雌孕激素对宫颈癌细胞体外生长的影响

目的研究17-β雌二醇（E2）和孕酮（P）对宫颈癌Hela细胞体外生长的影响。方法采用MTT法检测不同浓度的E2、P和E2＋P作用24h、48h、72h后对Hela细胞的影响。结果24h、48h和72h E2浓度为10^-5mol／L时刺激Hela细胞增殖;4hP浓度为10^-6～10^-5mol／L时,以及48h和72hP浓度为10^-7～10^-5mol／L时出现抑制作用;24h E2＋P浓度为10^5mol／L时,以及48h和72h E2＋P浓度为10^-7～10^-5mol／L时均抑制细胞增殖。结论E2促进Hela细胞增殖,P则是抑制作用,E2＋P联合也出现抑制作用。     

鱼藤素抑制MCF-7、H1299增殖及下调微小染色体维系蛋白3、CDC45表达

目的 探究鱼藤素对MCF-7及H1299细胞的增殖作用,并从mRNA水平研究了鱼藤素对微小染色体维系蛋白3(MCM3)和CDC45在MCF-7及H1299细胞中的影响.方法 利用MTT法研究不同浓度的鱼藤素分别处理MCF-7和H1299细胞48、72、96 h后的抑制增殖作用;利用显微镜观察MCF-7和H1299细胞的生长状态;荧光定量PCR探究鱼藤素对MCF-7和H1299细胞中MCM3-CDC45表达的变化.结果 0.25、0.5、1、5、10、30、50μmol/L的鱼藤素作用MCF-7细胞48、72、96 h后,能明显抑制其增殖,且呈浓度时间依赖性,鱼藤素作用MCF-748、72、96 h的IC50分别为9、3、2μmol/L;0.5、1、5、10、30、50、100μmol/L的鱼藤素作用H1299细胞48、72、96 h,抑制率呈浓度时间依赖性,鱼藤素作用H1299细胞96 h的IC50为2μmol/L.光学显微镜下,观察到药物处理组中,细胞数目减少,形态皱缩明显.鱼藤素干预MCF-7及H1299细胞,MCM3-CDC45的表达量减少.结论 鱼藤素可抑制MCF-7、H1299细胞增殖,并可下调细胞中MCM3和CDC45的表达.     

α-倒捻子素通过NF-κB途径抑制LPS/ATP诱导的小胶质细胞中NLRP3炎症小体的激活

目的 探究α-倒捻子素（α-mangostin）在脊髓损伤后小胶质细胞炎症模型中作用及相关机制。方法 体外培养小鼠小胶质细胞系BV-2细胞,利用脂多糖和三磷酸腺苷（LPS/ATP）联合诱导的方式建立BV-2炎症模型。CCK-8法检测不同浓度（0、10、20、40、80μmol/L）的α-mangostin对LPS/ATP刺激下的细胞增殖活力影响以筛选适宜的α-mangostin浓度范围;将BV-2细胞分为Ctrl组、LPS/ATP组、40μmol/Lα-mangostin组和不同浓度（10、20、40μmol/L）的α-mangostin干预组（分别记为LPS/ATP+10μmol/Lα-mangostin组、LPS/ATP+20μmol/Lα-mangostin组与LPS/ATP+40μmol/Lα-mangostin组）。ELISA实验检测各组BV-2细胞上清液中促炎因子白介素-6/1β/18(IL-6、IL-1β、IL-18)和肿瘤坏死因子（TNF-α）含量,Westernblot检测各组细胞中NOD样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体相关蛋白NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白（ASC...     

