人参皂苷Rg_1基于SIRT6/NF-κB信号通路对辐射致造血干/祖细胞衰老的保护作用

目的探讨去乙酰化酶SIRT6/核转录因子-κB(NF-κB)信号通路在人参皂苷Rg_1抗辐射致造血干/祖细胞(Sca-1+HSC/HPC)衰老中的作用。方法 C57BL/6小鼠随机分为对照组、模型组和人参皂苷Rg_1组。给予模型组和人参皂苷Rg_1组小鼠全身一次性6.5 Gy ~(60)Coγ线照射,人参皂苷Rg_1组于照射前ip人参皂苷Rg_1 20 mg/kg,每天1次,连续给药7 d,照射后继续ip等剂量人参皂苷Rg_1 7 d。给药结束后第2天,外周血血象指标检测确定人参皂苷Rg_1促进造血恢复情况;免疫磁性分选法分离纯化各组Sca-1+HSC/HPC,造血祖细胞混合性集落(CFU-Mix)培养、细胞周期分析和衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色分析人参皂苷Rg_1抗辐射损伤致Sca-1+HSC/HPC衰老的生物学作用;荧光定量PCR及Western blotting法检测衰老调控分子SIRT6、NF-κB mRNA及蛋白的表达。结果辐射后,与对照组相比,模型组小鼠外周血象恢复缓慢,Sca-1+HSC/HPC出现细胞衰老特征,G0/G1期细胞比例及SA-β-Gal染色阳性率增高,CFU-Mix数量下降,SIRT6 mRNA及蛋白表达下调,NF-κB mRNA及蛋白表达上调。与模型组比较,人参皂苷Rg_1组小鼠白细胞(WBC)、红细胞(RBC)、血小板(PLT)数量增高,Sca-1+HSC/HPC G_0/G_1期细胞比例及SA-β-Gal染色阳性率下降,CFU-Mix数量升高,SIRT6 mRNA及蛋白表达上调,NF-κB mRNA及蛋白表达下调。结论人参皂苷Rg_1可通过调控SIRT6/NF-κB信号通路发挥抗辐射致Sca-1+HSC/HPC衰老的作用。     

SIRT6/NF-κB信号轴在人参皂苷Rg1延缓造血干/祖细胞衰老中的作用

目的:探讨SIRT6/NF-κB信号轴在人参皂苷Rg1延缓造血干/祖细胞衰老中的作用,为寻找延缓HSC/HPC衰老途径提供理论和实验依据。方法:免疫磁性分选法分离纯化Sca-1+HSC/HPC后分为:正常对照组、衰老组、阳性对照组、Rg1延缓衰老组、Rg1治疗衰老组。衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)细胞化学染色、流式细胞术分析细胞周期和造血祖细胞混合集落(CFU-Mix)培养确定Rg1延缓或治疗Sca-1+HSC/HPC衰老生物学作用。荧光定量PCR及Western blotting检测衰老调控分子SIRT6,NF-κB mRNA及蛋白的表达。结果:与衰老组相比,Rg1延缓及治疗衰老组SA-β-gal染色阳性细胞百分比降低,G1期细胞比例下降,生成CFU-Mix数量增加,SIRT6 mRNA及蛋白表达上调,NF-κB mRNA及蛋白表达下调;Rg1延缓衰老组各指标变化均较Rg1治疗衰老组明显。结论:Rg1可能通过调控SIRT6-NF-κB信号通路发挥其对抗t-BHP诱导的Sca-1+HSC/HPC衰老的作用。     

人参皂苷Rg1延缓造血干细胞衰老过程中端粒长度和端粒酶活性的变化

目的:探讨端粒长度和端粒酶活性在人参皂苷Rg1延缓造血干细胞(HSC)衰老中的作用.方法:免疫磁性分选法分离纯化小鼠Sca-1+ HSC后分5组:对照组,衰老模型组,Rg1组,Rg1治疗衰老组,Rg1延缓衰老组.衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色、流式细胞术细胞周期测定和造血祖细胞混合集落(CFU-Mix)培养分析Rg1调控Sca-1+ HSC衰老的生物学作用;Southern blotting与TRAP-PCR SYBR Green法检测端粒长度和端粒酶活性.结果:与衰老模型组相比,Rg1治疗组和Rg1延缓衰老组Sca-1+ HSC的SA-β-Gal染色阳性细胞百分比降低,G1期细胞比例下降,生成CFU-Mix数相对增加,端粒长度缩短明显减少,端粒酶活性增强;Rg1延缓衰老组各检测指标变化均较Rg1治疗组明显.结论:Rg1可能通过激活端粒酶活性和减少端粒长度缩短发挥延缓和治疗Sca-1+ HSC衰老的作用.     

