应用6种人癌基因探针进行肝癌胃癌与脑瘤转化基因的RFLPs和扩增及重排的研究(摘要)

本文应用c-Ha-ras-1、N-ras Wigler(左段)和P~(52c-)(右段)、c-sis、erbB、c-myc和V-fos六种癌基因作探针,用瑟慎印迹和斑点杂交两种方法研究了94例胃癌、肝癌和脑瘤DNA的限制性片段长度多态性(RFLPs)、基因扩增和基因重排情况,和85例正常人组织杂交结果相比,发现了国内外未见报道过的癌基因等位片段。在肝癌中用N-ras作探针,ECORI酶解的杂交结果发现4kb、7.8kb、12kb和12.8kb等位片段。     

应用6种人癌基因探针进行肝癌、胃癌与脑瘤转化基因的RFLPs和扩增及重排的研究

本文应用c-Ha-ras-1、N-ras wigler(左段)和P~(52-c)(右段)、c-sis、v-erbB、c-myc和v-fos六种癌基因作探针,用瑟慎印迹杂交和斑点杂交两种方法研究了94例胃癌、肝癌和脑瘤DNA的限制性片段长度多态性(RFLPs),基因扩增和基因重组情况。和85例正常人组织DNA的杂交结果相比,发现了一些国内外未曾报道过的癌基因等位片段。其中有些等位片段只在癌组织DNA中富集。两个癌患者家系中病人的一级亲属的RFLPs分析表明,这些成员中罕见的癌基因等位片段明显高于正常人群。同时我们在一些肿瘤中还发现有癌基因扩增和重排现象。     

原发性肝癌转化基因的RFLPs研究(Ⅱ)中国汉族人癌基因N—ras对限制酶Hind Ⅲ的RFLPs

用~(32)p 标记的人癌基因 N-ras 探针 p52C-分别与经限制性核酸内切酶 Hind Ⅲ消化的原发性肝癌患者手术切除的肝癌组织 DNA 以及作为对照的人工流产胎儿绒毛的DNA 进行分子杂交以观察其 RFLPs。结果发现有8.6kb、5.2kb 和6.5kb 三种首报的等位片段,它们在全部标本中出现的频率分别为100%、53.8%和23%。就基因型而言,8.6kb 纯合子占23%,8.6kb/5.2kb 杂合子占54%,8.6kb/6.5kb 杂合子占23%。在首报的三种等位片段中,6.5kb 的片段仅出现于肝癌组织 DNA。     

原发性肝癌转化基因的RFLP研究(Ⅲ)

以原发性肝癌组织DNA以及作为对照的正常人白细胞DNA和人工流产胎儿绒毛DNA为材料,应用5′侧和3′侧两种N-ras探针以及c-sis探针,通过Southern吸印杂交探查其对特定限制酶的限制性片段长度多态性。结果未发现人癌基因N-ras对限制酶Bam HⅠ、PstⅠ、MspⅠ以及人癌基因c-sis对限制酶Eco RⅠ、HaeⅢ的限制性片段长度多态性;但发现人癌基因c-sis对限制酶Hind Ⅲ、SacⅠ、PstⅠ、PvuⅢ、MspⅠ等都有限制性片段长度多态性。这些等位片段可为进一步结合家系分析,探查致癌的家族素因以及肿瘤的遗传易感性研究中寻找遗传标记提供基础。     

Ha-ras在正常人和胃癌患者DNAs的限制性片段长度多态性研究

以癌基因 Ha-ras 为探针,对10例正常人组织和22例人胃癌组织的 DNA 用限制性内切酶 Bam HI 酶切后,再通过瑟慎印迹法(Southern Blot)杂交,发现正常组织中的 Ha-ras 常见等位片段的出现频率高于胃癌组织,而稀有等位片段的出现频率低于胃癌组织;正常组织中Ha-ras常见等位基因纯合子的出现频率高于胃癌组织,而稀有杂合子的出现频率低于胃癌组织。提示 Ha-ras 限制性片段长度多态性(RFLPs)和胃癌可能存在着连锁关系。     

原发性肝癌相关基因

随着分子生物学理论与技术的飞速发展,已经证实多种癌基因与肿瘤发生有着十分密切的关系。自1984年顾建人等对原发性肝癌及肝癌7402细胞株DNA转染NIH/3T3所得转化细胞的研究证明存在人N-ras基因顺序以来,肝癌基因研究十分迅速。已证明与肝癌有关的癌基因     

