大肠癌组织Runx3基因启动子甲基化的研究

目的:检测大肠癌患者肿瘤组织及其相应的癌旁组织中Runx3基因表达和启动子区域甲基化状态,探讨甲基转移酶抑制剂5-aza-dc对结肠癌细胞系中Runx3表达的作用。方法:将手术切除的37例大肠癌组织和对应癌旁组织提取RNA和基因组DNA,采用RT-PCR检测Runx3基因的表达,甲基化特异PCR方法(MSP)检测Runx3基因启动子区域甲基化状态,用5-aza-dC处理结肠癌细胞系后,RT-PCR方法检测Runx3基因的表达。结果:37例大肠癌和对应癌旁组织中Runx3基因表达阳性率分别为100%(37/37),2.7%(1/37)。癌组织中Runx3基因表达明显降低(P<0.01)。MSP检测发现11例(30%)大肠癌标本及1例(3%)癌旁正常组织中Runx3基因呈甲基化状态。癌组织中Runx3基因甲基化明显高于癌旁组织(P<0.05)。结肠癌细胞系HT29 5-aza-dC处理后Runx3基因表达水平增加。结论:Runx3基因启动子甲基化和Runx3基因表达在大肠癌的癌旁组织和原发癌灶间存在显著性差异,可能与结肠癌的发生发展有关。     

利用全基因组寡核苷酸筛选大肠癌差异表达基因

目的筛查人大肠癌组织与相应正常大肠粘膜差异表达基因。方法应用美国AffymetrixHG—U133寡核苷酸芯片（代表迄今所知的32264个人类全基因．包括19308个已知的人类基因和12956个EST簇）检测9例大肠癌组织及相应正常大肠粘膜基因表达谱，并以实时荧光定量PCR技术对基因芯片检测结果进行验证；综合运用交集补集、秩和检验及t检验比较两组表达谱数据结果获得大肠癌组织与正常大肠粘膜组织差异表达基因和ESTs3125个（包括肿瘤上调基因ESTs974个、下调基因ESTs2151个）；大肠癌组织表达而相应正常粘膜不表达的ESTs245个：大肠癌组织不表达而正常粘膜表达的ESTs162个；最重要的大肠癌差异表达基因ESTs17个。本研究所筛得之大肠癌差异表达基因80．1％未见报道。结论综合运用交集补集分析、t检验、秩和检验对基因谱数据进行挖掘的策略，可为寻找大肠癌分子标记物和从整体上探讨大肠癌发生的分子机制奠定基础。     

利用全基因组寡核苷酸筛选大肠癌差异表达基因

目的 筛查人大肠癌组织与相应正常大肠粘膜差异表达基因。方法 应用美国AffymetrixHG-U133寡核苷酸芯片(代表迄今所知的32264个人类全基因,包括19308个已知的人类基因和12956个EST簇)检测9例大肠癌组织及相应正常大肠粘膜基因表达谱,并以实时荧光定量PCR技术对基因芯片检测结果进行验证;综合运用交集补集、秩和检验及t检验比较两组表达谱数据。结果 获得大肠癌组织与正常大肠粘膜组织差异表达基因和ESTs3125个(包括肿瘤上调基因ESTs974个、下调基因ESTs2151个);大肠癌组织表达而相应正常粘膜不表达的ESTs245个;大肠癌组织不表达而正常粘膜表达的ESTs162个;最重要的大肠癌差异表达基因ESTs17个。本研究所筛得之大肠癌差异表达基因80.1%未见报道。结论 综合运用交集补集分析、t检验、秩和检验对基因谱数据进行挖掘的策略,可为寻找大肠癌分子标记物和从整体上探讨大肠癌发生的分子机制奠定基础。     

Fas在大肠癌及癌旁组织的不同表达及意义

目的研究Fas在人体大肠癌及癌旁组织中的表达. 方法应用SP免疫组化方法（链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连接法）对49例大肠癌及癌旁组织中的Fas基因的表达进行检测. 结果凋亡基因Fas在大肠癌组织中的阳性表达率高于癌旁组织（P＜0.05）,且高分化腺癌组织中的阳性表达率高于癌旁组织（P＜0.05）,但在不同分级的大肠癌及其癌旁组织之间的阳性率无明显差异. 结论分化低的大肠腺癌癌旁组织中的细胞凋亡活动较活跃,有利于肿瘤的浸润与破坏.     

