甲状腺功能亢进症患者甲状腺组织糖皮质激素受体的改变及意义

1　材料和方法1.1　研究对象　甲状腺功能亢进症 (甲亢 )组患者 2 0例 ,年龄 (30± 4)岁 ;甲状腺腺瘤组 15例 ,年龄 (35± 6 )岁 ;对照组 15例 ,年龄 (33± 5 )岁。 3组均为女性。1.2　甲状腺组织 GR测定方法　采用放射配体结合法。取甲亢患者手术切除的甲状腺组织 ,甲状腺腺瘤患者手术切除的甲状腺组织以及周围正常组织 (作对照 ) ,加入 10倍体积 Tris- HCl缓冲液 (p H 7.45 ,0 .0 5 mol/ L ) ,匀浆 ,高速离心 10 0 0 0× g 2 0min,分离出细胞核 ;分别加入 0 .5、1、5、10、15、2 0、2 5 nmol/ L 3 H- Dex(1.78TBq/ mm ol,英国放化中…     

精液中炎性细胞对精子运动功能的影响

材料与方法:人精液标本6份,总活率大于50%,a级+b级精子≥38%.过氧化物酶甲苯胺蓝法证实白细胞总数小于106 ml-1.1∶2(体积比)加入孵育液,300×g离心15 min,弃上清,重复操作操作3次.调节细胞浓度至20×106个/ml.取24孔板每孔加入0.5 ml,实验组加入L-NAME,终浓度为1 mmol.L-1,37 ℃孵育.不同时间观察精子活动率的变化.孵育结束后Gresis试剂测定上清液中NO的生成.     

肝细胞型肝癌组织中谷胱甘肽含量初探

本文报道10例肝细胞型肝癌患者手术切除标本中癌、癌周和远处肝组织的谷胱甘肽含量测定结果。 材料和方法 肝癌患者10例(男9例,女1例),中位年龄54岁(42～60岁)。于手术时分别切取肝癌、癌周和远处肝组织各一块。剪碎后分别用冰生理盐水洗涤5次,除去血液和血块后用滤纸吸干。减量法称取湿重约200mg组织,加冰生理盐水2ml制备匀浆。2000g离心10min后吸取上清液10μl,加入无水乙醇50μl沉淀组织蛋白质。再次以2000g离心5min后吸取上清液20μl,经邻苯二甲醛柱     

前列腺素E1、黄芪合用对家兔缺血心肌MDA、SOD的影响

目的　观察前列腺素E1(8μg·kg-1)与黄芪 (2 2 5mg·kg-1)合用对家兔缺血心肌MDA、SOD的影响。方法　麻醉家兔冠脉结扎 30min后再灌 30min ,取缺血心肌组织 0 .3g ,制成 10 %组织匀浆离心备用 ,分别测定MDA含量和SOD的活力。结果　两药合用的疗效优于单药应用 ,联合用药显著提高缺血心肌SOD的活力 (P <0 .0 1) ,降低MDA的含量 (P <0 .0 5 )。结论　前列腺素E1与黄芪合用对家兔心肌缺血再灌注损伤的保护有显著的协同作用     

褪黑素受体mRNA检测方法的建立

1　方法介绍1.1　组织标本制备　待检新鲜组织标本立即用 4%多聚甲醇 DEPC液固定 ,梯度乙醇脱水、二甲苯透明、石蜡包埋组织 ,置4℃冰箱贮存待检测。1.2　原位杂交检测方法1.2 .1　载玻片的预处理　载玻片盐酸浸泡 2 4h,流水洗净 ,蒸馏水洗后晾干 ,用 95 %乙醇浸泡 30 min,180℃烘干过夜 ,室温冷却 ,涂切片粘合剂。1.2 .2　探针制备　 L B培养基各 5 0 ml,分别加入 mt1 、和 MT2 受体探针大肠杆菌菌株甘油保存液各 15 μl,37℃ ,2 0 0 r/ m in培养过夜。 10 0 0 0× g离心 5 min回收大肠杆菌 ,按照华舜公司质粒抽提纯化试剂盒说明抽提纯…     

