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目的建立一种新的可以快速筛查急性肝炎患者HBV和HCV感染的多重实时荧光定量PCR方法。方法收集596例急性肝炎患者血清或血浆样本,应用自主构建的多重实时荧光定量PCR方法同时检测HBV和HCV,同时应用HBV和HCV单管检测试剂进行检测分析。结果新建立的多重实时荧光定量PCR体系,可以有效地检测HBV和HCV的阳性质控品及阳性样本。多重实时荧光定量PCR体系特异性较好,检测HBV和HCV时,两者之间无交叉反应,且以多种血浆病毒的核酸样品为模板进行检测时结果全为阴性;多重实时荧光定量PCR体系检测HBV、HCV的灵敏度分别为20 IU/ml、50 IU/ml;多重实时荧光定量PCR体系精密度好,检测HBV、HCV的CV值分别为0.11%、0.096%。在检测临床样本时,多重复合体系检测血清或血浆中HBV和HCV的检出率与单独检测HBV和HCV具有很好的一致性,且HBV和HCV的一致率分别达到97.7%(k=0.952)、98.8%(k=0.976);同时有6例样本出现HBV和HCV共感染。结论新型多重实时荧光定量PCR方法对快速检测及筛查HBV和HCV较快捷,而且特异性好、灵敏度高、精密度好。因此多重实时荧光定量PCR方法对2种肝炎病毒的检测具有重要意义。 相似文献
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[摘要] 目的 描述并评价锁核酸(locked nucleic acid,LNA)探针实时荧光定量聚合酶链反应(Real-Time PCR)检测乙型肝炎病毒(HBV)204位基因突变的方法及特点。方法 分别用直接测序法、锁核酸(LNA)探针实时荧光定量PCR检测109例接受拉米夫定(LAM)治疗6个月以上的慢性乙型肝炎患者的血清样本。结果 LNA探针实时荧光定量PCR能检测HBV野生型YMDD和其突变型YVDD,YIDD。而且,这种方法还可以检测HBV野生型和变异型的混合。LNA探针相比普通探针在检测野生型和突变型混合样本方面,更敏感,区分度更好。结论 LNA探针实时荧光定量PCR检测YMDD变异具有快速,灵敏,等特点,可以用于大量临床样本的快速筛查,在监测拉米夫定治疗疗效及发现新耐药突变型等方面具有广泛的应用前景。 相似文献
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目的:以实时荧光定量PCR检测乙型肝炎病毒核酸载量实验为例,尝试性评定临床实验室中标准曲线变动性的不确定度分量。方法:对4个乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸(DNA)定量检测系列标准品重复测定5次,取各标准品的Ct均值对标准品浓度的对数值求回归直线,进而测定并计算高、中、低值血清样本的DNA载量及其标准曲线变动性的不确定度分量。结果:高、中、低值血清样本浓度取对数后的标准曲线变动性的标准不确定度分量分别为0.079、0.040和0.071。结论:标准曲线变动性的不确定度分量和标准品的数量及标准品重复测量次数相关;和待测样本浓度及其重复测量次数相关。 相似文献
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两种HBV-DNA定量测定方法的比较 总被引:4,自引:3,他引:1
目的考察实时荧光PCR定量法(FQ-PCR)检测乙型肝炎病毒DNA的准确性。方法通过对 56份血清进行HBV—DNA检测,其中包括一个10倍倍比稀释系列6份、阴性血清12份和阳性血清38份。比较两种方法的准确性及临床标本符合情况。结果微板核酸杂交定量法和实时荧光定量法的线性回归系统分别为0.977 和0.999。实时荧光定量法所检测的不同含量的样本批内变异系数均低于微板核酸杂交定量法。结论实时荧光定量法具有较好的灵敏度、特异性、重复性和线性,与微板核酸杂交定量法有良好的相关性。 相似文献
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目的 分析抗原检测及聚合酶链反应(PCR)在医院甲、乙型流感病毒检测中的临床应用价值,以期为临床早期诊断、制定治疗方案提供参考。方法 选取河南省洛阳市中心医院2020年1月至2023年1月诊治的120例疑似流感患者作为研究对象,入院后均采集咽拭子标本,采用抗原(胶体金法)检测甲、乙型流感病毒,实时荧光定量PCR法检测甲、乙型流感病毒核酸,比较胶体金法、实时荧光定量PCR法检测甲、乙型流感病毒的性能,分析胶体金法、实时荧光定量PCR法的稳定性及不同病毒核酸载量的胶体金法检测敏感性。结果 120例疑似流感患者胶体金法检测阳性89例(甲型49例、乙型40例),实时荧光定量PCR法阳性98例(甲型55例、乙型43例);两种方法特异度、敏感度相近,胶体金法检测用时仅为15 min,实时荧光定量PCR法用时需要3 h,胶体金法检测时间明显少于实时荧光定量PCR法;2种方法检测从性别、季节、年龄方面比较对阳性结果影响差异均无统计学意义(P>0.05);胶体金法甲型流感病毒检测阳性、阴性样本核酸载量平均值比较差异有统计学意义(P<0.001);乙型阳性、阴性样本核酸载量平均值比较差异有统计... 相似文献
