低氧预适应对大鼠肝癌肝切除术后残肝缺血再灌注中细胞凋亡的影响

目的 探讨低氧预适应诱导热休克蛋白70（HSP70）在大鼠肝癌肝切除术后对残肝细胞凋亡的影响及可能的作用机制.方法 采用SD大鼠移植性肝癌模型,根据随机表将60只模型鼠分为A组（假手术组）,B组（缺血状态下肝叶切除组）,C组（低氧预适应＋缺血状态下肝叶切除组）,每组20只.C组的处理方式：术前给予10％氮氧混合气体处理90 min,Pringle法完全阻断入肝血流15 min,同时切除肿瘤所在的肝左外叶.各组分别于术后1,8,12,24 h取残余肝脏标本,用Western blotting免疫印迹法检测HSP70、Bax蛋白的表达,应用流式细胞仪检测肝细胞凋亡率,下腔静脉取血检测ALT、AST,并在光镜下观察各组组织形态学改变,对相关数据进行统计学处理.结果 （1）与A、B组比较,C组检测的各同时相点HSP70的相对量表达明显增加,组间比较差异有统计学意义（均P＜0.05）,A、B组肝组织中仅有微量HSP70表达,两组比较差异无统计学意义（P＞0.05）;（2）与A组比较,B组各同时相点Bax蛋白表达水平明显升高,肝细胞凋亡率明显增加,两组比较差异有统计学意义（均P＜0.01或0.05）,而C组以上各项指标的变化均较B组明显减弱（均P ＜0.05）;（3）C组肝功能较B组改善明显,病理示A组肝组织形态基本正常,C组呈轻微病理学改变,而B组肝组织损伤明显加重.结论 低氧预适应对缺血条件下肝癌肝切除术产生的缺血再灌注损伤具有保护作用,其可能的机制之一是通过上调HSP70蛋白的表达,而HSP70通过降低Bax的表达,抑制细胞凋亡,从而发挥肝脏保护作用.     

低氧预适应对多器官缺血再灌注损伤的保护作用

<正>早在1960年Jennings就证实心肌缺血再灌注后超微结构会发生不可逆性损伤,并初步提出了缺血再灌注损伤的概念,以后学者们陆续发现在脑、肾、肝、肺、胃肠道、骨骼肌等器官和组织也存在着缺血再灌注损伤现象。缺血再灌损伤是在缺血的组织、器官血流恢复后,不仅不能使组织、器官功能恢复,反而会加重其功能障碍和结构损伤的现象。由于其发生机制复杂,现在仍未完全明确,目前主要认为与大量自由基产生、钙超载、中性粒细胞活化、     

HSP70和iNOS表达在大鼠肾脏缺血再灌注损伤中的作用

为探讨热休克蛋白 70 (ＨＳＰ70 )和诱导型一氧化氮合酶 (ｉＮＯＳ)在缺血预处理对大鼠肾脏缺血再灌注中的作用 ,我们用免疫组化方法 ,对肾脏缺血大鼠模型的ＨＳＰ70和ｉＮＯＳ进行了检测。材料和方法　健康Ｗｉｓｔａｒ大鼠 81只 ,体重 (2 37.2± 16 .6 ) ｇ ,雌雄不限。随机分为对照组 (ＣＯＮ)、缺血再灌注组(ＩＲ)、缺血预处理后缺血再灌注组(ＩＰＣ) ,每组 2 7只。ＩＰＣ组连续 3次左肾血管蒂缺血 5ｍｉｎ后再灌注 5ｍｉｎ ,再缺血 1ｈ ,然后再灌注 0、2、6ｈ取标本 ;ＩＲ组在切除右肾 30ｍｉｎ后 ,左肾缺血 1ｈ ,取标本时间同ＩＰＣ组…     