人参皂苷Rg1在造血干/祖细胞连续移植中对抗细胞衰老的作用研究

目的:探讨人参皂苷Rg₁在造血干/祖细胞(HSC/HPC)连续移植中对抗细胞衰老的作用。方法:免疫磁性分选法分离纯化的雄性供体小鼠Sca-1⁺HSC/HPC连续移植3代构建HSC/HPC衰老体内模型。⁶⁰Coγ射线致死剂量辐射雌性受体鼠后分4组:对照组、衰老模型组、Rg₁治疗衰老组、Rg₁延缓衰老组。荧光定量PCR检测受体鼠骨髓细胞Y染色体(Sry基因)表达,确定受体鼠重建造血细胞来源;观察受体鼠存活时间及外周血血象指标的恢复,确定受体鼠造血功能重建情况及Rg₁促进造血恢复情况;造血祖细胞混合性集落(CFU-Mix)培养,细胞周期分析和衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色分析Sca-1⁺HSC/HPC衰老的生物学特点及Rg₁体内调控Sca-1⁺HSC/HPC衰老的作用。结果:雌性受体鼠重建造血细胞来源于雄性供体鼠;连续移植后受体鼠30 d存活率明显降低,外周血象恢复延缓,Sca-1⁺HSC/HPC出现细胞衰老特征:G₀/G₁期细胞比例及SA-β-Gal染色阳性率增高,CFU-Mix数量下降。与同代衰老模型组相比,Rg₁治疗衰老组及Rg₁延缓衰老组受体鼠30 d存活率,WBC,HCT,PLT增高,Sca-1HSC/HPC G₀/G₁期细胞比例、SA-β-Gal染色阳性率下降,CFU-Mix数量升高。Rg₁延缓衰老组变化较Rg₁治疗衰老组明显。结论:人参皂苷Rg₁在HSC/HPC连续移植过程中具有延缓和治疗Sca-1⁺HSC/HPC衰老的作用。Rg₁延缓衰老作用优于Rg₁治疗衰老作用。     

人参皂苷Rg1延缓造血干细胞衰老与 p16INK4a表达关系的研究

目的:探讨人参皂苷单体Rg1延缓造血干细胞(HSC)衰老与p16INK4a的表达调控关系,为寻找延缓HSC衰老途径提供理论和实验依据.方法:免疫磁性分选法分离纯化Sca-1+HSC后分组.对照组常规培养;衰老组运用三丁基过氧化氢(t-BHP)复制衰老模型;Rg1组在对照组基础上加入10μmol·L-1Rg1共培养;Rg1延缓衰老组给予10μmol·L-1Rg1预处理后,复制衰老模型;Rg1治疗衰老组,衰老模型复制后,给予10μmol·L-1Rg1抗衰老处理.衰老相关β半乳糖苷酶(SA-β-gal)细胞化学染色、流式细胞术分析细胞周期和造血祖细胞混合集落(CFU-Mix)培养确定Rg1延缓或治疗Sca-1+HSC衰老生物学作用.RT-PCR及Western blotting检测衰老相关基因pl6INK4amRNA及蛋白的表达.结果:Rg1延缓衰老组,Rg1治疗衰老组与衰老组相比,SA-β-gal染色阳性细胞百分比降低,G1期细胞比例下降,生成造血祖细胞混合集落数增加,p16INK4amRNA及蛋白的表达下降;Rg1延缓衰老组的SA-β-gal染色阳性细胞百分比、G1期比例、pl6INK4amRNA及蛋白的表达均低于Rg1治疗衰老组,形成造血祖细胞混合集落数高于Rg1治疗衰老组.结论:Rg1具有延缓和治疗Sca-1+HSC衰老的作用,Rg1延缓衰老比治疗衰老效果更好.Rg1可能通过调控p16INK4a的表达发挥其对抗t-BHP诱导的Sca-1+HSC衰老的作用.     