大肠癌组织MALmRNA、蛋白表达及其启动子甲基化状态研究

目的探讨MAL基因对大肠癌筛查及早期诊断的价值。方法选取10例正常大肠组织作为对照,应用RT-PCR、甲基化特异性PCR、Westernblot方法分别检测并比较大肠癌组织（40例）及相应癌旁组织（40例）中MALmRNA、蛋白的表达情况以及MAL基因启动子甲基化状态。结果大肠癌组织中MALmRNA、蛋白的表达阳性率（10.0%、20.0%）均低于其在癌旁组织（75.0%、85.0%）和正常大肠组织（100.0%、100.0%）中的表达阳性率（均P＜0.05）,而大肠癌组织中MAL基因启动子甲基化率（90.0%）均高于其在癌旁组织（40.0%）和正常大肠组织（0.0%）中的甲基化率（均P＜0.05）。结论大肠癌组织中MAL基因或可作为大肠癌筛查及早期诊断的高潜力分子标志物。     

mTOR和eIF4E蛋白在大肠癌组织中的表达及临床意义

目的研究eIF4E和mTOR在结直肠癌中的表达及其临床病理关系。方法外科手术中获取大肠癌组织及癌旁组织各60例,采用RT-PCR及ELISA检测大肠癌组织及癌旁组织中mTOR和eIF4E基因的表达。结果大肠癌组织中mTOR和eIF4E基因的表达明显高于癌旁正常组织,差异有统计学意义(P<0.05)。mTOR和eIF4E基因表达与性别、年龄、临床TNM分期差异无统计学意义(P>0.05),在不同肿瘤分化程度以及有无淋巴结转移上差异有统计学意义(P<0.05)。相关性分析显示,mTOR和eIF4E在大肠癌中的表达呈显著正相关(P<0.05)。结论 mTOR和eIF4E基因在大肠癌中过度表达,联合检测两者在大肠癌中的表达可能有助于恶性程度的评估与预后判断。     

Fas/FasL在大肠癌及癌旁组织的表达

目的研究Fas/FasL在大肠癌及癌旁组织中的表达及其生物学意义。方法利用免疫组织化学方法对 5 0例大肠癌组织、癌旁交界组织、距肿瘤边缘 5cm处、正常组织的Fas/FasL表达进行检测 ,分析上述组织中Fas/FasL表达的差异。结果大肠癌组织、癌旁交界组织与正常组织Fas/FasL的阳性表达率均有显著性差异 (P<0 .0 5 ) ;距肿瘤边缘 5cm处与正常组织的Fas/FasL的阳性表达率无显著性差异 (P >0 .0 5 )。不同分化的肿瘤组织中Fas/FasL表达均无显著性差异 (P >0 .0 5 )。结论大肠癌中存在Fas表达的下调和FasL表达的上调 ,Fas/FasL系统可能参与了大肠癌细胞的免疫逃避机制     

Clusterin和Survivin在大肠癌中的表达及意义

目的研究调亡抑制蛋白Clusterin和Survivin在大肠癌组织和相应癌旁组织中的表达情况及意义。方法应用免疫组织化学法检测100例大肠癌癌组织和相应的癌旁正常组织的Clusterin和Survivin的表达情况,并进行相关的分析。结果Clusterin在大肠癌组织中其阳性率为67.0%,癌旁正常组织为18.0%,两者差异十分显著(P<0.01);Survivin在大肠癌组织中其阳性率为58%,癌旁正常组织为3%,两者差异十分显著(P<0.01);Clusterin和Survivin在大肠癌中的表达具有一定的相关性(r=0.225,P<0.01)。结论Clusterin和Survivin在大肠癌组织中具有较高的表达率在大肠癌中的表达呈正相关性,表明可能是大肠癌的生存基因,这为大肠癌的基因治疗提供了新的途径。     

利用基因芯片筛选大肠癌中细胞增殖相关基因

目的 用基因芯片技术筛选大肠癌中细胞增殖相关基因. 方法 利用HG-U133 Plus2.0基因芯片.对大肠癌组织和正常组织基因表达谱进行检测,并利用生物信息学方法对检测结果进行分析. 结果 ①癌组织与正常组织比较,表达差异2倍以上基因共有1 200个,其中表达上调的474个,表达下调的726个.②在1 200个基因中,共有127个基因与细胞的增殖功能相关,其中表达上调的66个,表达下调的61个. 结论 127个细胞增殖相关基因可为大肠癌的基因治疗提供靶点.     