肝癌的癌基因研究

从肝癌、7402肝癌细胞株DNA转染NIH/3T3所得的转化细胞株中,证明存在人N-ras基因顺序;人肝癌中N-ras基因存在过量的mRNA表达以及转化细胞株中ras基因转化蛋白P21的过量表达,提示N-ras基因是人肝癌的重要转化基因。鉴于肿瘤的发生是多因素参与和多阶段过程,因而推测应有多种激活的原癌基因所致。迄今已知人肝癌发生中至少有7种癌基因和相关基因参与,包括N-ras、C-myc、C-ets-2、C-fos、P53、IGF-Ⅱ及C-fms,它们均有不同的功能。还有人发现肝癌的发生可能与4号染色体杂合子丢失有关,其位点在4q32附近。近期已成功地获得了P21蛋白和C-myc蛋白的单克隆抗体,这为研究肝癌的发病机理,抑制癌基因产物的生物学效应(癌变作用),从而阻止癌变或抑制癌细胞增殖以及把癌变细胞作为直接杀伤的靶细胞等开辟了广阔的前景。     

N-ras癌基因负调控因子的研究(简报)

笔者曾通过分子杂交、Run-off转录活性的检测及原位杂交技术证明,肝癌细胞中N-ras癌基因的表达明显高于正常肝细胞,其分子机理可能是由于转录水平的异常.进而采用Southwestern Blot技术对反式作用因子(trans-acting factor)进行检测,结果发现在肝癌细胞中缺失了一组(分子量45 000、40 000和35 000)DNA结合蛋白.本实验对该组DNA结合蛋白进行分离、鉴定并利用体外转录系统证明其具有抑制转录的作用,提示存在N-ras癌基因的负调控因子.     

5-氟尿嘧啶及其与甲酰四氢叶酸合并用药对7402肝癌细胞株N-ras癌基因表达的影响

为了探讨5－氟尿嘧啶（5-Fu）和5-Fu合并甲酰四氢叶酸（FH4）用药对7402肝癌细胞N-ras癌基因表达的影响。采用了异硫氰酸胍法从加有5-FU和5-FU与FH4。合用的7402肝癌细胞中分别提取总RNA，应用缺口平移法，用[α-(32)P]-dATP，dCTP标记N-ras癌基因DNA探针，与各实验组提取的7402肝癌细胞RNA进行斑点杂交。结果显示：单独使用5-FU，杂交斑点明显变小。5-Fu与FH4合并使用，杂交斑点完全消失。表明5-Fu可以明显抑制7402肝癌细胞N-ras癌基因的表达。5-Fu与FH4联合使用，其抑制效果更为明显。实验提示N-rasRNA降低并不是细胞毒作用而是药物对细胞DNA合成抑制的结果。     

RFLPs分析技术在分类学研究中的应用

RFLPs技术是随着分子生物学的发展而产生的一种根据基因组DNA上存在着一些限制性内切酶的长度片断多态性的特点来进行基因分型的方法。本文综述了这项技术的基本方法及其在HLA的基因分型、寄生虫的虫种鉴定及病毒分型中的具体应用。RFLPs技术的应用对于分类学的鉴定研究具有突破性意义。     

DMD家系的RFLPs连锁分析

目的：为寻找DMD家系中与致病基因紧密连锁的多态性DNA标记，以检出女性携带者及实施基因诊断。方法：应用四种DMD基因内及旁侧紧密连锁的DNA探针（P~ERT87－15、P~ERT87-8、XJ23、C7）对四个DMD家系进行了七种RFLPS连锁分析（包括4名肯定携带者和3名可能携带者）。结果：所有肯定携带者和可能携带者均被检出，且对患者进行了基因诊断。结论：提示选择多个探针联合应用RFLPs方法对DMD患者及女性携带者具有较高诊断价值。     

PCR-SSCP检测急性白血病患者N-ras基因突变及临床意义初探

目的 探讨N-ras基因突变与急性白血病发生的关系。方法 采取骨髓和外周血白细胞提取DNA．用PCR-SSCP分析技术分别对急性白血病患者、正常对照组的N-ras基因突变进行检测。结果 84例急性白血病患者中25例发生N-ras基因突变，基因变异频率为29．8％，其中急性淋巴细胞白血病为18．6％，急性髓细胞白血病为41.4％；11例随访6个月，7例N-ras基因突变消失，4例N-ras基因突变持续存在；正常对照组未发现N-ras基因突变、结论 N-ras基因突变对急性白血病患者的预后具有一定的参考价值。     

人肝细胞癌总基因组DNA与c-myc、c-N-ras基因甲基化的改变

分别用两种方法研究了人原发性肝细胞癌总基因组及特定癌基因片段的DNA甲基化情况，并进行对比研究。以3H－SAM掺入法研究总基因组DNA甲基化水平，以限制性内切酶酶切、South－ern吸印法对c－myc、c－N－ras两种癌基因状况进行分析。结果：发现人肝细胞癌区和癌旁区组织内c－myc、c－N－ras癌基因分别有不同程度的低甲基化，且有癌区总基因DNA甲基化水平明显下降。本文结果提示：两种方法检测均发现在人原发性肝癌中存在DNA低甲基化现象，联用两种方法效果优于单一检测者。     

