HOXB1基因转染对HL—60细胞视黄酸代谢和α—干扰素表达 …

目的　探讨同源盒基因B1(HOXB1)转染对HL 6 0细胞视黄酸代谢和α 干扰素表达的影响。方法　采用脂质体介导的质粒转染、RT PCR及高效液相色谱 (HPLC)分析等方法进行分析检测。结果　2 .5× 10 -7mol/L全反式视黄酸 (ATRA)能抑制HOXB1转染及非转染HL 6 0细胞的增殖 ,HOXB1的高表达能明显减弱ATRA对HL 6 0细胞的增殖抑制作用 ;HPLC分析显示 ,转染细胞ATRA的代谢减慢 ;ATRA处理能诱导HOXB1转染及未转染HL 6 0细胞IFNα表达 ,加用外源性IFNα能上调ATRA处理HL 6 0细胞IFNα基因表达。结论　HOXB1转染使HL 6 0细胞ATRA代谢受抑 ,ATRA增殖抑制作用减弱 ,外源性IFNα能上调HL 6 0细胞IFNα表达     

视黄酸诱导下的HL-60凋亡和IFNα控制机制的研究

目的探讨在多功能的细胞因子干扰素（IFN）和全反视黄酸（ATRA）联合作用下，HL-60细胞的细胞增殖、分化及表达水平。方法选择人白血病细胞HL-60细胞株为实验对象，以逆转录病毒载体PbCSN—IFNa5经PA317细胞包装，再特染HL-60细胞，用RT-PCR、ELISA、流式细胞仪和NBT实验进行观察和分析。结果逆转录病毒载体介导下的IFNα在HL-60细胞中高表达，24h10^6个细胞分泌量为95ng／ml，ATRA对IFNα高表达的HL-60细胞诱导作用十分明显。结论逆转录病毒载体介导的1FNα能显著增强ATRA对HL-60细胞的抑制增殖、诱导分化作用，1FNα和ATRA联合使用存在叠加或协同效应。     

视黄酸对pRARE4-IFNα表达载体转染HL-60细胞放射敏感性的影响

目的探讨视黄酸(RA)及其诱导的外源性α-干扰素(IFNα)对肿瘤细胞放射敏感性的影响及其可能机制.方法含视黄酸反应元件(RARE)的IFNα表达载体(pRARE4-IFNα),转染肿瘤细胞并证实外源性IFNα基因的表达受RA的诱导后,对细胞进行RA和辐射联合处理,分析细胞增殖功能、细胞DNA片段化百分率,caspase-3蛋白表达与活性,以及caspase-3特异性抑制剂(DEVD-CHO)对RA和/或辐射的效应的拮抗作用.结果 HL-60和HL-60IFNα细胞经2×10-7mol/L RA和/或4 Gy 60Co γ射线电离辐射处理后,细胞增殖能力减弱,DNA片段化百分率增加,caspase-3蛋白表达上调,活性升高,RA和辐射联合处理作用更明显,DEVD-CHO可拮抗RA引起的caspase-3活性升高,并部分削弱RA引起的细胞增殖抑制和凋亡.结论 RA及其诱导的外源性IFNα可提高肿瘤细胞放射敏感性,caspase-3的表达和活性升高在RA和辐射诱导细胞凋亡过程中可能具有重要作用.     

Cyclin D1／CDK4在ω-3脂肪酸和视黄酸抑制HL-60细胞增殖中的作用

目的研究Cyclin D1／CDK4在ω-3脂肪酸和视黄酸抑制HL-60细胞增殖过程中的作用。方法HL-60细胞经全反式视黄酸(ATRA)和二十二碳五烯酸(EPA)处理一定时间后，MTr比色法测定细胞增殖功能；RT—PCR分析ATRA和EPA对HL-60细胞Cyclin D1、CDK4、CDK2mRNA表达的影响；Western blot分析CDK4和P15蛋白质表达水平。结果ATRA或EPA单独处理均能抑制HL-60细胞生长，下调节HL-60细胞Cyclin D1、CDK4mRNA和CDK4蛋白的表达，上调P16蛋白的表达，二者联合处理时上述变化更明显，而ATRA和／或EPA对CDK2 mRNA表达无明显影响。结论ATRA和EPA可能通过下调节Cychn D1、CDK4的表达，上调节P16的表达，导致Cyclin D1／CDK4复合物的活性下降，细胞生长被阻断在G1／G0期，从而发挥它们对HL-60细胞增殖抑制作用。     

