兔不同部位单核/巨噬细胞的分离、培养和鉴定

目的:建立兔不同部位单核/巨噬细胞(Mφ)的分离、培养和鉴定的方法,并在体外培养情况下研究其形态、生长特性及生理功能的差异.方法:6只健康新西兰兔以Fi-coil-Hypaque密度梯度离心法分离外周血单核细胞(MO),以灌洗法分离肺泡巨噬细胞(AM)和腹腔巨噬细胞(PM),以酶消化法十Percoll密度梯度法分离肝脏枯否氏细胞(KC).在光镜和透射电镜下观察形态学及微观结构的差异,采用墨汁吞噬试验及免疫细胞化学方法分别测定吞噬功能和表型的表达情况.结果:同一个体来源的4个部位贴壁细胞具有单核/巨噬细胞的形态学特征及免疫表型,有较强的吞噬能力,且表现出一定的差异性.墨汁吞噬功能:AM > PM,KC > Mo,MAC387表达:KC > AM > PM > Mo.结论:同一个体不同部位兔单核/巨噬细胞的功能及表型存在异质性.     

Pg-LPS对兔单核/巨噬细胞炎症因子表达的影响

目的比较Pg-LPS对新西兰兔不同部位单核/巨噬细胞炎症因子(IL-1β、IL-6、TNF-α)表达的影响。方法分离新西兰兔不同部位(血液、肺、腹腔、肝脏)的单核/巨噬细胞(Mo、AM、PM、KC),将每一个部位的细胞分别用E.coli-LPS、Pg-LPS刺激。运用RT-PCR法检测各组Mo、AM、PM、KC中IL-1β、IL-6、TNF-αmRNA的表达情况。结果各实验组的4个部位(Mo、AM、PM、KC)相比,IL-1β、IL-6、TNF-αmRNA的表达均存在部位差异(P﹤0.05)。E.coli-LPS组和Pg-LPS组IL-1β、IL-6、TNF-αmRNA的表达较对照组总体上均明显升高(P﹤0.05),并且E.coli-LPS组的升高作用强于Pg-LPS组(P﹤0.05)。结论不同部位的单核/巨噬细胞对Pg-LPS的刺激存在敏感性差异。Pg-LPS可以增强单核/巨噬细胞炎症因子基因的表达水平。     

低剂量纳曲酮对小鼠巨噬细胞的免疫调节作用及机理研究

目的:探讨纳曲酮(Naltrexone,NTX)对小鼠腹膜巨噬细胞表型,分泌细胞因子及吞噬功能的影响。方法:本实验利用新型四唑化合物比色法测得NTX 对RAW264郾7 细胞作用的最佳剂量;再将培养的腹膜巨噬细胞分为3 组,RPMI1640 空白对照组、脂多糖(LPS)阳性对照组和NTX 处理组,采用流式细胞术检测CD206、CD64 的阳性表达率及对葡聚糖的吞噬能力;ELISA 法检测白介素10(IL鄄10)、白介素6(IL-6)、白介素1茁(IL-1)、肿瘤坏死因子 (TNF )的分泌表达。结果:10-11 mol/ L 剂量可显著促进RAW264-7 细胞的增殖;NTX(10-11 mol/ L)处理可明显提高腹膜巨噬细胞表面CD64 的阳性表达,减少CD206 的表达;提高对葡聚糖的吞噬能力;TNF、IL-6、IL1的表达显著增加,IL-10 的表达无明显差异。结论:低剂量纳曲酮可改变巨噬细胞表型及功能,起免疫调节作用。     

小鼠血浆IL-1β和IL-6水平与脑不对称程度的关系

为研究血浆IL 1 β和IL 6水平与脑不对称程度的关系 ,利用伸爪取食法 ,记录反映小鼠脑不对称程度的右利分(RPE ) ,生理盐水或细菌脂多糖 (lipopolysaccharide ,LPS )刺激 4h后ELISA法检测其血浆中IL 1 β和IL 6水平。结果表明 :血浆IL 1 β水平在正常生理状况下随RPE的升高而呈抛物线样分布 ,LPS刺激 4h后血浆IL 1 β水平随RPE的升高而下降 ,呈直线负相关分布 ;IL 6水平在正常生理状况下随RPE的升高而升高 ,呈直线正相关分布 ,LPS刺激 4h后则呈直线负相关分布。由于IL 1 β和IL 6主要由单核 /巨噬细胞分泌 ,这一结果提示脑不对称小鼠单核 /巨噬细胞功能存在差异 ,脑不对称对免疫功能的影响程度与右利分有关     

