葡萄糖调节蛋白94在人肝癌组织中的表达及其临床意义

目的 探讨葡萄糖调节蛋白94(Crp94)mRNA及蛋白在肝癌组织和癌旁组织中的表达情况及其与肝癌发生的关系.方法 肝癌患者手术切除标本10例,应用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)分别检测肝癌组织和癌旁组织细胞Grp94 mRNA基因的相对表达量,并通过免疫组织化学SP法检测10例肝癌组织和癌旁组织标本Crp94蛋白的表达情况.结果 (1)半定量RT-PCR显示:Grp94 mRNA在肝癌组织中均呈高表达,相对表达量为0.7490±0.7508,而在对应的癌旁组织中呈低表达或无表达,相对表达量为0.446 62±0.50000两组之间差异有统计学意义(P《0.05).(2)免疫组织化学及图像分析结果显示:在肝癌组织和癌旁组织中Grp94蛋白平均灰度扫描值分别为158.0800±20.5952、122.2800±24.4148两组之间差异有统计学意义(P《0.01).结论 Grp94在肝癌中的表达明显增高,可能在肝癌的发生、发展过程中发挥重要作用.     

胃泌素受体在肝细胞肝癌中的表达

目的 探讨人肝细胞性肝癌(HCC)细胞株和组织中胃泌素受体(GR)的表达和临床病理学意义.方法 免疫组织化学染色方法 检测四种人HCC细胞株和25例人HCC组织中GR的表达.结果 显示在较高一抗浓度下,三种人HCC细胞株可见GR阳性表达,表达强弱为SMMC一7721>HepG2>QGY-7701,在人HCC组织中GR的阳性表达率为56%(14/25).但GR的表达与病人性别、年龄、临床分期、有否乙肝后肝硬化、肿瘤大小均无明显相关性.有脉管癌栓组与无脉管癌栓组显示出GR表达差异有统计学意义.结论 在肝细胞肝癌中存有胃泌素受体表达.是否具有内分泌治疗意义尚须进一步研究.     

PI3Kp110beta和前强啡肽在人肝癌组织中的表达

目的 观察人肝癌中磷脂酰肌醇激酶-3(PI3K)p110beta和前强啡肽的表达.方法 应用半定量逆转录.聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测10例人中晚期肝癌及其癌旁正常组织中PI3Kp110beta和前强啡肽mRNA基因的相对表达量.结果 PI3Kp110beta和前强啡肽在中晚期肝癌中的表达高于癌旁正常组织,差异有统计学意义(90%比10%;80%比20%,P<0.05).结论 中晚期肝癌中PI3Kp110beta和前强啡肽处于过度表达状态,参与肝癌的发生、发展.     

Survivin在肝细胞性肝癌中的表达及其临床意义

为研究survivin 与肝细胞肝癌（HCC）临床特征的关系，探讨其对HCC的早期诊断及治疗的意义。笔者应用免疫组织化学(SABC)法,检测survivin在39例HCC组织、4例正常肝组织和8例肝硬化组织中的表达，并分析HCC及不同病理学特征与survivin蛋白表达的关系。结果示， HCC组织、正常肝组织、肝硬化组织中survivin基因的阳性表达率依次为61.3%，0%和0%;HCC组织与后2组间差异有显著性(P<0.05);随HCC分化程度的降低, survivin的阳性表达率明显上升(P<0.05)。提示survivin的表达水平在HCC的发生、发展中具有重要意义,有望成为一新的肿瘤标志物而应用于临床。     

凋亡抑制蛋白FLIP在肝癌组织中的表达和意义

目的检测凋亡抑制蛋白FLIP在人肝癌不同分化组织中的表达并揭示其在肝癌发生发展中的意义。方法采用免疫组织化学技术，分析86例肝癌标本（采用经典的Edmondson四级分级法，Ⅰ级18例，Ⅱ级25例，Ⅲ级21例，Ⅳ级22例），肝癌Hepg2细胞系1株细胞爬片的10样本中FLIP蛋白的表达并进行统计学分析比较。结果凋亡抑制蛋白FLIP在86例肝癌标本中有72例阳性表达（83．72％），Ⅰ级13／18（72．22％），Ⅱ级20／25（80．00％），Ⅲ级18／21（85．71％），Ⅳ级21／22（95．45％）（P〈0．05）；在肝癌Hepg2细胞系细胞爬片10个样本中全部阳性表达（100％），（P〈0．01）。结论凋亡抑制蛋白FLIP在肝癌组织中呈阳性表达；不同分化的肝癌组织其表达阳性率不同，分化越差其阳性表达率越高；这可能为揭示肝脏恶性肿瘤的发生、发展提供新的理论依据，并为肝癌的有效治疗提供新的思路。     

