羧甲基茯苓多糖抗大鼠实验性肝纤维化作用的研究

目的：肝纤维化是原发性肝癌（HCC）的重要中间环节,本文研究羧甲基茯苓多糖（CMP）对实验性肝纤维化模型大鼠肝组织病理形态及转化生长因子（TGFβ）的影响,探讨CMP抗肝纤维化的作用机制。方法：采用SD大鼠,四氯化碳复合因素法制作肝纤维化模型,采用1％CMP灌胃,以0．1％秋水仙碱作为阳性对照,光镜观察肝组织形态学变化,免疫组化法检测TGFβ。结果：与正常对照组比较,模型组大鼠肝组织呈现典型纤维化表现,TGF-β表达显著增强（P〈0．01）,CMP组与模型组比较,肝组织纤维化明显减轻,TGF-β表达显著下降（P〈0．01）,显示了较好的抗纤维化、调节TGF-β表达的作用,CMP组与秋水仙碱组无显著差异（P〉0．05）。结论：CMP对肝纤维化大鼠模型肝组织细胞具有较好的保护作用,对TGF一13表达具有明显抑制作用,可能是其抗肝纤维化的主要机制之一。     

TGFβ与肝纤维化关系研究进展

肝纤维化是慢性肝病晚期的组织学变化，是一种在损害因子持续作用下渐进的病理过程。以细胞外基质（extracellular matrix，ECM）增加为特征，同时伴有肝实质的广泛破坏、再生，导致肝小叶和肝血管结构的紊乱，引起肝功能失代偿、肝腹水、肝癌、上消化道出血等一系列严重疾病。TGFβ是体内最强和最广泛的影响纤维产生的介质之一，对细胞的生长、分化、细胞外基质的聚集和免疫反应有着广泛潜在影响的多功能肽类生长因子，尤其TGFβ1在肝纤维化的发展中具有重要作用。深入了解其与肝纤维化的关系对肝纤维化的治疗有重要意义。     

二氢杨梅素对实验性肝纤维化大鼠血清和肝组织中TGF—β1表达的影响

目的：观察二氢杨梅素对四氯化碳（CCL．）诱导的肝纤维化大鼠的防治作用及对转化生长因子β1（TGF—β1）表达的影响。方法：56只雄性SD大鼠被随机分为正常组、模型组、二氢杨梅素治疗组及复方鳖甲阳性对照组,采用CCL4皮下注射诱导大鼠肝纤维化模型。于第13周末检测大鼠血清TGF—β1、I、PCⅢ及ClV的水平,免疫组织化学方法检测肝组织TGF-β1表达。结果：与模型组相比,二氢杨梅素治疗组血清TGF—β1、I、PCⅢ、CⅣ水平显著下降（P〈0．05）,肝组织内TGF—β1阳性面积的表达明显下降（P〈0．05）。结论：二氢杨梅素对CCL4诱导的肝纤维化大鼠有较好的保护作用,对TGF—β1表达的影响可能是其作用机制之一。     

三甲散加减方对实验性肝纤维化大鼠TGF—β1／Smads信号通路的影响

目的：观察三甲散加减方对肝纤维化大鼠转化生长因子β1（TGF—β1）、Smad2、Smad3、Smad7,即TGF-β1／Smads信号转导通路的影响。方法：用CCl4油液诱导大鼠肝纤维化模型,随机分为4组,正常组对照组,病理模型组,阳性对照组,透邪通络组。造模的同时予药物灌胃治疗,正常组和模型组予生理盐水灌胃,10mL（kg·d）,阳性对照组予秋水仙碱0．5mg／（kg·d）,透邪通络组予三甲散加减方浸膏1．1mL／（100g·d）。8周后,处死各组大鼠,取肝组织,光镜下观察纤维化程度和免疫组化法检测TGF-β1、Smad2／3及Smad7的表达。结果：病理学观察和免疫组化检测显示,三甲散加减方能逆转CCl4诱导的肝纤维化,能显著降低TGF—β1和Smad2／3的表达,明显增高Smad7的表达,且效果优于秋水仙碱。结论：三甲散加减方能减轻肝纤维化大鼠的病理损害,有效降低肝组织TGF-β1、Smad2、Smad3的表达,增高Smad7的表达,从而减轻或逆转肝纤维化。其机制可能与阻断TGF-β1／Smads信号转导通路有关。     