人类巨细胞病毒感染对人胚肺细胞HOXB1,HOXB5,HOXB6及HOXB9基因表达的影响

目的 :研究人胚肺 (HEL)细胞HOXB1,HOXB5 ,HOXB6及HOXB9基因的表达状态及人类巨细胞病毒(HCMV)感染对上述基因表达的影响。方法 :采用半定量逆转录 -聚合酶链反应 (RT -PCR)技术。结果 :①HEL细胞表达HOXB5和HOXB6 ,但不表达HOXB1和HOXB9;②HCMV感染后 ,HEL细胞HOXB6基因的表达上调 ,且被HCMV诱导表达HOXB9T ,而HOXB5基因的表达无明显改变 ,HOXB1基因仍旧不表达 ;③全反式维甲酸 (ATRA)能上调HCMV感染后HOXB9基因的表达 ,但对HCMV感染晚期HOXB6基因的表达有抑制作用。结论 :HCMV能诱导HOXB6和HOXB9基因表达异常 ,这可能在先天性HCMV感染导致胚胎发育畸形中起重要作用     

人类巨细胞病毒感染对神经胶质瘤细胞HOXB5,HOXB6,HOXB7及HOXB8基因表达的影响

以半定量RT -PCR技术检测经人类巨细胞病毒 (HCMV)感染和 /或全反式维甲酸 (ATRA)处理的神经胶质瘤细胞U2 5 1株的HOXB5 ,HOXB6 ,HOXB7和HOXB8的相对表达水平 ,以探讨HCMV致畸的可能机制。结果示 ,未经处理的U2 5 1细胞不表达HOXB5 ,HOXB6及HOXB8,但表达HOXB7;HCMV感染和 /或ATRA处理后 ,细胞仍不表达HOXB5及HOXB6 ,但在第二代时均表达HOXB8,尤以HCMV和ATRA共同处理后更明显 ;第三代后HOXB8的表达恢复正常。HCMV和 /或ATRA处理细胞后 ,HOXB7的表达在第一代即上调 ,第二代、第三代其表达稍下降 ,至第四代时表达又上调。表明HCMV致畸作用可能是通过诱导HOX基因的表达进而调节其它基因的异常表达而实现。     

全反式维甲酸与紫杉醇、阿霉素联合诱导HL-60细胞凋亡的研究

目的:探讨全反式维甲酸(ATRA)分别与紫杉醇(Taxol)、阿霉素(ADR)单独或联合孵育HL-60细胞株能否增强凋亡诱导作用,并进一步研究bcl-2基因及家族bax、bcl-x基因在此过程中的作用。方法:1用台盼兰拒染法观察细胞生长活力;2在光镜和电镜下观察细胞形态变化;3用流式细胞仪(FCM)检测药物孵育前后细胞凋亡率(AP)的变化;4用RT-PCR法检测药物孵育前后bcl-2基因及其家族bax、bcl-x基因的表达水平。结果:1ATRA能增强Taxol和ADR对HL-60细胞的生长抑制作用;2ATRA能增强HL-60细胞对Taxol和ADR诱导的细胞凋亡;3在ATRA与Taxol、ADR联合诱导的HL-60细胞凋亡中,bcl-2、bcl-xl基因表达下降,bax、bcl-xs基因表达增加。结论:ATRA能增加Taxol和ADR对HL-60细胞的生长抑制作用及凋亡诱导作用,bcl-2基因及家族bax、bcl-x基因参与了ATRA与Taxol、ADR联合诱导细胞凋亡的调控。     

重组腺病毒介导的反义c-myc基因对HL-60细胞增殖及细胞周期的影响

目的:观察重组反义c-myc腺病毒(Ad-Asc-myc)对急性早幼粒白血病HL-60细胞周期及增殖的影响,探讨其作用的分子机制.方法:将Ad-Asc-myc与鱼精蛋白硫酸盐(Protamine sulfate)混合后转染HL-60细胞,MTF法观察细胞生长曲线,流式细胞仪检测细胞增殖周期,RT-PCR检测c-myc转录变化,免疫细胞化学检测c-myc及增殖细胞核抗原(PCNA)表达变化.结果:Ad-Asc-myc转染HL-60细胞后,细胞生长受抑,细胞周期呈现G1期延长、S期缩短,增殖指数逐渐下降,出现大量凋亡细胞.c-myc基因转录及表达下降,PCNA表达降低.结论:Ad-Asc-myc可使HL-60细胞的生长减缓,增殖能力降低,凋亡细胞增加.其生物学活性与HL-60细胞c-myc和PCNA表达受抑有关.     