肝癌患者血浆载脂蛋白M水平的检测

原发性肝细胞癌是我国常见的恶性肿瘤之一，在肝癌肝细胞损伤的情况下，可导致血浆脂质和脂蛋白结构的改变。载脂蛋白M（ApoM）是由Xu于近年发现并从乳糜微粒中分离及克隆的一种高密度载脂蛋白。本研究旨在检测肝癌患者血浆中ApoM的水平，并对ApoM和其他脂质成分进行相关性分析。[第一段]     

Polo样激酶1在原发性肝癌组织中的表达及其意义

目的 观察Polo样激酶1(PLK1)在原发性肝癌细胞中的表达,探讨其与肝癌患者临床病理特点及预后的关系.方法 采用免疫组织化学技术观察PLK1在40例原发性肝癌组织石蜡切片中的表达.结果　癌栓、包膜侵犯、BCLC分期等因素和PLK1的阳性表达呈明显相关(P＜0.05);PLK1阳性组和阴性组的术前甲胎蛋白(AFP)差异有统计学意义(P＜0.05);秩和检验分析PLK1表达与患者肿瘤直径大小的关系发现PLK1阳性组和阴性组之间差异有统计学意义(P＜0.01).生存分析显示,PLK1的表达和患者的生存期无明显相关;Kaplan-Meier法分析原发性肝癌的预后的单因素相关因子显示与包膜侵犯、TNM分期、癌栓及转移与生存期明显相关(P＜0.05),与性别、乙肝、肝硬化、肿瘤数目BCLC分期及临床分期无明显相关;多因素Cox回归分析显示包膜侵犯、癌栓及转移3项指标反映肝癌预后(P＜0.05).结论 PLK1的表达与肝癌的发展及其临床生物学行为密切相关.

Abstract：

Objective To investigate the expression of Polo-like kinase 1 (PLK1) in patients with hepatocellular cancer (HCC), and find out its correlation with clinicopathological features and prognosis of HCC. Methods The expression of PLK1 in 40 patients with primary HCC was detected by using immunohistochemistry (IHC) and analyzed with SPSS13.0 software. Results Significant positive correlations were revealed between PLK1 expression and tumor thrombosis, envelope evasion and BCLC staging ( P ＜0. 05). Meanwhile, there were significant differences in preoperative alpha fetal protein (AFP) level and tumor diameter between PLK1 positive and negative groups ( P ＜ 0. 05). However, no significant correlation was observed between PLK1 expression and survival time of HCC. Factors, including envelope evasion, TNM staging, tumor thrombosis and metastasis, were significantly correlated with the survival time ( P ＜ 0. 05), while Cox regression analysis showed that envelope evasion, tumor thrombosis and metastasis were significantly correlated with HCC prognosis (P ＜ 0. 05). Conclusion PLK1 is closely correlated with the development and clinicobiological characteristics of HCC.     

MCM2p、p16INK4A和Ki-67在肝癌组织中的表达

目的 探讨MCM2p在肝癌中的表达及其与肿瘤细胞增殖活性的关系.方法 采用免疫组织化学法检测MCM2p、p16INK4A和Ki-67在肝细胞肝癌及其相应的癌旁正常组织中的表达.结果 肝癌组织MCM2p和Ki-67的表达显著高于癌旁肝组织(P《0.01),而p16INK4A表达显著低于癌旁肝组织(P《0.01).MCM2p的表达和Ki-67的表达状况关系密切,呈正相关,而与p16INK4A表达呈负相关.结论 MCM2p和Ki-67在肝癌组织中呈高表达,并与肝癌的发生发展及肿瘤的增殖活性有关.     