藤茶总黄酮对实验性肝纤维化大鼠TGF-β_1表达的影响

目的：探讨藤茶总黄酮（Tengcha flavonoids,TCF）对实验性肝纤维化大鼠的防治作用及机制。方法：52只雄性sD大鼠被随机分为正常对照组、模型组、TCF组及复方鳖甲软肝片组,采用四氯化碳（CCL4）皮下注射诱导大鼠肝纤维化模型。造模的同时,各组分别灌胃给予TCF、复方鳖甲软肝片及生理盐水治疗。于第12周末检测大鼠血清透明质酸（HA）、层粘连蛋白（LN）、Ⅲ型前胶原（PCⅢ）、Ⅳ型胶原（CⅣ）及转化生长因子β1（TGF-β1）的水平,检测肝组织TGF—β1阳性面积的表达水平。结果：与模型组比较,TCF组血清HA、LN、PCⅢ、CⅣ水平显著下降（P〈0．05）,肝组织内TGF-β1阳性面积的表达明显下降（P〈0．05）。结论：TCF对实验性肝纤维化大鼠有较好的防治作用,其作用机制可能与降低血清及肝组织内TGF—β1有关。     

芪术颗粒对大鼠肝纤维化模型TGF—β1、EGF表达的影响

目的观察芪术颗粒对肝纤维化模型大鼠肝组织TGF-β1、EGF表达的影响.方法人血白蛋白免疫致敏法建立大鼠肝纤维化模型,用芪术颗粒治疗3个月,取肝组织用原位杂交方法检测TGF-β1、EGF的表达信号,MPEAS-500型图像分析仪进行图像分析.结果芪术颗粒治疗组TGF-β1、EGF表达较模型组弱,信号面积比分别为1.85±0.94和2.51±1.03,明显低于模型组的3.56±1.29和3.89±1.26.结论芪术颗粒通过抑制TGF-β1、EGF的基因表达,使胶原蛋白合成减少,从而减轻肝纤维化的程度.     

TGF-β-Smad信号转导途径在肝纤维化中的作用及中药干预的研究进展

肝纤维化（LF）的病理过程是当肝细胞发生炎症刺激或坏死时,因ECM的合成、沉积与降解不平衡等因素而引起的,其中涉及复杂的细胞及分子机理的一个动态过程.肝纤维化不仅是向肝硬化发展的重要阶段,而且也是各种慢性肝病共同的病理特征,如果病因持续地存在,将导致肝小叶、血管等的改变,同时中心静脉区和汇管区出现假小叶而使肝脏的正常结构遭到不可逆的转变,即发展为不可逆转的肝硬化.     

比色法测定羧甲基茯苓多糖的含量

羧甲基茯苓多糖在浓硫酸存在下与苯酚生成红色物质,反应十分灵敏,颜色稳定。利用这个反应,建立比色法测定羧甲基茯苓多糖含量,并讨论了测定条件。     

壮肝逐瘀煎对肝纤维化大鼠转化生长因子β1表达的影响

目的：观察壮肝逐瘀煎对肝纤维化大鼠血清及肝组织中TGF—β1表达的影响,探讨本方治疗肝纤维化的作用机理。方法：将100只Wistar大鼠随机分为正常对照组20只、观察组80只,参照相关文献复制大鼠肝纤维化模型,造模过程中,于第4周末随机处死正常对照组及观察组大鼠各5只,证实肝纤维化形成后,将观察组其余大鼠随机分为病理模型组、壮肝逐瘀煎大、中、小剂量组及秋水仙碱对照组,分别予生理盐水、壮肝逐瘀煎大、中、小剂量及秋水仙碱灌胃,日1次;12周后处死大鼠,应用ELISA法检测血清TGF—β1含量的改变,同时采用免疫组化观察肝脏组织中TGF—β1的表达水平。结果：壮肝逐瘀煎能降低欠鼠肝纤维化血清中TGF—β1的表达,拮抗肝纤维化大鼠肝组织中TGF—β1的分泌。结论：壮肝逐瘀煎能有效抗大鼠肝纤维化,其作用机制是通过抑制TGF—β1的活性来实现的。     

羧甲基茯苓多糖对小鼠免疫功能的影响

目的　观察羧甲基茯苓多糖 (CMP)体内外给药对小鼠免疫功能的影响。方法　体外方法为将指数生长小鼠淋巴细胞或巨噬细胞与不同浓度的羧甲基茯苓多糖共培养 ,观察小鼠脾淋巴细胞的增殖作用和巨噬细胞吞噬中性红的能力。体内方法为每日给正常小鼠分别静脉注射不同剂量的羧甲基茯苓多糖 ,连续注射 1 0d ,用与体外同样方法观察CMP对小鼠脾淋巴细胞的增殖作用及对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响。结果　CMP静脉注射剂量在 5 ,1 0 ,50mg·kg- 1 时对小鼠脾淋巴细胞增殖、腹腔巨噬细胞吞噬功能均有明显的促进作用 ,体外给药浓度在 0 .1～ 50 μg·mL- 1 时对小鼠脾淋巴细胞增殖有直接的促进作用。对小鼠混合淋巴细胞反应也有明显的促进作用 ,CMP还显著增强ConA及LPS活化的小鼠脾淋巴细胞的增殖反应及小鼠腹腔巨噬细胞吞噬中性红的作用。结论　羧甲基茯苓多糖体内外给药均可显著增强小鼠免疫功能     

