脾气虚大鼠肝细胞超微结构动态变化的实验研究

用过劳及饮食失节法塑造大鼠脾气虚模型、结果表明，随着造模时间的延长，脾气虚大鼠肝细胞线粒体的肿胀、基质变浅、空泡变淡、嵴断裂及排列紊乱等逐渐加重，同时空肠细胞线粒体也有类似变化。提示脾气虚大鼠肝细胞线粒体的变化是一个由轻到重的渐进过程，其病变程度与空肠细胞线粒体的病变程度密切相关；随着营养物质吸收障碍的逐渐加重，肝细胞线粒体的病变程度也渐趋严重，肝脏合成血浆蛋白的能力逐渐下降，是脾气虚证低蛋白血症逐渐加重的形态学基础和发病机制。     

线粒体损伤对NAFL大鼠肝细胞凋亡的影响

目的研究肝细胞凋亡及线粒体损伤在大鼠非酒精性脂肪肝（NAFL）形成中的作用,探讨NAFL的发病机理。方法 将30只雄性SD大鼠随机分为正常对照组和高脂组;HE染色观察肝组织光镜下的病理改变;电镜观察肝细胞超微结构变化;流式细胞仪检测肝细胞凋亡及线粒体膜电位;实时荧光定量PCR法检查caspase-3的mR-NA表达;免疫组化法检查细胞色素C（CytC）含量及caspase-3的蛋白表达。结果 HE染色结果显示,正常对照组大鼠肝脏无异常发现,高脂组肝脏在4周时出现脂肪变,8周出现轻度脂肪肝,12周出现中、重度脂肪肝;电镜下观察高脂组肝组织中肝细胞线粒体肿胀,嵴变短、减少甚至消失,粗面内质网减少,核型欠规则;与正常对照组比较,高脂组4～12周肝细胞凋亡指数增加,线粒体膜电位明显下降（P〈0.05）;高脂组caspase-3的mRNA表达随着时间延长逐渐增高;与正常对照组比较,高脂组CytC、caspase-3的蛋白表达随着时间延长逐渐增高,以12周增加明显（P〈0.05）。结论大鼠NAFL引起的肝细胞损伤与肝细胞凋亡密切相关,线粒体膜电位下降启动了CytC由线粒体向胞质释放,激活caspase家族的级联反应,最终导致肝细胞凋亡,线粒体功能损伤在NAFL发病机制中起关键作用。     

慢性染砷大鼠肝脏线粒体DNA及相关酶活性变化研究

目的 探讨慢性染砷大鼠肝脏线粒体DNA（mtDNA）及线粒体相关酶，特别是mtDNA编码酶活性的变化。方法 Wistar大鼠经饮水给75mg／L三氧化二砷6个月。用分光光度法测定肝脏线粒体呼吸酶活性：碱变性法提取大鼠肝脏mtDNA；以PCR大片段扩增法扩增长片段mtDNA；用HindⅢ、EcoRⅠ、SalⅠ、BamHⅠ、MspⅠ、MboⅠ、StuⅠ7种限制性内切酶对扩增片段进行酶切分析。结果 染砷大鼠肝脏线粒体细胞色素C氧化酶（CytCOX）和ATP酶活性下降；而经mtDNA扩增片段凝胶电泳分析和7种限制性内切酶酶切分析，未发现染砷大鼠肝脏参与编码上述2种线粒体酶的4151bp片段有碱基缺失、重复和突变等异常表现。结论 慢性染砷能够导致肝细胞mtDNA参与编码的CytCOX和ATP酶活性下降，进一步证实了染砷对肝细胞及其线粒体的损害作用。但其活性下降的机制，目前尚不能以砷致mtDNA片段的变化来解释，需进一步进行DNA序列分析研究。     

