流式细胞术检测石见穿多糖诱导的肝癌细胞凋亡率

目的 探讨石见穿多糖抑制肝癌细胞SMMC-7721增殖的机制. 方法 利用流式细胞仪Annexin V-FITC/PI法检测经不同浓度石见穿多糖作用的SMMC-7721肝癌细胞的凋亡率.结果石见穿多糖各浓度组平均细胞凋亡率为(7.87±1.860)%、(13.63±2.87)%、(21.05±2.68)%,显著高于对照组(0.67±0.28)%. 结论 石见穿多糖能够诱导肝癌细胞SMMC-7721凋亡,且凋亡率随着石见穿多糖浓度的增加而增高.     

补肾健脾方含药血清对人肝癌细胞株SMMC-7721细胞增殖和细胞凋亡的影响

目的：探讨中药补肾健脾方含药血清对人肝癌细胞株SMMC-7721细胞增殖和细胞凋亡的影响。方法：制备补肾健脾方含药血清,分为高、中、低浓度组;另设复方斑蝥组和甲状腺素组作为阳性对照组,并以空白细胞组作为空白对照组。培养人肝癌细胞株SMMC-7721进行体外实验,用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法检测各组培养24、48、72 h时细胞增殖抑制率,流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果：各药物组含药血清对人肝癌细胞株SMMC-7721的抑制作用与浓度呈负相关、与作用时间呈正相关,在5%浓度、48 h作用下达到抑制率的高峰。中药干预组细胞凋亡率呈现浓度依赖性,高浓度组显著高于低浓度组（P〈0.05）;复方斑蝥组的细胞凋亡率略低于中药高浓度组（P〉0.05）,甲状腺素片组略高于中药低浓度组（P〉0.05）。结论：补肾健脾方含药血清可抑制人肝癌细胞株SMMC-7721细胞的增殖,具有诱导人肝癌细胞株SMMC-7721细胞凋亡的趋势。     

蟾酥注射液对人肝癌SMMC-7721细胞增殖与凋亡的影响

目的 研究蟾酥注射液对人肝癌SMMC-7721细胞增殖与凋亡的影响。方法 CCK-8法检测SMMC-7721细胞活力;DCFH-DA染色法检测SMMC-7721细胞活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平;荧光染色法观察SMMC-7721细胞线粒体膜电位变化;流式细胞术检测SMMC-7721细胞凋亡率。结果 蟾酥注射液明显抑制SMMC-7721细胞增殖,呈时间和浓度依赖性,作用24、48和72h后,半数抑制浓度(IC₅₀)分别为2.60±0.01、2.00±0.10和1.57±0.17μg/L;ROS检测结果显示不同浓度药物处理组细胞内ROS水平与对照组比较均明显升高(P=0.000);荧光染色观察到药物处理组细胞的绿色荧光随药物浓度增加而变强,红色荧光反而逐渐变弱;流式细胞术检测出SMMC-7721细胞经低、中、高浓度蟾酥注射液处理48h后,总凋亡率分别为17.33%±3.20%、25.60%±1.05%和35.76%±4.72%,与对照组比较,总凋亡率明显增加,呈浓度依赖性,差异有统计学意义(P＜0.05)。结论 蟾酥注射液能显著抑制人肝癌SMMC-7721细胞增殖,并诱导7721细胞凋亡。该凋亡可能与蟾酥注射液引起SMMC-7721细胞ROS水平增加、线粒体损伤以及膜电位下降有关。     

腺病毒介导的干扰素-β基因对SMMC-7721细胞凋亡的影响

目的:观察腺病毒介导的干扰素-β(IFN-β)基因能否诱导人肝癌SMMC-7721细胞体外凋亡.方法:用HEK293A细胞扩增重组腺病毒介导的人干扰素-β(AdhlFN-β)基因,经纯化后用空斑形成实验法测定病毒滴度;分别用AdhIFN-β基因和重组腺病毒介导的绿色荧光蛋白(AdGFP)基因转染人肝癌SMMC-7721细胞.并设空白对照组.应用免疫细胞化学方法检测hIFN-β基因的表达,应用Hochest 33342荧光染色法和流式细胞术检测转染重组AdhIFN-β基因组、空载体组和对照组细胞的凋亡情况.结果:重组腺病毒经HEK293A细胞扩增、纯化后滴度可达2×1011 pfu/mL,且40 MOI的腺病毒即可获得95%以上的转染效率;免疫细胞化学法检测到外源性hIFN-β基因在SMMC-7721细胞中的蛋白表达产物;荧光染色法检测到重组AdhIFN-β基因组细胞明显发生了凋亡,而重组AdGFP组和空白对照组细胞凋亡不明显;流式细胞术检测到转染重组AdhIFN-β基因组细胞凋亡率[(28.27±4.21)%]高于转染空载体组[(2.08±0.89)%]和对照组[(1.53 4±0.70)%](F=377.625,P<0.001),后2组细胞凋亡率比较差异无统计学意义.结论:腺病毒介导的hIFN-β基因能诱导体外肝癌细胞发生凋亡.     

