1,25（OH）2D3缺乏对小鼠下颌骨体及髁突骨形成的影响

目的:研究1,25(OH)2D3缺乏对小鼠下颌体及髁突骨形成的影响及机制。方法:利用组织化学、免疫组织化学和western-blot等方法比较分析6周龄野生型(WT)和1α(OH)ase-/-小鼠髁突的骨形成及其与下颌体骨形成的差异。结果:与WT小鼠相比,1α(OH)ase-/-小鼠髁突骨量明显增加,ALP和I型胶原的阳性面积也明显增加,而下颌体的骨量明显减少,ALP和I型胶原的阳性面积明显减少。1α(OH)ase-/-小鼠的下颌体PTHR和IGF-1蛋白表达水平轻度减少,而在髁突中PTHR和IGF-1蛋白表达水平明显增加。结论:内源性1,25(OH)2D3在小鼠下颌体骨形成中发挥了重要作用,PTH通过和PTHR结合在IGF-1的介导下在髁突骨形成中发挥重要作用。     

1,25二羟维生素D3缺乏对小鼠继发性牙本质生成、矿化和龋损的影响

目的探讨1,25二羟维生素D3[1,25（OH）2D3]对小鼠继发性牙本质生成和矿化的作用。方法利用苏木精-伊红（HE）染色、免疫组织化学染色和碱性磷酸酶（ALP）组织化学染色方法,比较分析6周龄野生型和1α 羟化酶基因敲除小鼠[1α（OH）ase-/-小鼠]下颌骨矿化的差异。结果与野生型小鼠相比,1α（OH）ase-/-小鼠下颌第一磨牙龋损明显增加,面继发性牙本质面积明显减少,Ⅰ型胶原及OCN在继发性牙本质的阳性比例明显减少,Biglycan在继发性牙本质的阳性比例明显增加,ALP明显减少。结论1,25（OH）2D3缺乏会导致小鼠继发性牙本质生成、矿化减少和龋损增加。     

1,25-(OH)2 Vit D3对小鼠牙囊细胞分化的影响

目的:探讨1,25-(OH)2V it D3对小鼠牙囊细胞向成骨细胞(成牙骨质细胞)分化能力的影响。方法:第3代小鼠牙囊细胞与10-8mol/L的1,25-(OH)2V it D3共孵育3、5、7、9 d后,测定其对牙囊细胞增殖、碱性磷酸酶(alkaline phosphotase,ALP)活性、蛋白含量及骨钙素(osteocalc in,OC)表达的影响。结果:在5~7 d的时间范围内,1,25-(OH)2V it D3能显著促进牙囊细胞的增殖(P<0.05),在5~9 d内能提高ALP活性(P<0.01),增加OC阳性细胞率(P<0.05),但在9 d时能使总蛋白含量下降(P<0.05)。结论:1,25-(OH)2V it D3能促进牙囊细胞的增殖及向成骨细胞方向分化,但对蛋白合成有抑制作用。     

人牙乳头细胞分化过程中胞内Ca~(2 )浓度变化和1,25(OH)_2D_3对Ca~(2 )影响

目的 :探讨人牙乳头细胞不同分化阶段和 1,2 5 (OH) 2 D3 作用下细胞内Ca2 的变化。方法 :体外培养人牙乳头细胞 ,利用激光共聚焦显微镜观察细胞内Ca2 浓度的变化。结果 :具有某些成牙本质细胞表型的细胞 (2 1d)胞内Ca2 浓度比无分化表型的细胞 (14d)高约 2倍 ;1,2 5 (OH) 2 D3 使 2 1d组细胞胞内Ca2 明显升高 ,而 14d组则无明显变化。结论 :人牙乳头细胞在分化过程中胞内Ca2 浓度上调 ;1,2 5 (OH) 2 D3 能提高牙乳头细胞静息内Ca2 水平以达新的Ca2 稳态 ,促进牙乳头细胞分化     