氧化苦参碱抑制脂多糖所致小胶质细胞炎性因子 分泌的实验研究

目的:观察氧化苦参碱对脂多糖所致小胶质细胞白介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白介素-6(IL-6)分泌的影响。方法:予终浓度分别为1、10、20μg/mL的氧化苦参碱培养BV-2细胞30 min,再加终浓度为1μg/mL的脂多糖培养BV-2细胞30 min、1 h、3 h和6 h,应用ELISA法测定各时间点细胞培养上清液IL-1β、TNF-α和IL-6浓度。结果:在30 min、1 h、3 h和6h四个时间点,终浓度为1μg/mL的氧化苦参碱不能显著降低细胞培养上清液中IL-1β、TNF-α和IL-6浓度(P>0.05),终浓度为10、20μg/mL的氧化苦参碱剂量依赖性地降低细胞培养上清液中IL-1β、TNF-α和IL-6浓度(P<0.05)。结论:氧化苦参碱可抑制脂多糖所致小胶质细胞炎性因子分泌。     

反向高效液相色谱法测定大鼠血清、组织中加替沙星药物浓度

目的 :建立反向高效液相色谱法测定大鼠血清、组织 (心、肝、肾、胃、肺、大肠、脾、睾丸、大脑、骨骼肌 )匀浆中加替沙星药物浓度。方法 :采用 Sino Chrom C1 8ODS- AP色谱柱 (5 μm i.d.4 .6× 2 5 0 mm) ,流动相为 0 .0 5 mol/ L 磷酸盐缓冲溶液 -甲醇 -三乙胺 (5 5 .0∶ 4 4 .5∶ 0 .5 ) ,p H为 3.1 0 ;流速 1 .0 m l/ min,检测波长为 2 93nm,柱温为 35℃ ,以环丙沙星为内标 ,含药大鼠血清、组织匀浆经二氯甲烷提取 ,于 4 0℃水浴用氮气吹干和盐酸溶解后直接进样。结果 :本测定方法血清加替沙星浓度在 0 .1～ 1 0μg/ ml范围内线性关系良好 ;组织药物浓度在 0 .0 5～ 4 .0μg/ ml范围内线性关系良好。血清中最低检测限为 0 .0 1 μg/ m l,组织中加替沙星的最低检测限均为 0 .0 2 μg/ ml,相对回收率在 88.2 %～ 1 0 8.9%之间 ,绝对回收率在 78.5 %～ 96 .5 %之间 ,日内、日间变异均分别小于 1 0 .4 %和 7.8%。结论 :高效液相色谱法测定大鼠血清、组织中的加替沙星药物浓度精确、灵敏、可靠 ,可用于加替沙星的药代动力学研究     

高蛋白质营养抗高碘致甲状腺肿作用的实验研究

目的 :复制小鼠高碘甲状腺肿模型 ,研究高蛋白质营养对高碘甲状腺肿的预防作用。方法 :将昆明雄性小鼠随机分成 4组 :H组饮高碘水 (碘浓度为 2 5 0 0 μg/L) ,食普通鼠饲料 ,不含酪蛋白 ;C1和C2 组饮高碘水 ,同时饲养高蛋白饲料 (C1组为鼠饲料混入 2 5 %酪蛋白 ,C2 组混入 5 0 %酪蛋白 ) ;N组为对照组 ,食普通鼠饲料 ,饮自来水 (碘浓度为7 5 μg/L)。实验时间为 15 0天 ,观察小鼠甲状腺重量、甲状腺碘含量 (Riesco碘测定方法 )、甲状腺组织学结构 (光镜和电镜 )、甲状腺和垂体功能及TPO活性 (愈创木酚分析法 )。结果 :H组甲状腺碘含量、血FT4 水平较对照组、C1和C2 组明显升高 (P <0 .0 0 1) ,TPO活性明显下降 (P <0 .0 0 1) ,甲状腺呈典型的胶质性甲状腺肿。结论 :高碘对甲状腺有损伤作用 ,高酪蛋白膳食能明显抑制高碘甲状腺肿的发生 ,机制可能是其阻止过量碘进入甲状腺内。     

HPLC法测定大鼠肺组织中双(对-氟苄基)三硫醚及其降解产物的浓度

目的建立一种测定大鼠肺组织中双(对-氟苄基)三硫醚(BFTS)及其降解产物双(对-氟苄基)二硫醚(BFDS)的RP-HPLC分析方法.方法在0.2 g大鼠肺组织中加入正己烷-异丙醇(955,v/v)5.0 ml,11.50 μg/ml内标(苄基二硫醚)溶液20 μl,制成匀浆,离心后取上清液4.0 ml,真空抽干,残渣加流动相(乙腈∶水＝65∶35,v/v)150 μl复溶,离心后取上清液进行HPLC分析.HPLC分析条件为SB-C18柱,流动相为乙腈-水(65∶35,v/v);流速1.0 ml/min;柱温30℃;检测波长220 nm;进样量100 μl.结果BFTS和BFDS在0.04712～14.78 μg/g(r=0.999)及0.04831～23.96 μg/g(r=0.999) 范围内呈线性关系,定量限分别为0.04712 μg/g和0.04831 μg/g,回收率分别为95.71%～107.2%和90.00%～110.5%,精密度RSD均小于10%.该方法已成功地用于大鼠静脉注射12.5 mg/kg BFTS后,肺组织中BFTS及BFDS的含量测定.结论该法准确、灵敏、可靠,可用于BFTS及BFDS的组织分布研究.     