ARK5在肝癌组织中的表达及其对肝癌SMMC-7721细胞生长的影响

目的： 检测ARK5在肝癌组织及肝癌SMMC-7721细胞中表达水平,探讨其对肝癌细胞生长的作用。 方法： 采用PCR和Western blotting法检测30例肝癌组织及癌旁组织、正常肝细胞LO2及肝癌SMMC-7721细胞中ARK5 mRNA和蛋白表达水平;合成ARK5 的小干扰RNA(siRNA)和阴性对照siRNA,转染至SMMC-7721细胞分别为实验组和阴性对照组,同时设空白对照组,采用MTT法和流式细胞术检测各组肝癌细胞的增殖活性和细胞凋亡率。 结果： PCR和Western blotting法检测,肝癌组织和肝癌SMMC-7721细胞中ARK5 mRNA和蛋白表达水平明显高于癌旁组织和LO2细胞(P＜0.05)。MTT法检测,实验组24、48和72　h细胞生长抑制率分别为(19.39±5.42)%、(23.19±0.53)%和(20.74±1.23)%,均高于空白对照组和阴性对照组(P＜0.01);流式细胞术检测,实验组细胞凋亡率为(15.017±0.945)%,与空白对照组［(8.770±0.656)%］和阴性对照组［(8.763±1.201)%］比较差异均有统计学意义(P＜0.05)。 结论：ARK5在肝癌组织和肝癌SMMC-7721细胞中表达水平明显升高,抑制其表达可抑制肝癌细胞生长,促进肝癌细胞凋亡,提示ARK5可能作为一种癌基因促进肝癌的形成。     

柴胡注射液对人肝癌细胞株SMMC-7721增殖及凋亡的影响

目的:探讨柴胡注射液对人肝癌细胞株SMMC-7721凋亡的影响及相关机制。方法:将人肝癌SMMC-7721细胞株(由西安交通大学医学院第一附属医院临床分子试验中心提供)分为空白对照组(加10%小牛血清的1640培养液)、氟尿嘧啶阳性对照组(10μg/ml)及实验组(分别为5mg/ml、10mg/ml、20mg/ml、25mg/ml、50mg/ml柴胡注射液)。采用噻唑蓝比色法(即MTT)检测人肝癌细胞株SMMC-7721对柴胡注射液药物和氟尿嘧啶注射液的敏感性;应用流式细胞术(FCM)检测柴胡注射液对人肝癌细胞株(SMMC-7721细胞)周期的影响。结果:柴胡注射液对SMMC-7721的生长有明显的抑制作用,抑制率与柴胡注射液浓度呈正相关。不同浓度柴胡注射液处理肝癌细胞时,药物浓度与凋亡细胞且呈剂量依赖关系。结论:柴胡提取物可抑制人肝癌SMMC-7721细胞增殖,诱导其凋亡,作用机制可能与调控细胞周期有关。     

EGFR抑制剂吉非替尼对肝癌细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)抑制剂吉非替尼对人肝癌细胞株SMMC-7721增殖和凋亡的影响,为原发性肝癌的分子靶向治疗提供实验依据.方法应用免疫组化法检测SMMC-7721细胞中EGFR的表达,不同浓度吉非替尼处理SMMC-7721细胞48 h后,MTT法检测细胞对该药物敏感性,流式细胞仪检测细胞凋亡变化.结果SMMC-7721细胞中EGFR呈强阳性表达,吉非替尼明显下调EGFR表达,抑制SMMC-7721细胞生长,呈剂量时间依赖性,8 mmol/L吉非替尼组细胞凋亡率为(58.58±2.95)%,显著高于对照组(0.11±0.04)%,(P＜0.01).结论吉非替尼能够通过诱导细胞凋亡抑制SMMC-7721细胞生长,因而有望为肝癌的分子靶向治疗提供新的有效途径.     

