儿童急性白血病生存素和细胞周期素B1基因表达

目的:探讨基因生存素,细胞周期素B1的表达与儿童急性白血病(AL)的关系. 方法:采用RT-PCR对初治或复发AL患儿42例和完全缓解AL(AL-CR)患儿13例及非恶性疾病患儿15例骨髓单个核细胞进行基因生存素,细胞周期素B1表达的检测. 结果:初治和复发AL组生存素 mRNA表达水平分别为0.472和0.810,细胞周期素B1 mRNA为0.609和0.739,均高于AL-CR组(0)和对照组(0)(P＜0.01);复发AL组生存素 mRNA表达水平高于初治组,有统计学差异(P=0.025). 生存素基因的表达与白细胞总数及临床分型有关,与性别、年龄、免疫分型无明显相关性. 细胞周期素B1表达与性别、年龄、免疫分型、白细胞总数及临床分型无明显相关关系. 儿童AL中生存素与细胞周期素B1的表达呈正相关. 生存素 mRNA表达水平高者缓解率低. 结论:儿童AL中存在生存素,细胞周期素B1异常表达,两者表达存在相关性. 生存素是AL复发的高危因素;AL 生存素高表达者可以降低AL的化疗敏感性,生存素水平对AL有判断疗效和预后的价值.     

细胞周期素A、E在胃癌组织中的表达及与细胞周期的关系

目的　探讨cyclinA和CyclinE在胃癌组织中的表达及与细胞周期的关系。方法　采用免疫组织化学方法和流式细胞仪分别检测cyclinA和cyclinE在胃癌组织中的表达和测定胃癌组织中S期细胞所占百分比。结果　cyclinA的阳性率为 71 8% (2 8/ 39) ;cyclinE的阳性率为 4 8 7% (19/ 39) ;cyclinA的阴阳性S期百分数所占的比例无显著性差异 ;cyclinE的阴阳性S期百分数所占的比例有显著性差异。它们的阴阳性与DNA的二倍体或异倍体无关 ;cyclinA和cyclinE 2者在胃癌组织中的表达有关联。结论　cyclinA在胃癌组织中的表达阳性率明显高于cyclinE ,2者在胃癌组织中的表达相关联 ,cyclinE阳性者的S期细胞比例明显高于阴性者     

细胞周期素D1与癌症

许多恶性肿瘤染色体畸变时 ,位于 11q13的CCND1基因扩增和过量表达。例如副甲状腺瘤的倒位、B细胞恶性肿瘤的易位、头颈鳞癌和乳腺癌的基因扩增、卵巢癌和结直肠癌不扩增基因的过量表达、两种肺癌和两种食道癌基因表达的不同改变等。CCND1基因编码细胞周期素D1是候选的多能癌基因 ,与肿瘤的发生和进展相关。     

细胞周期素D1表达与胃癌的关系

目的探讨细胞周期素D1(Cyclin D1)在胃癌表达及其与肿瘤生物学行为的关系。方法应用免疫组化法检测50例胃癌组织、10例正常胃组织、20例胃腺瘤标本中细胞周期素D1在胃癌中的表达。结果胃癌CyclinD1的异常表达率(72.0%)高于胃腺瘤60.0%),CyclinD1的表达异常与胃癌的分化程度相关,而与胃癌的浸润、转移无相关性。结论CyclinD1的激活而引起细胞增殖和分化失控。CyclinD1可作为反映胃癌生物学行为的指标。目的探讨细胞周期素D1(CyclinD1)在胃癌表达及其与肿瘤生物学行为的关系。方法应用免疫组化法检测50例胃癌组织、10例正常胃组织、20例胃腺瘤标本中细胞周期素D1在胃癌中的表达。结果胃癌CyclinD1的异常表达率(72.0%)高于胃腺瘤60.0%),CyclinD1的表达异常与胃癌的分化程度相关,而与胃癌的浸润、转移无相关性。结论CyclinD1的激活而引起细胞增殖和分化失控。CyclinD1可作为反映胃癌生物学行为的指标。     

细胞周期素D_1、细胞周期素E及PCNA在尖锐湿疣中的表达

目的　探讨细胞周期素D1(CyclinD1)、细胞周期素E(CyclinE)及增殖细胞核抗原 (PCNA)在尖锐湿疣(CA)中的表达及其意义。方法　应用免疫组化染色法测定 35例CA患者皮损、2 5例正常人包皮中CyclinD1、Cy clinE和PCNA的表达与分布。结果　 35例CA患者CyclinE、PCNA表达较正常人上皮有不同程度的增强 ,有统计学意义 (P <0 .0 1)。CyclinD1在正常人上皮和大部分CA患者皮损都不表达 ,但在 3例不典型增生的CA上皮中有少量表达。结论　CA患者CyclinE、PCNA表达增强 ,CyclinD1表达与CA上皮不典型增生有关     

