右美托咪定调控miR-526b-3p/S100A4表达影响胰腺癌细胞增殖及凋亡的机制研究

摘要：目的:探讨右美托咪定（Dex）对胰腺癌细胞增殖、凋亡的影响及其可能作用机制。方法:应用MTT法检测Dex对人胰腺癌Capan-1细胞增殖的抑制作用;采用流式细胞术检测细胞凋亡率;实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）与蛋白免疫印迹法检测Dex对微小RNA-526b-3p（miR-526b-3p）和钙结合蛋白A4（S100A4）表达的影响;检测miR-526b-3p过表达与干扰S100A4表达对Capan-1细胞增殖及凋亡的影响;双荧光素酶报告实验验证miR-526b-3p与S100A4的靶向作用关系;抑制miR-526b-3p表达验证Dex对Capan-1细胞增殖和凋亡的作用机制; Western blot法检测细胞周期蛋白1（CyclinD1）、B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）、p21、B淋巴细胞瘤-2相关蛋白（Bax）蛋白表达。结果:用不同浓度的Dex处理后,细胞抑制率、细胞凋亡率与miR-526b-3p、p21、Bax的表达水平显著高于对照组（P<0.05）,S100A4、CyclinD1、Bcl-2的表达水平显著降低（P<0.05）,且呈明显的浓度依赖性（P<0.05）;双荧光素酶报告实验与Western blot实验证实miR-526b-3p与S100A4存在靶向结合关系,且miR-526b-3p可负性调控S100A4的表达; miR-526b-3p过表达或干扰S100A4表达后细胞抑制率、细胞凋亡率与p21、Bax的表达水平显著升高（P<0.05）,CyclinD1、Bcl-2的表达水平显著降低（P<0.05）;抑制miR-526b-3p表达可逆转Dex对Capan-1细胞增殖与凋亡的作用。结论:Dex可通过调控miR-526b-3p/S100A4表达抑制胰腺癌细胞增殖并诱导细胞凋亡。     

冬凌草甲素对胰腺癌SW1990细胞的抑制作用及机制

目的探讨冬凌草甲素对人胰腺癌SW1990细胞增殖的抑制作用及其作用机制。方法以10、20、40μmol/L不同浓度冬凌草甲素(Ori)作用于胰腺癌SW1990细胞,采用CCK-8检测胰腺癌SW1990细胞增殖情况;流式细胞仪检测细胞周期及凋亡情况;RT-PCR法检测Survivin、p21基因mRNA表达水平。结果不同浓度的Ori作用于胰腺癌SW1990细胞1、2、3 d后,胰腺癌SW1990细胞增殖抑制程度不等,药物浓度越高,抑制程度越高,两者间具有明显剂量与时间依赖性。0、10、20、40μmol/L的冬凌草甲素作用于胰腺癌SW1990细胞24 h后,凋亡率分别为0.87%±0.65%、1.85%±1.02%、5.38%±0.15%和16.60%±0.50%,出现明显的G2/M期周期阻滞。与对照组相比,10、20、40μmol/L的Ori作用于SW1990细胞24 h后,p21 mRNA表达增加,而Survivin mRNA表达下降。结论冬凌草甲素通过诱导凋亡和G2/M期周期阻滞来实现对胰腺癌SW1990细胞增殖的抑制作用,其机制可能与Survivin和p21调节信号有关。     

冬凌草甲素对人胰腺癌SW1990细胞系生长抑制作用

目的研究冬凌草甲素(oridonin)对人胰腺癌SW1990细胞生长抑制作用并探究其可能机制。方法采用MTT法检测冬凌草甲素对SW1990细胞增殖抑制作用、Hoechst 33258染色法及透射电镜观察细胞的形态学变化、流式细胞仪检测细胞周期及凋亡率、RT-PCR法检测survivin、p21mR-NA表达。结果冬凌草甲素对人胰腺癌SW1990细胞具有明显的生长抑制作用,荧光显微镜和透射电镜下均见到典型的凋亡形态学改变,流式分析出现亚G1峰并显示G2/M期周期阻滞。RT-PCR分析结果显示p21mRNA表达增加而survivin mRNA表达减少。结论冬凌草甲素通过诱导凋亡和G2/M期周期阻滞来抑制人胰腺癌SW1990细胞生长,其分子机制可能与survivin和p21调节的信号途径有关。     