5-Fu,HCPT诱导人肝癌细胞凋亡的对比性实验研究

用不同浓度的传统的化疗药物5-氟尿嘧啶(5-Fu)、羟基喜树碱(HCPT)作用人肝癌SMMC-7721细胞,于不同时间,用定性的方法观察有无细胞凋亡的产生,用定量的方法对两药物诱导人肝癌细胞凋亡的效果进行比较.结果:5-Fu,HCPT均能诱导人肝癌SMMC-7721细胞产生凋亡,两药物诱导人肝癌细胞产生的最高凋亡率的作用时间为48 h,最佳浓度为7.5 μg/mL,1 mg/mL,最高凋亡率分别为38.7%,42.6%.经统计学处理,两药物诱导人肝癌细胞凋亡的效果相当,而与对照组有显著性差异.结论:小剂量的5-Fu,HCPT均可作为凋亡诱导剂用于临床肝癌治疗.     

5-FU、HCPT诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡的研究

目的观察两种传统抗癌药5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)、羟基喜树碱(10-hydroxycamptothecin,HCPT)对人肝癌SMMC-7721细胞凋亡的影响,从细胞凋亡的角度探讨其抗癌机制,为它们的临床应用提供实验依据。方法用不同浓度的5-FU(2.5、5、7.5、15、25 mg/L)和HCPT(0.25、0.5、1、1.5、2 mg/L)分别干预人肝癌SMMC-7721细胞生长,采用倒置相差显微镜、荧光显微镜、透射电镜和DNA凝胶电泳方法观察培养不同时间(12、24、48、72 h)人肝癌SMMC-7721细胞的凋亡,并比较两种药物诱导人肝癌细胞凋亡的效果。结果5-FU、HCPT均能诱导人肝癌SMMC-7721细胞产生凋亡,产生最高凋亡率的作用时间均为48 h,最佳浓度分别为7.5、1 mg/L,最高凋亡率分别为38.7%、42.6%,5-FU、HCPT两种药物诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡的效果相当,而与对照组有显著性差异(P<0.01)。结论5-FU、HCPT均能诱导人肝癌SMMC-7721细胞产生凋亡,小剂量的5-FU、HCPT有望作为凋亡诱导剂用于临床肝癌治疗。     

靶向STAT5的siRNA诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡

目的 采用RNA干扰技术阻断STAT5基因的表达,观察其对人肝癌SMMC-7721凋亡的影响.方法 构建3种靶向STAT5的小干扰RNA(siRNA)真核表达载体,采用LipofectamineTM2000转染肝癌细胞SMMC-7721;分别采用半定量RT-PCR、Western blot技术检测转染前后SMMC-7721细胞STAT5 mRNA和蛋白质表达的变化;采用透射电镜技术观察细胞形态变化;流式细胞术检测细胞凋亡率.结果 3条靶向STATS的序列特异性的siRNA可以有效地抑制SMMC-7721细胞STATS mRNA和蛋白质表达,STAT5 mRNA表达抑制率分别为70.43%、43.02%、45.07%,STAT5蛋白表达抑制率分别为67.45%、37.36%、41.86%;转染靶向STAT5的siRNA真核表达载体48 h后出现凋亡细胞的典型形态学变化,并诱导25.61%的SMMC-7721细胞发生凋亡.结论 靶向STAT5的siRNA真核表达载体可以有效、特异地阻断SMMC-7721细胞STAT5基因的表达,并能够诱导SMMC-7721细胞凋亡,STAT5 siRNA在人肝癌的基因治疗中可能具有潜在的应用价值.     

双胸蚯蚓溶栓酶对沙鼠缺血额叶皮质超微结构及离子的影响

采用结扎沙土鼠双颈总动脉20分钟后恢复血流制做脑缺血再灌注模型。应用透射电镜对额叶皮质超微结构进行观察,并采用电镜能谱技术对神经元随机检测Na~十Ca~卄等离子含量。结果表明,缺血的对照组神经元Na~十明显增高达16.43,而缺血后腹腔注入双胸蚯蚓溶栓酶的实验组显著下降为13.02,接近正常组的11.47;Ca~卄正常组为1.03,对照组增高达3.81,而实验组下降为2.44。同时实验组超微结构的损伤性改变明显轻于对照组。     