源于细菌CpG基序的寡核苷酸激活单核/巨噬细胞抗白血病效应的研究

目的： 研究源于细菌CpG基序的寡核苷酸激活单核/巨噬细胞抗白血病细胞的作用。方法: 用血细胞分离机从健康人外周血分离并诱导出单核-巨噬细胞，流式细胞仪检测细胞表面CD14分子和CD16分子表达状况。设计合成含CpG基序的寡核苷酸(CpG-ODN)和不含CpG基序的寡核苷酸（nonCpG-ODN）分别作用于单核/巨噬细胞, MTT法检测经寡核苷酸作用后,单核/巨噬细胞抗白血病K562细胞的效应, 用ELISA法检测其分泌细胞因子IL-12、TNF-α的表达。结果: 从健康人外周血分离并成功诱导出单核/巨噬细胞，证实CpG-ODN作用于单核/巨噬细胞,可显著增强单核/巨噬细胞体外抗白血病细胞的作用，同时能促进单核/巨噬细胞分泌细胞因子IL-12、TNF-α。结论: 源于细菌CpG-ODN可增强单核/巨噬细胞介导的抗白血病细胞作用，此为白血病免疫治疗提供了新的途径。     

PM2.5对慢性阻塞性肺疾病患者巨噬细胞Toll样受体表达及吞噬功能的影响

目的:采用PM2.5干预慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者单核细胞来源巨噬细胞(MDM),研究PM2.5对COPD患者巨噬细胞Toll样受体(TLR)表达及吞噬功能的影响.方法:选择兰州大学第一医院COPD患者14例及健康志愿者14例,抽取肘静脉血,分离单核细胞,采用重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子诱导培养为MDM,PM...     

哮喘患儿外周血巨噬细胞M1 / M2 极化状态研究

目的:体外培养哮喘患儿外周血巨噬细胞,并从细胞的表型和功能方面观察巨噬细胞M1/ M2 极化状态的变化,从而探讨巨噬细胞在哮喘发病中的作用。方法:选取50 例健康对照者与50 例哮喘患儿,收集哮喘患儿及健康对照组的血液,分离纯化得到巨噬细胞,体外给予10 ng/ ml GM-CSF 的血清培养液培养,并在第7 天,收集细胞及上清,运用流式细胞技术检测巨噬细胞表型表达,ELISA 方法检测细胞上清IL-10、IL-12 含量变化,检测巨噬细胞吞噬外来性抗原及刺激淋巴细胞分化的能力。结果:与健康对照组相比,哮喘患儿外周血巨噬细胞表面表达的共刺激分子CD64、CD11c、CD40 明显降低,CD206、CD14 及CD23 明显升高(P 均<0.05);患儿巨噬细胞分泌的IL-10 明显降低(P<0.05),IL鄄12 与对照组相比无显著变化(P>0.05);外周血巨噬细胞吞噬能力明显降低(P<0.05);将患儿巨噬细胞与T 淋巴细胞共培养,IL-4 含量明显升高,IFN含量明显降低(P 均<0.05)。结论:相比于健康对照组,哮喘患儿外周血巨噬细胞呈现M2 型,提示巨噬细胞与哮喘疾病具有很大的相关性。     

M-CSF和IL-10对人单核细胞表面分子表达的影响

本文采用流式细胞术检测人外周血单核细胞表面CD14、CD2 3、CD6 4、CD11b、CD18、CD2 9表达 ,研究巨噬细胞集落刺激因子 (M CSF )和白细胞介素 (IL ) 10对单核细胞炎症效应和免疫效应功能的影响。结果显示 ,(1)M CSF诱导单核细胞表面CD14及CD2 3分子的表达 (P <0 0 5 )。IL 10抑制CD2 3的表达 ,促进CD6 4的表达 ,并协同M CSF诱导单核细胞CD14的表达 ,拮抗M CSF对CD2 3的诱导作用。M CSF能协同IL 10对单核细胞CD6 4的诱导作用 ;(2 )M CSF能诱导单核细胞表面CD11b及CD18的表达 (P <0 0 5 )。结论 :M CSF通过促进单核细胞表面CD11b、CD18、CD14、CD2 3的表达及协同促进CD6 4的表达而促进单核细胞粘附、炎性渗出、IgG及IgE依赖的细胞杀伤和吞噬功能 ,促进单核 巨噬细胞在炎症反应、体液免疫应答效应阶段发挥效应细胞功能。IL 10通过促进CD6 4的表达 ,增强体液免疫应答效应阶段单核 巨噬细胞的免疫效应功能 ,但通过抑制CD2 3的表达 ,下调IgE介导的体液免疫效应。     