鱼藤素对乳腺癌细胞株MCF-7增殖和凋亡及PI3K/Akt信号通路的影响

目的：观察鱼藤素对MCF-7细胞株细胞增殖和凋亡及磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B（phosphatidylinositol 3-kinase/protein kinase B,PI3K/Akt）信号通路的影响,旨在研究其抗肿瘤机制。方法：细胞计数试剂盒8（cell counting kit-8,CCK8）检测0、1、5、10、15和20μmol/L鱼藤素作用6、24、48和72h后对MCF-7细胞增殖的影响,膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶双染法检测细胞凋亡率,透射电子显微镜观察细胞凋亡形态,蛋白质印迹法检测细胞内PI3K/Akt通路相关分子的蛋白表达。结果：5、10、15和20μmol/L鱼藤素作用6、24、48和72h后能明显抑制MCF-7细胞增殖（P〈0.01）,抑制率随着浓度升高和时间延长而增加,各组间两两比较差异有统计学意义（P〈0.05）;而1μmol/L鱼藤素作用6、24、48和72h后对MCF-7细胞的增殖无明显影响（P〉0.05）。5、10、15和20μmol/L鱼藤素作用6h后能诱导MCF-7细胞凋亡,透射电子显微镜下可观察到典型的凋亡细胞形态,而相同条件下1μmol/L鱼藤素对MCF-7细胞的凋亡诱导作用不明显。5μmol/L鱼藤素作用6h后,MCF-7细胞内磷酸化Akt（p-Akt）（Thr308）、磷酸化糖原合成酶激酶-3β（phosphorylated glycogen synthase kinase-3β,p-GSK-3β）（Ser9）、磷酸化磷酸肌醇依赖性激酶1（phosphorylated 3-phosphoinositide-dependent protein kinase1,p-PDK1）（Ser241）和磷酸化人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源的基因编码的蛋白（phosphorylated phosphatase and tensin homologue deleted on chromosome10,p-PTEN）（Ser380）的表达量明显减少,而总Akt蛋白的表达量则无明显变化;1μmol/L鱼藤素作用6h后,细胞内上述所有蛋白的表达量均无明显变化。结论：鱼藤素可能通过抑制PTEN（Ser380）和PDK1（Ser241）蛋白的磷酸化,进而抑制Akt（Thr308）的磷酸化,间接抑制其下游GSK-3β（Ser9）的磷酸化,最终诱导MCF-7细胞凋亡和抑制其增殖。     

5-Aza-CdR对膀胱癌EJ细胞系生长及Apaf-1基因异常甲基化的影响

目的观察5-氮杂-2′-脱氧胞苷（5-aza-2-′deoxyc ityd ine,5-Aza-CdR）对体外培养的膀胱癌EJ细胞增生、细胞周期影响及其对此细胞株中Apaf-1基因的甲基化状态的影响。方法不同浓度5-Aza-CdR处理体外培养膀胱癌EJ细胞后,用MTT法检测药物处理24、48、72 h后的细胞增殖活性;PI染色和流式细胞仪检测药物处理72 h后的细胞周期分布;MSP法检测用药前后细胞中Apaf-1基因的甲基化状态;Real-time RT-PCR法检测用药前后细胞中Apaf-1的mRNA表达变化。结果2×10^-6、5×10^-6、1×10^-5mol/L 5-Aza-CdR处理膀胱癌EJ细胞24、48、72 h后,细胞增生受到抑制,有时间和剂量依赖性。流式细胞仪分析表明,不同药物浓度处理EJ细胞72 h后细胞增殖指数降低明显：5×10^-6、1×10^-5mol/L组分别为（34.09±0.79）、（28.55±1.76）,与对照组（42.78±1.23）相比,差异有统计学意义（P〈0.05）。在5-Aza-CdR处理前未检测到膀胱癌EJ细胞系的Apaf-1基因的mRNA表达,经过5-Aza-CdR处理后,Apaf-1基因在膀胱癌EJ细胞系中甲基化状态得到了逆转,Apaf-1基因的mRNA重新表达。结论5-Aza-CdR对膀胱癌EJ细胞具有增生抑制作用;Apaf-1基因的表达情况与其甲基化状态的改变有关。     