褪黑素腹腔注射对小鼠胸腺及脑组织褪黑素受体的调节作用

1　材料和方法1.1　材料　 C5 7小鼠 (购自中科院生化所动物房 ) ,3周龄 ,用药组小鼠每天腹腔注射褪黑素 (Mel) 0 .0 1、0 .0 5、0 .1、0 .5 m g/kg,共 2周。然后处死动物 ,取出胸腺和脑组织 ,液氮冻存。对照组小鼠每天腹腔注射等量生理盐水。1.2　膜受体制备　取出冷冻的胸腺、下丘脑组织在 0℃环境中解冻。解冻的组织加 10倍体积 (W/V)的 Tris- HCl缓冲液(0 .0 5 m ol/L ,p H 7.4)匀浆 ;匀浆液经高速低温离心 (4 40 0 0× g,2 5 m in,4℃ )后弃上清 ,用 Tris- HCl缓冲液洗涤并离心 1次。提取粗制的膜组织 ,加 Tris- HCl缓冲液制成膜…     

羊膜对培养的人视网膜色素上皮细胞增殖影响的实验研究

目的　观察羊膜是否对视网膜色素上皮细胞 (Retinalpigmentepithelial ,RPE)的生长有影响 ,探讨羊膜用于治疗增殖性玻璃体视网膜病变 (Proliferativevitreoretinopathy ,PVR)的潜在可能性。方法　运用MTT比色法 ,观察羊膜匀浆在不同浓度 (4 0、80、160 μg ml)及不同作用时相点 (2 4、48、96h)对人RPE增殖的影响。 结果　①在第 2 4小时 ,3个浓度羊膜匀浆均对人RPE增殖起抑制作用 ,而且随浓度增加抑制作用减弱 ,抑制率 (5 0 774%、2 7 3 87%、14 80 2 % )间相差显著 (P <0 0 5 ) ;在第 48、96小时 ,羊膜匀浆在低浓度时 ,对人RPE增殖起抑制作用 ,而在中、高浓度为促增殖作用 ,其中在第 48小时抑制率 (4 494%、-0 944 %、-3 693 % )间相差不显著 (P >0 0 5 ) ,在第 96小时时抑制率 (8 3 88%、-9 42 5 %、-17 65 1% )间相差显著 (P <0 0 5 )。②羊膜匀浆浓度为 40 μg ml ,各时相点对人RPE均为抑制增殖 ,抑制率间相差非常显著 (P <0 0 1) ;在浓度为 80 μg ml、160 μg ml时 ,随着作用时间延长 ,羊膜匀浆对人RPE增殖的作用逐渐由抑制变为促进作用 ,抑制率间相差显著 (P <0 0 5 )。结论　羊膜匀浆在低浓度 ,短时间内对人RPE增殖有抑制作用 ,而在高浓度、长时间则对RPE增殖有促进作用。羊膜匀浆用     

贝尔康颗粒剂中β-胡萝卜素的含量测定

1　仪器、试剂与药品1 .1　仪器日本岛津ＵＶ - 2 4 0 1ＰＣ紫外分光光度计 ,ＫＱ- 1 0 0Ｅ医用超声波清洗器 (昆山市超声仪器有限公司 ) ,ＬＤＺ4- 0 .8离心机 (北京医用离心机厂 )。1 .2　试剂与药品β-Ｃａｒｏｔｅｎｅ 1 0 %ＣＷＳ(瑞士罗氏公司 ) ,无水乙醇 (分析纯 ,国营南京化学试剂一厂 ) ,乙醚 (分析纯 ,上海马陆制药厂 ) ,环己烷 (分析纯 ,上海试剂四厂 )。2　方法与结果2 .1　紫外吸收光谱称取β -Ｃａｒｏｔｅｎｅ 1 0 %ＣＷＳ约 1 2 0ｍｇ置 2 5 0ｍＬ容量瓶中 ,加水 5ｍＬ ,在最高温度 60℃范围内用超声波处理 (破微囊 ) 1 0…     