低氧预适应对自体原位肝移植大鼠肠道TLR4表达的影响

目的：探讨低氧预适应（HP）对大鼠自体肝移植后肠道TLR4蛋白表达的影响。方法：将SD大鼠随机分为正常对照组（NC）、自体肝移植（AT）组和低氧预适应＋AT（HP）组3组,每组24只,采用改良的自体肝移植模型。HP组术前用8%氮氧混合气体处理90 min,分别于术后1、6、12 h处死大鼠取小肠标本,抽血检测血清ALT及AST水平,采用免疫组化法测定各组小肠组织TLR4蛋白表达情况,及应用逆转录-聚合酶反应（RT-PCR）检测小肠组织TNF-αmRNA的含量。结果：HP组血清ALT、AST水平,小肠组织TLR4蛋白表达及TNF-αmRNA的含量均显著低于AT组,但均高于NC组,差异均有统计学意义（P〈0.05）。结论：HP通过下调肝移植大鼠小肠组织TLR4蛋白的表达,进一步抑制TLR4信号转导通路,减少TNF-α等细胞因子的合成与释放,从而减轻对移植肝功能的损伤。     

低氧预适应对自体肝移植大鼠Bcl-2蛋白表达的影响及其意义

目的 探讨低氧预适应(HP)对大鼠自体肝移植后Bcl-2蛋白表达的影响及其意义.方法 采用改良的自体肝移植模型研究缺血再灌注损伤(IRI),将SD大鼠随机分为正常对照(NC)、自体移植(AT)和AT+低氧预适应(HP)3组,每组24只.HP组术前用8%氮氧混合气体处理90 min,分别于术后1,6,24 h处死大鼠取肝脏标本,抽血检测肝功能,免疫组化方法测定大鼠肝组织Bcl-2蛋白的表达,并在光镜和透射电镜下观察各组肝细胞形态学改变、线粒体损伤程度等.结果 HP组血清ALT和AST水平显著低于AT组,差异有统计学意义 (P＜0.05);HP组各时段的肝功能明显优于AT组;HP组各时段Bcl-2蛋白明显高于AT组,差异有统计学意义(P＜0.05).光镜下AT组的肝组织肿胀明显,而HP组无明显改变.透射电镜下AT组肝细胞出现典型的凋亡征象,而HP组肝细胞无明显凋亡形态;定量分析线粒体的面积、周长及直径均与AT组差异有统计学意义(P＜0.05),HP组线粒体损伤程度较AT组为轻.结论 HP对移植所导致的肝细胞凋亡有明显的抑制作用;它可能系通过上调Bcl-2蛋白的表达、减轻线粒体损伤途径而发挥其保护作用.     

热休克蛋白70对肝缺血再灌注损伤的作用及机制探讨

目的 探索热休克蛋白70（Heat shock protein 70,HSP700）对大鼠肝缺血再灌注损伤的作用及机制。方法 实验大鼠分为持续阻断组，间断阻断组和假处理组。用免疫金银法观察再灌注1h后肝组织HSP70蛋白的表达，并检测其肝细胞及线粒体功能，肝组织内钙和脂质过氧化物（Lipid peroxide,LPO)含量，以及超氧化物歧化酶（Superoxide dismutase,SOD)活性。结果 HSP70蛋白在持续性缺血再灌注后无表达，肝细胞功能，线粒体功能和SOD活性均显下降，而肝组织内钙和LPO值均显升高。间断性血流阻断组则有HSP70蛋白的合成表达，该组与假处理组的上述各项指标的差异均无显意义。结论 HSP70蛋白在肝缺血再灌注后的诱导产生有利于保护肝细胞有线粒体的功能，该效应与细胞内钙稳定和SOD活性增高有关。     