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目的 应用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)核酸,寻求呼吸道标本MRSA的快速检测技术.方法 收集临床分离的75株金黄色葡萄球菌菌株及97份下呼吸道感染患者的合格痰液标本,应用实时荧光定量PCR快速检测法检测标本中Nuc及MecA基因,并以常规培养+头孢西丁纸片扩散法的检测结果为标准,判断实时荧光定量PCR与传统方法检测结果的一致性,及该方法对下呼吸道痰液标本检测的敏感度、特异度.结果 以常规培养+头孢西丁纸片扩散法的检测结果为对照,实时荧光定量PCR快速检测法检测金黄色葡萄球菌菌株中MRSA的敏感度及特异度均为100.0%,检测下呼吸道痰液标本MRSA的敏感度为100.0%、特异度为84.7%.结论 应用实时荧光定量PCR快速检测下呼吸道痰液标本MRSA的敏感度高,特异性强,操作时间短,与常规培养+药物敏感试验的检测结果具有良好的一致性,具有较高的临床应用价值. 相似文献
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郑瑞兵张卉卉应建飞汪一萍 《现代实用医学》2022,(6):737-739
目的评估实时荧光定量PCR检测技术对社区获得性艰难梭菌感染(CA-CDI)的诊断价值。方法选取具有社区暴露史的有效非重复腹泻标本329例,分别以实时荧光定量PCR粪便标本直接检测法与产毒培养+细胞毒性酶免疫分析法(EIA)对CA-CDI进行诊断,并以产毒培养+EIA为“金标准”,评估实时荧光定量PCR检测的效能。结果CA-CDI“金标准”检测阳性率为5.17%(17/329).艰难梭菌荧光PCR检测试剂盒诊断结果与“金标准”差异无统计学意义(P>0.05),检测一致性为0.831,灵敏度与特异度分为76.47%、99.68%。艰难梭菌荧光PCR检测试剂盒对tcd-B的检测结果与“金标准”差异无统计学意义(P>0.05),检测一致性为0.860,灵敏度与特异度为81.25%、99.68%。结论实时荧光定量PCR检测技术以快速、高敏感度、高特异度等特点,可对社区暴露腹泻样本CA-CDI进行独立检测。 相似文献
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LightCycler实时监测PCR定量分析血清HBV DNA 总被引:2,自引:0,他引:2
目的 检验LightCycler实时监测PCR(real-time detection PCR,RTD-PCR)对血清中HBV DNA定量检测的灵敏性和可重复性,探讨HBV血清标志物与HBV DNA定量的关系。方法 HBV定量按深圳匹基公司乙肝PCR荧光检测试剂盒使用说明,对乙肝标志物已明确的773例血清中HBV DNA定量结果进行统计分析。结果 实时监测PCR对血清中HBV DNA定量检测的灵敏性高,可检测低至1000拷贝/ml血清;可重复性好,批间误差<20%;各种标志物类型的血清HBV DNA含量分布情况表明,HBV血清标志物中HBeAg与HBV DNA含量有明显的关系,一般HBeAg阳性血清HBV DNA含量较高,但也有相当一部分例外。结论 LightCycler实时监测PCR对血清中HBV DNA定量检测灵敏性高可重复性好;仅根据HBV血清标志物往往不能确定乙肝患者HBV DNA复制水平的高低,HBV DNA定量检测具有十分重要的临床意义。 相似文献
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目的建立多联病毒核酸荧光PCR检测方法,为我国核酸检测技术的应用前景提供技术支持。方法使用逆转录实时荧光PCR定量方法(QRT。PCR)检测HCV、HIV病毒,在成功扩增定量单一病毒的基础上,通过主要调整Mg2+离子、dNTPs、Taq的浓度等优化反应体系,建立同时检测两种病毒核酸的逆转录实时荧光PCR定量检测方法(一步法双检),并分析双检体系的扩增灵敏度。结果通过优化筛选反应条件,使用QRT.PCR方法成功扩增双模板HCV/HIVRNA,且检测特异性好,灵敏度较高,能达到HCVRNA20IU/ml与HIVRNA80IU/ml的检测灵敏度。结论本试验成功建立能同时检测两种病毒核酸的QRT.PCR方法,为后续研究HBV、HCV、HIV多联荧光病毒核酸检测系统提供了理论依据与技术支持。 相似文献