高效液相色谱法测定鱼用麻醉剂在鱼体中的浓度

目的 :建立高效液相色谱 (HPLC)测定鱼血和鱼肝中麻醉剂间氨基苯甲酸乙酯甲烷磺酸盐 (MS_2 2 2 )浓度的方法。方法 :样品用重蒸水匀浆 ,离心 (12 0 0 0r/min) 15min ,将上清液用 0 .45 μm过滤膜过滤后进YWG_C18柱分析 ,流动相为 0 .2mol/L磷酸缓冲液 (pH 3.1)∶甲醇 =85∶15 ,紫外检测波长 2 2 3nm。结果 :所得标准曲线的回归方程为鱼血 :Y (ng) =0 .5 2 5 8- 0 .0 894X ,相关系数γ =0 .9939,鱼肝 :Y (ng) =- 0 .10 0 +0 .110 0X ,γ=0 .996 5 ,X为峰高。平均回收率为鱼血 87.78%、鱼肝 76 .6 6 %。结论 :本法操作简便 ,重现性和回收率均较好。     

高蛋白质营养抗高碘致甲状腺肿作用的实验研究

目的 :复制小鼠高碘甲状腺肿模型 ,研究高蛋白质营养对高碘状腺肿的预防作用。方法 :将昆明雄性小鼠随机分成 4组 :H组饮高碘水 (碘浓度为 2 50 0 μg/L) ,食普通鼠饲料 ,不含酪蛋白 ;C1和C2 组饮高碘水 ,同时饲养高蛋白饲料 (C1组为鼠饲料混入 2 5%酪蛋白 ,C2 组混入 50 %酪蛋白 ) ;N组为对照组食普通鼠饲料 ,饮自来水 (碘浓度为 7.5μg/L)。实验时间 150d ,观察小鼠甲状腺重量、甲状腺碘含量 (Riesco碘测定方法 )、甲状腺组织学结构 (光镜和电镜 )、甲状腺和垂体功能及TPO活性 (愈创木酚分析法 )。结果 :H组甲状腺碘含量、血FT4 水平较对照组、C1和C2 组明显升高 (P <0 .0 0 1) ,TPO活性明显下降 (P <0 .0 0 1) ,甲状腺呈典型的胶质性甲状腺肿。结论 :高碘对甲状腺有损伤作用 ,高酪蛋白膳食能明显抑制高碘甲状腺肿的发生 ,机制可能是其阻止过量碘进入甲状腺内。     

寄生线虫同工酶聚丙烯酰胺凝胶电泳法

我们采用垂直板型聚丙烯酰胺凝胶电泳法,结合本实验室条件,对几种寄生线虫的同工酶进行了比较分析,结果较好。将获取的新鲜虫体剪碎,按1:1(W/V)的浓度比加入适量0.01M磷酸钠缓冲液(pH7.4),冰浴下制成匀浆,经10000g离心15min后,取上清液冰冻备用。采用高pH不连续系统在板膜腔灌胶。分离胶浓度7.5％,pH8.9;浓缩胶浓度3％,pH6.7。将板膜置     

小鼠高碘甲状腺肿的实验研究

目的 :为了解小鼠高碘甲状腺肿的发病机理。方法 :实验分 4个组。对照组 (A) ,小鼠饮水含碘量为 10 .8μg/L ,实验组 (B、C和D)小鼠饮水含碘量分别为 5 0 0 0 μg/L、10 0 0 0 μg/L、2 0 0 0 0 μg/L。实验时间为 15 0d。观察甲状腺组织形态学、甲状腺组织碘含量、甲状腺过氧化酶 (TPO)活性及血清TSH和甲状腺激素浓度的改变。结果 :实验各组甲状腺组碘含量、血清FT4水平明显高于对照组 ,且随摄入碘量的增加而增加。实验各级TPO活性、C组和D组血清FT3 水平明显低于照组。实验各组甲状腺呈典型的胶质性甲状腺肿。高碘对小鼠甲状腺形态与功能具有抑制作用。结论 :高碘甲状腺肿是由于滤泡扩张 ,过多胶质堆积在滤胞腔内所致 ,并非TSH升高导致甲状腺滤泡增生的结果 ,高碘对甲状腺有损害     

一种从凝胶上回收蛋白质的简易方法(摘要)