积雪草苷对脂多糖诱导小鼠急性肺损伤的影响

目的观察积雪草苷对脂多糖(LPS)诱导急性肺损伤(ALI)小鼠的保护效应。方法56只Balb/c小鼠随机分为对照、假手术、模型、溶媒、积雪草苷(5、15、45 mg/kg)7组,每组8只。LPS(2.5 mg/kg)气管滴注造ALI模型,24 h后HE染色观察小鼠肺组织病理改变,计算肺湿质量/干质量值;收集支气管肺泡灌洗液(BALF)后行白细胞计数和分类,BCA法检测其蛋白的量;化学法检测肺组织髓过氧化物酶(MPO)活性。结果积雪草苷各剂量组呈剂量依赖性减轻LPS所致ALI模型肺组织病变情况,减轻肺水肿,减轻中性粒细胞的浸润,抑制蛋白渗出。抑制肺组织中MPO活性。结论积雪草苷对LPS诱导ALI有保护效应。     

多囊卵巢综合征激素水平测定的临床意义

本文选择87例多囊卵巢(PCOS)妇女,进行放射免疫测定激素T、PRL、FSH和LH,并与35例正常妇女进行对照,结果87例PCOS的T、LH值升高,而LlH/FSH比值并不高。     

孕周与母儿血甲状腺激素含量的关系

目的：观察不同孕周与母儿血甲状腺激素的关系。方法：应用放射免疫分析法对67例中、晚期妊娠要求引产患者，10例早产及78例孕足月自然分娩患者进行了母血及胎儿脐静脉、脐动脉血中TSH、T3、T4的测定。结果：TSH值在母血及胎儿血中随着孕周的增加而增加．T3值在胎儿血中与母血中比较，显示低T3血症，T4值接近正常母体水平。结论：测定母血中的甲状腺激素，可动态观察不同孕周甲状腺激素变化，可及时发现胎儿低甲血症。     

缺氧缺血(HI)新生大鼠脑损伤后NO水平的变化及GM1对其影响

目的:观察新生大鼠缺氧缺血性(HI)脑损伤后NO水平的变化,探讨单唾液酸四己糖神经节苷脂(GM1)对NO水平的影响.方法: 选择新生7日龄Sprague-Dawley大鼠108只,随机分为三组:缺氧缺血组(HI组,36只),假手术对照组(Control组,36只),缺氧缺血 神经节苷脂组(GM1组,36只) .采用结扎右侧颈总动脉并吸入低氧混合气体制备HIBD模型.采用镀铜镉还原法测定血浆一氧化氮(NO)水平.结果: Control组、HI组、和GM1组新生大鼠血浆NO-2/NO-3含量分别为(41.6±8.9 ) 、(60.9±14.7 )和(43.8±10.6) μmol/L.HI组明显高于对照组和GM1组(P<0.05);GM1组与对照组比较,无明显差异(P>0.05).结论:GM1能抑制新生大鼠缺氧缺血性(HI)脑损伤后NO生成,对缺氧缺血(HI)新生大鼠的脑具有保护作用.     

和田地区维、汉族老年居民血清生化指标的测定

目的:探讨新疆和田地区不同民族同年龄段老年居民血清钙(Ca)、磷(P)、镁(Mg)、铁(Fe)、转铁蛋白(TRF)、碱性磷酸酶(AKP)等生化指标的差异。方法:对186例60～79岁维吾尔族(维族)和汉族老年人血清Ca、P、Mg、Fe等水平进行了测定,比较两民族间各生化指标的差异。结果:汉族血清Ca、P、Mg、Fe水平明显高于维族(P<0.01～0.001),两民族血清TRF、AKP水平差异无统计学意义(P>0.05);汉族女性血清Ca、P、Mg、Fe水平明显高于维族(P<0.05～0.001),汉族男性血清P、Fe水平明显高于维族,AKP水平明显低于维族(P<0.05～0.001);汉族女性血清P、Mg、AKP、TRF水平明显高于男性(P<0.05～0.001),维族男性血清Fe水平明显高于女性(P<0.05)。结论:新疆和田地区同年龄段维族和汉族老年居民血清Ca、P、Mg、Fe生化指标的差异可能和两民族居民不同生活习惯有关。     