c-myc反义寡核苷酸对HL-60细胞增殖及c-myc基因表达的影响

目的：观察c-myc基因反义寡核苷酸(ASODN)对HL-60细胞增殖及c-myc基因表达的抑制作用．探讨ASODN作为药物进行白血病基因治疗的可行性、方法：应用c-myc反义寡核苷酸封闭HL-60细胞c-myc基因、RTPCR方法检测该基因表达抑制情况．流式细胞仪进行细胞周期分析,倒置显微镜观察细胞形态变化．绘制细胞生长曲线,MTT法检测细胞增殖状态。结果：c-myc基因反义寡核苷酸转染HL-60细胞后,c-myc基因表达明显受抑;S期细胞比值由55.6％降至16．7％;细胞生长受抑,增殖能力减弱,其抑制作用具有序列特异性及剂量依赖性。结论c-myc基因反义寡核苷酸对HKL-60细胞增殖及c-myc基因的表达具有明显的抑制作用,有望成为抑制白血病细胞增殖的核酸药物。     

表达人Jagged1基因的骨髓基质细胞系的建立及其在HL-60细胞分化过程中的作用

目的:建立表达人Jagged1基因的骨髓基质细胞系,并研究Jagged1基因表达在HL-60细胞诱导分化过程中的作用.方法:构建含有人全长Jagged1基因的逆转录病毒载体MSCV-Jagged1/neoR,将其导入包装细胞PT67并收获病毒上清,用病毒上清转染骨髓基质细胞系HFCL,经G418筛选得HFCL-pMSCV-Jagged1细胞,用Western印迹方法检测Jagged1基因的表达;将HL-60细胞与HFCL-pMSCV-Jagged1细胞、HFCL细胞在含有全反式维甲酸(ATRA)的培养液中共培养,流式细胞仪检测不同时间点HL-60细胞CD11b的阳性率.结果:Western印迹方法证明HFCL-pMSCV-Jagged1细胞Jagged1表达水平明显高于HFCL细胞;HL-60细胞与HFCL-pMSCV-Jagged1、HFCL共培养48和72 h后,CD11b阳性率在Jagged1组明显低于HFCL组(P<0.05).结论:Jagged1基因表达可以较为显著地抑制ATRA诱导的HL-60细胞的分化.     

视黄酸和α-干扰素对带有视黄酸反应元件的LUC报告基因表达的调控作用

目的：探讨视黄酸（Retinoic acid,RA）通过视黄酸反应元件（RARE）调控外源基因表达的可行性。方法：构建带有视黄酸受体β（RARβ）基因增强子区域RARE的荧光素酶（Luciferase,LUC）报告基因表达载体，应用脂质体包裹RARE－TK－LUC和RARE3－TK－LUC质粒，并转染HL－60细胞，48h后，用RA和／或α-干扰素（IFNα)处理不同时间，用LUC报告基因检测试剂盒分析LUC报告基因活性。结果：经RA处理不同时间后，RARE－TK－LUC和RARE3－TK－LUC质粒转染细胞的LUC相对活性分别较未经处理的转染细胞增加12－38和20－85倍；单用IFNα处理转染细胞，对LUC的表达无明显的诱导作用；IFNα和RA联合处理48、72h，LUC相对活性比单用RA处理增加60％－70％。结论：RA可调控带有RARE的LUC报告基因的表达，说明应用RARE构建RA可调控的目的基因表达载体是可行的。     

核因子-кB在TNF-α诱导HL-60细胞凋亡中的作用

目的了解白血病细胞系HL-60中,肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导的核因子-кB(NF-кB)活化与细胞凋亡之间的关系.方法采用脂质体基因转染技术,将突变的核因子抑制蛋白(IкBα)质粒(pCMV4-IкBαs32/36A)转染HL-60细胞,于48 h后测其瞬时表达效应.用间接免疫荧光和Western bbt技术检测转染组和非转染组HL-60细胞的NF-кB活化状态,同时用流式细胞术和MTT法分别检测TNF-α对两组HL-60细胞的凋亡诱导及生长抑制效应.结果 TNF-α可诱导非转染组HL-60细胞的NF-кB活化,不能诱导转染组细胞的NF-кB活化,即突变型IкBα可特异性抑制HL-60细胞的NF-кB活化.结论用突变型IкBα特异性抑制HL-60细胞的NF-кB活化,能明显增加其对TNF-α的敏感性.     