沙棘熊果酸通过调节线粒体-细胞色素c抑制酒精性肝病大鼠模型肝细胞凋亡的作用分析

目的 基于线粒体-细胞色素c途径探讨沙棘熊果酸对酒精性肝病大鼠肝细胞凋亡的抑制作用。方法 根据随机数字表将50只SPF级雄性Wistar大鼠进行完全随机分组，分为正常对照组、酒精模型组、沙棘熊果酸低、中和高剂量组，每组10只。正常对照组给予每日1次生理盐水灌胃8周；酒精模型组用阶梯式浓度酒精灌胃的方法持续灌胃8周；沙棘熊果酸组分别按50 mg/kg、100 mg/kg和150 mg/kg灌胃,1 h后再灌喂模型组同等剂量酒精。测定各组大鼠血清肝功能指标;HE染色观察肝组织病理情况；电镜下观察大鼠肝细胞超微结构;TUNEL法检测大鼠肝细胞凋亡情况;Western Blot法检测肝细胞线粒体和胞浆细胞色素c和活化caspase-3蛋白表达水平。计量资料多组间比较采用单因素方差分析，进一步两两比较采用LSD-t检验。结果 与酒精模型组相比，沙棘熊果酸中、高剂量组大鼠血清ALT、AST和胆碱酯酶水平均下降(P值均<0.05);酒精模型组大鼠肝细胞索排列紊乱，肝细胞水肿、脂肪变性明显，而沙棘熊果酸中、高剂量组大鼠肝细胞索排列逐渐趋于正常、肝脂肪变性明显改善；肝细胞线粒体数目增加、形态明显改...     

内毒素血症对大鼠肝细胞线粒体能量代谢的影响及黄芪注射液的干预作用

[目的]观察内毒素血症(Endotoxemia,ETM)对大鼠肝细胞线粒体能量代谢的影响及黄芪注射液的干预作用.[方法]将40只大鼠随机分为正常对照组及内毒素(LPS)注射后6、12 h组和黄芪处理6、12 h组.取肝组织分离线粒体,测定其琥珀酸脱氢酶(SDH)及细胞色素氧化酶(CCO)活性,同时行高压液相色谱检测线粒体内腺苷酸能荷(EC)水平.[结果]在注射LPS 6h后,线粒体SDH、CCO活性降低,EC值减少;12h后,线粒体SDH、CCO活性明显降低,EC值进一步减少,与对应的LPS组比较,经黄芪处理后,肝细胞线粒体SDH、CCO活性及EC值均升高.[结论]ETM可造成肝细胞线粒体能量储备的下降,黄芪注射液能提升其肝细胞线粒体氧化磷酸化水平,增加线粒体腺苷酸EC值,促进肝细胞线粒体的能量合成和代谢,具有保护肝细胞的作用.     

线粒体功能障碍与肝细胞癌的关系

肝细胞癌(HCC)是一种发病率高、早诊率低、预后差的肿瘤,其发生与发展涉及多方面因素。线粒体是细胞的“能量工厂”,是体内活性氧自由基产生的主要部位之一,并参与调控细胞凋亡,是一种重要的细胞器。在HCC发生、发展过程中,线粒体膜、氧化呼吸链、线粒体动力学、线粒体DNA、线粒体钙稳态等均发生不同程度的变化,且这种改变会影响HCC的进展。系统阐述线粒体与HCC的关系,为HCC的诊治提供新方向。     

喂饲绞股蓝皂苷对Aβ1～40注射海马后大鼠脑内COX活性和线粒体超微结构变化的影响

目的 探讨β淀粉样蛋白（Aβl。柏）海马注射后大鼠脑内细胞色素氧化酶（cytochrome oxidase，COX）活性和线粒体超微结构变化及绞股蓝（GP）对其影响。方法 动物随机分为GP组、模型组、对照组。运用Aβ双侧海马注射，模拟阿尔茨海默病（AD）脑内Aβ对神经系统的损害。Y型迷宫测试大鼠学习记忆能力，组织化学、原位杂交法结合图像分析检测海马CA1区线粒体COX活性及细胞色素氧化酶Ⅱ型亚基（COⅡ）mRNA表达，电镜观察CA1区神经细胞线粒体超微结构。并对AD模型大鼠给予GP灌胃，观察其对AD模型大鼠上述各项指标变化的影响。结果 与对照组比较，AD模型大鼠空间学习记忆能力、海马CA1区线粒体COX活性及COⅡ mRNA表达明显降低，线粒体数量减少，结构不清、肿胀、空泡样变、嵴断裂；GP对上述各项指标有不同程度的改善。结论 GP具有改善AD模型大鼠学习记忆能力、海马COX活性和COⅡ mRNA表达及线粒体超微结构的作用，对AD模型大鼠有一定治疗和保护作用。     