姜黄素诱导人肝癌细胞株Bel-7402凋亡

目的 探讨姜黄素对人肝癌Bel-7402细胞的增殖抑制、诱导凋亡及其分子作用机制.方法 用姜黄素10 μmol/L体外处理Bel-7402细胞48 h.采用MTT比色法检测细胞生长的抑制作用,流式细胞术检测细胞凋亡率,RT-PCR检测Bcl-2和Bax mRNA表达.结果 10 μmol/L姜黄素处理细胞48 h后呈现时间和剂量依赖性细胞增殖抑制作用;细胞凋亡率随着姜黄素浓度的增加而逐步增高,Bax mRNA表达上调,而Bcl-2 mRNA表达降低.结论 姜黄素对Bel-7402细胞有显著的增殖抑制及诱导凋亡作用,其作用机制可能与上调Bax基因的表达及下调Bcl-2基因的表达有关.     

马甲子提取物调控HCG18对宫颈癌细胞增殖、凋亡的影响

摘要：目的:探索马甲子提取物对宫颈癌细胞增殖、凋亡的影响及其分子机制。方法:分别使用0,25,50,75μg·ml-1马甲子提取物处理宫颈癌细胞SiHa,噻唑蓝（MTT）检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,蛋白质印迹法（Western blot）检测细胞周期蛋白D1（Cyclin D1）、P21、B细胞淋巴瘤/白血病-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）表达,实时荧光定量PCR（qPCR）检测长链非编码RNA（lncRNA）人类白细胞抗原复合体18（HCG18）表达。在细胞中转染si-HCG18,观察抑制HCG18对细胞SiHa增殖、凋亡的影响。在细胞中转染pc DNA 3.1-HCG18,并使用75μg·ml-1马甲子提取物进行处理,探讨过表达HCG18对马甲子提取物诱导的SiHa增殖、凋亡的影响。结果:与0μg·ml-1马甲子提取物组比较,25,50,75μg·ml-1马甲子提取物显著提高SiHa细胞的增殖抑制率、凋亡率、P21、Bax蛋白水平,显著减少Cyclin D1、Bcl-2蛋白表达量及HCG18表达量,且呈浓度依赖性（P<0.05）。抑制HCG18显著减少SiHa细胞HCG18表达量及Cyclin D1、Bcl-2蛋白表达量,显著提高P21、Bax蛋白水平、细胞增殖抑制率、凋亡率（P<0.05）。过表达HCG18能逆转马甲子提取物抑制细胞SiHa增殖、Cyclin D1、Bcl-2蛋白表达,以及促进细胞SiHa凋亡、P21、Bax蛋白表达的作用。结论:马甲子提取物通过调控lnc RNA HCG18表达抑制宫颈癌细胞增殖和诱导细胞凋亡。     

葛根素对人骨肿瘤细胞株 MG63 的增殖抑制和诱导凋亡作用

目的 探讨葛根素对人骨肉瘤细胞株MG63的作用及其机制。方法 取对数生长期的MG63细胞分别用不同浓度的葛根素处理(0,25,50,100 mmol·L^-1)。细胞培养48 h后,利用MTT检测MG63细胞增殖水平;流式细胞术检测细胞凋亡水平,RT-PCR检测PI3K、AKT、Bax、Bcl-2、p53 和 p21 mRNA水平。Western blotting 检测PI3K、AKT、Bax、 Bcl-2、p53和p21表达水平。结果 葛根素浓度依赖性的诱导MG63细胞增殖抑制、凋亡和 Bax 表达,减少PI3K、AKT、Bcl-2、p53和p21表达。结论 葛根素可通过抑制PI3K/AKT/p53信号通路而诱导MG63细胞增殖抑制和凋亡。     