人参皂苷Rg_1对D-半乳糖所致衰老小鼠海马的保护机制

目的探讨人参皂苷Rg_1对D-半乳糖(D-gal)所致衰老小鼠海马的保护机制。方法 6~8周龄雄性C57BL/6J巢蛋白(Nestin)-绿色荧光蛋白(GFP)转基因小鼠随机分为4组,每组10只,分别为对照组、人参皂苷Rg_1对照组、人参皂苷Rg_1治疗组、模型组。衰老模型建立与给药完成后第2天,水迷宫实验检测小鼠空间学习记忆能力;取小鼠海马制备冷冻组织切片,观察海马区神经干细胞Nestin荧光强度;衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-gal)染色法检测海马细胞衰老;酶标比色法检测海马组织匀浆中超氧化物歧化酶(SOD)活性、总抗氧化能力(T-AOC)和丙二醛(MDA)的量;ELISA检测海马组织匀浆中白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-6与肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的量;蛋白印迹法检测海马组织中p53、p21蛋白表达。结果与模型组比较,人参皂苷Rg_1对照组和人参皂苷Rg_1治疗组小鼠空间学习记忆能力明显增强;海马齿状回(DG区)Nestin荧光强度增高;海马齿状回(CA3区)SA-β-gal染色阳性细胞百分比显著降低;海马组织匀浆中SOD活性与T-AOC显著增加、MDA量下降;IL-1β、IL-6和TNF-α量减少;p53、p21蛋白表达降低。结论人参皂苷Rg_1具有拮抗D-gal所致衰老小鼠海马损伤和延缓海马衰老的作用,其机制可能与抑制氧化应激及下调其下游p53-p21信号通路有关。     

人参皂苷Rg1在造血干/祖细胞连续移植中抗细胞衰老的作用机制

目的 探讨人参皂苷Rg₁在造血干/祖细胞（HSC/HPC）连续移植中抗细胞衰老的作用机制。方法 免疫磁性分选法分离纯化的雄性供体小鼠Sca-1⁺HSC/HPC连续移植3代构建HSC/HPC衰老体内模型。经⁶⁰Co γ射线致死剂量辐射的雌性受体小鼠分成4组：对照组、模型组、人参皂苷Rg₁（20 mg/kg）治疗给药组、人参皂苷Rg₁（20 mg/kg）预防给药组,每天给药1次,连续给药30 d。荧光定量PCR法检测各组小鼠Sca-1⁺HSC/HPC p16^INK4a、p19^Arf、p53、p21^Cip1/Waf1基因的表达,Western blotting法检测p16^INK4a、p21^Cip1/Waf1、CDK4、CDK2、CyclinD1、Cyclin E蛋白的表达。结果 与模型组比较,各代移植Sca-1⁺HSC/HPC雌性小鼠中,人参皂苷Rg₁治疗给药组及预防给药组小鼠Sca-1⁺HSC/HPC p16^INK4a、p19^Arf、p53、p21^Cip1/Waf1基因及p16^INK4a、p21^Cip1/Waf1、CyclinD1蛋白表达下调;CDK4、CDK2、CyclinE蛋白表达上调。人参皂苷Rg₁预防给药组小鼠各项检测指标的改善均优于其治疗给药组。结论 人参皂苷Rg₁可能通过调控p16^INK4a-Rb和p19^Arf-p53-p21^Cip1/Waf1信号转导通路,对Sca-1⁺HSC/HPC连续移植衰老模型发挥拮抗作用。     

人参皂苷Rb_1通过Caveolin-1/eNOS/NO通路抗人脐静脉内皮细胞衰老

目的:观察人参皂苷Rb_1延缓人脐静脉内皮细胞(HUVECs)复制性衰老的作用,并探讨Caveolin-1/eNOS/NO通路在其中的作用。方法:建立HUVECs复制性衰老模型,根据细胞形态的变化、衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色阳性率和纤溶酶原激活物抑制剂1(PAI-1)的表达水平评估HUVECs衰老;使用不同浓度人参皂苷Rb_1处理衰老细胞后,观察衰老指标SA-β-Gal染色和PAI-1蛋白变化;采用Western blot方法检测各组细胞Caveolin-1、eNOS蛋白的表达;最后使用RNA干扰技术抑制Caveolin-1表达后,检测各组细胞Caveolin-1、eNOS、PAI-1 mRNA和蛋白表达及细胞上清中NO的含量。结果:累计细胞群体倍增殖(CPDL)16的HUVECs可作为复制性衰老模型。与模型组比较,80μmol/L的人参皂苷Rb_1能显著降低SA-β-Gal染色阳性细胞数及PAI-1、Caveolin-1蛋白表达,升高eNOS蛋白表达(P0.05);使用siRNA抑制Caveolin-1表达后,人参皂苷Rb_1对Caveolin-1作用减弱,但其对eNOS mRNA和蛋白表达无明显影响(P0.05),NO含量显著升高,PAI-1 mRNA和蛋白表达显著降低(P0.05)。结论:人参皂苷Rb_1可延缓人脐静脉内皮细胞复制性衰老,其机制可能与调控Caveolin-1/eNOS/NO通路有关。     