用基因芯片筛选早期大肠癌相关基因

目的 用基因芯片技术筛选早期大肠癌相关基因. 方法 利用HG-U133Plus2.0基因芯片,对大肠腺瘤组织、癌组织和正常组织基因表达谱进行检测,并利用生物信息学方法对检测结果进行分析. 结果 腺瘤组织与正常组织比较,表达差异2倍以上基因及ESTs共有1892个,其中表达上调的485个,表达下调的1407个.腺瘤组织和癌组织同时与正常组织比较,有602个表达相同的基因及ESTs,其中表达上调2倍以上的125个,表达下调2倍以上的477个. 结论 602个腺瘤与癌表达相同的基因可能与早期大肠癌的启动和演化有关.     

C8orf4基因在大肠癌中的表达

目的：筛查大肠癌分化相关分子标志物。方法：应用美国Affymetrix HG-U133寡核苷酸芯片对不同分化程度大肠癌组织和正常大肠黏膜组织的基因表达谱进行检测。采用肿瘤样品分类法（T-class）对各样品进行基因分类。并应用实时荧光定量RT-PCR检测候选基因在不同分化程度大肠癌中的差异表达。结果：T-class分析获得分类精度100%的大肠癌分化差异表达基因＆ ESTs 8个。其中C8orf4基因（chromosome 8 open reading frame 4）经非多元统计分析，在大肠癌组较正常黏膜表达下调。实时荧光定量RT-PCR检测该基因在不同分化程度大肠癌组间表达，其标准化表达值与基因芯片该基因探针组信号值相关性分析，呈线性相关。两种方法检测C8orf4基因在不同分化程度大肠癌组表达趋势相符。结论：C8orf4基因与大肠癌分化密切相关，可作为大肠癌分化的候选分子标志物。     

用原位RT—PCR技术检测大肠癌组织中相关新基因SNC66的表达

目的：探讨在肿瘤组织石蜡切片标本中原位检测内源性基因表达产物的灵敏方法，研究大肠癌相关新基因SNC66在大肠癌组织中的表达情况以及与大肠癌的相关性。方法：经原位逆转录后进行原位PCR扩增，在扩增过程中掺入地高辛标记的核苷酸（Dig-UTP)并加以检测。比较SNC66在大肠粘膜和大肠癌组织中的表达情况。结果：25个循环时，37例大肠癌组织标本有10例阴性不表达，27例强阳性表达。10个循环时，则14例呈阴性，18例弱阳性，5例强阳性。配对的37例大肠粘膜标本则都呈强阳性表达。结论：原位RT－PCR是一种检测内源性基因低拷贝转录产物mRNA的较灵敏的方法。SNC66基因在大肠癌组织中存在明显的表达降低或缺陷，可作为侯选的抑癌基因加以进一步研究。     

NucIeophosminl胞浆表达的结肠癌组织中不存在其第12外显子突变

目的观察Nucleophosminl（NPMl）在结肠癌组织中是否存在NPMl基因第12外显子突变。方法免疫组化检测115例结肠癌组织及相应癌旁组织、10例结肠绒毛状腺瘤、lO例管状腺瘤和10例正常结肠黏膜组织NPMl表达;检查NPMl胞浆表达的结肠癌组织中是否存在NPMl基因第12外显子突变。结果在115例结肠癌样本中有92．1％（106／115）的病例NPMl表达定位于胞核,7．0％（8／115）的病例存在胞浆NPMl表达,O．9％（1／115）的病例胞核与胞浆NPMl阴性表达;NPMI在结肠癌组织中呈高表达,并且明显高于在相应癌旁组织、绒毛状腺瘤、管状腺瘤和正常结肠黏膜组织的表达（P均〈O．05）。结肠癌组织中NPMl第12外显子结构与正常黏膜野生型NPMl第12外显子结构的相似。结论NPMl在结肠癌组织中呈高表达,表明NPMl在结肠癌发生发展中的潜在作用;NPMl胞浆表达的结肠癌组织中不存在NPMI基因第12外显子突变,说明NPMl以未知方式而不是基因突变方式参与结肠癌发生发展。     

基于PPI网络预测和验证结直肠癌相关Hub基因

目的:通过PPI网络分析确定CRC相关Hub基因,为CRC靶向治疗提供一定参考。方法:从OpenTargets数据库获得CRC相关基因,使用Metascape对基因集进行富集分析,确定基因集富集术语。采用STRING数据库及CytoScape构建PPI网络,采用MCODE寻找PPI网络中的功能模块（子网）。根据功能模块中节点的网络属性确定Hub基因,通过文献法和GEPIA数据库对Hub基因进行验证。结果:共得到CXCL8、ERBB2、CYCS 3个Hub基因,它们均与CRC的发生和发展有一定关系,。它们均在CRC组织与正常组织中存在差异表达,并与CRC患者的总体生存时间相关。结论:基于PPI的网络分析可准确预测CRC相关Hub基因和为CRC靶向治疗提供参考。     