间断低氧预适应对大鼠肝切除缺血再灌注损伤的保护作用

目的探讨间断低氧预适应对大鼠肝大部切除术后残余肝脏合并缺血再灌注引发过氧化损伤的保护作用。方法78只SD大鼠,用SPSS软件将其随机分为4组：假手术组（SO组,n=6）、肝切除组（PH组,n=24）、肝切除合并缺血再灌注损伤组（IR组,n=24）和间断低氧预适应组（IHP组,n=24）。以无创伤血管夹阻断IR组大鼠入肝血流后切除肝脏的左叶和中叶（约占全肝的70％）,20min后开放入肝血流,残余肝脏发生了缺血再灌注损伤。将IHP组大鼠暴露于10％的低氧环境中,每日持续1h,连续进行1周,最后1次低氧暴露后行肝切除术（同IR组）。SO组大鼠在术后2h取材检测,其余各组分别于术后2、6、12及24h进行检测。检测血清转氨酶（ALT、AST）水平和肝匀浆组织中超氧化物歧化酶（SOD）活性及丙二醛（MDA）含量。结果术后2h,PH组、IR组和IHP组大鼠血清ALT和AST水平均高于SO组（尸〈0．05）。在术后6、12和24h,IHP组大鼠血清ALT和AST均高于PH组,但低于IR组（均P〈0．05）。与IR组相比,IHP组大鼠术后各时间点残余肝脏中SOD活性明显升高,而MDA含量则显著降低（均P〈0．05）。结论间断低氧预适应对残余肝脏缺血再灌注损伤具有保护作用,其机理可能与提高肝脏的抗氧化能力有关。     

低氧预适应对自体原位肝移植大鼠TNF—α诱导肝细胞凋亡的保护作用及机制的研究

目的：探讨低氧预适应（HP）对自体原位肝移植大鼠肿瘤坏死因子-α（TNF-α）诱导肝细胞凋亡的保护作用以及可能的机制。方法：采用经门静脉灌注法制备大鼠自体原位肝移植模型,将SD大鼠随机分为正常对照组（NC）、自体肝移植（AT）和AT＋低氧预适应（HP）3组。HP组术前用8％氮氧混合气体处理90min。3组分别于术后1,2,12,24h处死大鼠取肝脏标本,抽血检测肝功能,RT-PCR检测TNF-、C-Jun mRNA表达水平,透射电子显微镜下观察肝细胞的超微结构变化。     

低氧预适应对自体原位肝移植大鼠血清内毒素的影响

目的 探讨低氧预适应(HP)对大鼠自体肝移植后血清内毒素的影响.方法 采用改良的自体肝移植模型进行研究.将SD大鼠随机分为正常对照组(NC)、自体肝移植(AT)和低氧预适应+AT(HP)3组,每组24只.HP组术前用8%氮氧混合气体处理90 min.各组分别于术后1,6,12 h处死大鼠取肠标本,抽血检测ALT和AST水平;在光镜及透射电镜下观察各组小肠黏膜损伤程度及线粒体超微结构改变;同时应用ELISA试剂盒测定大鼠血清内毒素水平的变化.结果 HP组血清ALT,AST及内毒素水平均显著低于AT组,但高于NC组,差异均有统计学意义(P＜0.05);光镜下 HP组小肠黏膜损伤程度明显低于AT组;透射电镜下HP组线粒体损伤较AT组明显减轻.结论 HP可减轻肝IRI对肠道黏膜的损伤,减少了肠道内毒素移位而降低肝移植大鼠血清内毒素水平,从而减轻内毒素对移植肝功能的影响,其机制可能与减轻线粒体结构损伤,减轻缺血缺氧后线粒体功能障碍,改善细胞的供能,提高细胞的抗缺氧能力有关.     

重复电针预处理对脑缺血再灌注大鼠脑皮层热休克蛋白70表达的影响

目的 探讨重复电针刺激百会穴预处理对脑缺血再灌注大鼠脑皮质热休克蛋白70表达的影响。方法 20只雄性SD大鼠,随机分为对照组(n=10)和电针组(n=10)。对照组未行任何预处理;电针组予电针刺激百会穴,30 min·d-1,连续5d。最后一次预处理后24 h时,两组均采用颈内动脉尼龙线线栓法致大脑中动脉阻闭(120 min)。缺血再灌注后24 h将大鼠灌注固定,取脑组织行病理学观察及免疫组织化学染色,并按照McCarthy等的方法对免疫组化染色结果进行半定量分析。结果 半定量分析结果,电针组皮层HSP70表达(1.9±0.6)明显强于对照组(0.9±0.4)(P<0.05)。电针组组织病理学损害轻于对照组。结论 重复电针刺激百会穴预处理减轻脑缺血再灌注损伤与皮层HSP70表达增强有关。     