人参皂苷Rg1延缓脑衰老机制研究

神经系统退行性疾病是老年患者的常见病和多发病。前期研究发现人参皂苷Rg1有明显延缓脑衰老作用,但作用机制并不完全清楚。为研究人参皂苷Rg1抗脑衰老的可能机制,40只雄性SD大鼠随机分为正常组、Rg1正常组、脑衰老模型组、Rg1脑衰老模型组,每组10只(脑衰老模型组:大鼠皮下连续42 d注射D-半乳糖(120 mg·kg-1),qd。Rg1脑衰老模型组:在脑衰老模型复制同时,16 d起开始腹腔注射人参皂苷Rg1(20 mg·kg-1)27 d,qd。Rg1正常组:大鼠皮下注射等量生理盐水,16 d起开始腹腔注射人参皂苷Rg1(20 mg·kg-1)27 d,qd。正常组:注射等时与等量生理盐水。模型复制结束或药物注射完成第2天进行相关实验。通过水迷宫实验、β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色实验、ELISA实验、酶标比色法实验、Southern blotting和PCR-ELISA实验检测各组大鼠的空间记忆能力、脑衰老情况、海马区IL-1和IL-6炎症因子变化、海马区抗氧化指标SOD和GSH变化以及海马区端粒长度和端粒酶活性变化。结果脑衰老模型组大鼠空间记忆能力减退,脑组织切片显示SA-β-Gal染色阳性颗粒增多,海马区SOD活性降低,GSH含量减少,IL-1,IL-6含量增多,端粒长度缩短,端粒酶活性降低。Rg1脑衰老模型组大鼠空间记忆能力有明显改善,SA-β-Gal染色蓝色颗粒减少,海马区SOD活性增高,GSH含量增多,IL-1,IL-6含量减少,端粒长度缩短受到阻止,端粒酶活性增高。Rg1正常组大鼠与正常组大鼠相比空间记忆能力增强,SA-β-Gal染色蓝色颗粒减少,海马区IL-1,IL-6含量减少。结果表明人参皂苷Rg1可能通过调节端粒系统、炎症因子水平和抗氧化作用发挥延缓脑衰老作用。     

人参皂苷Rg1调节沉默信息调节因子1对抗晶状体上皮细胞衰老的影响

目的:观察人参皂苷Rb1是否通过调节沉默信息调节因子1(SIRT1)表达抗晶状体上皮细胞衰老。方法:构建晶状体上皮细胞株SRA01/04衰老模型,加入人参皂苷Rb1培养后通过PCR检测SIRT1的表达改变,通过β-半乳糖苷酶染色检测衰老情况。敲降正常晶状体上皮细胞株SRA01/04中SIRT1的表达后检测衰老情况,再次加入人参皂苷Rb1后通过PCR和免疫荧光观察上述指标有无改变。结果:60μmol/L人参皂苷Rb1处理衰老SRA01/04细胞内SIRT1表达增加,差异有统计学意义(P0.05);SIRT1沉默后,SRA01/04细胞衰老程度明显增加,差异有统计学意义(P0.05);与SIRT1沉默组比较,SIRT1沉默同时加入人参皂苷Rb1后,SIRT1有所上升。结论:人参皂苷Rb1可以通过调节SIRT1表达抗晶状体上皮细胞衰老。     

当归多糖对衰老模型小鼠造血干细胞Wnt/β-catenin信号通路的影响

目的探讨当归多糖(ASP)对衰老小鼠造血十细胞(HSCs) Wnt/β-catenin信号通路的影响。方法 6~8周雄性C57BL/6J小鼠30只,随机分为对照组、模型组和ASP组,每组10只。小鼠scD-半乳糖(D-Gal,120 mg/kg),每天1次,连续42 d,复制衰老小鼠模型;ASP(200 mg/kg)组ip给药,连续35 d。给药结束后第2天,免疫磁珠分离HSCs,衰老β半乳糖昔酶(SA-β-Gal)染色观察衰老HSCs百分率;造血祖细胞混介集落(CFU-Mix)培养检测HSCs形成集落能力;流式细胞术和激光共聚焦检测HSCs中活性氧(ROS)水平;Western blotting检测HSCs胞质β-catenin、胞核β-catenin. GSK-3β、Phospho-GSK-邓和TCF-4蛋自表达。结果与对照组比较,模型组HSCs的SA-β-Gal染色阳性百分率和ROS水平显著增加;胞质β-catenin、胞核p-catenin、Phospho-GSK-3β和TCF-4蛋自表达上调;CFU-Mix形成能力降低;GSK-3β蛋自表达下调。与模型组比较,ASP能显著降低衰老HSCs的SA-β-Gal染色阳性百分率和ROS水平;下调胞质β-catenin、胞核β-catenin、Phospho-GSK-邓和TCF-4蛋自表达;提高CFU-Mix形成能力;上调GSK-邓蛋自表达。结论 ASP能延缓或拮抗D-Gal致小鼠HSCs衰老,其机制可能与 ASP抑制Wnt/β-catenin信号通路过度激活有关。     