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乙肝病毒血清标志物模型与HBV—DNA定量的相关性 总被引:3,自引:0,他引:3
目的:探讨乙肝病毒血清标志物模型与HBV-DNA定量的相关性。方法:应用酶联免疫吸附试验(ELISA)和荧光定量聚合酶链反应技术(FQ-PCR),对865例乙型肝炎病毒携带者血清标本分别进行乙肝病毒血清标志物模型与HBV.DNA定量测定。结果:模式A(大三阳)的检出率最高,为96.1%,模式B(小三阳)的HBV—DNA检出率为79.0%,模式CHBV-DNA检出率为63.5%。结论:HbeAg是反映HBV复制活跃的可靠指标;血清HBeAg阴性,病毒并未停止复制;联合检测乙肝标志物和HBV-DNA水平有助于疾病的诊断、疗效提高及预后判断。 相似文献
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目的:为了进一步探讨乙型肝炎患者血清中HBV-DNA含量与HBV血清学标志物之间的关系,了解荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测乙型肝炎病毒的应用价值。方法:应用酶联免疫吸附试验(ELISA法)检测510例来自我院门诊就诊者和住院患者血清标本中的特异性抗原抗体,并同时应用荧光定量PCR分析系统测定血清标本中HBV-DNA的含量进行分析。结果:经ELISA法与FQ-PCR法检测的510例血清标本中,51例"大三阳"(HBsAg+HBeAg+HBcAb)的血清标本,其HBV-DNA检出数均呈阳性,阳性率为100%,其HBV-DNA的拷贝数范围为105~109/ml;76例"小三阳"(HBsAg+HBeAb+HBcAb)的血清标本,其HBV-DNA检出的阳性率为47.4%,HBV-DNA的拷贝数范围为104~107/ml。结论:HBV-DNA是乙型肝炎病毒感染和复制的特异性指标,应用FQ-PCR技术检测乙型肝炎病毒,具有较高的灵敏度和特异性,其操作简便,定量准确,结果可靠,它比HBV血清学标志物更能反映乙型肝炎病毒在体内的存在和真实复制状况,在HBV-DNA感染诊断,特别是药物疗效的观察中,具有良好的应用价值。因此,HBV-DNA与血清学标志物的相互关系是本文研究的课题。 相似文献
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乙型肝炎病毒感染者血清HBV-DNA载量测定的临床意义 总被引:1,自引:0,他引:1
目的:探讨HBV-DNA载量测定的临床意义及其与HBV-M、拉米夫定治疗的相关性。方法:采用酶联免疫吸附试验和荧光定量聚合酶链反应技术对280例乙肝患者HBV-M和HBV-DNA载量进行检测;同时动态检测32例乙肝患者48周拉米夫定治疗期间血清HBV-M和HBV-DNA载量变化。结果:HBeAg(+)组患者血清HBV-DNA载量显著高于HBeAg(-)组(P<0.01);不同临床类型急性肝炎组HBV-DNA载量与其它组比较(P<0.05);其它各组HBV-DNA载量之间比较(P>0.05);拉米夫定治疗12周、24周、48周后HBV-DNA载量迅速下降,与治疗前比较(P<0.001);HBV-DNA载量下降明显较HBeAg血清学转换发生早。结论:HBeAg是反映HBV-DNA复制的重要指标;HBV-DNA载量测定是反映HBV复制和判断药物疗效的最直接、可靠的指标。 相似文献
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乙肝HBsAg定量检测的临床诊断意义 总被引:2,自引:0,他引:2
目的 探讨化学发光方法对乙肝表面抗原(HBsAg)含量测定结果与HBV-DNA水平及乙肝病毒标志物模式之间的相互关系.方法 运用化学发光法、荧光定量PCR(FQ-PCR)及ELISA三种方法同时检测346例患者血清标本,并对其结果进行统计学分析.结果 346例患者血清HBsAg含量与HBV-DNA水平及乙肝病毒标志物检测的结果具有较好相关性.结论 化学发光法定量检测HBsAg能较准确、快速地反映体内乙肝病毒复制情况. 相似文献
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目的 探讨广西麻鸭作为乙型肝炎病毒感染动物模型的可能性.方法 应用广西1 d龄雏麻鸭经腹腔感染鸭乙型肝炎病毒(DHBV),13 d后采用实时荧光定量PCR法检测麻鸭血清DHBV含量,筛选出DHBV强阳性鸭.结果 共检测148份麻鸭血清标本,其中DHBV阳性标本136份,阳性率为91.9%.结论 广西麻鸭可作为乙型肝炎病毒感染动物模型.实时荧光定量PCR法检测DHBV敏感性较高,重复性好,可用于DHBV检测. 相似文献