D-氨基半乳糖/脂多糖诱导急性肝衰竭大鼠肝细胞凋亡的电镜观察

目的通过透射电镜观察急性肝衰竭大鼠肝脏超微结构,以了解肝细胞凋亡的形态学变化。方法给予雌性Wistar大鼠D-氨基半乳糖/脂多糖联合腹腔注射,计算其死亡率及生存时间,动态观察给药后4、8、12小时肝功能和组织病理学变化,并以TUNEL法检测和电镜观察原位细胞凋亡。结果实验组80%大鼠死于急性肝衰竭,平均生存时间为15.6±1.8小时。给药后4小时电镜观察,发现肝细胞线粒体肿胀、内质网扩张,胞浆包含体形成,部分细胞核呈早期凋亡表现,细胞内凋亡小体形成;8小时时,肝细胞凋亡明显增多并呈不同阶段表现,凋亡肝细胞内线粒体病变程度不一;TUNEL检测给药后8小时肝细胞,凋亡指数达高峰,与电镜观察结果一致。结论肝细胞凋亡为D-氨基半乳糖/脂多糖致急性肝衰竭大鼠肝细胞的主要病理形态学表现,这可能为该类型肝衰竭的主要病理学变化基础。     

间断性阻断肝血流对肝细胞和线粒体的保护作用

本实验观察并评价间断性和持续性肝缺血再灌注对大鼠肝细胞和线粒体结构功能、肝组织内钙和脂质过氧化物(LPO)含量．以及超氧化物歧化酶(SOD)活性改变的影响。实验大鼠分为持续阻断组、间断阻断和假处理组。结果表明；持续性缺血再灌注后大鼠肝线粒体呼吸控制比率，磷氧比值和氧化磷酸化效率均显著降低，肝组织内钙和LPO含量均增高，SOD活性下降，细胞损伤较重。间断性缺血再灌注后，上述指标无明显异常改变，细胞损伤较轻。说明间断性肝缺血有利于保护肝细胞和线粒体功能，该效应与细胞内钙稳定和SOD活性增高有关。     

线粒体形态结构随增龄的变化

线粒体形态结构随增龄的变化刘永海，吴丽娟，陈清棠随着电镜等新技术的应用，对线粒体的复杂结构已有了全面了解。它含有三羧酸循环、氧化磷酸化及呼吸链等一系列酶系，是细胞的能源中心，因此线粒体与细胞生命活动有着极为密切的关系。线粒体功能随增龄而减退，线粒体电...     

脾气虚证胃粘膜超微结构及其发病机理的研究

目的:了解脾气虚证的胃粘膜病理形态及其发病机理。方法:慢性胃病24例,进行胃粘膜超微结构研究,超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量,及餐后/空腹血清胃液素检测。结果:脾气虚证其壁细胞线粒体、主细胞酶原颗粒、G细胞分泌颗粒的面数密度,及餐后/空腹血清胃液素比值均明显低于对照组肝胃不和证(P<0.01)。同时,线粒体结构亦有明显损伤。此外,脾虚证胃粘膜MDA含量高于对照组(P<0.05),而SOD活性则低于对照组(P<0.05)。结论:提示脾气虚证胃蛋白酶储备不足,G细胞分泌储备力差。线粒体质和量的改变,可能是脾气虚证病理形态改变的主要环节。脾气虚证的发病过程有氧自由基参与。     

慢性氟中毒大鼠肝细胞超微结构改变的体视学研究

用体视学方法计量两组大鼠肝细胞线粒人本的体密度、面密度、比表面、面数密度、规化形状因子。结果表明染氟组大鼠肝细胞线粒体ＲＦＦ显著减少；Ｖｖｍ、Ｓｖｍ显著增高；Ｑｍ无显著差异。提示ＮａＦ能引起肝细胞线粒体的畸形和增生。     