SIRT1在人参皂苷Rg_1延缓D-gal诱导的卵巢早衰小鼠模型卵巢早衰中的作用

探索沉默信息调节因子2相关酶1(slient mating type information regulation 2 homolog 1,SIRT1)在人参皂苷Rg_1(ginsenoside Rg_1,Rg_1)延缓D-半乳糖(D-galactose,D-gal)诱导的卵巢早衰小鼠模型卵巢早衰中的作用。将SPF级雌性BALB/c小鼠54只随机分成PBS组、D-gal组、Rg_1组。D-gal组给予颈背部皮下注射D-半乳糖200 mg·kg~(-1)·d~(-1),连续给药42 d;PBS组给予颈背部注射等时等量磷酸盐缓冲液(phosphate buffered saline,PBS),连续注射42 d;Rg_1组在D-gal组处理基础上,于第15天开始给予腹腔注射Rg_1 20 mg·kg~(-1)·d~(-1),连续给药28 d,同时D-gal组和PBS组也在第15天开始给予腹腔注射等时等量PBS,连续给药28 d;给药后,检测小鼠体质量变化和卵巢质量系数改变,检测外周血雌二醇(estradiol 2,E_2)、黄体生成素(luteinizing hormone,LH)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、过氧化氢酶(catalase,CAT)、卵泡刺激素(follicle-stimulating hormone,FSH)水平,HE染色法检测卵巢形态学改变,荧光定量PCR和Western blot法检测衰老调控因子SIRT1表达的改变。结果显示,与PBS组比较,D-gal组小鼠体质量增长率明显减缓,卵巢质量系数下降;血清E_2,LH,SOD,CAT水平明显降低,FSH水平明显升高。Rg_1作用后,Rg_1组体质量增长率,卵巢质量系数以及血清E_2,LH,SOD,CAT水平均高于D-gal组,FSH水平低于D-gal组。HE染色检测显示PBS组卵巢卵泡形态结构正常;D-gal组卵泡数量减少,黄体空泡化明显,闭锁卵泡数量增多;与D-gal组比较,Rg_1组卵泡数量增多,黄体数量减少。与PBS组比较,D-gal组SIRT1表达下调;与D-gal组比较,Rg_1组SIRT1表达上调。研究结果提示,Rg_1具有延缓D-gal诱导的卵巢早衰小鼠模型中卵巢早衰的作用,衰老调控因子SIRT1在其中发挥重要功能。     

人参皂苷Rg_1对糖尿病大鼠勃起功能障碍的影响

目的探讨人参皂苷Rg_1对糖尿病大鼠勃起功能障碍的影响。方法大鼠腹腔注射链脲佐菌素诱导糖尿病,10周后阿扑吗啡筛选勃起功能障碍模型,随机分为正常组、模型组、人参皂苷Rg_1低剂量组(15 mg/kg)和高剂量组(30 mg/kg)、西地那非组(5 mg/kg)。给药4周后,测定阴茎海绵体内压和平均颈动脉压,ELISA检测SOD、MDA、NO水平,qPCR及Western blot测定SIRT1、eNOS表达,免疫组化观察eNOS在阴茎组织切片中的阳性表达。结果与模型组比较,人参皂苷Rg_1高剂量组大鼠勃起功能明显改善,ICP/MAP值显著升高(P0.01),与西地那非组相当;人参皂苷Rg_1高剂量组能显著提高SIRT1、eNOS mRNA及蛋白表达,并能显著减少MDA含量,显著提高SOD活性、NO含量(P0.05,P0.01)。免疫组化显示,eNOS阳性细胞主要分布于血管内皮细胞。结论人参皂苷Rg_1可有效改善糖尿病勃起功能障碍大鼠勃起功能,其机制可能是减轻氧化应激损伤,并上调SIRT1/eNOS信号通路。     