抗肝纤冲剂对肝纤维化小鼠肝组织TGFβ信号转导通路的影响

目的探讨抗肝纤冲剂对免疫损伤肝纤维化小鼠的治疗作用机制。方法将75只雌性Balb/c小鼠分为5组:正常对照组、肝纤维化模型组,秋水仙碱治疗组,抗肝纤冲剂低剂量组、抗肝纤冲剂高剂量组。除正常对照组外,其余各组均制备肝纤维化小鼠模型。造模的同时分别用药物对小鼠进行干预治疗7周。7周末处死小鼠,免疫荧光检测肝组织中的TGF-β、Smad2/3和Smad6/7蛋白的表达,采用Western blotting方法检测肝组织中的TGF-β和Ⅰ型胶原蛋白的表达情况。结果正常小鼠肝组织中的TGF-β、Smad2/3和Ⅰ型胶原蛋白的表达量少,Smad6/7表达量多;模型组小鼠的肝组织中TGF-β、Smad2/3和Ⅰ型胶原蛋白的表达量明显增加,而Smad6/7表达量减少;抗肝纤冲剂干预治疗后,肝组织中TGF-β、Smad2/3和Ⅰ型胶原蛋白的表达量有减少的趋势,而Smad6/7表抗肝纤冲剂通过抑制TGF-β的分泌,降低Smad2/3的磷酸化水平,起到抑制Ⅰ型胶原的蛋白分泌的作用。达量又趋增加。结论抗肝纤冲剂通过抑制TGF-β的分泌,降低Smad2/3的磷酸化水平,起到抑制Ⅰ型胶原的蛋白分泌的作用。     

羧甲基茯苓多糖对小鼠T淋巴细胞分泌细胞因子的影响

目的：探讨羧甲基茯苓多糖（CMP）对小鼠T淋巴细胞分泌IFN-γ、IL-10的影响。方法：CMP溶液给小鼠腹腔注射，10天后取外周血分离T细胞，体外将不同浓度的CMP与T细胞共培养，MTT法观察其对T细胞的毒性作用，ELISA法检测IFN-γ、IL-10的含量。结果：CMP在0～500μg／ml对小鼠T细胞无明显毒性作用，CMP能显著提高IFN-γ水平，降低IL-10含量。结论：CMP具有较好的调节Th1／Th2细胞因子分泌作用。     

羧甲基茯苓多糖的抗肿瘤实验

茯苓[Poria cocos(Sehw．)Wolf]是一种药用真菌，是中药“四君八珍”之一，茯苓菌核中的β-茯苓聚糖(β-Pachyman)约占茯苓菌核干重的93％，β-茯苓聚糖转化成为β-茯苓多糖(β-Pachymaran)才具有抗肿瘤活性。为了使茯苓多糖溶于水，便于人体吸收，必须用氯乙酸进行醚化，使茯苓多糖变成一种水溶性多糖——羧甲基茯苓多糖(Carboxymethylpachymaran，CMP)。本文报道三明市真菌研究所药用真菌研究室研制的CMP抗肿瘤实验。     

羧甲基茯苓多糖含量测定

目的：建立羧甲基茯苓多糖含量测定方法。方法：以无水葡萄糖为对照,采用苯酚-硫酸法测定羧甲基茯苓多糖的含量。结果：葡萄糖在0.002～0.012mg·mL^-1范围呈良好的线性关系,回归方程为Y=49.016X-0.002 9（R=0.999 6）。测得羧甲基茯苓多糖含量为57.72%。结论：该方法操作简便,重现性好,测定结果准确可靠,可用于中药多糖含量的分析。     

老鼠簕乙醇提取物对肝纤维化大鼠COX-2和TGFβ1表达的影响

目的研究老鼠簕对CCl4诱导的大鼠肝纤维化肝组织COX-2和TGFβ1表达的影响。方法 Wistar大鼠随机分成5组:空白对照组、模型对照组、秋水仙碱组、老鼠簕乙醇提取物低剂量组和老鼠簕乙醇提取物高剂量组。除空白对照组外,其余4组用CCl4制备大鼠肝纤维化模型。秋水仙碱组、老鼠簕乙醇提取物低剂量组和老鼠簕乙醇提取物高剂量组分别于4周后给予相应的药物,空白对照组给予等容量的生理盐水,每天1次。8周后处死大鼠,RT-PCR检测肝组织中COX-2和TGFβ1mRNA的表达,用免疫组化方法观察肝组织COX-2和TGFβ1蛋白质的表达。结果①大鼠出现肝纤维化改变;②RT-PCR结果显示,与空白对照组相比,模型对照组COX-2和TGFβ1mRNA表达增强(P<0.01);老鼠簕乙醇提取物干预组(1.0,2.0 g.kg-1)较模型对照组COX-2和TGFβ1mRNA表达减弱(P<0.05);③免疫组化结果显示,模型对照组大鼠肝组织的COX-2和TGFβ1蛋白表达明显增加(P<0.01);老鼠簕乙醇提取物干预组(1.0,2.0 g.kg-1)大鼠肝组织的COX-2和TGFβ1蛋白表达明显下降(P<0.05)。结论老鼠簕能够抑制肝纤维化大鼠肝组织COX-2和TGFβ1的表达。     