鱼藤素对小细胞肺癌的体外抗肿瘤效果评价及相关机制分析

目的:研究鱼藤素对小细胞肺癌体外抗肿瘤效果?方法:0?5?10?20?50 μmol/L鱼藤素作用于NCI-H446细胞24 h,细胞计数试剂盒8(cell counting kit-8,CCK8)分析鱼藤素对细胞活力的影响?据CCK8结果,以0?5?10?20 μmol/L鱼藤素作用于NCI-H446细胞,EdU掺入法检测细胞增殖,DAPI染色及流式细胞术测定细胞凋亡?据流式结果,20 μmol/L鱼藤素作用NCI-H446细胞0?0.5?2.0?4.0 h,蛋白质印迹法检测细胞内凋亡相关蛋白的表达?结果:鱼藤素呈剂量依赖性地抑制小细胞肺癌NCI-H446细胞增殖?诱导其凋亡,作用不同时间后可上调促凋亡蛋白Bax?下调抗凋亡蛋白Bcl-2水平?结论:鱼藤素体外抗小细胞肺癌效应可能通过上调促凋亡蛋白Bax?下调抗凋亡蛋白Bcl-2表达,诱导细胞凋亡实现?     

蛇床子素对骺板TGF-β1及其受体TGF-βRⅡ蛋白表达的影响

【目的】考察蛇床子素对小鼠长骨转化生长因子-β1（transforming growth factorβ,TGF-β1）及其受体TGF-βRⅡ蛋白表达的影响,初步探讨该化合物对骨的作用机制。【方法】取16 d胚胎小鼠前肢尺骨在BGJb培养基中培养48 h,培养基中分别含有1×10^-6mol/L雌酚酮、1×10^-7-1×10^-4mol/L四个不同梯度浓度的蛇床子素。采用免疫组织化学方法测定长骨骺板静止区、增殖区和肥大区TGF-β1和TGF-βRⅡ蛋白。【结果】（1）经不同浓度的蛇床子素和雌酚酮处理后,胎鼠长骨骨总长显著增加。与对照组相比,蛇床子素1×10^-7、1×10^-6、1×10^-5mol/L和雌酚酮1×10^-6mol/L组有显著性差异（P〈0.01）。蛇床子素1×10^-4mol/L组骨总长有增加的趋势,但无统计学意义（P〉0.05）。（2）与空白对照组,蛇床子素和雌酚酮组骺板各区TGF-β1和TGF-βRⅡ蛋白水平明显上调。当蛇床子素浓度由1×10^-7、1×10^-6、1×10^-5mol/L逐渐升高时,各区TGF-β1和TGF-βRⅡ蛋白表达升高,而1×10^-4mol/L组各区TGF-β1和TGF-βRⅡ蛋白表达降低。与雌酚酮组相比,蛇床子素组除1×10^-5mol/L组外,其他各组长骨骺板各区TGF-β1和TGF-βRⅡ表达与雌酚酮组相比有统计学意义（P〈0.05）。【结论】（1）蛇床子素能明显促进体外培养胚胎小鼠长骨生长。（2）培养基中加入蛇床子素可上调长骨TGF-β1及其受体TGF-βRⅡ表达,提示可能与其促进体外培养胚胎小鼠长骨生长有关。     

蛇床子素对新生大鼠颅骨成骨细胞中OPG、RANKLmRNA表达的影响

目的：研究蛇床子素对新生大鼠颅骨成骨细胞中OPG、RANKLmRNA表达的影响。方法：新生大鼠颅骨成骨细胞分离培养后，取第4代细胞，以5×10^4／mL接种于100cm^2培养瓶中，常规培养3d后，更换为无血清DMEM培养液，细胞饥饿过夜。然后每瓶分别加入含不同浓度蛇床子素的培养液，每浓度4瓶，连续给药48h和72h。每日通过相差显微镜观察细胞的形态、生长状况及治疗组和对照组之间的差别。提取和鉴定成骨细胞总RNA。结果：在培养液中加入不同浓度的蛇床子素培养48h后，1×10^-7mol／L组OPG、OPG／RANKL与对照组比较差异有统计学意义；培养72h后，1×10^-6mol／L组OPG／RANKL、1×10^-7mol／L组OPGmRNA的相对表达量以及OPG／RANKL与对照组比较差异有统计学意义（P＜0．01，P〈0．05）。结论：蛇床子素能通过OPG—RANKL—RANK系统影响骨重建。     