人类巨细胞病毒对人胚肺细胞HOXB1，HOXB1，HOXB5，HOXB6及HOXB9基因表达的影响

目的：研究人胚肺（HEL）细胞HOXB1，HOXB5，HOXB6及HOXB9基因的表达状态及人类巨细胞病毒（HCMV）感染对上述基因表达的影响。方法：采用半定量逆转录－聚合酶链反应（RT－PCR）技术。结果：①HEL细胞表达HOXB5和HOXB6，但不表达HOXB1和HOXB9；②HCMV感染后，HEL细胞HOXB6基因的表达上调，且被HCMV诱导表达HOXB9T，而HOXB5基因的表达无明显改变，HOXB1基因仍旧不表达；③全反式维甲酸（ATRA）能上调HCMV感染后HOXB9基因的表达，但对HCMV感染晚期HOXB6基因的表达有抑制作用。结论：HCMV能诱导HOXB6和HOXB9基因表达异常，这可能在先天性HCMV感染导致胚胎发育畸形中起重要作用。     

期刊文摘

Mcl-1基因在HL-60细胞对全反式维甲酸耐药机制中的作用[付劲蓉,刘文励,周剑锋等.中华血液学杂志,2005,26(6):352～354]探讨髓系白血病-1(Mcl-1)基因在HL-60细胞对全反式维甲酸(ATRA)耐药中的作用。采用少量、递增、反复AT-RA诱导HL-60细胞,建立ATRA耐药细胞系HL-60/ATRA;利用鸡尾酒法制备Mcl-1基因的小片段干扰RNA(smallinterference RNA,si RNA),并通过脂质体介导将其导入HL-60/ATRA细胞;Western blot检测Mcl-1蛋白在细胞中的表达;MTF实验、NBT还原反应实验、TUNEL免疫组化染色法分别检测细胞的增殖、分化和凋亡情况…     

人白血病细胞 HL-60凋亡启动时相的亚细胞蛋白质组学研究

目的：建立全反式维甲酸（ ATRA）诱导HL-60细胞凋亡启动模型,分析凋亡启动时细胞总蛋白和亚细胞组分蛋白的表达情况。方法：体外培养HL-60细胞,氮唑蓝（ MTT）比色法检HL-60细胞测增殖活性,流式细胞术（ FCM）检HL-60细胞测细胞凋亡和细胞周期分布;高速离心法分离对照组与凋亡启动时相的HL-60细胞核、膜和细胞器以及细胞质等组分蛋白;双向电泳（2-DE）HL-60细胞总蛋白和亚细胞组分蛋白,图像分析软件分析2-DE图谱,筛选差异表达蛋白,并进行液相色谱串联质谱（ LC- MS/MS）鉴定。结果：ATRA明显抑制HL-60细胞增殖,并随浓度、时间的增加,抑制作用也越显著;以1μmol/L的ATRA诱导HL-60细胞48 h早期凋亡比例为13.21％,细胞形态也存在明显变化;筛选出22个差异表达蛋白点,其中5个蛋白在凋亡启动时表达上调,15个蛋白表达下调,2个蛋白只在凋亡启动时表达;它们的功能主要涉及与细胞凋亡相关的蛋白,与细胞分化、增殖相关的蛋白和其它蛋白。结论：1μmol/L的ATRA诱导HL-60细胞生长48 h,成功建立细胞凋亡启动模型;凋亡启动时相的HL-60细胞质、膜和细胞器以及细胞总蛋白的表达都存在差异,这些差异表达蛋白可能在细胞凋亡启动时起重要作用。     

Lovastatin对HL-60细胞HMG-CoA还原酶mRNA表达及细胞增殖功能的影响

目的探讨胆固醇合成抑制剂洛伐他汀(10vastatin,LOV)对HL-60细胞HMG-CoA还原酶mRNA表达及细胞增殖功能的影响.方法采用MTT比色法、生长曲线测定、计算细胞生长抑制率、流式细胞仪分析、以及RT-PCR等技术方法,观察LOV对HL-60细胞体外增殖能力、细胞周期分布及HMG-CoA还原酶mRNA表达的影响.结果HL-60细胞经LOV处理后,生长减慢,细胞周期被阻滞在G0/G1期,LOV剂量越大,时间越长,增殖抑制作用越明显;LOV处理HL-60细胞1～3 d,低剂量组(4 lμmol/L)HMG-CoA还原酶mRNA表达上调;而中剂量组(8μnol/L)和高剂量组(16μmol/L)第1天有增加趋势,第2～3天明显降低.结论LOV能显著抑制HL-60细胞增殖,使细胞受阻于G0/G1期,该作用有明显剂量-效应和时间依赖关系;随洛伐他汀处理剂量和时间的不同,HL-60细胞HMG-CoA还原酶mRNA表达表现为上调或下调变化.     

