三氯化镧对糖尿病大鼠胰岛B细胞的影响

目的 探讨三氯化镧(LaCl3)对糖尿病大鼠胰岛B细胞保护及修复作用.方法 将糖尿病SD大鼠随机分为:低剂量(0.01mg/kg,Lacl3)、中剂量(0.05mg/kg,LaCl3)、高剂量组(0.25mg/kg,LaCl3)及对照组,测定血糖及空腹血清胰岛素、C肽,治疗8周后取胰腺行透射电镜观察.结果 治疗后8周低剂量组随机血糖降低6.04±2.01 mmol/L,空腹血清胰岛素由15.86±2.12 mIu/L升为25.99±5.62 mIu/L,C肽由0.07±0.03 ng/ml升为0.16±0.02 ng/ml.对照组电镜见胰岛B细胞分泌颗粒减少或消失;低剂量组分泌颗粒密集.结论 低剂量LaCl3可促进胰岛B细胞再生,修复胰岛B细胞功能.     

采用Edmonton免疫抑制方案的同种异体胰岛移植治疗糖尿病32例的临床研究

目的研究同种异体胰岛移植治疗1型糖尿病与肾移植后糖尿病的临床效果。方法对27位(其中5位行二次移植术)1型糖尿病患者或糖尿病肾病肾移植后患者施行同种异体胰岛移植。胰腺供体来自于公民死亡捐献,经消化、纯化后获得纯度≥50%、活力≥80%的胰岛,重悬于CMRL1066液体后,采用经皮肝门静脉穿刺,将胰岛悬液重力输注与肝内。术前采用巴利昔单抗诱导,术后采用口服他克莫司+吗替麦考酚酯诱导免疫耐受。定期检测移植受者血糖、C肽和糖化血红蛋白水平等指标。结果移植后平均随访7.6个月。随访期内,其中16例完全停用胰岛素,9例胰岛素用量减少50%～90%,2例效果不明显,术后C肽无显著增加。25例有效移植受者空腹血糖从移植前的(8.8±13.7)mmol/L降至(5.1±4.3)mmol/L,控制更加平稳;糖化血红蛋白A1从(7.63±4.53)%降至(5.30±1.43)%。平均C肽增量为1.34nmol/L。常见并发症为术后短暂的恶心、呕吐和转氨酶上升,无严重并发症发生。结论经肝门静脉胰岛移植是治疗1型糖尿病与肾移植后糖尿病的有效手段,短期临床疗效较好,远期疗效尚需进一步观察。     

链脲佐菌素联合高脂高糖饲料诱导糖尿病大鼠模型的建立

目的探讨链脲佐菌素(STZ)联合高脂高糖饲料诱导Wistar大鼠糖尿病模型的方法。方法 Wistar雄性大鼠45只,均分为三组。A组为高脂高糖饲料联合STZ诱导组,B组为高脂高糖饲料喂养组,C组为正常饲料喂养组。高脂高糖饲料喂养4周后,在0.5h内将STZ缓冲液通过腹腔注射至A组大鼠,STZ的剂量为50mg/kg。观察三组大鼠血糖、体重及血胰岛素变化情况。结果A、B组大鼠血糖均升高,与C组比较差异有统计学意义(P<0.05);A组较B组血糖升高更为明显[(20.5±0.5)mmol/L vs.(11.3±0.7)mmol/L](P<0.05)。A、B组大鼠体重及胰岛素水平较C组减低(P<0.05),A组较B组血胰岛素降低更为明显[(26.7±6.8)mmol/L vs.(30.3±11.3)mmol/L](P<0.05)。结论 STZ联合高脂高糖饲料能够成功诱导出糖尿病大鼠模型,方法简便。     

环孢素A对冠心病患者T淋巴细胞CD40/CD40L表达的影响

目的探讨CD40/CD40L在冠心病发生发展中的作用,以及环孢素A(Cs A)对CD40/CD40L是否具有抑制作用。方法 71例冠心病或疑诊为冠心病患者分为急性心肌梗死(AMI)组19例,不稳定型心绞痛(UAP)组18例,稳定型心绞痛(SAP)组17例,正常对照(N)组17例。提取各组患者外周血单个核细胞(PBMCs),应用流式细胞术检测各组CD40/CD40L表达水平,筛选出CD40/CD40L高表达组并给予不同浓度Cs A(H1:0 mg/L;H2:0.01 mg/L;H3:0.1mg/L;H4:1 mg/L)处理细胞,流式细胞术检测处理组CD40/CD40L的表达水平。结果与N组相比,其他3组CD40表达水平均升高(均P<0.05),UAP组、AMI组较SAP组升高,UAP组与AMI组之间差异无统计学意义(P>0.05);CD40L的表达在不同病变程度组间依次升高,两两比较差异均有统计学意义(P<0.05)。AMI组CD40/CD40L表达水平最高。不同浓度Cs A处理后H1组CD40表达率高于H3组、H4组(均P<0.05)。CD40L表达率在H1组显著高于其他3组(均P<0.05)。结论 CD40/CD40L可能参与冠心病的发生发展,Cs A可通过抑制CD40/CD40L从而延缓冠心病发展及改善预后。     