载脂蛋白M在结直肠癌组织中的表达及其临床病理相关性

目的探讨载脂蛋白M（apoM）在结直肠癌组织中表达水平的变化及其临床相关性。方法采用荧光定量PCR检测20例结直肠癌组织及其癌旁组织中apoM的mRNA表达：采用免疫组织化学方法检测7例正常肠黏膜、6例肠炎组织、10例肠息肉、20例结直肠癌及其癌旁组织中apoM的蛋白表达水平。结果apoMmRNA在结直肠癌组织和癌旁组织中均有表达．前者相对表达量显著低于后者（0．05±0．01比0．19±0．05,P〈0．05）。无淋巴结转移者apoMmRNA表达水平显著低于有淋巴结转移者（P〈0．01）。结直肠癌组织中apoM蛋白表达中位分值为5．50．显著低于癌旁组织（10．5,P〈0．05）、肠炎组织（9．75,P〈0．05）、肠息肉组织（11．0,P〈0．01）及正常黏膜组织（10．5,P〈0．05）。未见结肠癌组织中apoM蛋白水平与患者临床病理特征有关（P〉0．05）。结论载脂蛋白apoM在肠癌组织中的mRNA及蛋白水平较正常组织及良性病变组织显著降低。结直肠癌组织中apoMmRNA表达水平与淋巴结转移有关。     

P-糖蛋白和p38在人肝癌组织中的表达及其意义

目的观察P-精蛋白和p38蛋白在人肝癌组织中的表达。方法应用免疫组织化学方法检测62例人中晚期肝癌及其癌旁正常黏膜中P-糖蛋白和有丝分裂原活化蛋白激酶（MAPK）家族成员p38的表达。结果P-糖蛋白和p38在中晚期肝癌中的表达高于早期癌和正常黏膜，差异有统计学意义（66．67％比33．33％；83．87％比16．13％，P〈0．05）。结论中晚期肝癌中P-糖蛋白和p38处于过度表达状态，参与肝癌的发生、发展和转移。     

APOBEC3G在慢性乙型肝炎、肝癌组织中的表达及其意义

目的 探讨APOBEC3G在慢性乙型肝炎和肝癌组织中的表达,及与慢性乙型肝炎和肝癌的关系.方法 应用免疫组织化学方法检测45例肝组织(正常肝组织8例,慢性乙型肝炎肝组织6例,肝癌组织21例,癌旁组织10例)中APOBEC3G的表达,采用半定量积分法判断表达的强度.结果 APOBEC3G在正常肝组织中无表达或仅见少量表达(表达阳性率12.5%),而在慢性乙型肝炎肝组织中、肝癌组织中和癌旁组织中均有较强表达(表达阳性率分别为83.3%、66.7%、50.O%),其差异有统计学意义(P<0.01).APOBEC3G在肝组织中的表达强度与同组中HBsAg、HBcAg的表达强度无明显相关(P>0.05).结论 慢性HBV感染能促使肝细胞内APOBEC3G表达增高,但APOBEC3G高水平的表达与HBsAg、HBcAg的表达强度无明显相关.     

DLL4和血管内皮生长因子在肝细胞癌的表达及其在肿瘤血管生成的作用

目的 探讨Delta样配体(DLL4)及血管内皮生长因子(VEGF)在肝细胞癌中的表达及其与血管生成的关系.方法 免疫组织化学法检测75例肝细胞癌(HCC)中DLL4和VEGF的表达,用CD34进行微血管内皮细胞染色,计算微血管密度(MVD),分析其相关性.结果 DLL4和VEGF表达在HCC组明显高于肝硬化组和正常肝组(P＜0.01),与HCC的临床病理学分级相关(P＜0.01),HCC组中的CD34表达与DLL4的表达呈明显负相关(P＜0.05,r=-0.778);与VEGF的表达呈明显正相关(P＜0.05,r=0.747),32例共表达DLL4和VECF蛋白者,其平均微血管数(19.70±5.82)个/HP,明显高于非共表达组(7.60±2.12)个/HP(P＜0.01).结论 DLL4、VEGF在肝细胞癌血管生成中可能起重要作用.     

