伤科接骨片对MC3T3-E1细胞成骨能力的影响

目的观察伤科接骨片对MC3T3-E1细胞成骨能力的影响。方法取BALB/c小鼠30只,随机分为药物+细胞组:伤科接骨片及饲料喂养+MC3T3-E1+明胶海绵;细胞组:单纯饲料+MC3T3-E1+明胶海绵;阴性对照组:单纯饲料+生理盐水+明胶海绵。每组10只。在小鼠右侧股部臀大肌下方制成肌袋,药物+细胞组和细胞组用无菌明胶海绵吸附MC3T3-E1细胞悬液、阴性对照组用无菌明胶海绵吸附生理盐水后植入肌袋内。术后3天,药物+细胞组将伤科接骨片(0.35g/片)用蒸馏水配制成浓度为20mg/m L的混悬液,按2.0mg/(g·d)剂量灌胃给药,细胞组和对照组均灌胃给予2.0mg/(g·d)的蒸馏水。分别于建模后第4、8周每组各处死小鼠5只,取材后分别作大体、切片HE染色光镜,以及扫描电镜下观察。结果术后4周,药物+细胞组和细胞组肌袋内均可见新骨出现,术后8周两组均形成松质骨样结构的板层骨,药物+细胞组形成的板层骨结构较细胞组更为成熟,成骨细胞数量更多,胶原纤维分泌量也更多,并有更多的钙化结节形成。阴性对照组内未见有明显骨化现象。结论伤科接骨片可以促进MC3T3-E1细胞在动物体内的成骨作用。     

MC3T3-E1细胞成骨模型的建立及局部黏着斑激酶表达的研究

目的:通过化学诱导手段建立MC3T3-E1细胞成骨模型,探讨局部黏着斑激酶(FAK)基因表达与成骨细胞形成的关系,了解FAK对成骨分化的影响。方法:观察MC3T3-E1细胞成骨诱导前后细胞形态,茜素红化学染色检测矿化情况,实时荧光定量PCR检测成骨标志物Runx2、ALP的表达,同时分析FAK在成骨过程中的表达情况。结果:MC3T3-E1细胞成骨诱导3 d后细胞呈长梭形或多角形;第21、28 d时,茜素红染色可见矿化结节;成骨标志物Runx2、ALP的表达呈持续升高的趋势,FAK的表达总体呈升高趋势,在第7 d时略有下降。结论:FAK的表达与成骨相关基因的表达趋势基本一致,提示FAK可能在MC3T3-E1细胞成骨过程中发挥一定作用。     

补肾中药促进成骨前体细胞MC3T3-E1成骨与分化研究进展

骨缺损修复是由成骨细胞、破骨细胞及多种生长因子共同参与的复杂、漫长的过程。成骨前体细胞MC3T3-E1在骨缺损的再生修复过程中起重要作用。近年来随着中药现代提纯分离技术的快速发展,基于中医“肾主骨生髓”理论,运用补肾中药制剂提高成骨前体细胞MC3T3-E1成骨与分化效能的研究逐渐开展,并初见成效,这为骨缺损的修复再生开辟了一条新思路。     

还原型谷胱甘肽上调β-catenin蛋白表达促进MC3T3-E1细胞成骨分化

目的:探讨还原型谷胱甘肽(GST)对小鼠成骨细胞MC3T3-E1成骨分化的影响,并从Wnt/β-catenin信号通路角度初步探讨其可能的机制。方法:通过碱性磷酸酶(ALP)染色以及细胞外钙化结节来检测成骨细胞MC3T3-E1的分化情况;GST干预MC3T3-E1成骨细胞株7 d、14 d和21 d后,利用Real-time PCR检测成骨相关因子RUNX2、OSX、COLⅠ、OCN基因及Wnt/β-catenin信号通路相关基因β-catenin、LRP5和GSK-3β的表达;通过Western blot检测β-catenin蛋白表达。结果:ALP染色观察到MC3T3-E1细胞外基质存在钙质沉积,且MC3T3-E1 ALP活性阳性。GST能明显提高MC3T3-E1细胞成骨相关基因以及Wnt/β-catenin信号通路相关基因的表达。Western blot结果提示GST可以明显促进β-catenin蛋白的表达。结论:MC3T3-E1细胞本身具有一定的成骨细胞特性,有效浓度的GST能促进小鼠MC3T3-E1细胞成骨分化,Wnt/β-catenin信号转导通路在成骨分化过程中起一定的调节作用。     