白细胞介素-10联合抗CD40L单克隆抗体对大鼠小肠移植早期排斥反应的研究

目的探讨重组大鼠白细胞介素-10(rIL-10)联合抗大鼠CD40L单克隆抗体对抑制大鼠小肠移植早期排斥反应的作用,为小肠移植免疫提供实验依据。方法将30只雄性SD大鼠和Wistar大鼠(各15只),建立(SD→Wister)大鼠小肠移植模型,随机分为A、B、C3组各10只。A组为生理盐水对照组;B组应用rIL-10;C组应用rIL-10联合抗CD40L单克隆抗体。3组均于术后第2天开始注射。术后第5、7天从3组随机各取5只,取小肠移植物,行组织病理学检查;采受体大鼠的外周血检测IL-2、干扰素-γ(INF-γ)表达水平。结果组织病理学检查:与A组相比,B、C组早期排斥反应明显延迟,且C组早期排斥反应较B组轻;外周血血清学检测:B、C组受体大鼠血清IL-2、INF-γ较A组明显降低,且C组较B组均有不同程度的下降,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 rIL-10联合抗大鼠CD40L单克隆抗体能有效抑制大鼠小肠移植的早期排斥反应。     

阻断共刺激信号在异种小动物心脏移植中诱导免疫耐受的研究

目的在非协调性异种小动物豚鼠-大鼠心脏移植模型当中,通过单克隆抗体阻断T细胞B7/CD28及CD40/CD40L激活通路途径来探讨T细胞在异种移植延迟性免疫排斥中的作用,探索诱导异种移植T细胞外周耐受的可能性。方法将供体三色豚鼠和受体SD大鼠随即分成四组：A组（对照组）,在移植前一天大鼠腹腔内注射CVF 0.4mg/kg;B组（B7mAb组）,在移植当天大鼠腹腔内注射B7单抗0.1mg,余处理同A组;C组（CD40LmAb组）,在移植当天大鼠腹腔内注射CD154单抗0.1mg,余处理同A组;D组（联合组）,在移植当天大鼠腹腔内注射B7单抗0.1mg、CD154单抗0.1mg,余处理同A组。观察各组供心存活的时间,并行移植心脏的常规病理和免疫组化检查。结果对照组移植心脏的存活时间为（19.5±2.7）h,与对照组比较,B7组、CD40L组和联合处理组的移植心脏存活时间均得到了显著的延长,但联合处理组延长最为明显。移植心脏组织病理学检查均呈急性血管排斥反应改变,且以CD8＋T细胞浸润为主。结论联合阻断CD28/B7与CD40/CD40L共刺激通路可延长异种移植心脏存活时间。     

糖尿病大鼠腹腔内移植微囊化成猪胰岛疗效观察

18只链脲佐菌素制备的糖尿病模型大鼠随机分为三组：对照组、本微囊化胰岛移植组和微囊化胰岛移植组。移植物由成猪胰腺制备。移植量均为1克。结果：移植前三组血糖水平无显著差异；移植7天后，三组的血糖分别为22．67±1．15mmol／L，18．58±2．62mmol／L和14．87±2．40mmol／L。微囊化胰岛移植组与前两组比较均有显著差异，且生存期明显长于前两组，表明微囊化成猪胰岛可存活于糖尿病大鼠体内，并具有生物活性。     

Effects of gastric bypass on blood glucose in rats with diabetes mellitus

目的 研究胃肠转流手术(GBP)对非肥胖型糖尿病大鼠的降糖效果与术后进食量、体重的关系.方法 健康雄性wistar大鼠,腹腔注射链脲佐菌素(STZ)建立糖尿病模型.随机分成3组,O组:GBP手术组;F组:饮食控制组;C组:空白对照组.观察各组大鼠体重、平均进食量,分别测定术前、术后1、2、3、4、8周空腹及灌服葡萄糖30 min后血糖水平.结果 O组GBP后4周,空腹和灌服葡萄糖后血糖分别由(20.8±4.9)、(30.2±3.1)mmol/L下降到(11.6±2.9)、(16.6±3.1)mmol/L (P＜0.01).O组体重改变无统计学意义.F组控制平均进食量约为O组的1/3并致体重显著下降,血糖下降没有O组明显.结论 胃转流术对糖尿病大鼠具有明显治疗作用,其降糖作用与术后体重下降及进食量无关.     