雌激素对内皮细胞释放一氧化氮的作用

目的：探讨雌激素对血管保护作用的机制,为绝经后妇女应用激素替代治疗提供参考。方法：观察10^-9～10^-5mol/L17β－雌二醇（17β－E2）、睾酮（T）、10^-4及10^-3mol/L同型半胱氨酸（Hcy)单独应用和10^-9～10^-5mol/L17β-E2分别与1010^-9～10^-5mol/L T、10^-9～10^-5mol/L17β－E2分别与10^-4及10^-3mol/LHcy联合应用对原代培养脐静脉内皮细胞释放一氧化氮（NO）的影响。结果：10^-9mol/L17β－E2刺激内皮细胞8－48h,NO释放明显增多;10^-9mol/LT刺激内皮细胞2－48h,NO无明显增多。10^-9～10^-7mol/LT刺激内皮细胞24h,培养液中NO水平无明显改变,10^-6及10^-5mol/LT使培养液中的NO明显减少。当10^-9～10^-5mol/LE2与10^-9～10^-5mol/LT分别联合应用刺激内皮细胞时,10^-9～10^-8mol/LT不影响17β-E2的促进NO释放作用,而10^-7～10^-5mol/LT抑制17β－E2,10^-9～10^-7mol/L17β－E2能改善Hcy对内皮细胞的损伤作用,10^-5mol/L17β－E2则无此作用。结论：T不能促进人脐静脉内皮细胞释放NO。T具有抑制17β－E2促进内皮细胞释放NO的作用,尤其在17β-E2、T浓度较高时作用更明显。高浓度Hcy对内皮细胞释放NO产生抑制作用,但加入17β-E2可减轻Hcy的抑制作用。     

口虾蛄提取物对乳腺癌MCF-7细胞增殖及凋亡的影响及其可能机制

目的探讨口虾蛄提取物(ESO)对乳腺癌MCF-7细胞增殖和凋亡的影响及其可能机制。方法将MCF-7细胞分为阴性对照组(仅加入培养基)以及5、10、20、40μmol/L ESO组,另设空白对照组(仅加入培养基),分别干预24 h、48 h、72 h后检测细胞吸光度值,计算增殖抑制率。使用0、5、10、20、40μmol/L ESO干预MCF-7细胞48 h后,检测MCF-7细胞凋亡率、细胞周期,以及p53、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、p70s6k的mRNA表达量。结果 (1)干预24 h、48 h、72 h后,不同浓度ESO组细胞增殖抑制率均高于阴性对照组(均P<0.05);干预24 h、48 h后,细胞增殖抑制率随ESO浓度升高而升高(均P<0.05);ESO浓度为5～20μmol/L时,细胞增殖抑制率随干预时间延长而升高(均P<0.05)。(2)经ESO干预后,MCF-7细胞出现G₁期细胞阻滞现象,同时S期和G₂期细胞都相应减少;10、20、40μm...     