1,25(OH)2D3对2型糖尿病伴牙周炎患者中性粒细胞凋亡及炎性介质表达的影响

目的:探讨1,25(OH)₂D₃对2型糖尿病伴牙周炎患者中性粒细胞(Polymorphonuclear leukocytes,PMN)凋亡及炎性介质表达的影响。方法:采用密度梯度离心法分离2型糖尿病伴牙周炎患者外周血PMN,然后于含或不含1,25(OH)₂D₃培养液中培养24 h,分别运用流式细胞术(FCM)检测PMN凋亡率;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测上清液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、中性粒细胞弹性蛋白酶(neutrophil elastase,NE)的含量变化。结果:与1,25(OH)₂D₃未干预组相比,1,25(OH)2D3干预组PMN凋亡率均升高,P<0.05; 1,25(OH)2D3干预组两两比较发现,10-8 mol/L干预组PMN凋亡率＞10^-6 mol/L干预组＞10^-10 mol/L干预组(P<0.05)。ELISA检测PMN上清液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)的结果显示,1,25(OH)₂D₃干预组TNF-α、IL-1β、IL-6、NE的水平均较未干预组低(P<0.05)。结论:1,25(OH)₂D₃能够促进PMN凋亡,下调炎性介质的表达,在2型糖尿病伴牙周炎的发生、发展中可能起免疫调节作用。     

1,25(OH)_2D_3对培养人牙乳头细胞Calbindin-D28K表达和矿化能力的影响

目的 :研究 1,2 5 (OH) 2 D3 对培养人牙乳头细胞Calbindin -D2 8K(CaB)表达和矿化能力的影响。方法 :用 10 -8mol/L 1,2 5 (OH) 2 D3 矿化液处理长期培养的第 2 8天细胞 2 4h ,用放射免疫和免疫组化方法 ,观察CaB表达和碱性磷酸酶 (ALP)、骨钙蛋白 (OC)的变化。同位素示踪方法观察 1,2 5 (OH) 2 D3 对胞外基质4 5Ca2 的影响。结果 :加入1,2 5 (OH) 2 D3 后ALP活性约为对照组的 4倍 ;OC含量约为对照组的 1.5倍。CaB在培养 2 8d牙乳头细胞及其胞外基质中表达 ,而在培养 14d牙乳头细胞中CaB免疫反应阴性。 1,2 5 (OH) 2 D3 可加强CaB表达 ,并使胞外基质对4 5Ca2 摄取量增加 1.5倍。结论 :1,2 5 (OH) 2 D3 有促进人牙乳头细胞矿化作用 ,表现在不仅能刺激OC、ALP的活性 ,而且可刺激具有分化表型的牙乳头细胞中CaB的合成 ,增加基质对Ca2 的摄取。证实促进牙乳头细胞的钙转导是CaB在矿化过程中的作用之一 ,推测CaB被“俘获”在基质中时有诱导Ca2 聚集和直接贮存的作用。     

人牙乳头细胞分化过程中胞内Ca^2＋浓度变化和1，25（OH）2D3对Ca^2＋影响

目的：探讨人牙乳头细胞不同分化阶段和1,25（OH）2D3作用下细胞内Ca^2 的变化。方法：体外培养人牙乳头细胞,利用激光共聚焦显微镜观察细胞内Ca^2 浓度的变化。结果：具有某些成牙本质细胞表型的细胞（21d)胞内Ca^2 浓度比无分化表型的细胞（14d)高约2倍;1,25（OH）2D3使21d组细胞胞内Ca^2 明显升高,而14d组则无明显变化。结论：人牙乳头细胞在分化过程中胞内Ca^2 浓度上调;1,25（OH）2D3能提高牙乳头细胞静息内Ca^2 水平以达新的Ca^2 稳态,促进牙乳头细胞分化。     