褪黑素载药纳米粒的优化设计及研制

目的：探讨采用复合乳液-溶剂挥发法制备褪黑素载药纳米粒的最佳工艺条件。方法：以聚乳酸、壳聚糖可降解生物材料为载体,明胶为分散剂,span-80和tween-80混合液为微乳液,根据微粒的表面形态、粒径大小、分布、包封率、载药量选择最佳工艺条件,制备褪黑素载药纳米粒。结果与结论：原子力显微镜下可见纳米粒表面圆滑,分布均匀。正交设计效应曲线图直观分析和方差分析结果显示,搅拌速度、溶剂挥发温度、聚乳酸与褪黑素投药比、壳聚糖浓度是影响制备工艺的主要因素。在30℃,1000r／min搅拌速度,搅拌时间45min,m(褪黑素)：m(聚乳酸)为1：5,V(Tween-80)：V(Span-80)为5：1,壳聚糖质量浓度为1％条件下,可制备成平均粒径为45．84nm,包封率为38．33％,载药量为8．35％的褪黑素载药纳米粒。     

血栓调节蛋白在系膜增生性肾小球肾炎中的相关探讨

目的：探讨系膜增生性肾小球肾炎（MsPGN）患者血浆中血栓调节蛋白（PTM）的水平与肾功能、蛋白尿、凝血功能、血脂之间的关系。方法：54例经肾穿刺活检明确诊断的MsPGN患者,采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测血浆PTM水平。依照蛋白尿的程度将病人分为两组：（1）大量蛋白尿组,24h尿蛋白定量大于3.5 g。（2）少量蛋白尿组,24 h尿蛋白定量小于3.5 g。结果：大量蛋白尿组的PTM浓度、纤维蛋白原（Feb）、甘油三酯和总胆固醇均比少量蛋白尿组高,两组之间有统计学差异（P〈0.05）。而少量蛋白尿组的白蛋白比大量蛋白尿组高（P〈0.05）,两组CCr相比没有显著性差异。所有病人的PTM与其他指标的相关性分析显示PTM与Feb和蛋白尿呈正相关（r=0.371r、=0.505,P均〈0.05）,PTM随着Feb和蛋白尿的增加而增高。PTM与白蛋白呈负相关（r=-0.491,P〈0.05）,PTM随着白蛋白降低而增高。PTM与CCr、甘油三酯和总胆固醇无相关性（P〉均0.05）。结论：血浆PTM水平与蛋白尿的程度相关。血浆PTM与蛋白尿的水平不仅是（MsPGN）病变程度的指标,并且可为指导治疗和判断预后提供依据。     

毛果芸香碱对大鼠蓝斑核痛反应神经元电活动的影响

目的 本实验观察大鼠侧脑室内加入外源性乙酰胆碱(Ach)后,蓝斑核(Locus ceruleus,LC)痛反应神经元的电变化,以及M受体激动剂毛果芸香碱(Pilocarpine)的激动效应,进一步研究Ach和LC在痛觉调制中的作用及其相互关系.方法 以电脉冲刺激右侧坐骨神经作为伤害性痛刺激,用玻璃微电极细胞外记录痛反应神经元放电的变化.结果 1)侧脑室注入Ach能够使正常大鼠LC中痛兴奋神经元(PEN)痛诱发放电频率增加、潜伏期缩短,痛抑制神经元(PIN)痛诱发放电频率减少,诱发放电完全抑制时程延长,而后逐渐恢复;2)侧脑室注入毛果芸香碱能够产生与Ach相似的效应.结论 外源性Ach可使正常大鼠LC中痛反应神经元对伤害性刺激的反应增强,表现为致病效应;M受体激动剂毛果芸香碱可使正常大鼠LC中痛反应神经元对伤害性刺激的反应增强,与Ach产生相似的效应;揭示了Ach的这种致痛作用主要是通过M受体介导的.     

清醒豚鼠的耳蜗电图

在面神经管内长期植入电极记录清醒豚鼠的耳蜗电图，测量了耳蜗电图中各项指标的正常值。耳蜗微音器电位的波幅以短纯音２ｋＨｚ刺激时为最大，其次是０．５、１、４ｋＨｚ，以８ｋＨｚ时为最小。面神经管法记录的总和电位（ＳＰ）的极性均为负性，在短声刺激时ＳＰ／ＡＰ为０．０８４±０；０４３。动作电位（ＡＰ）Ｎ，波的反应阈值在短声刺激时为２．６±４．２ｄＢ，在０．５和ｌｋＨｚ短纯音刺激时分别为５３．２±５．４和４２．４±７．３ｄＢ。在０．５、１．２、４ｋＨｚ短纯音刺激时均可见频率跟随反应，在０．５和１ｋＨｚ时，其波幅大于同频率ＡＰ（Ｎ１）波幅，其反应阈值低于同频率ＡＰ（Ｎ１）反应阈值。