二十二碳六烯酸对胰腺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的 观察二十二碳六烯酸(DHA)对人胰腺癌细胞株生长的抑制作用.方法 将DHA与胰腺癌细胞混合培养,采用MTT、流式细胞技术分析细胞增殖、细胞凋亡、细胞周期以及凋亡相关蛋白Bcl-2含量.结果 50μg/ml DHA作用人胰腺癌细胞株后,Patu8988、SW1990增殖率24 h为(46.89±5.99)、(46.03±7.69),48 h为(35.92±2.91)、(25.70±5.60),肿瘤细胞增殖受到明显抑制(P<0.01).同时细胞凋亡率明显升高,效应呈现时间-剂量依赖关系,72 h后Patu8988、SW1990凋亡率分别为53.2%、13.7.G0～G1期细胞比例增高,S期细胞比例下降.DHA作用24 h后,Patu8988、SW1990 Bcl-2蛋白表达率明显低于对照组(P<0.05).结论 DHA能抑制胰腺癌细胞增殖,并通过下调Bcl-2在细胞中表达来诱导胰腺癌细胞凋亡.     

莪术油对直肠癌SW1463细胞株增殖、凋亡及Caspase-3、Bax、Bcl-2蛋白表达的影响

目的 探讨莪术油对直肠癌SW1463细胞株增殖、凋亡及相关蛋白Caspase-3、Bax、Bcl-2表达的影响。方法 水蒸气蒸馏法提取黔产莪术挥发油,配制成40、80、120、160、200、240、280 mg/L浓度梯度,干预SW1463细胞24、48、72 h,MTT法检测莪术油对SW1463细胞的增殖抑制率;Giemsa染色法观察莪术油对SW1463细胞凋亡形态的影响;蛋白免疫印迹法（Western blotting）检测Capase-3、Bax与Bcl-2蛋白表达。结果 莪术油对SW1463细胞的增殖有明显抑制作用,并呈现时间-剂量相关性,24、48、72 h的半数抑制浓度（IC₅₀）分别为144.33、134.11、120.04 mg/L;Giemsa染色可见细胞明显的凋亡形态学特征;莪术油干预SW1463细胞24 h后,与对照组比较,Caspase-3、Bax蛋白表达显著上调、Bcl-2蛋白表达显著下调（P<0.05）。结论 莪术油能明显抑制SW1463细胞增殖,诱导细胞凋亡,其机制可能与上调Caspase-3和Bax蛋白表达、下调Bcl-2蛋白表达相关。     

胡椒碱诱导人胰腺癌PANC-1细胞凋亡的Caspase 3/Bax/Bcl-2信号通路机制研究

目的 观察胡椒碱对人胰腺癌PANC-1细胞增殖、凋亡的影响,探讨其诱导凋亡的Caspase 3/Bax/Bcl-2信号通路机制。方法 将人胰腺癌PANC-1细胞分为阴性对照组和40,20,10 μmol·L^-1胡椒碱组,采用MTT、台盼蓝染色计数及平板克隆形成试验法检测胡椒碱对PANC-1细胞增殖、生长曲线及克隆形成的影响;采用Hoechst 33258染色法观察胡椒碱对PANC-1细胞凋亡形态学的影响;采用RT-PCR和Western blotting法检测胡椒碱对PANC-1细胞Caspase 3、cleaved-Caspase 3、Bax及Bcl-2 mRNA及蛋白表达的影响。结果 MTT、台盼蓝染色计数和平板克隆形成实验结果显示40,20 μmol·L^-1胡椒碱可明显抑制PANC-1增殖、细胞生长曲线和克隆形成;Hoechst 33258染色实验显示40,20,10 μmol·L^-1胡椒碱有诱导PANC-1细胞凋亡作用;RT-PCR和Western blotting实验结果显示40,20 μmol·L^-1胡椒碱可上调PANC-1细胞Caspase 3、Bax mRNA表达水平,上调cleaved-Caspase 3和Bax蛋白表达水平,下调Bcl-2 mRNA和蛋白表达水平。结论 胡椒碱可抑制人胰腺癌PANC-1细胞生长、增殖,并诱导其凋亡,其机制可能与调控Caspase 3/Bax/Bcl-2凋亡信号通路有关。     