热激活蛋白70识别蛋白在脊髓缺血再灌注损伤后表达变化及其意义

目的:探讨热激活蛋白70识别蛋白(heat shock cognate protein 70,HSC70)在兔脊髓缺血再灌注损伤(spinal cord ischemia-reperfusion injury,SCIRI)后表达变化及其意义。方法:随机将36只新西兰白兔分成6组(每组6只),采用Zivin法建立兔SCIRI模型。A组只显露腹主动脉而不阻断血流,30min后关闭腹腔,取材(L3~L5段脊髓);B组阻断腹主动脉血流30min后关闭腹腔,取材;缺血再灌注组(C、D、E、F组)阻断腹主动脉血流30min后停止夹闭,再灌注6、12、24、48h时采用改良Tarlov评分分别进行运动功能评价后取材。应用差异蛋白质组学技术荧光差异双向凝胶电泳联合质谱分析筛选出应激相关蛋白HSC70,利用免疫印迹对质谱进行印证,结合免疫组化研究其在脊髓内的时空变化特点。结果:成功建立SCIRI兔模型,SCIRI后实验动物后肢功能逐渐好转,C~F组改良Tarlov评分分别为1.167±0.753、1.667±0.516、2.668±0.516和2.167±0.752分,再灌注24h达SCIRI早期最好水平,再灌注48h略有下降。应激相关蛋白HSC70在A组印迹清晰,B组印迹轻微加强,C组和D组印迹再次加强,E组印迹显著减弱至最低,F组印迹灰度回归至再灌注6~12h水平。A组灰质中部体积较小中间神经元胞浆见轻度免疫反应;B组灰质各部位神经元胞浆免疫反应程度与A组相当;C组胶质细胞核免疫反应加重;D组神经元免疫反应减轻,但胶质细胞及雪旺细胞核免疫反应较强烈;E组神经元免疫反应进一步减弱,低于A组水平;F组神经元胞浆免疫反应加重,胶质细胞及雪旺细胞核免疫反应仍强烈。结论:HSC70参与SCIRI发生和发展过程,可作为SCIRI预防、诊断和治疗的靶点。     

热休克蛋白70对肾脏缺血预处理保护作用的研究

目的 :研究缺血预处理对肾脏缺血再灌注损伤的保护作用 ,观察热休克蛋白 70 (HSP70 )的表达变化并探讨其作用机制。方法 :建立大鼠肾脏缺血再灌注损伤模型并进行缺血预处理 ,实验分组 :假手术组 (S组 )、缺血再灌注组 (IR组 )和缺血预处理组 (PC组 )。各组再灌注后检测血清肌酐 (Scr)、肾组织丙二醛 (MDA)含量 ,肾组织石蜡切片苏木精伊红染色以及免疫组化染色。结果 :PC组Scr值、肾小管病理评分、肾组织中MDA含量明显低于IR组 (P <0 .0 5 ) ,PC组与S组比较差异无显著性意义 (P >0 .0 5 ) ;HSP70免疫组化染色 :S组未见明显的阳性反应产物 ,PC组和IR组肾小管上皮细胞胞质可见棕黄色阳性反应产物。计算机图像分析显示PC组灰度值显著高于IR组 (P <0 .0 1)。结论 :缺血预处理对肾脏缺血再灌注损伤有明显保护作用 ,其作用机制可能与HSP70本身的细胞保护作用及HSP70的细胞内抗氧化作用有关     