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①目的 探讨实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)定量检测乙型肝炎病毒DNA(HBV-DNA)对干扰素(IFN)治疗慢性乙型肝炎(CHB)疗效预测及评价的价值。②方法 21例CHB病人,在治疗前、治疗过程中第1~6个月、疗程结束后随访6和12个月共9个时间点分别取血,用FQ-PCR定量检测HBV-DNA、放免法定量检测HBeAg。③结果 用药后第1~5个月,HBV-DNA载量逐月下降(H=137.50,q=4.68~14.04,P均〈0.01);其后不再下降。治疗前血清HBV-DNA与HBeAg和谷丙转氨酶(ALT)呈高度正相关(r=0.719、0.492,P〈0.05),治疗期间及随访过程中各时间点HBV-DNA与ALT呈负相关(r=-0.259~-0.057,P〈0.05),与HBeAg呈低度正相关(r=0.014~O.138,P%0.05)。④结论 FQ-PCR以其高度的敏感性及简便、快速、准确而成为目前HBV-DNA定量检测的首选方法;在应用IFN治疗CHB前,应根据血清HBV-DNA拷贝数和其他预测因子慎重选择病例,可以明显提高疗效。 相似文献
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目的比较国产实时荧光定量PCR(FQ PCR)试剂与罗氏COBAS Amplicor方法检测乙型肝炎病毒(HBV)DNA的结果。方法据COBAS Amplicor 的FQ PCR试剂(A)的检测结果,抽取151份慢性乙型肝炎(慢乙肝)血清标本,采用两种国产实时FQ PCR试剂B、C对血清标本进行HBV DNA平行检测,以分析国产试剂的敏感度、特异度及与试剂A的相关性。结果试剂A、B、C测得的HBV DNA结果分别为(5.87±1.64)、(5.11±1.34)、(4.93±1.35)log10?copies/mL,试剂B、C与试剂A的相关系数分别为0.947、0.937。3种试剂检测结果总体差异有统计学意义(P<0.05),试剂B、C与试剂A检测结果相比差异有统计学意义(P<0.05)。低HBV载量标本,试剂B、C与试剂A相关性较低。以试剂A为准,总体灵敏度、特异度分别为试剂B 90.4%、56.3%,试剂C 77.0%、100%。结论试剂B、C与试剂A在检测HBV DNA方面有较好一致性,但在低HBV载量时可靠性较低。试剂B灵敏度高,试剂C特异度高。 相似文献
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乙肝HBV DNA荧光定量检测与血清标志物结果相关性分析 总被引:7,自引:1,他引:7
目的 研究乙肝血清学标志物(HBV-M)结果与HBV-DNA水平的关系,分析HBV DNA阳性率在各年龄组的分布情况。方法对深圳市部分服务行业人员血清应用荧光定量PCR检测和ELISA法检测并对结果进行分析。结果1781例乙肝血清学标志物阳性血清中有1102例HBV-DNA阳性。其中883例1.3.5阳性(俗称“大三阳”)血清中HBV-DNA的阳性率为96.15%;722例1.4.5阳性(俗称“小三阳”)血清中HBV-DNA的阳性率为24.38%;138例1.5阳性血清中HBV-DNA的阳性率为38.41%;22例1.3阳性血清中HBV-DNA的阳性率为90.91%;11例HBsAg阳性血清中HBV-DNA阳性率为36.36%。结论两种方法检测乙肝标志物有密切的相关性。荧光定量PCR是检测HBV-DNA含量较精确的方法,能正确反映乙肝病毒的复制水平和活跃程度;HBsAg和HBeAg与HBV-DNA含量有着明显的相关关系。 相似文献
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荧光定量PCR检测HBV-DNA与血清标志物的关系探讨 总被引:4,自引:0,他引:4
目的:探讨乙型肝炎血清HBV-DNA水平与乙肝抗原抗体模式的关系。方法:对320例血清标本同时用荧光定量PCR(FQ-PCR)检测HBV DNA和用酶联免疫吸附法(ELISA)检测乙肝标志物,根据不同检测结果进行对比分析。结果:320份血清中,乙型肝炎病毒标志物不同组合HBV-DNA阳性率有差异(P<0.01),320份血清中,有188例HBV-DNA阳性,占56.2%,HBsAg HBeAg HBcAb阳性者HBV-DNA阳性率占98.6%,>10copies/ml占64.5%,HBsAg HBeAb HBcAb阳性者HBV-DNA阳性率占37.5%,10 copies/ml占18.2%。结论:HBeAg和HBV-DNA有明显的相关性,PCR定量检测HBV-DNA含量更有助于判断体内HBV复制的情况及传染性强弱,在临床上有重要意义。 相似文献