烟雾暴露对大鼠肺泡巨噬细胞曲霉防御功能的影响

目的研究烟雾暴露对大鼠肺泡巨噬细胞(AM)曲霉防御功能的影响。方法建立烟雾暴露大鼠模型,分离肺泡巨噬细胞,并用免疫荧光法进行鉴定。加入烟曲霉孢子共培养,测定AM的吞噬率及吞噬指数;用ELISA方法检测培养上清中TNF-α和IL-1β的浓度;用免疫组化检测树突状细胞相关性C型植物血凝素-1(Dectin-1)蛋白的表达。结果烟雾暴露组AM对烟曲霉孢子的吞噬率下降(P<0.05),吞噬指数无显著变化。孢子刺激后,烟雾暴露组培养上清中TNF-α和IL-1β的浓度显著低于对照组(P<0.05)。烟雾暴露组AM中Dectin-1蛋白的表达低于对照组(P<0.05)。结论烟雾暴露使大鼠AM吞噬能力下降,对曲霉的防御功能受损,这种功能变化可能与Dectin-1蛋白表达降低有关。     

神经降压素使激活的巨噬细胞产生IL-1增加

现已确定除了细菌产物、吞噬刺激、免疫调节剂外,一些非免疫因素如神经肽类也能调节单核吞噬细胞的功能,例如神经降压素(Neurotensin,NT)能提高腹腔巨噬细胞的吞噬功能及细胞毒作用。NT 广泛存在于肺尤其是与下呼吸道血管密切相关的神经纤维内,为了更好地了解肺微环境中免疫功能的调节,本文作者研究了NT 对肺泡巨噬细胞(AM)产生IL-1活性的影响。取250—300gWistar 大鼠,通过支气管肺泡灌洗制得AM,将AM(0.5×10~6/ml)与不同的诱导剂(如LPS、MDP,酵母多糖、NT、LTB_4、IFN-γ)孵育24hr 后,经离心     

抗氧化微量营养素对1型糖尿病大鼠Th2型细胞因子IL-4、IL-10表达的影响

目的:研究抗氧化微量营养素(antioxidantmicronutrients,AM)对1型糖尿病大鼠Th2型细胞因子IL4、IL10基因表达的影响,以探索改善胰岛功能,防止糖尿病发生与发展的营养学因素。方法:应用链脲佐菌素(STZ)小剂量、多次注射法诱导大鼠1型糖尿病模型。AMSe、VE、V、Cr通过饮食方法补充。外周血、脾脏淋巴细胞IL4、IL10基因表达检测应用流式细胞术。血糖及自由基代谢通过生化分析法完成。结果:补充AM组大鼠外周血及脾组织IL4、IL10阳性淋巴细胞百分比明显高于模型对照组(P<0.05,P<0.01),其中Se+VE+V+Cr组升高更明显;糖尿病模型组IL4、IL10表达处于最低水平。补充AM各组较模型组明显增加了胰岛素分泌储备(P<0.05)。与模型组相比,AM补充各组血糖水平显著降低,GSHPx活力水平升高,MDA含量明显下降(P<0.05)。结论:AM最适剂量与组合不仅可以调节糖尿病大鼠胰岛素代谢、减轻氧化侵袭,而且通过上调IL4、IL10等Th2型细胞因子表达减轻胰岛损害。     

人参皂甙Rb1对小鼠腹腔巨噬细胞体外吞噬及细胞因子和NO分泌的影响

目的:研究人参皂甙Rb1(Ginsenoside Rb1)对小鼠腹腔巨噬细胞体外吞噬及细胞因子和一氧化氮(NO)分泌的影响。方法:分离制备小鼠腹腔巨噬细胞悬液;MTT法检测不同终浓度的人参皂甙Rb1对巨噬细胞的毒性;流式细胞术检测Rb1对巨噬细胞吞噬直径1μm微球的影响;用Griess试剂盒检测Rb1对巨噬细胞NO量的影响;使用流式液相蛋白定量检测技术Cytometric Bead Array(CBA)检测Rb1对LPS刺激巨噬细胞分泌细胞因子的影响。结果:终浓度为5、10、20μmol/L的Rb1对巨噬细胞的吞噬功能具有促进作用,明显抑制LPS诱导的吞噬作用(P<0.05);Rb1能抑制巨噬细胞NO的产生(P<0.01);Rb1能够调节LPS诱导的细胞因子的产生。结论:Rb1对巨噬细胞可能具有双向调节作用,通过抑制LPS信号的转导,调节巨噬细胞因子的分泌,抑制其活化,使NO减少;对于未活化的巨噬细胞,可能通过上调其吞噬功能,增强固有免疫系统来抵御病原体侵入。     