大鼠海马神经元及其线粒体增龄性改变的形态计量分析

目的探讨大鼠海马神经元及其线粒体形态结构增龄性改变的程度及性质。方法应用组织化学及电镜技术，通过计算机图像分析系统对海马神经元及其线粒体结构进行形态计量分析。结果海马ＣＡ１和ＣＡ３区神经元随增龄出现细胞皱缩，ＣＡ３区神经元数密度在老年组较青年组显著减少（Ｐ＜０．０５），ＣＡ１区神经元数密度各月龄组之间差异无显著性（Ｐ＞０．０５）。ＣＡ３区神经元胞体内线粒体体密度、数密度、比表面及嵴膜密度随增龄而减少，线粒体平均体积及平均截面积随增龄而增大。结论海马神经元及其线粒体形态结构随增龄发生显著性改变，这些形态结构的改变可能是大鼠海马老化的指征。     

内毒素对大鼠肝细胞线粒体膜电位的影响及黄芪注射液的干预作用

目的:观察内毒素血症对大鼠肝细胞线粒体膜电位(△Ψm)的影响及黄芪注射液的干预作用.方法:将40只大鼠随机分为正常对照组及内毒素注射后6h、12h组和黄芪处理组.分离肝细胞并检测其线粒体△Ψm水平,同时提取大鼠肝细胞线粒体测定其丙二醛(MDA)的含量及超氧化物岐化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)的活性.结果:在注射内毒素6h后,线粒体△Ψm减少,MDA的含量升高,SOD、GSH-PX活性减少,12h后,线粒体△Ψm明显减少,MDA升高更加明显,SOD、GSH-PX活性明显减少.与对应的内毒素组比较,经黄芪处理后,肝细胞线粒体△Ψm升高,MDA的含量明显减少,SOD、GSH-PX活性升高.结论:内毒素血症能造成肝细胞线粒体△Ψm下降和线粒体的氧化损伤,黄芪注射液可有效抑制内毒素血症肝细胞线粒体△Ψm的下降,减少内源性自由基的生成,提高机体的抗氧化损伤能力,具有保护肝细胞的作用.     

缺氧对大鼠心肌细胞损伤的影响及机制

目的探讨缺氧对大鼠心肌细胞系H9C2的损伤及机制。方法在1%O_2+5%CO_2+94%N_2条件下培养大鼠心肌细胞株H9C2 3、6、12、24、48 h,并以正常大鼠心肌细胞株作对照,使用台盼蓝进行细胞计数;CCK-8法检测细胞存活率;实时监测心肌细胞生长状态;透射电镜观察细胞内部结构;活性氧检测试剂盒检测胞内活性氧(ROS);Western印迹法检测线粒体色素C蛋白表达水平;流式细胞术检测细胞凋亡率;乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒检测细胞坏死程度。结果缺氧状态下,随着缺氧时间的不断增加,大鼠心肌细胞株H9C2的细胞生长、存活率均明显降低、细胞形态明显改变,细胞器结构明显损伤,ROS水平升高,线粒体细胞色素释放增加,细胞凋亡率明显增加,LDH的释放率明显增高。结论缺氧会造成大鼠心肌细胞的生长速度减慢、形态改变及心肌线粒体损伤,最终导致细胞凋亡和细胞坏死。     

解毒化瘀方对内毒素血症大鼠肝细胞线粒体能量代谢的影响

目的：观察解毒化瘀方对内毒素血症（endotoxemia，ETM）大鼠肝细胞线粒体能量代谢的影响。方法：将56只大鼠随机分为正常对照组及脂多糖（LPS）注射后6、12、24小时组和解毒化瘀方6、12、24小时组。取肝组织分离线粒体，测定其Na^＋-K^＋-ATP酶、Ca^2＋～Mg^2＋-ATP酶活性。同时行高压液相色谱检测线粒体内腺苷酸含量及能荷（EC）水平。结果：在注射LPS 6小时后，线粒体Na^＋-K^＋-ATP酶、Ca^2＋-Mg^2＋-ATP酶活性降低，ATP、ADP含量及EC值减少；24小时后，线粒体Na^＋-K^＋-ATP酶、Ca^2＋-Mg^2＋-ATP酶活性明显降低，ATP、ADP、AMP含量及EC值明显减少。与对应的LPS组比较，经解毒化瘀方处理后，肝细胞线粒体Na^＋-K^＋-ATP酶、Ca^2＋-Mg^2＋-ATP酶活性增加，ATP、ADP、AMP含量及EC值均升高。结论：解毒化瘀方能增加ETM大鼠肝线粒体Ma^＋-K^＋-ATP酶、Ca^2＋-Mg^2＋-ATP酶活性，提高线粒体氧化磷酸化水平，增加线粒体腺苷酸EC值，改善能量代谢，具有保护肝细胞的作用。     