异补骨脂素干预后BMSCs源性外泌体调控MC3T3-E1成骨分化的研究

目的 分析中药补骨脂单体药异补骨脂素刺激骨髓间充质干细胞(BMCSs)后分析的外泌体对MC3 T3-E1(骨髓间充质干细胞)的影响.方法 采用传代培养、贴壁等方法,大量培养BMSCs细胞后,用异补骨脂素刺激培养BMSCs,通过收集BMSCs细胞,在实现外泌体与MC3 T3-E1共育后,经统计学处理数据,记录标记基因AL...     

晚期糖基化终产物通过调控F-actin/YAP抑制MC3T3-E1细胞成骨分化

目的：研究晚期糖基化终产物(AGEs)对小鼠前成骨细胞系MC3T3-E1增殖和分化的影响及其作用机制。方法：用不同浓度AGEs作用于MC3T3-E1细胞,采用CCK8法和流式细胞仪分别检测细胞增殖和凋亡,碱性磷酸酶 (alkaline phosphatase,ALP) 染色检测钙盐沉积,real-time PCR检测OCN、ALP和Runx2的mRNA表达,real-time PCR和蛋白印迹法分别检测YAP和β-catenin mRNA和蛋白表达,采用免疫荧光法观察二者的核内含量以及细胞骨架蛋白F-actin的变化。结果：MC3T3-E1细胞在不同浓度AGEs处理后增殖活性降低、凋亡率增加,且具有浓度依赖性。与对照组相比,MC3T3-E1细胞经AGEs处理后,ALP染色较浅,OCN、ALP和Runx2 mRNA表达量较低（P＜0.05）;细胞骨架蛋白F-actin形态和分布发生明显改变;YAP mRNA和蛋白含量均无明显变化,但其细胞核内含量减少;β-catenin 的mRNA 和蛋白量均降低（P＜0.05）,但其细胞核内含量无明显变化。结论：AGEs能抑制MC3T3-E1细胞的增殖活性,诱导细胞凋亡,抑制MC3T3-E1细胞的成骨分化能力,F-actin,YAP和β-catenin参与其调控过程。     

杜仲叶提取物对MC3T3-E1细胞增殖作用的实验研究

目的研究杜仲叶提取物（Euec）对小鼠成骨样细胞株MC3T3-E1细胞生长、增殖的影响及其分子机制。方法采用Euec与MC3T3-E1细胞体外共同培养,MTT法检测不同浓度Euec处理MC3T3-E1细胞24、48、72h后的细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞周期分布。结果4．0～125．0μg／ml的Euec能促进MC3T3-E1细胞增殖,其中7.8μg／ml的Euec对MC3T3-E1细胞增殖的促进作用最强。流式细胞仪检测显示,6.25μg／ml的Euec作用MC3T3-E1细胞48h后,G0/G1期成骨样细胞显著减少,S期成骨样细胞增多,G2/M期成骨样细胞显著增多。结论Euec可促进MC3T3-E1细胞向G2／M期转换,使G1期的成骨样细胞减少,G2期的成骨样细胞显著增加,从而促进细胞的有丝分裂和细胞的增殖。     

miR-129-5p调控MC3T3-E1细胞成骨分化的体外研究

背景 微小RNA(microRNA,miR)是一种非编码的小分子化合物,在成骨分化等生命过程中发挥重要调控作用.目的 探讨miR-129-5p对小鼠成骨前体细胞(preosteoblast cell line,MC3T3-E1)成骨分化功能的影响及相关作用机制.方法 体外培养MC3T3-E1细胞后,分别转染慢病毒载体(...     