银杏内酯B对小鼠腹膜巨噬细胞体外增殖、吞噬及产生NO和ROS的影响

目的:银杏内酯B(GB)是已知的天然而强效的血小板激活因子(PAF)受体(PAFR)拮抗剂,本研究中GB对小鼠腹膜巨噬细胞的增殖、吞噬及产生NO和ROS的影响,初步探讨其潜在的免疫调节作用与机制,从而为临床应用提供可靠的实验依据。方法:分离纯化小鼠腹膜巨噬细胞(PM),以不同浓度的GB(1.25～20μmol/L)预孵后加以脂多糖(LPS)刺激并继续培养至相应时间点;以MTT法检测GB对PM活力及LPS诱导的增殖的影响;以荧光微球的摄入结合流式细胞术评价PM的吞噬作用;以Griess法检测GB对LPS诱导的NO释放的影响;以H2DCFDA标记结合流式细胞术检测PM的ROS水平。结果:LPS刺激后24 h时PM吞噬能力增强,ROS水平显著上升,并释放大量NO,至48 h时PM增殖明显,而经终浓度为5、10、20μmol/L GB在LPS刺激前对PM进行4 h预孵处理可以大幅下调PM对荧光微球的吞噬作用,显著降低PM的ROS水平及NO释放量,并能有效抑制PM的增殖。结论:GB能有效抑制LPS诱导的细胞增殖、吞噬作用、产生NO和ROS的水平,凭借GB对巨噬细胞的体外行为和功能的出色调节作用,理应将其作为天然的免疫抑制剂候选者进行更深入的研究。     

大槐合剂对实验性高胆固醇血症大鼠LDL清除途径的影响

本文应用同位素双标记示踪方法、巨噬细胞功能测定和斑点杂交力法,观察了大槐合剂对实验性高胆固醇血症大鼠LDL清除的受体途径和非受体途径(单核巨噬细胞系统)的影响。与造型组比较,大槐合剂组LDL经受体途径和非受体途径的部分清除率(FCR)均显著增加(P<0.01,P<0.05),非受体途径的第二指数曲线半衰期(t1/2)明显缩短(P<0.05)。单核巨噬细胞系统吞噬功能显著增强,吞噬指数(K,K’)和校正吞噬指数(α)显著增加(P<0.001,P<0.001,P<0.05),半量清除时间(t1/2)显著缩短(P<0.001)。肝胞液LDL受体mRNA表达的相对水平显著增加(P<0.05)。结果提示:大槐合剂可同时促进受体和非受体途径清除LDL的作用。为通过刺激单核巨噬细胞系统功能以治疗纯合子家族性高胆固醇血症(FH)的可能性提供依据。     

M-CSF、IL-10对单核细胞IL-12、IL-18产生及HLA-DR和CD80表达的影响

目的 :探讨巨噬细胞集落刺激因子 (M CSF)和白细胞介素 10(IL 10 )对人外周血单核细胞分泌IL 12、IL 18及细胞表面HLA DR和CD80表达的影响。方法 :从健康献血员血液中分离单核细胞并进行体外培养 ,分别以M CSF和IL 10单独及共同作用 ,收集上清 ,用ELISA法检测单核细胞IL 12和IL 18的分泌 ,用流式细胞术检测细胞表面HLA DR及CD80的表达。结果 :①M CSF能诱导单核细胞分泌IL 18(P <0 .0 5 ) ;IL 10则能抑制IL 18的产生 (P <0 .0 5 ) ,并拮抗M CSF增强LPS诱生IL 18的作用 (P <0 .0 5 )。M CSF和IL 10均能抑制单核细胞分泌IL 12 p4 0 (P <0 .0 5 ) ,并具有协同效应 (P <0 .0 5 )。②M CSF能诱导单核细胞表面HLA DR的表达 (P <0 .0 5 ) ;IL 10则可抑制HLA DR的表达 ,并拮抗M CSF对HLA DR的诱导作用。M CSF对CD80表达的影响不大 ,IL 10能促进CD80的表达。结论 :M CSF和IL - 10可通过对单核细胞分泌IL 12、IL 18及HLA DR和CD80表达的调节 ,影响T细胞的活化、分化及其介导的免疫应答     