羧甲基茯苓多糖的安全性实验

笔者于 1985年曾报道采用液相不振荡 -碱化法工艺成功地制取了羧甲基茯苓多糖 (Carboxymethylpachymaran,CMP) [1 ] 。 CMP具有抗肿瘤活性与免疫效应 [1～ 3] ,还能诱导人外周血白细胞产生干扰素、白细胞介素、肿瘤坏死因子与粒 -巨噬细胞集落刺激因子等活性细胞因子 [4～ 9] ,具有作为抗肿瘤生物反应调节剂的应用前景。本文报道 CMP的安全性实验。1　材料和方法1.1　材料1.1.1　实验药品 :CMP原料药与 CMP注射液由三明市真菌研究所提供 ,环磷酰胺由上海华联制药有限公司提供。1.1.2　动物 :昆明种小鼠分别由福建省医学科学研究所动…     

青蒿琥酯对肝纤维化小鼠肝组织中Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型胶原及TGF—β1表达的影响

目的：为了探讨青蒿琥酯抗肝纤维化的作用机理。方法：通过四氯化碳致小鼠肝损伤模型,利用免疫组化技术研究Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型胶原及TGF-β1在肝细胞的分布情况。结果：青蒿琥酯具有明显降低Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型胶原及TGF—β1在肝组织中的表达作用（P〈0．01）。结论：青蒿琥酯能够降低Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ胶原生成可能是通过抑制TGF-β1的表达而实现的。     

鳖甲煎丸对免疫性肝纤维化大鼠TGF-β1 mRNA表达的影响

目的：观察中药复方鳖甲煎丸对免疫性纤维化模型大鼠肝组织细胞因子TGF—β1 mRNA表达的影响，分析鳖甲煎丸的治疗作用，探讨鳖甲煎丸抗肝纤维化的作用机理；并与西药秋水仙碱作对照，为临床防治肝纤维化用药提供科学依据。方法：雄性Wistar大鼠90只随机分为6组：正常对照组、模型对照组、秋水仙碱预防组、秋水仙碱治疗组、鳖甲煎丸预防组、鳖甲煎丸治疗组，选用猪血清诱导免疫损伤性肝纤维化模型。各组于10周后取10只大鼠断头处死，取肝组织，用原位杂交法检测肝组织内TGF—β1 mRNA。结果：鳖甲煎丸能够明显减少TGF—β1 mRNA的表达，作用接近或优于秋水仙碱，显示它具有明显的抗纤维化作用。鳖甲煎丸和秋水仙碱的预防效果同治疗效果相比差异均不显著。     

三七总皂甙对肝纤维化大鼠Ⅰ、Ⅲ型胶原及TGF—β1的影响

目的：观察三七总皂甙对肝纤维化大鼠胶原合成及TGF－β1表达的影响。方法：用四氯化碳复合因素致大鼠肝纤维化模型,同时给与三七总皂甙治疗,免疫组化观察Ⅰ、Ⅲ型胶原及TGF－β1的合成表达,纤维化程度分级。结果：三七总皂甙能抑制肝纤维化大鼠Ⅰ、Ⅲ型胶原及TGF－β1的合成表达,减轻肝纤维化程度。结论：三七总皂甙具有抗肝纤维化作用,其机理尚待进一步研究。     

芪术颗粒对大鼠肝纤维化模型TGF-β_1、EGF表达的影响

目的 :观察芪术颗粒对肝纤维化模型大鼠肝组织TGF β1、EGF表达的影响。方法 :人血白蛋白免疫致敏法建立大鼠肝纤维化模型 ,用芪术颗粒治疗 3个月 ,取肝组织用原位杂交方法检测TGF β1、EGF的表达信号 ,MPEAS 5 0 0型图像分析仪进行图像分析。结果 :芪术颗粒治疗组TGF β1、EGF表达较模型组弱 ,信号面积比分别为 1 85± 0 94和 2 5 1± 1 0 3 ,明显低于模型组的3 5 6± 1 2 9和 3 89± 1 2 6。结论 :芪术颗粒通过抑制TGF β1、EGF的基因表达 ,使胶原蛋白合成减少 ,从而减轻肝纤维化的程度。