索拉非尼治疗晚期肝细胞性肝癌的耐受性研究

目的 探讨索拉非尼在临床治疗晚期原发性肝癌中的耐受性、安全性及相关疗效.方法 对2008年11月至2009年11月间于我院诊断晚期原发性肝癌接受索拉非尼治疗的患者的相关临床数据进行分析,应用t检验及x2检验.结果 本研究16例患者,平均生存时间12.37个月.治疗前Child评分A级者11例、B级3例、C级2例;治疗3个月后,治疗前A级患者中4例进展至B级,B级中2例进展至C级.治疗前MELD平均值为5.31,治疗后1个月为5.38(P＞0.05),治疗后3个月为6.67(P＞0.05).治疗前Child A级的患者平均总生存期为14.00个月,B/C级患者为8.80个月(P＞0.05).根据BCLC分期,B级患者的平均生存时间为13.70个月,C/D级患者的平均生存时间为10.17个月.结论 索拉非尼治疗可延长晚期肝细胞性肝癌的总生存期,并且在不同肝功能状态的患者中均耐受性良好.     

Sonichedgehog在肝细胞癌中的表达及其预后价值

目的 探讨Sonic hedgehog(SHH)在肝细胞癌(HCC)和癌周肝组织中的表达及其临床意义.方法 检测145例HCC和癌周肝组织SHH的表达,了解其表达与患者根治性切除术后预后的关系.检测4种肝癌细胞株以及正常肝细胞株SHH mRNA的含量.结果 SHH主要表达于肝细胞和肝癌细胞的胞质,肝癌与癌周肝组织表达差异无统计学意义(P＞0.05).癌和癌周高表达的患者总体生存率显著高于低表达患者(P＜0.05).肝癌细胞株SHH表达量显著高于正常肝细胞株(P＜0.01).结论 SHH在HCC和癌周肝组织中高表达,其表达可用于区分患者预后,SHH可能参与HCC的发生和发展.     

P16基因蛋白在原发性肝癌及癌旁组织中的表达及其临床意义

目的 探讨抑癌基因ｐ１６在肝癌及癌旁组织中的表达及临床意义。方法 应用免疫组织化学方法对５０例肝细胞性肝癌（ＨＣＣ）及癌旁肝硬化组织（４４例）手术切除石蜡包埋标本进行Ｐ１６基因蛋白表达的测定,并结合临床病理指标进行分析。结果 ｐ１６基因在ＨＣＣ中表达的阳性率为４８％,癌旁９１％。     

胆管内生长型肝细胞癌1例

正患者男,62岁,无明显诱因间歇性上腹钝痛2月余,伴尿黄;乙型肝炎病史20年。查体:巩膜稍黄染,上腹部稍压痛,无反跳痛,墨菲征阳性。实验室检查:直接胆红素25.6U/L,甲胎蛋白(alpha-fetoprotein,AFP)1 544.4U/L。腹部超声示肝外胆管内实性低回声填充(图1A),边界不清,未见明显血流信号;肝内胆管扩张,呈"蝴蝶征";CEUS动脉相病灶呈不均匀稍低增强,门静脉相及延迟相增强程度减弱。CT平扫见肝门部胆总管上段软组织密度结节,位于门静脉及肝动脉分叉上方,     

腹腔镜肝切除治疗肝细胞癌123例临床分析

目的 探讨腹腔镜肝切除治疗肝细胞癌(HCC)的临床应用价值.方法 总结2002年4月至2007年12月接受腹腔镜肝切除的123例HCC患者的临床资料,其中男性82例,女性41例,平均年龄53.8岁(31～69岁).肝功能Child A级89例,Child B级27例.结果 手术方式包括中转开腹肝切除4例(肝静脉出血),完全腹腔镜肝切除93例(规则性切除52例、不规则性切除41例),腹腔镜辅助肝切除26例.平均手术时间(205.5±92.5)min(115～290 min).出血量100～1500 ml,平均250 ml.输血21例,输血量400～800 ml.切除肝体积最大18 cm×16 cm×12 cm.病灶直径1.8～8.0 cm,平均(4.5±2.7)cm.5例出现少量胆漏,经引流后愈合;8例出现少量腹水(均为肝功能Child B级),经对症治疗后消失.1例术中死于肝中静脉出血及气体栓塞.术后住院3～15 d,平均(5.8±1.6)d.术后随访(28.1±10.5)个月(4～61个月),复发5例,未发现腹腔及穿刺孔转移.结论 腹腔镜肝切除具有创伤小、恢复快等优点,在一定条件下可作为治疗HCC的一种新方法 .     