人参皂苷Rg1对非酒精性脂肪肝HepG2细胞脂质摄取和氧化的影响

目的:探讨人参皂苷Rg_1改善游离脂肪酸(FFA)诱导的非酒精性脂肪肝(NAFLD)HepG2细胞脂质摄取和氧化的作用及机制。方法:将HepG2细胞分为空白组,模型组,人参皂苷Rg_1低、高剂量组(25,50μmol·L~(-1))。1 mmol·L~(-1)游离脂肪酸处理HepG2细胞24 h构建非酒精性脂肪肝细胞模型,25,50μmol·L~(-1)人参皂苷Rg_1处理24 h。细胞增殖及毒性检测-8(CCK-8)检测人参皂苷Rg_1对HepG2细胞活性的影响,微量法检测细胞内甘油三酯(TG)含量,油红O染色观察脂滴聚集情况,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)及蛋白免疫印迹法(Western blot)检测与脂质摄取和氧化相关基因与蛋白的表达情况。结果:与空白组比较,模型组细胞内TG含量及脂滴聚集吸光度显著增加(P0. 01);与模型组比较,人参皂苷Rg_1组细胞内TG含量及脂滴聚集吸光度显著降低(P0. 01)。Real-time PCR和Western blot结果均显示,与空白组比较,模型组过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ),脂肪酸结合蛋白1(FABP1),脂肪酸转运蛋白2/5(FATP2/5)和脂肪酸转运酶(CD36)mRNA和蛋白的表达明显升高(P0. 05),过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARα),肉毒碱棕榈酰基转移酶1(CPT1)和酰基辅酶A氧化酶1(ACOX1)mRNA和蛋白的表达明显降低(P0. 05);与模型组比较,人参皂苷Rg_1组PPARγ,FABP1,FATP2,FATP5和CD36mRNA和蛋白的表达明显降低(P0. 05,P0. 01),PPARα,CPT1和ACOX1 mRNA和蛋白的表达明显升高(P0. 05,P0. 01)。结论:人参皂苷Rg_1可通过降低脂质摄取和增强脂质氧化减少NAFLD细胞模型脂质蓄积。     

人参皂苷Rg1 通过PI3K/Akt/eNOS信号通路调控异丙肾上腺素致急性心肌缺血大鼠心肌的抗氧化作用

目的:观察人参皂苷Rg_1预处理对异丙肾上腺素致急性心肌缺血大鼠心肌磷酸肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(PKB/Akt)通路的影响。方法:采用异丙肾上腺素建立SD大鼠急性心肌缺血模型,将50只大鼠随机分为正常组,模型组,葛根素组,人参皂苷Rg_1高、低剂量组(20,10 mg·kg~(-1));Moor激光血流成像系统观测各组大鼠心脏表面血流值;酶联免疫吸附测定(ELISA)法测定各组大鼠血清中肌酸激酶(CK),乳酸脱氢酶(LDH),一氧化氮(NO)的水平以及心肌中超氧化物歧化酶(SOD),丙二醛(MDA),谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的水平;实时荧光定量-聚合酶链式反应(Real-time PCR)法检测各组大鼠心肌内皮型一氧化氮合酶(eNOS)mRNA的表达变化;蛋白质免疫印迹(Western blot)方法检测各组大鼠心肌PI3K,Akt,p-Akt蛋白的表达变化。结果:与正常组比较,模型组大鼠心脏表面平均血流量明显下降,血清NO降低,CK,LDH升高;心肌MDA含量升高,GSH-Px含量下降,eNOS mRNA含量显著降低,PI3K/Akt通路蛋白的表达有所降低(P0.05,P0.01);与模型组比较,人参皂苷Rg_1高、低剂量组,心肌表面平均血流有显著提升,血清NO升高,CK,LDH降低,心肌MDA含量降低,GSH-Px含量升高,eNOS mRNA表达含量升高,PI3K/Akt通路蛋白的表达有所升高(P0.05,P0.01)。结论:人参皂苷Rg_1可以通过调控PI3K-Akt-eNOS信号通路改善急性心肌缺血大鼠心脏变化防治心血管病变。     