人软骨调节素基因的克隆与纯化

目的克隆人软骨调节素I(CHM-I)cDNA,并在原核表达系统中表达和纯化。方法利用RT-PCR技术从人软骨组织中扩增出CHM-I基因片段,并将其克隆到原核表达载体pET28a中,转化至大肠杆菌BL21(DE3),IPTG进行诱导表达;对在N末端融合了6×His纯化标签的表达产物进行Westernblot分析和用Ni2+2NTA离子交换树脂进行纯化;纯化蛋白进行SDS-PAGE纯度分析。结果获得了人软骨调节素cDNA,并成功构建了高效原核表达质粒pET(CHM-I),能有效表达CHM-I蛋白,且CHM-I蛋白的纯度高于90%。结论原核表达系统可有效克隆较高纯度的CHM-I基因。     

水蛭素衍生物基因的克隆及其在哺乳类细胞中的表达

设计特异性更高的水蛭素新突变体。化学合成编码水蛭素基因，并融会了ＲＧＤ３肽编码序列，通过连接、克隆、酶切筛选、ＤＮＡ序列分析，得到真核表达质粒ｐＡＰＲ－ＨＤ，表达质粒转染ＣＨＬ细胞，经Ｇ４１８筛选，获得表达克隆。结果：细胞培液中，重组水蛭素衍生物的活性达到１０ＡＴＵ／ｍｌ，并有抗血小板凝集作用。结论：水蛭素新突变体具有预防血栓性疾病的应用前景，但其表达水平和稳定性有待于进一步提高。     

非小细胞肺癌细胞周期素D1(CyclinD1)与细胞周期素E(CyclinE)表达特点的研究

目的探讨非小细胞肺癌（NSCLC）细胞周期素D1（CyclinD1）及细胞周期素E（CyclinE）的表达特点。方法采用免疫组织化学S-P法,对40例NSCLC患者切除的癌组织石蜡切片进CyclinD1与CyclinE表达检测。结果 40例NCSLC患者中有19例表达CyclinD1,21例表达了CyclinE;CyclinD1的表达与原发肿瘤大小、分化程度有关,CyclinE表达与淋巴结转移状态相关。结论非小细胞肺癌CyclinD1与CyclinE的表达高于正常肺组织,过表达与NSCLC的发生有关,CyclinD1过表达可能有助于早期诊断。CyclinE的过表达可能提示淋巴结转移。     

胃肠道间质瘤中p27和细胞周期素D1蛋白的表达及临床意义

目的研究p27和细胞周期素D1蛋白在胃肠道间质瘤中的表达及其与间质瘤临床病理特征的关系。方法收集48例手术切除的胃肠道间质瘤标本,同时取距瘤灶>5cm的正常组织,应用免疫组织化学SP法检测肿瘤组织及正常组织中p27和细胞周期素D1蛋白的表达。结果48例胃肠道间质瘤中p27和细胞周期素D1蛋白阳性表达率分别为54.16%和58.33%。p27蛋白的低表达与间质瘤的分化程度呈负相关(P<0.01),与间质瘤复发呈负相关(P<0.01)。p27和细胞周期素D1蛋白在胃肠道间质瘤的表达呈正相关(r=0.573,P<0.01)。结论p27和细胞周期素D1蛋白与胃肠道间质瘤的发生、发展有关,检测p27和细胞周期素D1蛋白可作为评估恶性程度和判断预后的重要指标。     

利用电子差异展示方法克隆人类睾丸特异性新基因

目的 克隆一个新的人睾丸特异性基因.方法 运用电子差异展示方法筛选人类睾丸特异表达新基因,获得有差异显示的代表新基因的克隆重叠群,挑选其中一个克隆重叠群Hs.180197进行多组织RT-PCR验证该重叠群在人睾丸中的表达.然后从包含该重叠群的IMAGE克隆出发,采用生物信息学方法克隆一个人类新基因的全长eDNA序列.结果 新基因全长1197 bp,开放阅读框为504～806 bp,定位于6p21.1-p21.2.编码由100个氨基酸组成,相对分子质量为10 000,等电点为6.81的一个蛋白,该蛋白与已知蛋白无同源性.克隆实验验证该基因阅读框完全正确,推测其可能与精子生成相关,暂命名为TDRGI(restis development related gene 1),GenBank登录号为DQ168992.结论 电子差异展示方法与实验验证相结合用于发现人类功能新基因足行之有效的.     