硫化氢通过调控沉默信息调节子1抑制高糖诱导的人脐静脉内皮细胞氧化应激损伤

目的 观察外源性硫化氢（H2S）对高糖诱导人脐静脉内皮细胞（HUVECs）氧化应激损伤的保护作用及其可能机制。方法 用25 mmol/L D-葡萄糖（高糖）、外源性H2S供体硫化氢钠（NaHS）（5×10-5、1×10-4、5×10-4、1×10-3和5×10-3mol/L）及沉默信息调节子1（SIRT1）特异性抑制剂尼克酰胺（40 mmol/L）处理HUVECs细胞株24 h。实验分为对照组、高糖组、甘露醇组、NaHS（5×10-5、1×10-4、5×10-4、1×10-3、5×10-3mol/L）组、高糖＋NaHS（5×10-5、1×10-4、5×10-4、1×10-3和5×10-3mol/L）组和高糖＋NaHS（10-3 mol/L）＋尼克酰胺组。采用MTT比色法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞内的内活性氧（ROS）水平,Western bolt法检测SIRT1的表达。结果 与对照组比较,高糖组细胞活力显著降低[OD值分别为（0.76±0.09）和（0.18±0.01）,t=5.34,P〈0.05],细胞内ROS水平显著增加[ROS水平分别为（356.18±42.96）au和（1183.63±84.31）au,t=6.72,P〈0.05]。与高糖组比较,高糖＋NaHS（5×10-4、1×10-3和5×10-3 mol/L）组细胞活力显著增加[OD值分别为（0.18±0.01）、（0.39±0.05）、（0.68±0.04）和（0.51±0.08）,t1=3.16,t2=3.95,t3=3.86,均P〈0.05],细胞内ROS水平显著降低[ROS水平分别为（1183.63±84.31）、（874.32±85.36）、（628.65±54.27）和（439.56±53.64）au,t1=3.46,t2=3.97,t3=5.13,均P〈0.05]。与对照组比较,高糖组细胞中SIRT1蛋白表达显著下调[蛋白相对表达量分别为（0.48±0.04）和（0.17±0.03）,t=3.94,P〈0.05]。与高糖组比较,高糖＋NaHS（10-3mol/L）组细胞中SIRT1表达显著上调[蛋白相对表达量分别为（0.17±0.03）和（0.59±0.08）,t=4.36,P〈0.05]。SIRT1抑制剂尼克酰胺取消了NaHS抑制高糖诱导的HUVECs细胞活力的降低[高糖＋NaHS组和高糖＋NaHS＋尼克酰胺组OD值分别为（0.52±0.04）和（0.23±0.03）,t=2.98,P〈0.05]和细胞内ROS水平的增加[高糖＋NaHS组和高糖＋NaHS＋尼克酰胺组ROS水平分别为?     

蛇床子素对小鼠胚胎长骨雌激素受体α、β蛋白表达的影响

【目的】研究蛇床子素对小鼠胚胎长骨雌激素受体α（estrogen receptorα,ERα）和骨雌激素受体β（estrogen receptorβ,ERβ）蛋白表达的影响,探讨其作用于骨组织的调控机制。【方法】取16 d胎龄雌性小鼠前肢尺骨,置BGJb培养基中孵育,经不同浓度蛇床子素（1×10^-4、1×10^-5、1×10^-6、1×10^-7mol/L）和雌酚酮（1×10^-6mol/L）作用48 h后,采用免疫组织化学染色方法观察ERα、ERβ在小鼠尺骨骺板静止区、增殖区和肥大区中的定位和表达情况,并通过图像分析系统测定骺板各区免疫反应阳性细胞数和阳性细胞面积。【结果】与对照组相比较,各浓度蛇床子素和雌酚酮组均能显著上调软骨骺板静止区、增殖区和肥大区ERα、ERβ蛋白的表达水平（P〈0.01）。在1×10^-7-1×10^-5mol/L区间内,随着蛇床子素浓度的升高,各区ERα、ERβ蛋白的表达水平显著升高（P〈0.01）。除1×10^-5mol/L组外,其它各浓度蛇床子素对ERα、ERβ蛋白的调控作用明显弱于雌酚酮组（P〈0.05）,1×10^-5mol/L蛇床子素组作用与雌酚酮组无统计学差异。【结论】蛇床子素对骨组织的作用可能与其上调长骨骺板中ERα及ERβ表达有关。     