温度对过氧化氢抑制前成骨细胞MC3T3-E1细胞增殖和成骨分化的影响

目的 探讨温度对过氧化氢(H₂O₂)抑制前成骨细胞增殖和成骨分化的影响。方法 取对数生长期MC3T3-E1细胞,随机分为0、450、500、550、600、650μmol·L^-1H₂O₂干预组,分别给予0、450、500、550、600、650μmol·L^-1H₂O₂溶液干预2 h。另取对数生长期MC3T3-E1细胞,随机分为对照组、模型组、低温组和高温组。对照组细胞置于37℃、含体积分数5%CO₂培养箱中孵育24 h;模型组细胞置于37℃、含体积分数5%CO₂培养箱中孵育24 h,并给予H₂O₂刺激2 h;低温组细胞置于32℃、含体积分数5%CO₂培养箱中孵育24 h,并给予H₂O₂刺激2 h;高温组细胞置于40℃、含体积分数5%CO₂培...     

聚乙烯亚胺介导miR-2861模拟物转染MC3T3-E1细胞的体外成骨分化

目的：通过非病毒载体聚乙烯亚胺（PEI）介导miRNA-2861（miR-2861）模拟物转染MC3T3-E1细胞系,探讨miR-2861/PEI复合物在前成骨细胞中的转染效率及其对细胞增殖和成骨向分化的影响。方法：将适量的PEI分别与miR-2861和阴性对照（NC）以元素N/P=10的比例混合形成基因/载体复合物。将miR-2861/PEI复合物作为实验组,NC/PEI复合物作为阴性对照组以排除人工合成的双链基因对成骨作用的干扰。采用MTT法筛选PEI复合miR-2861模拟物的最佳使用浓度;应用荧光成像和茎环法RT-PCR技术分别检测10、30、50和100 nmol·L^-1 miR/PEI复合物对MC3T3细胞的瞬时转染效率和miR-2861的表达情况;采用qRT-PCR技术和茜素红染色检测用选定浓度瞬时转染miR-2861/PEI复合物作用下MC3T3细胞的成骨能力。结果：与空白对照组比较,100 nmol·L^-1 miR-2861/PEI复合物作用72h时MC3T3细胞增殖率明显下降（P<0.05）。随转染浓度增加,miR-2861/PEI复合物在MC3T3细胞中的转染效率逐渐升高。茜素红染色及定量分析,实验组诱导21 d后出现较多的钙盐沉积结节,而空白对照组和阴性对照组均较少。结论：以PEI作为载体可使miR-2861模拟物有效转染MC3T3-E1细胞并在细胞中高表达,miR-2861模拟物具有一定的促MC3T3-E1细胞成骨向分化的作用。     

伤科接骨片治疗大鼠骨折模型的影像学评价

[摘要] 目的 借助于X-射线、CT扫描成像、MRI等医学成像技术评价中成药伤科接骨片对大鼠骨折模型的治疗作用。 方法 大鼠麻醉后手术分离右前肢桡骨,于中段形成横断的完全骨折,随后随机分为模型组、药物治疗组,另设伪手术组进行平行对照。治疗组按0.33g/kg的剂量灌胃给药,模型组和伪手术组等量灌胃生理盐水,连续给药4周,给药结束后以X射线、CT和MRI图像观察和记录骨折部位的愈合情况。最后麻醉处死动物,经解剖取骨折部位进行抗折力测定和HE染色的病理组织学检查。 结果 X射线、CT和MRI检查结果清楚地表明,给药治疗后骨折部位可见有明显的致密性骨痂形成,骨折线模糊不清或消失,多数可见大量的钙盐沉积,趋于愈合,与骨折部位的病理组织学检查结果基本一致,愈合后的前肢桡骨的抗折力也明显地增强。而CT四维成像技术能更加直观、清晰地反映骨折部位的恢复情况。 结论 借助于医学影像技术可以更加客观地评价药物对大鼠骨折模型的治疗作用,尤以CT四维成像技术更加直观、清晰,值得进一步地推广应用。     