载脂蛋白A1基因克隆及序列分析

目的 :克隆人载脂蛋白A1 (apoA1 )基因。　方法 :选择人胎肝组织 ,提取总RNA ,以此为模板 ,利用RT PCR法获取apoA1成熟肽基因片段 ,琼脂糖电泳分离纯化所得目的基因并克隆至T Vector ;ABI 377自动序列分析仪分析所得基因序列。　结果 :PCR产物经琼脂糖电泳 ,目的基因片段与预期大小相符 ;序列分析仪分析所得基因序列 739bps,与国外报道的完全相同。　 结论 :从人胎肝组织成功克隆apoA1基因     

人LNX新基因克隆及组织分布和在脑胶质瘤中的表达

目的探讨人脑胶质瘤相关LNX新基因克隆、组织分布和在不同级别星形细胞瘤中的表达及其参与胶质瘤信号途径的分子机制。方法构建胎脑cDNA文库并测序获得全长LNX新基因;人多组织文库（MTC）为模板研究LNX的正常人体组织分布;应用含13939种人类基因表达谱芯片检测LNX新基因在脑星形细胞瘤中的表达;Northern杂交验证LNX新基因在不同级别胶质瘤中的表达;酵母双杂交研究与LNX新基因相互作用的蛋白,应用免疫共沉淀方法验证LNX与Numb蛋白和SKIP蛋白的相互作用。结果人胎脑文库中克隆的LNX新基因长约3．7kb,含1899bp开放阅读框,编码632氨基酸蛋白,相对分子质量约70000,登录号AF237782;LNX新基因在脑、肾和胰腺中表达较高,在心、胎盘、肺、肝、脾、胸腺和前列腺中也有表达;但LNX在胶质瘤组织中表达均降低,与肿瘤发生密切相关;酵母双杂交筛选到LNX新基因与肿瘤Notch信号途径中的Numb和SKIP蛋白有相互作用,免疫共沉淀发现LNX新基因与SKIP蛋白相互作用,可影响Numb的亚细胞定位,从而影响Notch信号途径Numb结合位点。结论表达谱芯片可快速高效锁定与胶质瘤密切相关的基因和寻找肿瘤标志物,LNX新基因与胶质瘤密切相关,通过Notch信号传导途径参与脑胶质瘤发生发展：可成为胶质瘤潜在的治疗靶标。     

三氧化二砷对A549细胞周期及cyclin D_1基因表达的影响

目的：研究三氧化二砷（arsenic trioxide,As2O3）对肺腺癌A549细胞株细胞增殖、细胞周期以及cylin D1基因表达情况,初步探讨As2O3对肺腺癌细胞增殖的影响及其机制。方法：分别以不同浓度的As2O3作用于A549细胞,作用不同时间后,对细胞增殖活性、细胞周期及cylin D1基因表达的情况进行检测。结果：稍高浓度（〉2μmol/L）的As2O3可抑制A549细胞增殖,并有剂量和时间依赖性,As2O3可抑制A549细胞由G1期进入S期。逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）检测cylin D1基因转录水平和细胞爬片免疫组化检测cyclin D1基因蛋白表达的相对强度,发现As2O3作用组cyclin D1基因表达与对照组相比明显减低（P〈0.01）。结论：As2O3可有效抑制A549细胞增殖,抑制效应呈量效和时效关系,并且能阻碍细胞周期由G1进入S期,这一过程可能与As2O3抑制cyclin D1基因表达有关。     

新的人内源性逆转录病毒NP9基因的分子克隆与病毒蛋白表达

目的:研究新近发现的人内源性逆转录病毒NP9基因与自身免疫性疾病的相关性及其可能的作用机制,构建该基因的蛋白表达系统. 方法:提取自身免疫性疾病患者外周血单个核细胞(PBMCs)的总RNA,利用RT-PCR 技术,扩增NP9基因,然后将该片段进行T-A克隆并测序鉴定,纯化回收后亚克隆于原核表达载体pQE30中,然后提取质粒,酶切鉴定;最后经IPTG诱导,原核表达重组子在M15宿主菌进行表达,并进行SDS-PAGE与Western 印迹分析与鉴定.结果:应用RT-PCR 技术,从系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞的总RNA中扩增到一条大小约为250 bp的片段,经T-A克隆与测序鉴定,证实此片段为NP9基因,具有一个完整的开放阅读框架;将pQE 30-NP9重组子转化入宿主菌,用IPTG诱导菌体表达NP9重组蛋白,经SDS-PAGE电泳和Western印迹技术鉴定证实:在相对分子量约9kD处见明显的病毒特异性的高表达条带.结论:已成功克隆了新的人内源性逆转录病毒NP9基因,并经IPTG诱导,在M15宿主菌中表达了相应的病毒蛋白,为进一步研究该逆转录病毒与自身免疫性疾病的相关性奠定基础.     