1，25（OH）2D3对培养人牙乳头细胞Calbindin—D28K表达和矿化能力的影响

目的：研究1,25（OH）2D3对培养人牙乳头细胞Calbindin-D28K（CaB）表达和矿化能力的影响。方法：用10^-8mol/L1,25(OH)2D3矿化液处理长期培养的第28天细胞24h,用放射免疫和免疫组化方法,观察CaB表达和碱性磷酸酶（ALP）、骨钙蛋白（OC）的变化。同位素示踪方法观察1,25(OH)2D3对胞外基质^45Ca^2 的影响。结果：加入1,25(OH)2D3后ALP活性约为对照组的4倍;OC含量约为对照组的1.5倍。CaB在培养28d牙乳头细胞及其胞外基质中表达,而在培养14d牙乳头细胞中CaB免疫反应阴性。1,25(OH)2D3可加强CaB表达,并使胞外基质对^45Ca^2 摄取量增加1.5倍。结论：1,25（OH）2D3有促进人牙乳头细胞矿化作用,表现在不仅能刺激OC、ALP的活性,而且可刺激具有分化表型的牙乳头细胞中CaB的合成,增加基质对Ca^2 的摄取。证实促进牙乳头细胞的钙转导是CaB在矿化过程中的作用之一,推测CaB被“俘获”在基质中时有诱导Ca^2 聚集和直接贮存的作用。     

白介素-6与1,25(OH)2维生素D3联合作用下大鼠骨髓破骨细胞的体外诱导培养

目的观察联合应用白介素(IL)-6和1,25(OH)2D3对大鼠骨髓破骨细胞生成诱导的影响.方法采用4周龄SD大鼠无菌条件下取出股骨,剪去两骺端,以α-MEM培养液将骨髓细胞冲出,然后将细胞悬液接种于预置盖玻片或牙本质片的24孔培养板内,24h后换液.试验分为4组,A组不加任何诱导因子;B组加入IL-6(10 U/ml);C组加入1,25(OH)2D3(1 ×10-8mol/L);D组加入IL-6(10 U/ml)和1,25(OH)2D3(1×10-8mol/L).每组各6孔,于培养的第7天进行多核细胞计数.结果培养1周左右IL-6与1,25(OH)2D3在体外均可单独诱导骨髓破骨细胞的形成,但D组多核细胞数与B、C组相比差异有显著性(P＜0.05).结论IL-6与1,25(OH)2D3联合作用下对骨髓破骨细胞生成的诱导效果明显高于单因素诱导效果.     

白介素-6与1,25(OH)_2维生素D_3联合作用下大鼠骨髓破骨细胞的体外诱导培养

目的观察联合应用白介素(IL)-6和1,25(OH)2D3对大鼠骨髓破骨细胞生成诱导的影响。方法采用4周龄SD大鼠无菌条件下取出股骨,剪去两骺端,以α-MEM培养液将骨髓细胞冲出,然后将细胞悬液接种于预置盖玻片或牙本质片的24孔培养板内,24 h后换液。试验分为4组,A组:不加任何诱导因子;B组:加入IL-6(10 U/ml);C组:加入1,25(OH)2D3(1×10-8mol/L);D组:加入IL-6(10 U/ml)和1,25(OH)2D3(1×10-8mol/L)。每组各6孔,于培养的第7天进行多核细胞计数。结果培养1周左右IL-6与1,25(OH)2D3在体外均可单独诱导骨髓破骨细胞的形成,但D组多核细胞数与B、C组相比差异有显著性(P<0.05)。结论IL-6与1,25(OH)2D3联合作用下对骨髓破骨细胞生成的诱导效果明显高于单因素诱导效果。     

1,25-二羟维生素D_3对MDPC-23细胞增殖和碱性磷酸酶活性的影响

目的 :探讨 1 ,2 5 二羟维生素D3 (1 ,2 5 dihydroxyvitaminD3 ,1 ,2 5 (OH) 2 D3 )对成牙本质细胞系MDPC 2 3细胞增殖和碱性磷酸酶 (alkalinephosphatase,ALP)活性的影响。方法 :细胞培养 ,MTT比色测定法和碱性磷酸酶活性测定法。结果 :1 ,2 5 (OH) 2 D3 明显抑制MDPC 2 3细胞增殖 ,而促进MDPC 2 3细胞内碱性磷酸酶活性 ,呈一定的剂量和时间依赖性。结论 :1 ,2 5 (OH) 2 D3 可调节成牙本质细胞增殖和ALP活性 ,在成牙本质细胞增殖和矿化过程中可能发挥重要的作用     