人参皂苷Rg1对腹主动脉缩窄致大鼠心肌肥厚和TLR4的影响

目的:探讨人参皂苷Rg1对腹主动脉缩窄(AAC)致心肌肥厚的抑制作用及其机制。方法:大鼠采用腹主动脉结扎的方法制备AAC模型,1周后ig给予大鼠人参皂苷Rg1 4,2,1 mg/kg,每天1次,共11周。计算心脏质量指数(HMI)和左心室质量指数(LVMI);测定左心室收缩压(LVSP)、左心室舒张末压(LVEDP)和左心室内压最大升降速率(±dp/dt max),HE染色观察大鼠左室心肌形态学改变;采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定心肌ANP和TLR4 mRNA表达;采用Western blot测定p65和IκBα的蛋白表达,采用ELISA测定血清中TNF-α和IL-1β的表达。结果:与假手术组相比,AAC模型组的大鼠IκBα明显降低,其他指标均显著增高。与模型组相比,人参皂苷Rg1 4 mg/kg组HMI,LVMI,LVSP,LVEDP和±dp/dt max均显著降低(P<0.05);人参皂苷Rg1 4,2 mg/kg组ANP mRNA,TLR4 mRNA,p65蛋白表达,血清中TNF-α和IL-1β表达明显下降(P<0.05),IκBα蛋白表达明显升高(P<0.05)。结论:人参皂苷Rg1能够有效抑制AAC大鼠心肌肥厚并改善炎症反应,其机制可能与抑制TLR4/NF-κB信号通路表达有关。     

基于microRNA-34a/SIRT1/p53通路探讨三七皂苷R_1对血管内皮细胞衰老的影响

该研究旨在探讨三七皂苷R_1能否通过调控miRNA-34a/SIRT1/p53通路发挥延缓H_2O_2诱导的血管内皮细胞衰老的作用。以人脐静脉内皮细胞(HUVEC)作为研究对象,建立H_2O_2诱导的衰老模型,以白藜芦醇作为阳性对照药,实验分为青年组、H_2O_2模型组、三七皂苷R1组、白藜芦醇组。药物组提前加入三七皂苷R1(30μmo L·L~(-1))或白藜芦醇(10μmo L·L~(-1))干预24 h,然后用H_2O_2(100μmo L·L~(-1))造模4 h,最后换成完全培养基培养24 h。采用衰老特异性β-半乳糖苷酶(SA-β-gal)染色法鉴定细胞衰老程度,CCK-8法检测细胞增殖能力,流式细胞仪分析细胞周期,WST-1法检测细胞内超氧化物歧化酶(SOD)活力,QRT-PCR检测miRNA-34a,SIRT1和p53的核酸表达,Western-blot技术检测SIRT1,p53和衰老相关蛋白p21,p16的蛋白表达。结果发现,与模型组相比,三七皂苷R1组和白藜芦醇组可有效减低衰老内皮细胞的β-半乳糖苷酶染色阳性率,增强细胞增殖能力和SOD活力,减少G0/G1期细胞比例,增加S期细胞比例,抑制了miRNA-34a和p53的核酸表达,促进了SIRT1的核酸表达,此外抑制了p53,p21和p16的蛋白表达,促进了SIRT1的蛋白表达,差异均有统计意义(P0.05)。该研究表明,H_2O_2诱导的衰老的内皮细胞可以作为衰老研究的模型,三七皂苷R1延缓血管内皮细胞衰老的效果明显,其机制可能是通过调控miRNA-34a/SIRT1/p53通路延缓了血管内皮细胞衰老的进程。     

人参皂苷Rg3对DSS诱导的溃疡性结肠炎小鼠Th1/Th2失衡的影响

目的:观察人参皂苷Rg3对葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的溃疡性结肠炎(UC)小鼠Th1/Th2失衡的影响。方法:将C57BL/6小鼠随机分为正常组、模型组、柳氮磺胺吡啶(SASP)200mg/kg组、人参皂苷Rg3 20mg/kg、40mg/kg组。除正常对照组以外的各组小鼠自由饮用3%的DSS溶液5天,后替换为正常饮用水。正常对照组和模型组给予蒸馏水灌胃,其余各组灌胃相应药物。每天观察小鼠一般状况、体重变化。第9天处死小鼠,测量结肠长度,对结肠组织进行组织形态学分析,ELISA法测定小鼠血浆中的IL-6、TNF-α和IL-10细胞因子浓度,QRT-PCR法检测结肠组织中IL-6、TNF-α和IL-10 mRNA的表达水平,Western blot测定结肠组织中NF-κB p65和p-NF-κB p65水平。结果:人参皂苷Rg3 40mg/kg组可显著增加小鼠体重和结肠长度,降低结肠病理评分,显著减少血浆TNF-α、IL-6的浓度,显著增加血浆IL-10的浓度,降低结肠组织中IL-6 mRNA、TNF-αmRNA的水平,提高IL-10 mRNA的水平。降低结肠组织中p-NF-κB p65/NF-κB p65的水平。结论:人参皂苷Rg3对DSS诱导的UC小鼠有明确的治疗作用,其机制可能是通过下调TNF-α、IL-6,上调IL-10水平,调节Th1/Th2平衡,抑制NF-κB活化,从而调节肠道免疫,促进肠道粘膜的修复。     

