5b对人乳腺癌耐药细胞株MCF-7ADR的耐药逆转作用

目的研究板蓝根活性单体-5b逆转乳腺癌耐药株MCF-7/ADR细胞的作用及逆转机理。方法选取人乳腺癌MCF-7细胞及耐药株MCF-7/ADR细胞作为主要研究细胞,在2种细胞中加入活性单体-5b,采用MTT法观察活性单体-5b对多药耐药(MDR)逆转作用;采用FCM法观察阿霉素对2种细胞的抑制浓度及倍数。结果当活性单体-5b的剂量低于150μmol/L时,其对2种细胞无毒性作用;活性单体-5b能提高MCF-7/ADR细胞的凋亡率;活性单体-5b能增加阿霉素在体内的积累。结论活性单体-5b对MCF-7/ADR细胞的MDR具有一定的逆转作用,是一种有效的乳腺癌化疗增敏剂。     

白藜芦醇增加乳腺癌细胞对阿霉素化疗敏感作用研究

目的研究白藜芦醇对乳腺癌MDA-MB-231阿霉素(adriamycin,ADR)耐药细胞株化疗敏感性的影响。方法建立阿霉素耐药细胞株MDA-MB-231/ADR。MTT法检测白藜芦醇作用对MDA-MB-231、MDA-MB-231/ADR细胞阿霉素化疗敏感性的影响,统计半数细胞死亡药物浓度(IC50值)。流式细胞术检测白藜芦醇对阿霉素诱导MDA-MB-231/ADR细胞凋亡的影响,Western blot法检测Bcl-2、Bax、cleaved-caspase3、肝细胞生长因子受体CMet、P-糖蛋白(P-glycoportein,P-gp)的表达。结果成功建立阿霉素耐药株MDA-MB-231/ADR,其IC50值为8.79±0.96μg/ml,较MDA-MB-231细胞IC50值(0.24±0.03μg/ml)有显著差异,P0.01。5μM、15μM白藜芦醇对MDA-MB-231细胞阿霉素敏感性没有影响,但显著增强MDA-MB-231/ADR细胞阿霉素敏感性,15μM组IC50值下降为3.46±0.58μg/ml,有显著性差异,P0.01。5μM、15μM白藜芦醇均增加阿霉素诱导MDA-MB-231/ADR的细胞凋亡;15μM白藜芦醇处理组,Bcl-2表达显著降低,Bax、cleaved-caspase3表达显著升高。5μM、15μM白藜芦醇处理显著降低耐药基因C-Met、P-gp的表达。结论白藜芦醇增加阿霉素耐药株MDA-MB-231/ADR对阿霉素的敏感性,可能的作用机制为降低耐药基因C-Met、P-gp的表达。     

自噬相关基因Beclin1沉默对乳腺癌细胞阿霉素敏感性的影响研究

目的研究自噬沉默相关基因Beclin1对乳腺癌MDA-MB-231细胞阿霉素耐药的影响;方法建立阿霉素耐药乳腺癌细胞株,起名为MDA-MB-231/ADR,MTT法检测Beclin1基因沉默对MDA-MB-231/ADR细胞阿霉素化疗敏感性的影响,计算IC_(50)值。流式细胞术检测阿霉素诱导MDA-MB-231/ADR细胞凋亡,Western blot法检测Bcl-2、Bax、cleaved-caspase3、Beclin1、LC3I/II的表达;结果成功建立阿霉素耐药株MDA-MB-231/ADR,其IC_(50)值为(8.51±0.96)μg/ml,较MDA-MB-231细胞IC_(50)值(0.26±0.03)μg/ml升高,差异有统计学意义(P0.01)。沉默Beclin1基因增强MDA-MB-231/ADR细胞对阿霉素敏感性,IC_(50)值下降为(2.98±0.58)μg/ml,与si RNA-NC组相比,差异有统计学意义(P0.01)。Beclin1沉默抑制细胞自噬,Beclin1、LC3I/II的表达降低,差异有统计学意义(P0.05)。沉默Beclin1基因增加了阿霉素诱导MDA-MB-231/ADR的细胞凋亡,降低Bcl-2表达,升高Bax、cleaved-caspase3表达;结论 Beclin1基因沉默增加阿霉素耐药株MDA-MB-231/ADR对阿霉素的敏感性,其可能机制为抑制细胞自噬。     