氧应激对线粒体呼吸链的影响及益心康的作用

目的　研究氧应激及益心康胶囊含药血清对大鼠心肌线粒体结构和功能的影响。方法　利用 Fe2 + /抗坏血酸损伤体系在体外攻击线粒体模型 ,观察对线粒体脂质过氧化、呼吸链细胞色素含量及复合物 活性的影响。结果　氧应激损伤可致线粒体脂质过氧化 ,呼吸链细胞色素明显丢失 ,复合物 活性降低。益心康和复方丹参片含药血清可使线粒体脂质过氧化程度减低 ,细胞色素含量增加 ,复合物 活性增加。结论　益心康含药血清具有保护氧应激状态下大鼠心肌线粒体结构和功能的作用     

压力负荷性大鼠肥厚心肌过氧化物酶体增殖剂活化受体α（PPARα）和肉碱棕榈酰转移酶（M—CPT—I）mRNA的表达变化

目的 了解压力负荷性肥厚心肌PPARα和M—CPT—ImRNA的表达变化，探讨PPARα调控心肌线粒体脂肪酸摄取及维持能量和脂质平衡的作用。方法 观察大鼠腹主动脉缩窄术后2、4、8、16周血流动力学参数、心室重塑指标、血清和心肌游离脂肪酸的含量及PPARα和M—CPT—ImRNA的表达变化。结果 随着肥厚程度的增加，压力负荷性大鼠血清和心肌游离脂肪酸蓄积增加，心肌PPARα和M—CPT—ImRNA的表达逐渐下调，而且与脂肪酸的利用下调相一致。结论 病理性肥厚心肌能量代谢底物发生改变，脂肪酸氧化不占主导地位；PPARα在转录水平上失活，对心肌线粒体脂肪酸摄取起重要的调控作用；PPARα可能与肥厚心肌能量和脂质失衡有关。     

同型半胱氨酸对大鼠心肌微血管内皮细胞线粒体功能的影响及通心络的保护作用

目的探讨通心络(TXL)对同型半胱氨酸(Hcy)诱导大鼠心肌微血管内皮细胞线粒体功能损伤的保护作用及机制。方法用Hcy建立大鼠心肌微血管内皮细胞损伤模型,分为对照组、Hcy组、TXL-L组、TXL-M组、TXL-H组。分别检测各组细胞线粒体活性、线粒体膜电位(MMP)和细胞内活性氧(ROS)水平。结果与对照组相比,模型组细胞线粒体活性和MMP降低,细胞内ROS水平升高(P<0.05,P<0.01);与模型组相比,TXL各浓度组均能不同程度地改善上述指标变化(P<0.05,P<0.01)。结论 TXL能够改善Hcy诱导的大鼠心肌微血管内皮细胞线粒体功能障碍,其作用机制可能与降低细胞内ROS水平有关。     

砷中毒大鼠肝脏亚细胞组分中砷的分布

目的　研究砷中毒大鼠肝脏亚细胞组分 (细胞核、线粒体、溶酶体、微粒体及胞液 )中砷的分布 ,为地方性砷中毒的治疗提供科学依据。方法　用亚砷酸钠 (Na As O2 )诱导出大鼠亚急性砷中毒模型 ,采用差速离心生化分离技术与超热中子活化分析相结合 ,测定大鼠肝脏亚细胞组分中砷的含量。结果　中毒组大鼠肝脏中各亚细胞组分中砷的含量均极显著高于正常对照组 (P <0 .0 1或 P <0 .0 0 1) ;且砷在各亚细胞组分中的浓度并非均匀分布 ,在中毒组肝脏亚细胞中的浓度遵循微粒体 >胞液 >线粒体 >细胞核。结论　砷在微粒体、胞液和细胞核中的大量蓄积 ,可能导致肝细胞损伤。