一氧化氮合酶在心血管内皮细胞中表达的调控

人心血管内皮细胞中的一氧化氮合酶（Nitricoxide synthase，NOS），又称为内皮型一氧化氮合酶（Endothelial NOS，eNOS），该基因定位于人类第12号染色体，由26个外显子组成，它以L-精氨酸为底物生成一氧化氮（NO）而发挥生物学作用。在eNOS结构基因的-103bp有spl住点，这个位点和位于-230bp的GAGA区是激活eNOS启动子的重要顺式作用元件。eNOS结构基因的Spl位点时转录是必需的，而GATA-2转录因子是激发eNOS转录的重要细胞因子。溶血磷脂胆碱、氧化的低密度脂蛋白、Statin、TGF—B、TNF—α和雌激素均可影响eNOS基因表达。eNOS与小凹蛋白、GPCR、Hsp90、钙／钙调素等调节蛋白之间的相互作用对翻译后的eNOS活性均有影响。eNOS可通过促进NO的生成，减少心、脑血管疾病的发生。     

牙龈卟啉单胞菌促进人脐静脉内皮细胞一氧化氮的生成

目的:观察牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,Pg)对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelialcells,HUVEC)一氧化氮(NO)生成的影响,探讨Pg对内皮细胞功能损伤的途径,以期为牙周病在动脉粥样硬化发病机制中的作用提供依据.方法:用感染复数(multiplicity of infection,MOI)1∶10、1∶100Pg干预HUVEC,未受Pg干预的HUVEC作为阴性对照组,分别于4、8、12、24 h时收集细胞上清液,利用硝酸还原酶法测定细胞上清液中NO的浓度:Western.blot检测诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和内皮型一氧化氮合酶(eNOS)蛋白表达水平;透射电镜观察Pg对HUVEC的黏附和入侵方式.结果:在24 h内,PgMOI 1∶10、1∶100能促进HUVEC NO的生成,与阴性对照组相比差异有统计学意义(P<0.05),PgMOII∶10,MOII∶100可以诱导HUVEC iNOS的蛋白表达,抑制eNOS的蛋白表达,与阴性对照组相比差异均有统计学意义(P<0.05),透射电镜观察Pg能够利用其菌毛黏附于HUVEC细胞表面并入侵到HUVEC细胞胞质内,定植于细胞内.结论:Pg能够黏附于HUVEC并入侵到细胞胞质内,诱导iNOS蛋白表达,抑制eNOS的蛋白表达,最终促进HUVEC NO的生成.过量的NO可能发挥细胞毒性作用,导致内皮功能失调.     

内皮型一氧化氮合酶基因多态性对一氧化氮水平的影响

一氧化氮(NO)是重要的细胞间信号转导分子,参与体内各种生理、病理过程。一氧化氮合酶是合成体内一氧化氮的关键酶,其中内皮型一氧化氮合酶(eNOS)是重要的关键酶之一。eNOS是由eNOS基因翻译、转录而来。近年来,eNOS基因多态性研究成为分子生物学和基因组学的重要热点,该文就eNOS基因多态性与体内NO水平的关系予以综述。     

中药对一氧化氮合酶/一氧化氮系统调节作用的研究进展

一氧化氮(nitric oxide,NO)是人体重要的信使分子,由内皮型一氧化氮合酶(nitric oxide synthase,NOS)、神经元型一氧化氮合酶和诱导型一氧化氮合酶催化而成,合成后的一氧化氮迅速跨膜扩散释放,对免疫系统、神经系统等许多生理系统具有重要调节功能。血管系统的内源性一氧化氮可增强血管系统功能、舒张血管、增强血管内皮细胞存活、抑制血小板积聚和抑制白细胞浸润。然而,病理情况下一氧化氮过量产生可能通过细胞毒性作用与细胞抑制作用导致组织损伤。本文从中药调节NOS/NO系统介导相关疾病出发,综述了近五年有关中药调节NOS/NO系统及相关通路作用的研究,以期为相关疾病治疗提供新的线索或参考,为临床合理、有效用药提供科学依据。     