全反式维甲酸调控AMPK/mTOR通路抑制血管平滑肌细胞增殖的研究

目的探讨AMP依赖的蛋白激酶(AMPK)在全反式维甲酸(ATRA)抑制血管平滑肌细胞(VSMC)增殖中的作用。方法采用MTS实验检测VSMC的增殖情况并进行细胞活力测定;Western blot测定AMPK活化后pAMPKα和AMPKα的表达水平及哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路激活后p-mTOR和mTOR的表达水平;利用AMPK抑制剂(CC)通过Western blot测定p-AMPKα和AMPKα的表达水平及A7r5细胞活力进一步确定AMPK在ATRA抗VSMC增殖中的作用。结果 ATRA可以剂量和时间依赖性方式抑制A7R5细胞的增殖(P均0.05);ATRA可以剂量依赖性显著地上调Thr172处AMPKα的磷酸化水平(P0.05),而不改变AMPKα的总水平;ATRA可以剂量依赖性抑制mTOR的磷酸化水平(P0.05),而不改变mTOR的总水平。AMPK抑制剂(CC)通过抑制AMPKα,部分抵消ATRA介导的对VSMC增殖的抑制作用。ATRA(4μmol/L)和CC共刺激A7R5细胞可显著下调AMPKα的磷酸化水平(P0.05);与此同时,与单独ATRA(4μmol/L)处理相比,ATRA(4μmol/L)与CC共同处理,可显著缓解ATRA抑制A7r5细胞的增殖作用(P0.05)。结论 ATRA可能通过激活AMPK和抑制mTOR信号通路抑制VSMC的增殖。     

自分泌干扰素α在全反式维甲酸诱导RIG-G基因表达中的作用

目的 深入研究维甲酸诱导基因G(RIG-G)表达中干扰素α(IFN-α)和全反式维甲酸(ATRA)两条信号途径间的相互关系.方法 运用急性早幼粒细胞白血病细胞系NB4细胞和信号转导子与转录激活子(STAT)1缺失的人纤维肉瘤细胞系U3A细胞,检测ATRA作用于NB4细胞后,细胞内STAT2的磷酸化水平,并测定NB4细胞培养液上清及转染了干扰素调节因子1(IRF-1)的U3A细胞培养液上清中的IFN-α水平,以及培养液上清对STAT2的磷酸化和RIG-G基因表达的诱导作用.结果 ATRA处理72 h后,NB4细胞内的STAT2磷酸化水平和细胞培养液上清中的IFN-α浓度均明显升高[ IFN-α:( 7.6±0.3)pg/ml比(1.5±0.5)pg/ml,P＜0.05].该培养液上清能够诱导STAT2发生磷酸化,并上调RIG-G的蛋白水平.U3A细胞转染IRF-1后,培养液上清中的IFN-α浓度也明显提高[(8.8±1.4) pg/ml比(3.4±0.4)pg/ml,P＜0.05].结论 RIG-G基因的表达与ATRA和IFN-α这两条信号途径的协同作用密切相关,ATRA可以通过上调IRF-1的蛋白水平促进细胞分泌IFN-α,所分泌的IFN-α能诱导STAT2发生磷酸化,并进一步增强细胞内RIG-G基因的表达.     

重组反义c-myc腺病毒诱导HL-60 细胞分化的作用

目的研究重组反义c-myc腺病毒(Ad-AS-c-myc)对人急性早幼粒HL-60细胞系的诱导分化作用及分子机制,探讨Ad-AS-c-myc用于急性早幼粒白血病基因治疗的可能性.方法采用重组腺病毒Lac-Z(Ad-LacZ)及Ad-AS-c-myc联合多聚阳离子转染HL-60细胞,X-gal染色判断转染效率.采用形态学、MTT试验、RT-PCR、流式细胞仪及免疫细胞化学等方法进行研究.结果多聚阳离子可提高腺病毒对HL-60细胞的转染,Ad-LacZ protamine sulfate转染率达79.8%.Ad-AS-c-myc能抑制HL-60细胞c-myc基因在转录及蛋白水平的表达.Ad-AS-c-myc抑制HL-60细胞生长及活力(抑制率51%),降低其核浆比例,增加其过氧化酶活性,引起其G0/G1阻滞及分化相关基因c-fos基因表达增强.结论Ad-AS-c-myc对HL-60细胞具有抑制生长及诱导分化作用.其生物学作用与HL-60细胞过氧化酶活性及c-fos的表达有关.Ad-AS-c-myc在急性早幼粒白血病基因治疗中具有潜在的临床价值.