醛固酮对h9c2心肌细胞缝隙连接蛋白43的影响

目的：观察醛固酮对h9c2心肌细胞缝隙连接蛋白43（Connexin 43,Cx43）表达的影响。方法：将h9c2心肌细胞随机分为对照组和实验组,实验组用不同浓度（1×10^-8、1×10^-6、1×10^-4 mol/L）醛固酮处理24 h后,用RT-PCR和Western Blot观察不同浓度醛固酮下h9c2心肌细胞Cx43蛋白和mRNA的变化。结果：1×10^-8 mol/L醛固酮组Cx43mRNA和蛋白表达含量较对照组增加;1×10^-6 mol/L和1×10^-4 mol/L组的Cx43蛋白表达含量较对照组减少,而Cx43mRNA较对照组无明显改变。结论：醛固酮可能是通过对表达Cx43的双重影响来参与心肌细胞间隙连接重构的。     

己烯雌酚对胎鼠海马神经干细胞增殖与分化的影响

目的:探讨己烯雌酚对胎鼠海马神经干细胞(neural stem cells,NSCs)的促增殖、分化作用及其机制。方法:取孕16天SD胎鼠海马NSCs培养,分别设空白对照组,己烯雌酚1×10-7 mol/L组、1×10-8 mol/L组、1×10-9 mol/L组,以及脑源性神经营养因子(BDNF)5×10-2 mg/L组;免疫荧光化学方法检测Nestin、神经元特异烯醇化酶及神经胶质酸性蛋白的表达,RT-PCR检测BDNF mRNA的含量。结果:不同剂量己烯雌酚处理各组神经球面积、积分光密度值、平均突起长度与平均突起数均增加,其中10-8 mol/L组海马NSC增殖与分化最明显,BDNF mRNA表达量亦最高(P<0.01)。结论:己烯雌酚对海马NSCs的增殖分化具有促进作用,且可能与上调BDNF的表达有关。     

血管紧张素Ⅱ对肾小管上皮细胞分泌纤连蛋白的影响

目的:观察血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对体外培养的肾小管上皮细胞分泌细胞外基质成分纤连蛋白的影响。方法:采用免疫印迹法(Westernblot)及细胞免疫荧光法检测10-6mol/LAngⅡ分别刺激肾小管上皮细胞6、12、24、48、72、96h,以及不同浓度(10-6、10-7、10-8mol/L) AngⅡ刺激96h时细胞纤连蛋白的表达。结果:10-6mol/LAngⅡ刺激体外培养的肾小管上皮细胞12h后纤连蛋白表达开始增加,72h达高峰。不同浓度的AngⅡ刺激96h后,纤连蛋白的表达均有增加,10-6mol/L增加最明显,10-7、10-8mol/L次之。结论:AngⅡ能使体外培养的肾小管上皮细胞分泌纤连蛋白增加,并具有时间和浓度依赖性。     

趋化因子Fractalkine在血管紧张素II诱导内皮细胞ICAM-1表达中的作用

目的 研究Fractalkine（FKN）在血管紧张素II（Ang II）诱导内皮细胞表达细胞间黏附分子-1（ICAM-1）中的作用.方法 取人脐静脉内皮细胞（HUVECs）培养,分别给予低、高浓度（10-7 mol/L,10-6 mol/L）Ang II干预12、24、48 h,采用MTT检测内皮细胞活性,Western blot检测ICAM-1和FKN蛋白表达;小RNA转染内皮细胞后,用高浓度Ang II培养24 h并检测各组细胞FKN mRNA表达及ICAM-1和FKN蛋白表达.结果 Ang II可降低HUVECs活性并促进ICAM-1及FKN蛋白表达,高浓度AngII对内皮细胞活性影响较大;FKN siRNA转染可显著抑制FKN mRNA表达,且在高浓度Ang II作用24 h后,被转染细胞的FKN mRNA表达量仍显著低于阴性对照＋Ang II组（P＜0.05）,且ICAM-1及FKN蛋白表达显著减少.结论 Ang II可降低内皮细胞活性并促进内皮细胞ICAM-1和FKN蛋白表达,趋化因子FKN介导了Ang II诱导的内皮细胞ICAM-1蛋白表达过程.