为寻求一种从凝胶上回收蛋白质的简易方法 ,将猫脊髓后角组织匀浆、离心制成提取液 ,用聚丙酰胺凝胶电泳对其分离 .用光密度扫描测算各蛋白带的相对含量 .将相对迁移率 (Ｒｆ) 0 4 5～ 0 4 8带切下 ,匀浆、Ｔｒｉｓ-ＨＣｌ浸泡过夜 ,用 5层纱布包被后离心 (4℃ ,4 0 0 0ｒ/ｍｉｎ) ,取离心液再电泳 ,同上用光密度扫描测算Ｒｆ 0 4 5～ 0 4 8带血清蛋白的相对含量 .结果 :第 2次的蛋白回收率约为第 1次的6 0 %～ 70 %左右 .结论 :凝胶上的大部分蛋白质被回收 .该法简便易行 ,可考虑用于从凝胶上回收蛋白质 .一种从凝胶上回收蛋白质的简易…     

全自动生化分析仪在动物肝脏甘油三酯检测中的应用

目的 应用全自动生化分析仪进行动物肝匀浆中甘油三酯的检测.方法 常规方法处死小鼠,取出肝脏,加生理盐水,制成10%肝匀浆混悬液.再用3000r/min,离心10min,取上清液应用日立7080全自动生化分析仪检测.结果 通过对比试验,肝匀浆混悬液和上清液中的甘油三酯实测值差异不大,两组实测值亦无统计学差异(P＞0.05),该结果说明,可以用肝匀浆上清液替代肝匀浆,这就使全自动生化分析仪在进行肝匀浆的甘油三酯测定中有了用武之地.     

蛋白激酶C信号传导通路在缺氧性心肌细胞凋亡中的作用

目的　研究蛋白激酶C信号通路在心肌细胞缺氧性凋亡中的作用。方法　将培养的大鼠心肌细胞随机分成 8组 :(1 )对照组 ;(2 )缺氧 6h组 ;(3)缺氧 1 2h组 ;(4 )缺氧 2 4h组 ;(5 )PMA1 0nM组 ;(6 )PMA1 0 0nM组 ;(7)CHE1 μM组 ;(8)CHE1mM组。对照组常氧培养 2 4h。缺氧培养即将心肌细胞 95 %N2 ～ 5 %CO2 下 37℃缺氧培养。 (5 )和 (6 )组即于缺氧培养前 ,加入PKC激动剂PMA(Phorbol 1 2 myristate 1 3 acetata) ,使其终浓度分别为 1 0nM、1 0 0nM ,预处理 1 0min后再缺氧 2 4h。 (7)和 (8)组即于缺氧培养前 1 0min ,加入PKC抑制剂CHE(chelerythrine) ,使其终浓度分别为 1 μM、1mM ,然后再缺氧培养 2 4h。其余各组缺氧不同的时间。终止培养后分别检测细胞的凋亡率和活性。结果　单纯缺氧能引起心肌细胞的凋亡和坏死 ,以缺氧 2 4h最显著。PMA1 0nM预处理能明显减少心肌细胞缺氧性凋亡 (P <0 .0 5 ) ,而PMA1 0 0nM组和CHE1 μM组心肌细胞凋亡率明显增加 (P <0 .0 5 )。PMA和CHE对 2 4h缺氧诱导的心肌细胞坏死无明显影响。结论　蛋白激酶C信号传导通路参与了抗心肌细胞缺氧性凋亡的信号传导 ,但可能与抗缺氧性坏死的信号传导之间存在差异     

TGF-β1对原代培养猪甲状腺细胞TPO表达的影响

目的观察TGF-β1对原代培养猪甲状腺细胞TPO表达的影响,探讨其可能的作用机制。方法体外培养猪甲状腺细胞,用MTT法测定TGF-β1对细胞存活率的影响。用愈创木酚法测定TGF-β1对细胞TPO活性的影响。实验分为0μg/L（对照组）,2μg/L、5μg/L、10μg/L组。用RT-PCR方法检测甲状腺细胞TPO的mRNA表达,分析各处理组TPO基因表达的变化。结果①TGF-β1对猪原代甲状腺细胞存活率的影响：与对照组相比,2μg/L、5μg/L、10μg/L组细胞的存活率均明显降低（P〈0.05）。②TGF-β1对TPO活性的影响：与对照组比较,2μg/L、5μg/L、10μg/L组染TGF-β1后,TPO活性均明显下降（P〈0.05）,呈显著的负相关。③RT-PCR结果：与对照组相比,给药各组的表达明显降低（P〈0.05）,并呈剂量-效应关系。结论 TGF-β1对猪原代培养甲状腺细胞有抑制的作用,并呈剂量-效应关系,其机制可能是与TGF-β1TPO基因的表达有关。