补阳还五汤对脑缺血模型大鼠血清中CD40和CD40L含量的影响

目的:研究补阳还五汤对脑缺血模型大鼠血清中CD40和CD40L含量的影响。方法:将大鼠随机分为假手术(生理盐水)组、模型(生理盐水)组、阳性对照[硫酸氢氯吡格雷6.75 mg/(kg·d)]组和补阳还五汤高、低剂量[26、6.5 g/(kg·d)]组,每组20只。采用大脑中动脉线栓法建立大鼠局灶性脑缺血模型,术后第2天开始ig给药,连续给药14 d。观察各组大鼠脑组织的病理改变,酶联免疫法测定血清中CD40、CD40L含量。结果:模型组大鼠病灶侧脑组织呈缺血样病理改变,阳性对照组和补阳还五汤高剂量组大鼠病灶侧缺血样脑组织较模型组均有改善,补阳还五汤低剂量组大鼠病灶侧脑组织病理改变与模型组相似。与假手术组比较,模型组大鼠血清中CD40、CD40L含量增加;与模型组比较,阳性对照组和补阳还五汤高剂量组大鼠血清中CD40L含量减少,差异具有统计学意义(P<0.01或P<0.05),其余差异无统计学意义(P>0.05)。结论:补阳还五汤能改善脑缺血模型大鼠脑细胞形态、减轻脑缺血组织损伤,其机制可能与降低CD40L含量有关。     

巨噬细胞在混合嵌合体诱导异种免疫耐受中作用的实验研究

目的研究巨噬细胞在建立非协调性异种混合嵌合体中的作用及混合嵌合体的形成对受体的免疫功能影响,探讨异种免疫耐受的机制。方法将非清髓性的预处理SD大鼠(受体)30只随机分成3组,A组(仅输注豚鼠BMC);B组(豚鼠BMC移植组+空脂质体移植组);C组(豚鼠BMC移植组+包裹clodronate脂质体移植组)。观察指标:大鼠肝脾CD68、嵌合体嵌合率、大鼠外周血CD3+T细胞、CD4+T细胞和CD8+T检测、单向混合淋巴细胞反应。结果注射包裹clodronate脂质体后24h受体大鼠肝脾(红髓及边缘带)中巨噬细胞消失,21d后与正常对照相比无差异。BMC移植后24h内各时间点,C组大鼠外周血中豚鼠细胞比例均高于A、B组;24h时大鼠脾、骨髓中豚鼠细胞比例,C组亦明显高于A、B两组;比较21d及35d嵌合水平,C组明显高于A、B两组。21d时CD3+、CD4+和CD8+T细胞比例均下降,各组CD4/CD8比值与对照组相比无差异。MLR显示耐受大鼠的免疫应答反应性降低,C组较其他组比最低。结论增加了供体BMC在受体体内的存活,从而提高嵌合水平,获得了更高水平的免疫抑制。     

非霍奇金淋巴瘤中CD40、CD40L的表达及意义

目的探讨非霍奇金淋巴瘤（NHL）中CD40、CD40L表达与NHL预后间的关系及意义。方法免疫组织化学法检测50例非霍奇金淋巴瘤、22例淋巴结反应性增生组织中CD40、CD40L的表达。结果 （1）NHL中CD40过度阳性率（66.0%）显著高于淋巴结反应性增生（36.4%）,P〈0.05;NHL中CD40L过度阳性率（20.0%）显著低于淋巴结反应性增生（63.6%）,P〈0.05。（2）NHL中CD40与CD40L表达呈负相关,r=-0.486,P〈0.05。（3）NHL患者CD40、CD40L的过度阳性率与恶性程度、结外浸润及临床分期均显著相关,P〈0.05。结论 （1）CD40、CD40L过度阳性率与恶性程度、结外浸润及临床分期密切相关,其可能与NHL侵袭性及预后有关。（2）NHL中CD40表达的增高、CD40L表达的减少可能是影响其发病的因素之一。     