马钱子碱对乳腺癌细胞MDA-MB-231作用的实验研究

目的本研究旨在观察马钱子碱（Brucine）对人乳腺癌细胞MDA-MB-231的增殖抑制和诱导凋亡作用,并分析Brucine在诱导细胞凋亡过程中对Bcl-2、Bax和Caspase-3蛋白表达的调控作用。方法人乳腺癌细胞株MDA-MB-231（雌激素受体阴性）细胞以L-15培养基体外培养,用MTT法测定Brucine对细胞的增殖抑制作用;倒置显微镜观察细胞形态;以碘化丙啶（PI）单染流式细胞仪检测细胞凋亡;AnnexinV-FITC/PI双染流式细胞术检测Brucine对MDA-MB-231的诱导凋亡作用;Western蛋白印迹法检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax和Caspase3的表达。结果Brucine对MDA-MB-231细胞有明显的增殖抑制作用;观察到典型的细胞凋亡形态学特征性改变;流式细胞术PI染色结果显示随着Brucine浓度的增加细胞凋亡率逐渐增高并呈明显的浓度依赖,与对照组相比差异有显著性（P〈0.05）;早期凋亡率和晚期凋亡率先增加后降低,但死亡细胞逐渐增加;且随着Brucine浓度的增加抗凋亡基因Bcl-2表达水平明显降低,而促凋亡基因Bax和Caspase-3表达明显增高。结论Brucine能够诱导乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡,其分子机制可能与激活Bax、Caspase-3和抑制Bcl-2等凋亡调控基因有关。     

固公果根提取物促进结肠癌细胞凋亡的机制研究

目的 探讨固公果根提取物促进结肠癌细胞凋亡及机制研究。方法 分别采用MTT法、DAPI染色及流式细胞术检测固公果根提取物对结肠癌细胞增殖活性及细胞凋亡的影响;蛋白免疫印迹（Western-Blot）法检测凋亡相关蛋白的活性表达水平。结果 固公果根提取物能显著抑制结肠癌SW620和LOVO细胞增殖,促进两种结肠癌细胞凋亡,上调凋亡相关基因Keap-1、Bax的蛋白表达,下调Nrf2、HO-1以及Bcl2蛋白的表达。结论 固公果根提取物能显著抑制人结肠癌细胞SW620和LOVO增殖、诱导细胞凋亡,其作用机制可能涉及调控凋亡相关基因Bax、Bcl-2表达,且与激活Nrf2氧化应激通路有关。     

尿石素A对乳腺癌细胞MCF-7增殖、凋亡的影响及其机制研究

目的 研究尿石素A对乳腺癌细胞MCF-7增殖、凋亡的影响并探讨其作用机制。方法 CCK-8法考察不同浓度尿石素A作用12、24、36、48 h对MCF-7细胞增殖能力的影响;细胞凋亡染色法考察20、40 μmol/L的尿石素A对MCF-7细胞凋亡的影响;实时荧光定量PCR（RT-qPCR）检测c-Myc、Cyclin D1、Bcl-2、Bax mRNA的表达水平;Western blotting法检测c-Myc、Cyclin D1、Bcl-2、Bax蛋白的表达水平。结果 尿石素A对MCF-7细胞增殖具有抑制作用且呈时间浓度相关性;细胞凋亡染色显示,20、40 μmol/L尿石素A给药后均能够诱导MCF-7细胞凋亡;RT-qPCR及Western blotting结果显示,20、40 μmol/L尿石素A能够显著降低MCF-7细胞中c-Myc、Cyclin D1、Bcl-2 mRNA及蛋白的表达水平（P<0.05、0.01）,升高Bax mRNA及蛋白的表达水平（P<0.05、0.01）。结论 尿石素A具有抑制MCF-7细胞增殖并诱导其凋亡的作用,其作用机制可能与抑制c-Myc、Cyclin D1、Bcl-2表达,升高Bax表达水平有关。     