中国人胃癌组织DNA中癌基因Ha—ras等位基因的缺失

本文应用C—Ha—ras—1为探针与14个中国人Ha—ras胃癌患者癌组织和癌旁正常胃组织经限制性酶BamHI酶切后的DNA进行瑟慎印迹杂交。结果发现1例6.3kb/7.8kb杂合子患者在癌组织中丢失了6.3kbHa—ras等位基因。另外在一个胃癌杂合子患者家系的限制性片段长度多态性(restriction fragment length polymorphisms, RFLPs)分析中,发现患者的一个女儿也丢失了一个Ha—ras7.4kb的等位基因。这一现象可能是有丝分裂不分离或者有丝分裂重组造成的。     

人肝癌细胞中hst-1、int-2和c-sea等癌基因结构的初步分析

应用基因特异性探针,通过Southern印迹杂交技术,分析五种有代表性的人肝癌细胞系基因组DNA中癌基因hst-1、int-2和c-sea等的结构。在所分析的肝癌细胞系基因组DNA中,未发现上述癌基因发生结构重排和扩增现象。这一结果对进一步研究人肝癌细胞中染色体畸变的分子基础有一定的参考价值。     

情感性精神病与Ha—ras基因限制性片段长度多态性关系的研究

用人C-Ha-ras-1全长基因组DNA作探针，对38例双相型情感性精神病人和正常对照人群66个进行RFLP分别，SacⅠ酶解产生5.2kb,5.7kb,6.2kb和6.8kb四种等位多态片段，但各等位片段的频率与北美人比较有较大差别，BP病人和正常之间，等位片段分布及等位片段组成的基因型分布均无显著差异。对4个BP家系进行分析，其中两个家系可见到等位片段分离现象，但基因传递和情感性精神病之间的关系难以确定，研究结果不支持情感性精神病与Ha-ras基因连锁。     

口腔癌中H-ras癌基因第12位密码子的G→T突变

癌基因是目前肿瘤研究中的活跃领域,口腔癌癌基因的研究正在引起人们的兴趣和重视。1989年,国外学者曾在两个口腔癌细胞株中发现H-ras癌基因的点突变,有关口腔癌实体瘤中H-ras癌基因的点突变研究,国内外尚未见报道。本研究采用分子生物学新技术——聚合酶链反应(PCR),先在体外放大口腔癌DNA中H-ras的亚基因片段,H-ras第12位密码子顺序位于该放大片段内,再用特异G→T突变的寡核苷酸探针与     

PCR技术在甲型血友病基因诊断中的应用

甲型血友病是一种最常见的X连锁隐性遗传性出血性疾病,至今尚无满意的治疗方法,故进行有效的遗传控制,防止患儿出生十分必要.目前,国内外多采用FⅧ基因内及与FⅧ基因紧密连锁的限制酶片段长度多态性(RFLPs)为遗传标志,通过连锁分析进行携带者检出和高危胎儿出生前诊断.聚合酶链反应(PCR)技术利用一对寡核苷酸引物在体外扩增特异DNA片段,已广泛用于β地中海贫血突变基因的检测;此外,PCR还可检测限制酶位点的改变,通过RFLPs连锁分析诊断甲型血友病基因.本实验室采用PCR对4个甲型血友病家系进行基因连锁分析,其中包括3例高危胎儿的出生前基因诊断.     

鼻咽癌癌基因的分离及其属性的鉴定(简报)

近年来,人们从膀胱癌,肺癌、神经母细胞瘤、肝癌、骨癌等一系列细胞系或癌组织中提取DNA,转染小鼠NIH 3T3细胞,从转化灶中分离出上述肿瘤各自的癌基因。上海肿瘤所曾报告以鼻咽癌活检组织DNA转染NIH3T3小鼠细胞成功,但鼻咽癌癌基因属性迄今未见有报告. 我们用低分化鼻咽癌上皮细胞系CNE-2转染NIH3T3细胞,经二轮转染获得的转化细胞株在软琼     

一种随机探针人DNA指纹分析法的建立

根据随机探针(Anonymous Probe)检测DNA限制性片段长度多态性(RFLPs)分析原理和人与鼠的髓鞘碱性蛋白(MBP)基因cDNA有90％以上同源序列的事实,选用rMBP-cDNA 3′-端非表达区高度重复序列的0.81千碱基对(kb)片段作探针,检测用HaeⅢ重酶解的人DNA限制性片段,结果可以分辨出22条谱带,受检的30例无血缘关系的个体之间,没有两个人的谱带是完全相同的,显示出此方法的高度特异性。本文还比较了若干DNA片段作探针和几种限制性内切酶水解人DNA后检测DNA指纹的初步结果。