当归多糖抑制氧化损伤延缓造血干细胞衰老

目的:观察当归多糖(ASP)对小鼠造血干细胞(HSCs)活性氧(ROS)、总抗氧化能力(T-AOC)及p16 mRNA表达的影响,探讨ASP延缓HSCs衰老的可能机制.方法:C57BL/6J小鼠随机分为正常组、衰老组,并分别予ASP干预;衰老组采用X线3.0 Gy/8 F全身均匀照射,建立小鼠HSCs衰老模型;正常、衰老ASP干预组在建模期间均予ASP灌胃;而正常组、衰老组予等体积NS灌胃.免疫磁珠分离HSCs.通过β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色、细胞周期分析和混合集落培养观察HSCs生物学特性变化;流式细胞术与免疫荧光检测ROS产量;比色法检测T-AOC;荧光定量PCR检测p16 mRNA表达.结果:与正常组比较,3.0 Gy/8 F的X线能显著增加衰老组HSCs SA-β-Gal染色阳性率和G1期比例;增加ROS产量,上调p16 mRNA表达;混合集落形成能力和T-AOC下降.与衰老组比较,ASP能显著降低衰老组HSCs的SA-β-Gal染色阳性率和G1期比例,减少ROS产量,下调p16 mRNA;增加混合集落形成能力和T-AOC.结论:3.0 Cy/8 F的X线能诱导小鼠HSCs衰老;ASP则能通过抑制氧化损伤及下调p16 mRNA表达延缓小鼠HSCs衰老.     

基于HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路考察木瓜提取物对脊髓损伤大鼠的保护作用

目的:探讨木瓜醇提取物对脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)大鼠神经功能的保护作用,并初步探讨其可能机制。方法:制备SCI大鼠模型,根据处理方式分为假手术组(Sham组),模型组(SCI组),木瓜提取物治疗组(Pap组);重组高迁移率族蛋白B1(high mobility group histone B1,HMGB_1)处理组(rHMGB_1组);重组HMGB_1+木瓜提取物处理组(rHMGB_1+Pap组)。应用basso beattie bresnahan(BBB)评分评估大鼠后肢运动功能;检测脊髓组织含水量评估脊髓水肿情况;应用苏木素-伊红(HE)染色进行组织学评估;运用酶联免疫吸附检测白细胞介素-1β(interleuki-1β,IL-1β),肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α),白细胞介素-6(interleuki-6,IL-6)水平;原位末端转移酶标记法(TUNEL)检测脊髓组织细胞凋亡情况;应用免疫组织化学和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测组织中HMGB_1,Toll样受体4(Toll-like receptors 4,TLR4),核转录因子κB(nuclear factor-κB,NF-κB)p65蛋白表达情况;Western blot检测半胱氨酸蛋白酶(Caspase)-3蛋白;应用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测HMGB_1,TLR4,NF-κB p65 mRNA表达情况。结果:与Sham组比较,SCI组大鼠BBB评分明显降低(P0.05)。SCI组和rHMGB_1组脊髓组织松散,呈现嗜中性粒细胞浸润的组织学损伤;而Pap组和rHMGB_1+Pap组中组织学损伤情况得到明显改善。与Sham组比较,SCI组大鼠脊髓组织中含水量,HMGB_1,TLR4,NF-κB p65 mRNA和蛋白表达水平,IL-1β,IL-6,TNF-α水平,凋亡阳性细胞数,Caspase-3蛋白表达水平均明显增加(P0.05)。Pap组和rHMGB_1+Pap组含水量,HMGB_1,TLR4,NF-κB p65 mRNA和蛋白表达水平,IL-1β,IL-6,TNF-α水平,凋亡阳性细胞数,Caspase-3蛋白表达水平均明显低于SCI组(P0.05)。rHMGB_1+Pap组含水量,HMGB_1,TLR4,NF-κB p65 mRNA和蛋白表达水平,IL-1β,IL-6,TNF-α水平,凋亡阳性细胞数,Caspase-3蛋白表达水平明显低于rHMGB_1组,差异均有统计学意义(P0.05)。结论:木瓜提取物能够通过抑制HMGB_1/TLR4/NF-κB p65信号通路活化,减轻SCI后的炎症反应、减少脊髓组织细胞凋亡,从而诱导脊髓组织修复和运动功能恢复。