肺癌RASSF1A基因甲基化与cyclin D1的表达

目的探讨肺癌中RASSFIA基因甲基化与cyclinD1表达对肺癌诊断的意义及RASSF1A基因甲基化与cyclinD1表达两者之间有无相关性。方法甲基化特异性PCR检测33例肺癌及10例癌旁组织中RASSFIA基因启动子区甲基化情况;用免疫组织化学S-P法检测cyclinD1在上述组织中的表达情况。分析两者分别与患者年龄、性别、组织分型的关系及与肿瘤分化间的相关性,同时对RASSFIA基因甲基化与cyclinD1表达间的关系进行分析。结果33例肺癌中有18例（54．5％）显示RASSFIA基因已被甲基化,16例（48．5％）肺癌组织显示为cyclinD1表达阳性;而10例癌旁组织RASSFIA基因未甲基化且cyclinD1免疫组化染色显示为阴性。RASSFIA基因甲基化与年龄、性别、组织分型、分化及cyclinD1表达均无关;而cyclinDl表达与肿瘤的分化具有相关性（r=0．418,P〈0．05）,但与年龄、性别、组织分型无关（P〉0．05）。结论RASSFlA基因甲基化与cyclinD1表达在肺癌的发生中具有重要作用,且cyclinD1表达与肿瘤分化有关,检测cyclinD1表达有助于对肺癌恶性程度作出判断。     

新基因TMBP-1的全长cDNA克隆

目的：克隆胸腺细胞发育相关新基因。方法：本研究建立了抑制性差减杂交技术（SSH）、构建了胸腺基质细胞系cDNA差减杂交文库。应用cDNA末端快速扩增方法（RACE）进一步克隆新基因的cDNA全长序列。结果：筛选两个不同胸腺基质细胞系的差异表达基因,获得了新基因cDNA片段C91,应用RACE成功克隆新基因TMBP－1cDNA全长序列。它拥有一个969bp的开放读码框架,编码323个氨基酸。同源序列 比较发现,它编码一个未知功能的膜结合蛋白。Northem杂交分析显示,mRNA转录本长度为1．5kb;在两种胸腺基质细胞系中均有表达。新基因的cDNA全长序列。已被GenBank所接受。结论：抑制性差减杂交技术是克隆新基因片的有效方法;成功克隆新基因TMBP－1的cDNA全长序列。     

日本血吸虫合抱相关未知功能基因SJCHGC00821的克隆及生物信息学分析

目的 克隆与日本血吸虫合抱相关但未知功能的新基因SJCHGC00821，构建其真核表达载体，并应用生物信息学初步探讨其功能。方法 应用PCR技术从日本血吸虫成虫cDNA文库中扩增SJCHGC00821基因全长ORF，将其亚克隆到真核表达载体pcDNA3中，通过PCR、限制性酶切分析及测序进行鉴定。应用生物信息学初步分析其细胞定位、蛋白序列、结构域及功能。结果 获得日本血吸虫合抱相关未知基因SJCHGC00821的克隆，序列分析结果提示该cDNA序列含有一个597bp的完整阅读框序列，编码198个氨基酸，其编码蛋白的理论分子量为22．76kDa，等电点为4．84。二级结构分析预测提示其具有一定抗原性。结论 成功地克隆了日本血吸虫SJCHGC00821基因全长ORF，构建了其pcDNA3真核表达载体，为进一步研究其结构与功能创造了条件。     

干扰素诱导的跨膜蛋白-1基因的扩增、克隆及蛋白表达

目的研究干扰素诱导的跨膜蛋白-1（interferon-inducible transmembrane protein-1,IFITMP-1）基因的扩增、克隆及蛋白表达.方法以含IFITMP-1基因的cDNA为模板,用Pfu酶做PCR扩增,用EcoR Ⅰ和HindⅢ双酶切,将目的基因克隆到pUCm-T质粒测序.进一步克隆到pET-Trx蛋白表达载体质粒,优化蛋白表达条件.结果含有IFITMP-1基因的PCR产物约1000 bp.重组pUCm-T质粒经EcoRⅠ、HindⅢ双酶切,有相应大小的cDNA片段插入,测序结果显示其序列正确,证实目的基因的扩增、克隆成功,并成功克隆进pET-Trx蛋白表达载体,经IPTG诱导,在BL21（DE3）plysS中有融合蛋白表达.结论成功扩增克隆IFITMP-1基因,并成功表达该基因编码的蛋白,为进一步研究IFITMP-1基因在大肠癌中的作用奠定了基础.