热休克蛋白70表达对未成熟心肌和心肌间质的保护作用

目的 观察热休克蛋白70(HSP70)对未成熟心肌和心肌间质的保护作用.方法 健康新生长耳大白兔30只随机分为5组.对照组:腹腔注射生理盐水0.4 ml 24 h后取离体心脏,建立Langendorff离体心脏灌注模型;E4h、E12h、E24h、E48h组,腹腔注射去甲肾上腺素,4、12、24、48 h后分别取离体心脏,方法同对照组.测定心肌细胞中HSPT0含量、血流动力学指标、心肌含水量(MWC)、心肌肌酸激酶(CK)和乳酸脱氢酶(LDH)漏出率、三磷酸腺苷(ATP)含量、超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)含量、心肌组织羟脯氨酸(HP)含量、内皮素(ET)含量、心肌细胞内Ca2+含量、心肌线粒体Ca2+-ATPase活性及其Ca2+含量、心肌线粒体合成ATP能力[ATP]m,心肌超微结构.结果 E24h组与其他各组比较,HSPT0含量明显增高(P＜0.01),MWC(72.48±1.36)低于其他各组(P＜0.05),ATP含量(11.64±1.87)、SOD活性(235.83±12.30)、心肌线粒体Ca2+-AT-Pase活性(18.46±1.95)、[ATP]m(106.26±9.42),HP含量(6.45±1.53)优于其他各组(P＜0.01),MDA含量(1.17±0.12)、CK(57.38±4.75),LDH漏出率(37.28±3.26)、心肌细胞内Ca2+含量(2.54±0.34)、心肌线粒体Ca2+含量(38.37±3.61)、ET含量(76.84±10.37)低于其他各组(P＜0.01),心肌超微结构损伤较其他各组明显减轻.结论 腹腔注射去甲肾上腺素24 h后可诱导未成熟心肌HSP70高表达,一定量的HSP70表达可明显减轻未成熟心肌和心肌间质的缺血再灌注损伤.     

异氟醚预处理对大鼠肝脏缺血再灌注损伤的影响

目的 探讨异氟醚预处理对大鼠肝脏缺血再灌注损伤的影响.方法 成年雄性SD大鼠24只,体重180～220 g,随机分为3组(n=8):假手术组(S组)吸人纯氧30 min,间隔30 min后仅开腹;肝脏缺血再灌注组(IR组)吸入纯氧30 min,间隔30 min后行肝脏缺血60 min,再灌注4 h;异氟醚预处理组(Iso组)吸入1.4%异氟醚30 min,间隔30 min后行肝脏缺血60 min,再灌注4 h.于再灌注4 h时处死大鼠,留取肝脏及腹主动脉血5ml.测定血清谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)浓度,血清及肝组织匀浆上清液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)的浓度,肝组织髓过氧化物酶(MPO)、超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量,观察肝组织病理学改变.结果 与S组比较,IR组、Iso组血清ALT、AST和TNF-α水平明显升高,肝组织TNF-α含量升高,肝组织MPO活性升高,MDA含量升高,SOD活性降低(P＜0.05或0.01),肝组织病理损伤明显;与IR组比较,Iso组血清ALT、AST和TNF-α水平降低,肝组织TNF-α含量降低,肝组织MPO活性降低,MDA含量降低,SOD活性升高(P＜0.05或0.01),肝组织病理损伤程度减轻.结论 1.4%异氟醚预处理可明显减轻大鼠肝脏缺血再灌注损伤,其机制可能与抑制TNF-α的释放、减少中性粒细胞在肝组织的浸润有关.     

热休克蛋白70对急性胰腺炎时TNF、IL-8的影响

目的 探讨热休克蛋白70(Hsp70)对急性胰腺炎时TNF、IL-8的影响。方法 温生理盐水(42℃)持续灌洗大鼠腹腔30min,10 h后诱导大鼠急性胰腺炎(AP),术后2、6 h检测血清淀粉酶、TNF、IL-8水平,观察病理改变。结果 与正常AP组相比,42℃生理盐水腹腔持续灌洗预处理能明显降低AP术后2 h时的淀粉酶水平、病理评分和6 h的淀粉酶、病理评分、TNF和IL-8水平(P<0.05)。结论 42℃生理盐水腹腔持续灌洗能诱导大鼠胰腺表达Hsp70,诱导表达的Hsp70能减轻AP时的胰腺局部损伤和全身炎症反应。     