胰岛素受体底物1在前成骨细胞分化过程中的表达

目的 研究胰岛素受体底物1(IRS-1)在小鼠前成骨样MC3T3-E1细胞分化过程中的表达.方法 在小鼠前成骨样MC3T3-E1细胞分化成熟过程中,分别在不同时点收集细胞及上清液.骨钙素含量用放射免疫法测定;碱性磷酸酶活性用α-磷酸奈酚法测定;Ⅰ型胶原、骨涎蛋白、骨桥素和IRS-1的mRNA表达应用半定量RT-PCR检测;免疫印迹法测定IRS-1蛋白水平.结果 在小鼠前成骨样MC3T3-E1细胞分化过程中,IRS-1的表达量逐渐增加,而且与Ⅰ型胶原、骨钙素、骨涎素和骨桥素呈正相关.结论 IRS-1参与MC3T3-E1细胞的增殖、成熟与矿化的全过程.     

静电纺丝薄膜支架对MC3T3-E1细胞增殖分化的影响

目的 观察静电纺丝薄膜支架对MC3T3-E1细胞增殖分化的影响。方法 通过静电纺丝法制备薄膜支架,扫描电镜观察薄膜网状结构,通过薄膜支架作为载体,观察其对成骨细胞的增殖、分化并观察细胞骨架的形态变化。结果 扫描电镜显示:静电纺丝薄膜网状结构有利于细胞的黏附;CCK-8细胞增殖检测与碱性磷酸酶活性检测结果显示,培养1 d、4 d、7 d对照组与实验组相比差异均有统计学意义(P<0.05);细胞骨架染色显示静电纺丝组细胞铺展面积增大且数目增多。结论 静电纺丝薄膜支架对成骨细胞增殖、分化以及细胞黏附具有促进作用。     

持续静压力环境下MC3T3-E1细胞的基因测序分析

目的：通过对持续静压力环境下MC3T3-E1细胞的基因测序,筛选出Hub基因并分析其与骨质疏松症相关性。方法 ：采用MTT检测细胞增殖和免疫荧光检测细胞骨架蛋白,筛选出最佳实验条件。用TRIzol法提取RNA与基因测序,通过Mfuzz聚类、富集分析、GSVA分析,利用NCBI GEO数据库、Genecards数据库、molecular signatures database数据库,分析对比持续静压力环境下MC3T3-E1细胞差异表达基因,筛选Hub基因,对比分析其与骨质疏松症信号通路关联的分子学机制。结果：在持续静压力环境下,MC3T3-E1细胞增殖显著降低,在1.0 MPa处理8 h和0.5 MPa处理24 h细胞模型组的细胞骨架中,微管蛋白和肌动蛋白的抑制作用显著。通过空白组与模型组基因测序对比后发现29 164个差异基因,其中14 489个上调、14 675个下调。这些差异基因涉及1 658个GO功能,包括1 096 GO＿BP（生物过程）,255 GO＿CC（细胞组分）,307 GO＿MF（分子功能）,MC3T3-E1细胞在持续静压力作用下受到差异基因调控的信号转导通路有305...     