内皮型一氧化氮合酶基因与冠心病

冠状动脉粥样硬化性心脏病 (简称冠心病 )是由遗传与环境因素共同所致的复杂疾病。分子遗传学的发展 ,为分析冠心病的遗传机制提供了可能。内皮细胞一氧化氮作为心血管功能上一种重要的调节分子 ,与冠心病的发生、发展有关［１］。一氧化氮合酶(ＮＯＳ)是左旋精氨酸一氧化氮途径的关键酶 ,其基因的突变可能影响ＮＯＳ蛋白的功能及活性 ［２］。ＮＯＳ基因被列为冠心病的一个候选基因［３］。因此 ,ＮＯＳ基因的突变可能与冠心病及心肌梗死风险有关 ,且已有证据证明此相关性 ［２ ,４～６］。人体内ＮＯＳ至少有３种 :内皮型 (ｅＮＯＳ)、神…     

二甲基精氨酸-二甲胺水解酶2的表达、调节和功能

非对称性-二甲基精氨酸(ADMA)抑制一氧化氮合酶,是内皮功能损伤、心血管疾病的危险因素。二甲基精氨酸-二甲胺水解酶(DDAH)可以代谢ADMA,主要分为两种。DDAH-1主要分布于肾小管、肝脏,从循环中摄取ADMA;DDAH-2主要存在于血管中,分布于内皮细胞胞膜交界处及胞内颗粒、血管平滑肌细胞肌纤维及核被膜中。肾和血管中的DDAH,其表达调节和分布均具有特异性,可以特异地调节一氧化氮(NO)的产生。下面主要介绍DDAH-2的表达、调节与功能,描述了DDAH-2在NO产生、内皮功能中所起的作用。     

柚皮甙对血管内皮细胞ROS相关酶类基因表达的影响

目的观察黄酮类物质柚皮甙对血管内皮细胞活性氧族(ROS)产生和清除酶类水平的影响,探讨其抗氧化作用机制。方法在牛颈动脉内皮细胞(BCAECs)培养基质中加入不同浓度的柚皮甙,用免疫印迹检测eNOS(内皮型一氧化氮合酶)、SOD1(超氧化物歧化酶1)、过氧化氢酶、NADPH氧化酶p22phox亚基基因表达的变化。结果0.01～100μmol/L柚皮甙可以明显上调eNOS基因和NADPH氧化酶p22phox亚基基因表达,并且在0.01～1.0μmol/L范围内对eNOS基因表达存在剂量效应关系。结论柚皮甙可以同时上调产生一氧化氮和超氧阴离子的酶蛋白水平,这种作用在血管内皮细胞功能调节中的作用,有待进一步研究。     

一氧化氮/一氧化氮合酶在阿尔茨海默病中的研究进展

一氧化氮(NO)是神经系统中的重要信号分子。生理条件下它由一氧化氮合酶(NOS)分解生成,作为逆行神经递质参与突触传递和完成长时程增强等生理功能,且不同浓度的NO调节不同的病理生理过程。在病理条件下,NO/NOS通过胞内各种信号通路调节与阿尔茨海默病(AD)发病相关的β淀粉样蛋白沉积t、au异常磷酸化等特征性病理改变,还参与AD微血管损伤和氧化应激。研究NO/NOS在AD发病中的作用,可为临床上探索药物治疗提供理论根据。     

皮肌炎的微血管免疫病理改变

目的 探讨皮肌炎患者骨骼肌内微血管的免疫病理改变规律。方法 对12例皮肌炎患者进行肌肉活检。选择10例非皮肌炎患者作为对照,进行常规组织学和酶组织化学和针对血管的免疫组织化学染色,第一抗体包括抗血管性血友病因子（vWF）抗体、抗血栓调节蛋白（TM）抗体和抗内皮细胞一氧化氮合酶（eNOS）抗体。结果 所有患者出现束周分布的肌纤维变性和肌束衣内小血管周围不同程度的炎细胞浸润,非特异性酯酶染色显示肌纤维间毛细血管深染。免疫组化染色显示毛细血管的vWF、TM和eNOS在束周区域分布显著减少,肌束衣处的微小动脉和静脉的TM和eNOS也减少。结论 皮肌炎的血管内皮细胞损害除毛细血管外,可以出现在其他微血管。TM以及eNOS在血管内皮细胞减少提示血管的抗凝和舒张功能下降。皮肌炎是一种弥漫性炎性血管内皮细胞病。     