槲皮素对结直肠癌细胞SW480增殖与Bcl-2、C-myc表达的影响

目的:研究槲皮素对结直肠癌细胞SW480增殖与B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、癌基因C-myc表达的影响。方法:5、10、20、40、80、160μmol/L槲皮素处理SW480细胞后,采用MTT法检测SW480细胞增殖情况,计算细胞增殖抑制率;实时荧光定量反相聚合酶链反应(qRT-PCR)和Western blot法检测Bcl-2、C-myc mRNA和蛋白表达水平。结果:槲皮素对SW480细胞有明显抑制作用,能够诱导SW480细胞凋亡,且与剂量、时间呈正相关;40μmol/L槲皮素可明显抑制Bcl-2、C-myc mRNA的表达;处理48、72 h时40μmol/L槲皮素明显抑制Bcl-2、C-myc蛋白的表达(P<0.05)。结论:槲皮素能够抑制SW480细胞增殖,且呈时间-剂量依赖性,槲皮素可能通过下调Bcl-2、C-myc的表达水平而发挥抗结直肠癌作用。     

艰难梭菌毒素A对白血病细胞株K562增殖、凋亡及相关基因调控的研究

目的探讨艰难梭菌毒素A（TcdA）对白血病细胞株K562增殖、凋亡的作用及其机制。方法采用四唑蓝比色试验（MTT）检测TcdA对K562细胞增殖的影响;流式细胞术（FCM）检测细胞凋亡情况;RT-PCR法检测TcdA作用后细胞Bcl-2/Bax,Egr-1mRNA表达的变化。结果 TcdA能抑制K562细胞的增殖,作用48h后的抑制率（IR）为47.67%,流式细胞仪分析出现典型的亚二倍体峰（凋亡峰）。TcdA作用后K562细胞Bcl-2基因表达下调,Bax基因表达上调,而Egr-1基因表达上调,并呈量效关系。结论艰难梭菌毒素A可诱导K562细胞凋亡,其机制可能与下调Bcl-2,上调Bax,上调Egr-1基因表达水平有关。     

姜黄素诱导乳腺癌MCF-7细胞凋亡

目的 研究姜黄素对人乳腺癌细胞株MCF-7细胞增殖抑制和诱导凋亡作用.方法 MTT法检测姜黄素对MCF-7细胞的增殖抑制作用;流式细胞术(FCM)PI单染检测细胞周期;Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡;Western blot法检测Bcl-2和Bax蛋白的表达.结果 姜黄素对MCF-7细胞生长有明显抑制作用,并呈剂量、时间依赖性;姜黄素能使MCF-7细胞阻滞在G1/S期,可以诱导细胞凋亡,Bax蛋白表达上调,而Bcl-2的表达减少.结论 姜黄素对人乳腺癌MCF-7细胞的增殖具有显著的抑制作用并可诱导细胞凋亡.其分子作用机制可能与其上调Bax基因表达水平的同时下调Bcl-2基因表达水平,从而诱导细胞凋亡有关.     

葫芦素B抑制神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞增殖机制的初步研究

目的研究葫芦素B对神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞增殖的影响及其作用的分子机制。方法通过MTT法检测葫芦素B对SH-SY5Y细胞增殖的影响,流式细胞仪检测葫芦素B对SH-SY5Y细胞凋亡和生理水平上活性氧含量、线粒体膜电位的影响。Hoechst 33258染色检测药物处理前后细胞形态的变化。Westernblot检测葫芦素B处理SH-SY5Y细胞24 h前后Bcl-2、Bax、p21、p53等蛋白合成的变化。结果实验浓度范围内,葫芦素B可时间与浓度依赖性地抑制SH-SY5Y细胞增殖;浓度依赖性地诱导SH-SY5Y细胞凋亡、活性氧水平升高和线粒体膜去极化;在蛋白水平上,葫芦素B能诱导凋亡抑制蛋白Bcl-2下调,促凋亡蛋白Bax、p21、p53上调。结论葫芦素B在体外能显著抑制SH-SY5Y细胞增殖,这一影响可能通过诱导细胞凋亡、ROS积累、线粒体膜去极化及其相关蛋白表达变化来实现。     