磷酸肌酸对小鼠前成骨细胞MC3T3-E1增殖、分化及矿化的影响

目的 探讨磷酸肌酸(phosphocreatine,PCr)对体外培养的小鼠前成骨细胞MC3T3-E1的增殖、成骨分化及矿化的影响.方法 在体外培养的MC3T3-E1细胞中,分别加入含不同浓度(5,10,20 mmol·L-1)的PCr进行培养,并以不给予PCr药物处理的组为空白对照组.采用MTT法检测MC3T3-E1细胞的增殖情况;使用碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性试剂盒检测MC3T3-E1细胞内ALP的活性;采用Western Blot法检测MC3T3-E1细胞内ALP、骨形态发生蛋白-2(bone morphogenetic protein-2,BMP-2)的蛋白表达情况;利用茜素红染色法检测MC3T3-E1细胞形成矿化的能力.结果 PCr可以促进MC3T3-E1细胞的增殖且具时间依赖性,当处理12 h时,PCr对细胞无明显促增殖作用(P＞0.05);然而当处理48 h时,PCr(5,10,20mmol·L-1)对细胞的促增殖作用可分别达到137％、146％、153％.PCr(10,20 mmol·L-1)使MC3T3-E1细胞内ALP的活性分别增加到空白对照组的1.37和2.14倍(P ＜0.05,P＜0.01),并且显著上调ALP蛋白表达(P＜0.01,P＜0.01).PCr(5,10,20 mmol·L-1)还可明显上调MC3T3-E1细胞内BMP-2的蛋白表达(P＜0.05,P＜0.01,P＜0.01),并使MC3T3-E1细胞形成的矿化结节数增加(P＜0.05,P＜0.01,P＜0.001).结论 PCr可以促进MC3T3-E1细胞的增殖、分化与矿化,具有促成骨作用.     

人参皂苷Rh1对MC3T3-E1细胞增殖和分化的促进作用及其机制

目的:筛选靶向上调雌激素受体β(ERβ)转录和表达的人参皂苷单体,研究其对MC3T3-E1细胞增殖和分化的影响及其机制.方法:采用PGL2-ERβ和内参Renilla荧光素酶质粒Prep7-Rluc共同转染HEK293T细胞,细胞分为对照组,雌二醇组(1×10-6 mmol·L-1),人参皂苷Rb1组、Rb2组、Rd组...     

雌激素对前成骨细胞胰岛素受体底物-1的影响

目的:观察前成骨样细胞(MC3T3-E1细胞)分化过程中17β-雌二醇对胰岛素受体底物-1(insulin receptor substrate-1,IRS-1)的影响。方法:应用10mmol/Lβ-甘油磷酸钠和50mg/L抗坏血酸诱导小鼠MC3T3-E1细胞分化成熟,分别在0,6,12,18,24,30d收集细胞。17β-雌二醇干预,用半定量RT-PCR和免疫印迹法检测干预组和对照组细胞IRS-1mRNA和蛋白的表达,比较两组细胞IRS-1表达量的变化。结果:在MC3T3-E1细胞分化成熟过程中,IRS-1 mRNA和蛋白的表达在MC3T3-E1细胞分化成熟过程中逐渐增高。结论:IRS-1可能在17β-雌二醇诱导的骨转换过程中起着重要作用。     

IL-17A对成骨细胞系MC3T3-E1细胞中明胶酶表达的影响及其作用机制

目的检测IL-17A对MC3T3-E1细胞中明胶酶表达的影响,并探讨其作用机制。方法采用小鼠重组细胞因子IL-17A作用于MC3T3-E1细胞,通过Real-time PCR和ELISA分别检测MMP-2及MMP-9在mRNA水平及蛋白水平上的表达情况;通过免疫荧光和Western Blot检测NF-κB的磷酸化水平的变化,并通过使用NF-κB阻断剂检测其在MMP-9表达中的影响。结果 IL-17A在mRNA水平及蛋白水平上均上调MMP-9的表达(P <0. 01),然而对MMP-2的表达无明显影响; IL-17A促进转录因子NF-κB的磷酸化水平(P <0. 01);阻断NFκB的活性可减弱IL-17A对MMP-9的上调作用(P <0. 05); IL-17A对MC3T3-E1细胞中TIMP-1及TIMP-2的表达没有影响。结论 IL-17A可以通过激活NF-κB促进MC3T3-E1细胞分泌MMP-9。