丙氨酰一谷氨酰胺二肽诱导热休克蛋白70对大鼠梗阻性肾病肾间质纤维化的影响

目的探讨丙氨酰一谷氨酰胺二肽（Ala—Gin）诱导热休克蛋白70（HSP70）对大鼠梗阻性肾病模型（UUO）肾间质纤维化的影响及机制。方法20只Wistar大鼠随机分成4组：假手术组、UUO模型组、GLN治疗组和QUE组,每组5只。从建立UUO模型前1d开始,GLN治疗组和QUE组分别按剂量1．125s／ks给予Ala—Gln溶液（Ala—Gln＋0．9％NaCl液配成浓度为3％的溶液）腹腔注射,假手术组和UUO模型给予相应剂量0．9％NaCl液腹腔注射,QUE组提前6h腹腔注射给予栎黄皮桐（quercetin）一种热休克蛋白阻滞剂,剂量4（10rag／ks,每天1次。术后第7天处死大鼠。常规HE染色及Masson染色观察肾间质纤维化情况。Western印迹检测肾脏HSP70的表达水平。免疫组织化学染色检测肾脏NF—Kb、a—SMA的表达水平。结果GLN治疗组Ala—Gin能诱导大鼠肾脏特异性高表达热休克蛋白70（HSP70）,其他3组大鼠肾脏HSP70均呈低表达。与UUO模型组、QUE组相比,GLN治疗组肾脏NF—KB、a—SMA的表达水平明显降低,肾小管损伤和肾间质纤维化的程度明显减轻[。肾小管损害百分比（26．2％±1．6％比78．4％±3．5％、80．2％±3-3％）和。肾间质损害分值（1．32±0．08、3．67±0．22、3．70±0．20）,P〈0．05]。结论Ala—Gln可通过诱导HSP70高表达,延缓大鼠梗阻性。肾病肾间质纤维化的进程,其机制可能与HSP70下调NF—KB及d—SMA表达,抑制肾小管上皮细胞一间充质转分化（EMT）有关。     

他克莫司对大鼠急性脊髓损伤后细胞凋亡及热休克蛋白70表达的影响

目的探讨脊髓损伤后他克莫司（FK506）对热休克蛋白70表达的影响及其与神经细胞凋亡的关系。方法采用Allen法建立大鼠急性脊髓损伤模型。雄性Wistar大鼠72只,随机分为假手术组（n=12）、损伤组（n=30）和FK506组（n=30）。FK506组伤后5min一次性经尾静脉注射FK506（0．3mg／kg）,假手术组和损伤组以相同方法给予0．9％的生理盐水。术后行脊髓功能评分;逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）检测热休克蛋白70mRNA的表达;免疫组织化学染色检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3和热休克蛋白70的表达;原位末端标记法（TUNEL）检测神经细胞凋亡。结果热休克蛋白70mRNA和蛋白的表达在FK506组较损伤组明显增加（P〈0．05）,分别于伤后6、24h达高峰;FK506组半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3的表达和神经细胞凋亡均较损伤组明显减少（P〈0．01,P〈0．05）;脊髓功能评分在FK506组显著优于损伤组（P〈0．05）。结论FK506能抑制脊髓损伤后半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3的活性,减轻神经细胞凋亡,促进脊髓功能恢复,其机制可能与诱导热休克蛋白70表达增加有关。     

缺血预处理对鼠肺缺血再灌注损伤的保护作用及其机制

目的探讨缺血预处理（IP）对肺脏缺血再灌注损伤（IRI）的保护机制。方法30只SD大鼠，随机分为预处理组（I组）、对照组（C组）和假手术组（S组），每组10只。I组和C组大鼠常规开胸后建立左上肺缺血再灌注模型，均遭受了IRI，但I组在缺血再灌注前给予IP干预，对以上样本的总蛋白质进行二维凝胶电泳分离，差异表达的蛋白质点进行基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱分析鉴定。S组大鼠开胸后不予特殊处理。免疫印迹法比较三组样本中热休克蛋白27（HSP27）的表达差异。结果建立了分辨率较高、重复性较好的鼠肺IRI双向凝胶电泳参考图谱，45个蛋白质点表达存在差异，其中30个得到了鉴定，HSP27在IP的第一窗口期表达上调。结论HSP27在IP对肺脏IRI的保护机制中起重要作用。