细胞肺癌患者肿瘤组织中 EGFR、K-Ras 和 BRAF 基因突变的分子病理检测分析

目的：探讨非小细胞肺癌(NSCLC)患者肿瘤组织中 EGFR、K-Ras 和 BRAF 基因各亚型突变情况。方法应用直接测序方法检测550例 NSCLC 石蜡组织中 EGFR 基因、K-Ras 基因和 BRAF 基因突变情况。结果 NSCLC肿瘤组织中 EGFR 基因总突变率为37.09%(204/550),外显子18、19、20和21的突变率分别为1.45%(8/550)、21．09%(116/550)、3.64%(20/550)和11.09%(61/550);EGFR 基因各外显子之间双重突变共13例(2.36%),EGFR基因各外显子内双重突变共12例(2.18%)。 K-Ras 基因总突变率为2.00%(11/550)。 BRAF 基因总突变率为0．36%(2/550)。结论 NSCLC 患者中 EGFR 基因存在较高的突变率,尤其为19和21外显子突变,其基因突变亚型分类能指导 EGFR-TKI 的肿瘤靶向治疗,K-Ras 和 BRAF 基因突变率虽低但不容忽视。