华蟾素诱导人肝癌细胞株HepG2凋亡及其作用机制

为了观察华蟾素体外抑制肝癌细胞株HepG₂增殖、诱导细胞凋亡作用及其机制, 将不同浓度华蟾素作用于HepG₂细胞。采用MTT法观察华蟾素对HepG₂细胞的增殖抑制作用; 用Hoechst 33258染色法观察细胞凋亡的形态学改变; 以流式细胞术观察细胞的凋亡率和细胞周期的变化; 以实时荧光定量PCR技术 (real time-PCR) 和蛋白免疫印迹 (Western blotting) 法检测细胞凋亡相关因子Bcl-2、Bax及p53 mRNA水平和蛋白水平的表达情况。结果表明, 华蟾素对体外培养的肝癌HepG₂细胞有抑制增殖作用, 且具有剂量、时间相关性; 华蟾素可致HepG₂细胞阻滞于G₂/M期, 细胞凋亡率随药物浓度增加亦呈增长趋势; 细胞凋亡相关因子Bax及p53 mRNA和蛋白表达上调, Bcl-2的mRNA和蛋白表达下调。因此, 华蟾素可抑制肝癌细胞株HepG₂的增殖, 诱导肝癌HepG₂细胞凋亡, 其机制可能与调节凋亡相关因子Bcl-2、Bax及p53的表达有关。     

干扰c-myc基因表达增强人胰腺癌细胞对吉西他滨和卡铂的敏感性

目的　探讨干扰c-myc 基因表达对人胰腺癌细胞SW1990 对化疗药物敏感性的影响。方法　采用实时定量PCR和Western blot 检测人胰腺癌细胞系SW1990 中c-myc 基因的干扰效果;MTT 法检测癌细胞对化疗药物吉西他滨和卡铂的敏感性;流式细胞术检测吉西他滨诱导的细胞凋亡情况。结果　c-myc siRNA 显著下调人胰腺癌SW1990 细胞中c-myc 基因的mRNA 和蛋白表达水平。干扰c-myc 表达后,化疗药物吉西他滨和卡铂对SW1990 细胞的半数抑制浓度（IC50）均显著减小（P<0.05）,吉西他滨诱导的SW1990 细胞凋亡率显著升高（P<0.05）。结论　干扰c-myc 表达可增强人胰腺癌细胞株SW1990 对化疗药物吉西他滨和卡铂的敏感性。     

蛇床子素通过p53信号通路诱导人乳腺癌细胞株MCF-7凋亡

目的 探讨蛇床子素对人乳腺癌细胞株MCF-7的作用及其机制。方法 对数生长期的MCF-7 细胞用0,25,50,100 mmol·L^-1的蛇床子素处理。细胞培养48 h后,利用MTT检测细胞增殖;流式检测细胞凋亡和膜电位。RT-PCR检测p53、p21、BCL-2、Bax和CytC mRNA水平;免疫印迹法检测p53、p21、BCL-2、Bax 和CytC 表达。结果 蛇床子素可以成浓度依赖性诱导MCF-7 细胞增殖抑制和凋亡,上调Bax、p53、p21和CytC表达,下调 Bcl-2的表达以及细胞膜电位。结论 蛇床子素可通过激活p53信号通路而诱导MCF-7细胞凋亡。     

美洲大蠊多肽提取物对SMMC-7721细胞凋亡及Bcl-2和Bax蛋白表达的影响

目的：研究美洲大蠊多肽提取物诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡及其分子机制。方法：采用不同质量浓度的美洲大蠊多肽提取物作用于SMMC-7721,以Cell Counting Kit-8（CCK-8）法检测细胞抑制率;Hoechst33342/PI与Annexin V-FITC/PI双染法相结合检测SMMC-7721细胞的凋亡;蛋白免疫印迹（Western blotting）法检测细胞凋亡相关因子Bcl-2和Bax蛋白表达。结果：不同质量浓度的美洲大蠊多肽提取物可抑制SMMC-7721细胞的增殖,诱导其凋亡,呈一定的量效关系;Western Blot法显示Bax表达增多,Bcl-2蛋白表达减少,Bcl-2/Bax比值降低。结论：美洲大蠊多肽提取物可明显诱导SMMC-7721细胞凋亡,抑制其增殖,其机制可能与下调Bcl-2蛋白表达,上调Bax蛋白表达,降低Bcl-2/Bax比值有关。