miR-146a对小鼠巨噬细胞IL-18表达的影响

目的:探讨miR-146a对小鼠单核-巨噬细胞株RAW264.7以及小鼠原代腹腔巨噬细胞Thl/Th2类细胞因子表达的影响。方法:体外培养的小鼠单核-巨噬细胞系RAW264.7细胞和腹腔新鲜分离的巨噬细胞分别瞬时转染miR-146a mimics、阴性对照mimics(NC mimics)、抑制性miR-146a(miR-146a inhibitor)和抑制性miR-146a阴性对照(NC in-hibitor)。转染后,利用real time PCR定量检测IL-18、IL-5和IL-10的表达情况。结果:RAW264.7细胞和原代腹腔巨噬细胞在转染miR-146a mimics后IL-18的表达水平明显降低(P<0.05),转染miR-146a inhibitor后IL-18的表达水平明显升高(P<0.05),但对IL-5和IL-10的表达,两种转染形式均没有影响。结论:巨噬细胞RAW264.7及原代巨噬细胞表达的miR-146a能够负向调控Thl类细胞因子IL-18的表达,但是不能调控Th2类细胞因子IL-5及IL-10的表达。     

灵芝孢子粉碱提多糖对小鼠巨噬细胞的免疫调节作用

目的 :研究灵芝孢子粉碱提多糖 (LZSBS)对小鼠巨噬细胞的激活作用。方法 :用灵芝孢子粉碱提多糖刺激体外培养的小鼠巨噬细胞 ,用ELISA法检测巨噬细胞分泌至培养基中的TNF α和IL 1β的含量 ;用Griess法检测培养上清中NO的含量。小鼠巨噬细胞对乳胶颗粒的吞噬率用显微镜计数。结果 :经灵芝孢子粉碱提多糖刺激后 ,小鼠巨噬细胞变大 ,颜色加深 ,并能显著刺激巨噬细胞分泌TNF α和IL 1β ,并产生大量的NO。小鼠巨噬细胞对乳胶颗粒的吞噬功能也明显的增强。结论 :灵芝孢子粉碱提多糖对小鼠巨噬细胞具有明显的激活作用     

动脉粥样斑块中巨噬细胞的病理生物学

正常动脉内膜及外膜有少量散在单核巨噬细胞,除部分来自滋养血管外膜,多数系由循环单核细胞经内皮细胞间隙进入衍生。单核巨噬细胞作为一个多功能细胞通过吞噬及其分泌产物等对维持动脉壁正常生理功具有重要作用,在许多血管或动脉疾病发生过程中,血管壁巨噬细胞浸润增生并构成病变的重要细胞成分。动脉粥样硬化斑块特征性病理形态学表     

重组耻垢分枝杆菌Ag85B-ESAT6-rMs对小鼠巨噬细胞功能的影响

目的:探讨重组耻垢分枝杆菌Ag85B-ESAT6-rMs对小鼠巨噬细胞功能的影响。方法:将耻垢分枝杆菌(Ms)与重组耻垢分枝杆菌Ag85B-ESAT6-rMs分别感染小鼠巨噬细胞系RAW264.7,通过抗酸染色和细胞内细菌菌落形成单位计数评价Ms和Ag85B-ESAT6-rMs被巨噬细胞吞噬和消化能力;采用流式细胞术检测巨噬细胞凋亡情况;分别采用实时定量PCR技术和ELISA检测细胞因子TNF-α的表达和分泌水平。结果:小鼠巨噬细胞实验证实,Ag85B-ESAT6-rMs比Ms具有更强的感染和促进巨噬细胞的吞噬能力,Ag85B-ESAT6-rMs可增加巨噬细胞表达和分泌TNF-α的水平,并促进受感染巨噬细胞的凋亡。结论:Ag85B-ESAT6-rMs可以促进巨噬细胞的吞噬消化功能,将有助于增强巨噬细胞对Ms抗原的递呈和机体抗Ms感染的特异性免疫。     

HMGB1对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬和I-A/E表达的影响

目的:探讨HMGB1对巨噬细胞免疫功能的影响.方法:梯度浓度HMGB1处理小鼠腹腔巨噬细胞, 或将小鼠随机分为生理盐水对照、 24 h和48 h高与低剂量HMGB1注射组, 腹腔注射0.2 μg或20 μg HMGB1, 或生理盐水.检测巨噬细胞吞噬功能和I-A/E表达.结果:10 μg/L HMGB1刺激6～12 h, 巨噬细胞吞噬功能较其他剂量组明显增强(P<0.05或P<0.01).HMGB1对培养巨噬细胞I-A/-E表达无影响.高剂量HMGB1攻击小鼠24 h, 其腹腔巨噬细胞吞噬能力明显降低(P<0.05); 低剂量HMGB1攻击48 h, 巨噬细胞I-A/-E表达明显上调(P<0.05或P<0.01).结论:高剂量HMGB1抑制巨噬细胞吞噬功能, 低剂量HMGB1增强巨噬细胞免疫功能.