CD40分子与肿瘤靶向治疗

T/B细胞相互作用是引起机体适应性免疫应答的关键,其中CD40和CD40L的协同作用不仅对体液免疫和细胞免疫应答具有重要的调节作用,而且在抗感染、抗病毒和抗肿瘤免疫应答及炎症反应中也起重要作用.CD40主要表达于B细胞、抗原提呈细胞和一些肿瘤细胞表面.因此,CD40分子介导的信号通路与大多数恶性肿瘤、自身免疫疾病、免疫缺陷病有关.以CD40为靶标进行肿瘤免疫治疗已成为免疫研究热点之一.此文主要阐述了CD40的生物学特征和功能、CD40相关恶性肿瘤以及治疗性抗CD40单克隆抗体在肿瘤治疗中的应用.     

CD40-CD40L interaction in Alzheimer's disease

Increasing evidence supports a role of the CD40 receptor-CD40 ligand (CD40-CD40L) interaction in the pathogenesis of Alzheimer's disease (AD). It has previously been shown that this dyad acts synergistically with the Alzheimer amyloid-beta peptide to promote microglial activation. Reactive microglia produce potentially neurotoxic substances such as tumor necrosis factor alpha and the reactive oxygen species nitric oxide, which can induce bystander neuronal injury at high levels. When a transgenic mouse model of AD is crossed with an animal deficient in CD40L, the resulting phenotype is deficient in the gliosis observed in a mouse model of AD in which CD40L is present. Additionally, these crossed animals have complete absence of AD-like neuronal Tau hyperphosphorylation, a marker of the preneuronal tangle pathology in AD patients. This suggests that the CD40-CD40L system is a critical enhancer of microglial activation in an AD transgenic mouse model and that such activation is associated with an increase in a key indicator of neuronal stress. Conversely, the finding that reduced CD40-CD40L interaction is associated with reduced chronic microgliosis and Tau hyperphosphorylation supports the view that, in general, mechanisms that reduce microgliosis will be beneficial in AD.     

CD40-CD40L在儿童过敏性紫癜发病机制中的作用研究

目的探讨CD40-CD40L在儿童过敏性紫癜发病机制中的作用。方法研究对象为30例HSP患儿,正常对照组30例,应用流式细胞术检测其外周血单个核细胞中CD40-CD40L的表达情况,并观察实验组治疗前后CD40-CD40L的表达有无差异。结果与对照组比较,CD40L表达明显增高,且治疗前表达高于治疗后(P<0.05),CD40表达增高,但与对照组及治疗前后比较差异均无显著性(P>0.05)。结论 HSP患儿外周血单个核细胞CD40L表达增高,且治疗前高于治疗后,表明其在HSP患儿免疫紊乱发病机制中可能起着重要作用。     

替罗非班对体外培养THP-1源性巨噬细胞CD40及其配体表达的影响

目的探讨替罗非班对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)刺激下THP-1源性巨噬细胞CD40和CD40配体(CD40L)表达的影响,探讨该类药物的抗炎及稳定斑块的作用机制。方法向体外培养的THP-1细胞中加入ox-LDL(80mg/L)共同孵育24h,然后与替罗非班共同孵育不同时间(分别为12、24、48h),应用流式细胞技术检测CD40和CD40L在细胞上的表达。采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测CD40和CD40L mRNA表达。结果替罗非班既可下调细胞表面CD40和CD40L的表达,又能使CD40和CD40LmRNA表达下降,其阻断作用呈时间依赖性(P<0.05)。结论替罗非班可以拮抗巨噬细胞CD40和CD40L表达,并呈时间依赖性,这种作用可能是其减轻动脉粥样斑块炎症及稳定斑块的机制之一。     

Association between serum levels of soluble CD40/CD40 ligand and organ damage in hypertensive patients

1. CD40 and CD40 ligand (CD40L) have a critical role in the pathophysiology and risk prediction of coronary artery syndrome, including atherothrombosis and atherosclerosis. However, the contribution of the CD40/CD40L dyad, especially the soluble form of CD40L (sCD40L), to the pathophysiology of hypertension and associated organ damage remains unknown. 2. In the present study, serum levels of CD40 and sCD40L were measured in 328 hypertensive patients with varying degrees of organ damage. The data revealed that serum levels of CD40 were significantly greater in patients with severe, but not mild, organ damage compared with patients without any organ damage. There were no significant differences in serum concentrations of sCD40L between patients with no, mild and severe organ damage. Concentrations of soluble CD40 were comparable in patients with mild organ damage that included left ventricular hypertrophy, retinal damage, renal dysfunction and proteinuria. In contrast, concentrations of soluble CD40 were increased significantly in patients with certain forms of severe organ damage, specifically stroke, but not coronary and peripheral artery disease. 3. Collectively, our data indicate that upregulation of the CD40 system in hypertensive patients with certain forms of severe end‐organ damage may contribute to the pro‐inflammatory, pro‐atherogenic and prothrombotic milieu in hypertension.     