一氧化氮及其合酶与脑胶质瘤

曾被认为是大气污染物的一氧化氮（NO）近年来作为一种“明星分子”愈来愈显示其在人体生理、病理过程中扮演的细胞介质、调质、信使等角色的重要性。NO在神经传递、机体物质与能量代谢、细胞发生、分化、生长及死亡、内分泌调节、抗病毒和细菌、杀伤肿瘤等方面的研究也越来越深入。现对NO及其合酶（NOS）在脑胶质瘤细胞中的作用及NO对血脑屏障的影响作一概述。至一氧化氛及其合酶概述1980年,Furchgott等［‘j报道了一种由血管内皮细胞释放的血管内皮舒张因子（E－DRF）,进一步研究认为EDRF6ifNO自由基［“。随后,在1988年Hibb…     

内皮型一氧化氮合酶活性和基因表达异常与动脉粥样硬化

内皮型一氧化氮合酶(eNOS)产生的一氧化氮(NO)减少将导致内皮细胞功能异常,最终可能导致动脉粥样硬化的产生。eNOS表达降低和酶活性的降低均可以导致NO生成减少。而eNOS活性受eNOS与某些蛋白质相互作用和本身磷酸化的影响。本文主要对eNOS基因表达异常和eNOS活性异常与动脉粥样硬化的关系予以综述。     

妊高征患者血浆致内皮细胞eNOS mRNA表达增强的研究

目的　研究妊高征 (PIH)患者的血浆对体外培养的内皮细胞合成一氧化氮 (NO)及内皮型一氧化氮合成酶 (eNOSmRNA)表达的影响 ,探讨PIH患者血中NO水平的改变及改变的原因。　方法　在体外培养的脐静脉内皮细胞中分别加入PIH患者和正常晚孕妇女的血浆 ,2 4h后应用Northern杂交法比较加入不同血浆的内皮细胞eNOSmRNA表达的差异。　结果　加入PIH组血浆的内皮细胞eNOSmRNA的表达水平较加入正常晚孕组的内皮细胞的eNOSmRNA的表达水平增高 (P <0 .0 1)。　结论　eNOSmRNA表达增强可能是PIH时的一种代偿机制。     

内皮型一氧化氮合酶和精氨酸酶活性异常对动脉粥样硬化的影响

内皮型一氧化氮合酶(eNOS)脱耦联和内源性不对称二甲基精氨酸(ADMA)水平增高均与动脉粥样硬化关系密切。前者使机体生成过多的过氧化物,造成机体氧化应激状态,后者则竞争性地与eNOS结合,使一氧化氮生成减少。精氨酸酶可以与eNOS竞争底物L-精氨酸,其催化生成的产物是尿素和L-鸟氨酸而不是一氧化氮(NO),因此精氨酸酶可以调节NO的生成量,也可能与动脉粥样硬化有关。     

妊高征母儿内皮型一氧化氮合酶基因多态性的检测

目的 了解内皮型一氧化氮合酶(eNOS)基因多态性与妊高征的关系。方法 采用聚合酶链反应、高分辨琼脂糖电泳与DNA测序技术检测31对母儿(妊高征15对，正常妊娠妇女16对)eNOS基因内含子4多态性。结果 62个标本中出现3种等位基因，即b(420bp)、a(393bp)和c(447bp)，其出现频率分别为91．93％，6．45％和1．61％．62个标本中出现3种基因型，即b／b、a／b和c／b，其出现频率分别为83．83％、12．90％和3．27％；妊高征妇女和正常妊娠妇女、妊高征妇女的新生儿及正常妊娠妇女的新生儿以及妊高征母儿间eNOS基因内含子4基因频率与基因型频率无显著差异．结论 eNOS基因内含子4多态性与妊高征无关。     

普伐他汀对培养人内皮祖细胞药理作用的影响

目的观察普伐他汀对培养人内皮祖细胞（EPC）数量、增殖、迁移、黏附及一氧化氮（NO）合成能力的影响。方法采用密度梯度离心法分离人外周血单个核细胞,贴壁筛选法培养内皮祖细胞,培养7d后收集细胞并分别加入普伐他汀10μmol／L及100μmol／L,干预48h,免疫组化、荧光显微镜和流式细胞仪鉴定内皮祖细胞,分别观察内皮祖细胞的数量、增殖迁移黏附能力、细胞内皮型一氧化氮合酶（eNOS）、mRNA的表达以及培养液中NO的水平。结果普伐他汀组促进外周血内皮祖细胞扩增,并显著改善外周血内皮祖细胞的黏附、迁移、增殖以及eNOSmRNA表达和NO合成的能力。结论他汀类药物可增加培养人内皮祖细胞数量并改善其功能。     