应用液相芯片分析肝细胞癌及癌旁组织小分子RNA表达谱差异

目的运用液相芯片技术研究肝细胞癌（HCC）及毗邻癌旁组织中小分子RNA（miRNA）表达谱差异。方法常规抽提20例HCC及对照癌旁组织中总RNA，采用含有114种miRNA的液相芯片及配套的Luminex 100检测系统进行miRNA差异表达谱分析；选取部分筛选出的差异表达miRNA，以半定量逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）和Western blot分析其相对应的靶mRNA和目的蛋白表达状况。结果HCC的miRNA表达谱中差异表达miRNA共有28个，其中上调6个，下调22个，20例标本中共存性差异表达miRNA有9个（上调2个，下调7个，P〈0．01）；选取表达明显上调的miR-222作为进一步研究对象，半定量RT—PCR和Western blot分别证实其调节的靶目标-结缔组织生长因子（CTGF）在mRNA水平HCC和癌旁组织中差异无统计学意义。而蛋白质水平在HCC中表达明显下降。结论液相芯片筛选差异表达miRNA为HCC发病机制和诊断治疗的研究提供了新的思路；miR-18可能通过转录后基因沉默机制抑制CTGF mRNA翻译，从而促进HCC浸润转移。     

原发性肝细胞癌病人肝组织中螺杆菌的检测及分析

目的检测并分析原发性肝细胞癌病人组织中螺杆菌的存在情况。方法取配对的80对肝癌、癌旁组织标本及13例正常肝组织标本，抽提组织DNA，分别以细菌特异性和螺杆菌属细菌特异性16SrRNA基因引物进行巢式PCR检测，RCR产物T-A克隆后进行测序和基因进化树分析；对16SrRNA基因归属于幽门螺杆菌的组织样品，PCR检测幽门螺杆菌特异性26KDa基因及cagA、vacA、rps4、g1mM四个功能相关基因，进一步验证幽门螺杆菌的存在；应用抗幽门螺杆菌抗体对肝癌／癌旁组织及正常肝标本进行免疫组化验测。结果39份肝癌组织标本（39／80，48．75％）及37份癌旁组织标本（37／80，46．25％）检出螺杆菌属16SrRNA基因，其中，肝癌组织及癌旁组织均阳性的共有20例，正常肝组织无一例阳性（P〈0．01）。对其中50份16SrRNA基因的进化树分析提示它们与幽门螺杆菌的同源性超过99％，与此相关的组织样本中，幽门螺杆菌特异性26KDa基因阳性37份，cagA基因阳性8份，g1mM基因阳性9份，vacA基因以及rps4基因未检出。免疫组化显示26份癌组织（26／80，32．5％）及24份癌旁组织（24／80，30．0％）检出幽门螺杆菌，且主要分布于肝窦、汇管区及小肝管，正常肝组织无一例阳性（P〈0．01）。结论原发性肝细胞癌病人的癌组织及（或）相应的癌旁组织内存在螺杆菌，螺杆菌感染与原发性肝癌发生可能存在某种关联。     

人肝细胞癌血管生成拟态的实验研究

目的 探讨血管生成拟态(vasculogenic mimicry,VM)在原发肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)中的表达及生物学和临床意义.方法 42例患者共47个原发中心结节HCC的根治性手术切除肿瘤组织标本,42例患者分为2组,VM阳性组(16例)和VM阴性组(31例).应用CD31和PAS双重染色检测VM表达及形态结构.RT-PCR检测VE-cadherin、EPHA2和MMP-2基因的表达情况及相关性.结果 42例HCC患者标本中,有16例(38.1%)存在VM结构.VM结构为由肿瘤细胞围成的无内皮细胞衬附的管道样结构或PAS染色阳性的网络样结构.VM的生成与HCC的Edmondson病理学分级、肝内转移、术后复发时间比较差异有统计学意义(P＜0.05).HCC中VM阳性的VE-cadherin、EPHA2和MMP-2基因表达高于VM阴性(P＜0.05),其基因表达与VM形成具有相关性.结论 HCC中存在VM.HCC恶性程度越高形成VM的能力越强.VM阳性的HCC更容易发生肝内转移,并且有较高的术后复发率,预后较差.