阻断CD40/CD40L相互作用延长移植物抗宿主病小鼠存活时间

目的：克隆表达人CD40-Ig融合蛋白，并在小鼠移植物抗宿主病（GVHD）模型中研究利用其阻断CD40/CD40L相互作用的保护性效果。方法：利用RT-PCR技术自人Daudi细胞系中克隆CD40基因胞外区，并插入含有人IgG1Fc段基因的pIG1载体中，构建携带CD40-Fc融合基因的瞬时表达载体转染COS-7细胞，间接夹心ELISA法检测CD40-Ig融合蛋白的表达，再将CD4-Fc融合基因连接入pcDNA3.1的相应位点构建稳定表达载体转染CHO细胞，筛选分泌CD40-Ig融合蛋白的阳性重组CHO细胞并进行无血清大规模培养，收获培养上清利用ProteinA亲和层析法纯化融合蛋白。SDS-PAGE，Western blot和配基结合实验鉴定CD40-Ig的性质，将C57BL6/J（H-2^b)小鼠的脾细胞经尾静脉注射入亚致死剂量照射的BALB/c(H-2^d)小鼠体内建立急性GVHD模型。通过体内注射CD40-Ig融合蛋白评价其对急性GVHD小鼠的保护效果。结果：按上述方法分别构建了哺乳动物表达载体pIG/40Ig和p3.1/40Ig。ELISA和Western blot确定在COS-7和CHO细胞中表达了CO40-Ig融合蛋白，SDS-PAGE结果显示该蛋白具有通过二硫键结合的二聚体结构并以同源二聚体的形式存在，纯化的CD40-Ig可与CD40L结合，体内应用CD40-Ig融合蛋白治疗可延缓小鼠GVHD病情发展并显著延长小鼠的平均存活时间。结论：CD40/CD40L相互作用在GVHD的病理过程中可能扮演了十分重要的角色，提示人CD40-Ig融合蛋白在临床预防和治疗GVHD方面的巨大应用潜力。     

Dehydroepiandrosterone inhibits CD40/CD40L expression on human umbilical vein endothelial cells induced by interferon gamma

Many studies indicated that the CD40/CD40 ligand (CD40L) pathway plays an important role in the pathogenesis of atherosclerosis. It has been demonstrated a protective role of dehydroepiandrosterone (DHEA) against atherosclerosis. The major purpose of our present work was to assess whether DHEA could decrease the expression of CD40 and CD40L on human umbilical vein endothelial cells (HUVECs) induced by interferon gamma (IFN-gamma). We found that DHEA inhibited IFN-γ-induced expression of CD40 and CD40L in a dose-dependent manner. Moreover, DHEA inhibited IFN-γ-induced activation of extracellular signal regulated kinase (ERK1/2). The important role of ERK1/2 in DHEA effect was further confirmed by using ERK1/2 inhibitor U0126. These findings suggest that DHEA can inhibit the expression of molecules involved in the inflammatory process in endothelial cells activated with IFN-gamma. Such antagonism is at least partially mediated through the modulation of ERK1/2 pathway. Therefore, DHEA may be considered as a potential preventive intervention for atherosclerosis.     

CD21和CD40L的表达与血清IgE相关性研究

目的研究哮喘的发病机制,探讨哮喘儿童白细胞表面分化抗原21(CD21)及CD40L的表达与血清IgE的相关性。方法利用流式细胞分析技术检测儿童哮喘发作期及缓解期外周血CD21 、CD40L 的百分率,同时用免疫化学发光法检测血清IgE的水平,并进行相关性分析。结果哮喘发作组CD21 、CD40L 的百分率明显高于哮喘缓解组、肺炎组和正常组(P均<0.01);哮喘发作组IgE明显高于哮喘缓解组、肺炎组和正常组(P均<0.01);哮喘发作组CD21 、CD40L 与IgE呈正相关。结论CD21 、CD40L 的表达与和血清IgE在哮喘的发病机制中发挥重要作用。