人星形细胞瘤中eNOS和VEGF的表达与血管生成关系的研究

目的探讨内皮型一氧化氮合酶(eNOS)、血管内皮生长因子(VEGF)的表达与星形细胞瘤血管生成及恶性程度的相互关系.方法应用免疫组化方法检测37例星形细胞瘤和4例胶质增生组织eNOS、VEGF的表达水平,并检测Ⅷ因子相关抗原(FⅧRAg)以反映微血管密度.结果微血管密度随肿瘤恶性程度增高而显著增多(P＜0.05).eNOS、VEGF在血管内皮及肿瘤细胞胞质中均有表达,其阳性程度及标记指数(LI)均随血管密度及恶性程度增高而显著增高(P＜0.05).eNOS与VEGF的表达水平有明显的正相关性(P＜0.01).结论eNOS与VEGF可能相互影响促进肿瘤组织内血管生成,在星形细胞瘤的形成与发展过程中起着重要作用,其表达水平对判断恶性程度及预后有指导意义.     

线粒体定位eNOS对肺动脉内皮细胞ROS和NO的调控研究

目的探讨肺动脉内皮细胞线粒体定位的eNOS减少与新生儿持续性肺动脉高压(persistent pulmonaryhypertension of the new born,PPHN)的相关性。方法 PPHN的胎羊模型并分离肺动脉内皮细胞,运用免疫荧光、Western Blot和特异性靶向eNOS(endothelial nitric oxide synthase)等方法,比较正常胎羊和持续性肺动脉高压的胎羊来源肺动脉内皮细胞的eNOS线粒体定位与胞内活性氧ROS(reactive oxygen species)和一氧化氮NO(nitric oxide)的关系。结果在持续性肺动脉高压来源的肺动脉内皮细胞中,Western Blot结果显示线粒体定位的eNOS减少;用Mito-HE荧光探针标记肺动脉内皮细胞中ROS,显示在PPHN的肺动脉内皮细胞中ROS增加;在293HEK细胞过表达不同靶向的eNOS,在线粒体过表达eNOS可减少胞内ROS含量。结论线粒体定位的eNOS可能通过ROS调控胞内NO的量,从而影响血管的舒张。我们的研究揭示了PPHN发病新的机制并为PPHN治疗提供了潜在的靶向位点。     

4′-甲基醚金连木黄酮对棕榈酸诱导的大鼠阴茎海绵体内皮细胞功能障碍的影响

目的：探讨双黄酮类药物4′-甲基醚金连木黄酮(4′-O-methylochnaflavone, MF)对棕榈酸诱导的大鼠阴茎海绵体内皮细胞(rat cavernous endothelial cells, RCECs)功能障碍的影响。方法：将RCECs随机分为4组,分别为正常+牛血清白蛋白组(NC组)、棕榈酸(palmitic acid, PA)组、MF治疗组、淫羊藿次苷Ⅱ(icasisideⅡ,ICAⅡ)治疗组。采用蛋白印迹实验检测各组细胞的蛋白激酶B(protein kinase B, PKB/AKT)和内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase, eNOS)蛋白表达水平,使用一氧化氮荧光探针检测MF以及ICAⅡ对RCECs内一氧化氮含量的影响,使用CCK-8试剂盒检测MF、ICAⅡ对PA诱导后的RCECs增殖能力的影响。结果：与NC组相比,MF组、ICAⅡ组处理后细胞内一氧化氮含量显著增加(P<0.05),MF组的效果优于ICAⅡ组(P<0.05)。与NC组相比,PA组的eNOS和AKT蛋白表达水平明显降低,提示成功构建了用...     

β神经生长因子对内皮祖细胞一氧化氮合酶的影响

目的:探讨β-神经生长因子(β-NGF)对大鼠内皮祖细胞(EPCs)内皮型一氧化氮合酶(eNOS)及一氧化氮(NO)合成的影响。方法:将β-NGF重组腺病毒(Ad-β-NGF)及其阴性对照感染至大鼠内皮祖细胞,同时设置空白对照,分别于24h、48h及72h进行检测。用qPCR及Western blot分别在mRNA和蛋白水平检测不同组eNOS表达情况,硝酸还原酶法测定培养液中NO的水平。结果:Ad-NGF感染组eNOS表达及NO合成明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),并随感染时间的延长而增加。结论:β-NGF能促进内皮祖细胞eNOS表达及NO合成,有利于内皮祖细胞发挥功能。