干扰素诱导的跨膜蛋白-1对诊断结直肠癌的临床价值

目的 探讨干扰素诱异的跨膜蛋白-1(IFITM1)基因在肿瘤组织中的表达,血清抗IFITM1的抗体反应以及对临床诊断结直肠癌的意义.方法 应用半定量RT-PCR方法检测IFITMl基因mRNA在正常大肠粘膜、结直肠癌组织、大肠炎性息肉、腺瘤性息肉、胃癌、食管癌和肝癌组织中的表达.采用Western印迹法检测患者血清抗IFITM1的抗体反应.分析有IFITM1基因表达癌肿的病理特点.结果 结直肠癌组织中IFITM1基因mRNA表达率为47.4%(18/38),显著高于大肠腺瘤性息肉的15%(3/20)和胃癌组织的4.8%(1/21)(P<0.05),而正常大肠粘膜、大肠炎性息肉、食管癌和肝癌组织均无表达.结直肠癌组织IFITM1基因mRNA呈强表达,其表达水平(0.8048+0.2273)显著高于大肠腺瘤性息肉(0.4447±0.0989)(P<0.001).结直肠癌血清相应的抗体反应率为36.8%(14/38),明最高于胃癌的9.5%(2/21)(P<0.05),而在食管癌、肝癌、大肠炎性息肉和大肠腺瘤性息肉以及健康人血清则末检测出相应的抗体反应.有IFITM1基因表达的结直肠癌多数直径大于5 cm,侵及浆膜,有淋巴结和远处转移,多属Dukes C期和D期,以高分化腺癌为主.结论 IFITM1基因可能在结直肠癌的发生、发展和转移过程中起重要作用,有望成为临床诊断结直肠癌的一个良好标志物.     

减式杂交筛检大肠癌负相关基因的研究

目的在分子水平寻找与人大肠癌的发生发展相关的新的因素。方法采用减式杂交技术筛选大肠癌下调基因。结果共获得４６个在正常肠粘膜中表达、而在大肠癌中低表达或不表达的克隆。其中２个（ＳＮＣ６和ＳＮＣ１９）已被ＮＣＢＩ作为新基因录入，编号分别为Ｕ１７７１４（ＳＮＣ６）和Ｕ２０４２８（ＳＮＣ１９）。其中ＳＮＣ６已完成全序列测定，为２９３２ｂｐ，推测其为编码２７１个氨基酸的蛋白，分子量为３００００。与蛋白数据库比较，最高同源性仅３０％，染色体定位于２２ｑ１３。ＲＮＡｄｏｔｂｌｏｔ显示：ＳＮＣ６的表达在大肠癌中低于在相应的正常肠粘膜中，在乳癌中亦有此现象。ＮｏｒｔｈｅｒｎＢｌｏｔ发现其在肝、肺、前列腺、睾丸、卵巢及Ｋ５６２细胞中的表达高于其它组织。结论ＳＮＣ６可作为新的大肠癌负相关基因加以研究、利用。     

结直肠癌中肿瘤相关巨噬细胞及基因表型的分析研究

目的结直肠癌(Colorectal cancer,CRC)中肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)CD68~+及CD163~+的检测及与基因表型的关系。方法免疫组化方法检测41例CRC肿物,癌旁5 cm(M5)、10 cm(M10)。不典型增生(Atypical hyperplasia,AH)组织CD68~+及CD163~+的表达,采用病理切片扫描仪细胞计数。对41例CRC肿物进行基因检测。结果CRC患者CD68~+及CD163~+检测肿物组织高于癌旁5 cm、10 cm(P0.01);肿物与不典型组织比较差异无统计学意义(P0.05);癌旁组织M5与M10比较差异无统计学意义(P0.05);回归分析提示CD163~+表达与K-ras基因突变有显著性关系(P0.05)。CD68~+及CD163~+的表达与B-raf基因突变、MSS(微卫星稳定型)、淋巴结转移、脉管癌栓、神经侵犯无相关性(P0.05)。结论 CD68~+及CD163~+在结直肠癌肿物间质中高表达,并高于癌旁组织,与AH表达无相关性。CD163~+在肿物的表达与K-ras基因突变有相关性。