不同浓度1,25-二羟基维生素D3对体外培养破骨样细胞骨吸收作用的影响

目的:观察不同浓度的1,25-二羟基维生素D3对体外培养破骨样细胞骨吸收作用的影响.进一步阐述骨吸收刺激因子在正畸牙周组织改建中的作用.方法:应用不同浓度的1,25-二羟基维生素D3(0、10-10、10-8、10-6mol/L)诱导大鼠骨髓破骨样细胞的形成,观察细胞在牙本质片上形成骨吸收陷窝的数目以及陷窝面积的大小;并采用原位杂交技术检测大鼠骨髓细胞的ODF mRNA表达.结果:随着1,25-二羟基维生素D3浓度的增加,骨陷窝数明显增多,陷窝面积增大;ODF mRNA表达的阳性信号显著增强.结论:在体外,1,25-二羟基维生素D3可以调节大鼠骨髓破骨样细胞的形成及骨吸收活性.     

1,25-二羟维生素D3对骨髓破骨细胞形成和破骨细胞分化因子mRNA表达的影响

目的：观察不同浓度的1，25-(0H)2D3对骨髓单个核细胞诱导形成破骨细胞和对单个核细胞ODF mRNA表达的影响。进一步阐明骨吸收刺激因子在破骨细胞性骨吸收中的作用机制。方法：应用不同浓度的1，25-(0H)2D3(0、10^-10、10^-8、10^-6moL／L)诱导大鼠破骨细胞的形成，观察形成破骨细胞的数目，并采用原位杂交技术检测骨髓细胞ODF mRNA的表达。结果：随着l，25-(0H)：D，浓度的增加，多核细胞计数增多；ODF mRNA表达的阳性信号显著增强。结论：1，25-(0H)2D3通过调节骨髓细胞ODF mRNA的表达，影响破骨细胞的形成和功能，进而调节局部骨微环境内骨吸收与骨形成平衡的变化，影响骨组织改建。     

1,25-(OH)2D3作用下人牙周膜细胞破骨细胞分化因子及破骨细胞发生抑制因子的表达及意义

目的观察1,25-二羟基维生素D3[1,25-(OH)2D3]对体外人牙周膜细胞(HPDLC)破骨细胞分化因子(ODF)mRNA及破骨细胞发生抑制因子(OCIF)mRNA表达的影响,探讨正畸牙周组织改建的分子机制。方法以不同浓度的1,25-(OH)2D3(0、1×10-10、1×10-8、1×10-6mol/L)作用于体外培养的人牙周膜细胞,利用原位杂交染色及RT-PCR检测技术,检测不同浓度的1,25-(OH)2D3作用于体外培养人牙周膜细胞ODF、OCIFmRNA表达的强度变化。结果随1,25-(OH)2D3浓度的升高,人牙周膜细胞ODFmRNA的表达升高,而OCIFmRNA的表达降低。结论1,25-(OH)2D3在体外可影响人牙周膜细胞ODFmRNA和OCIFmRNA的表达,从而通过调节ODF和OCIF相对含量的变化,影响牙周组织改建过程。     

1,25(OH)2D3激动髁突软骨细胞内Ca2+释放及其机制的研究

目的：探讨1，25(OH)2D3激动体外培养的兔髁突软骨细胞内Ca^2 的释放及其通道。方法：消化法培养2周新西兰白兔的髁突软骨细胞，分别进行20g／L肝素、1g／L普鲁卡因细胞内Ca^2 通道阻断处理，经钙荧光指示剂Fluo-3负载后，用激光扫描共聚焦显微镜测定l，25(OH)2D3刺激前后髁突软骨细胞内Ca^2 随时间变化情况。结果：10^-8mol／Ll，25(OH)2D3100μL刺激后对照组细胞内荧光强度随时间明显升高；普鲁卡因处理组变化与其相似，而肝素处理组在刺激前后细胞内荧光强度无明显的变化。结论：1，25(OH)2D3能激动髁突软骨细胞内三磷酸肌醇受体(IP3R)Ca^2 释放通道开放，使细胞内Ca^2 水平显著升高。