人乳腺癌多耐药细胞株中ALDH1,P-gp及CD44v6的表达研究

目的:比较人乳腺癌亲代敏感株MCF-7和多耐药细胞株MCF-7/A中ALDH1,P-gp及CD44v6的表达差异,探讨多耐药与侵袭转移作用机制。方法:以阿霉素低浓度加量持续诱导法,建立人乳腺癌多耐药细胞模型株MCF-7/A,用ALDEFLUOR分析法检测乳腺癌干细胞功能性标志物ALDH1阳性细胞在亲代敏感株MCF-7与多耐药细胞株MCF-7/A中所占比例,Transwell侵袭实验论证乳腺癌胞耐药是否伴随相应侵袭转移能力的改变,免疫细胞化学染色及荧光定量PCR分析亲代敏感株MCF-7与多耐药细胞株MCF-7/A中MDR1(P-gp)和CD44V6的表达变化。结果:耐药细胞株MCF-7/A较亲代敏感株ALDH1阳性细胞比例数明显增高;耐药细胞株MCF-7/A穿膜细胞数明显多于敏感细胞株MCF-7;耐药细胞株MCF-7/A中P-gp和CD44v6表达均明显高于亲代敏感细胞株。结论:乳腺癌的多耐药不仅包含获得性耐药细胞比例增加,同时伴有肿瘤干细胞的富集造成的内在性耐药增加,耐药的乳腺癌细胞伴有侵袭能力增强。     

Twist及其相关调控基因在不同转移性人乳腺癌细胞中的差异表达

目的:观察不同转移潜能人乳腺癌细胞株中Twist及其相关调控基因mRNA表达的差异。方法:培养低侵袭性人乳腺癌细胞株MCF-7和高转移性人乳腺癌细胞株MDA-MB-435S,采用RT-PCR法检测两种细胞株中Twist、脆性组氨酸三联体(FHIT)、皮性钙黏附素(E-cadherin)、细胞凋亡相关基因Mcl-1、Bcl-2和Bax mRNA表达的差异。结果:MCF-7中FHIT、E-cadherin、Bax mRNA的表达显著高于MDA-MB-435S细胞,Twist mRNA在MDA-MB-435S细胞中的表达明显高于MCF-7,Mcl-1、Bcl-2 mRNA在两种细胞株中的表达无明显差异。结论:Twist、FHIT、E-cadherin、Bax mRNA表达差异可能与人乳腺癌细胞的不同转移潜能有关。     

靶向Twist基因逆转卵巢癌耐药细胞化疗敏感性的研究

目的探讨载体表达的小干扰RNA（siRNA）影响卵巢癌耐药细胞株Twist基因的表达、促进凋亡并逆转其阿霉素耐药的可行性。方法体外构建Twist小发卡状RNA（shRNA）的表达质粒,脂质体法介导将其转染入SKOV3／ADM细胞。采用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）检测TwistmRNA的表达;使用免疫细胞化学法（ICC）检测Twist蛋白的表达;使用四甲基偶氮唑蓝法（MTT）测定各组细胞对阿霉素的半数抑制浓度（ic50）;流式细胞术检测其对卵巢癌细胞凋亡的影响。结果TwistshRNA转染组细胞TwistmRNA的表达与其他两组相比明显减弱,Twist蛋白表达明显下调,差异均有统计学意义（P〈0．01）;阿霉素敏感性比正常对照组提高了约2．5倍;流式细胞仪显示阿霉素作用24h后,特异性转染组细胞周期分布发生明显改变,G0／G1期细胞比例增多,而S期细胞比例减少,凋亡率显著升高,差异有统计学意义（P〈O．05）。结论针对TWIST合成的siRNA能够有效地抑制TWISTmRNA和蛋白的表达,促进卵巢癌耐药细胞凋亡并能恢复其对阿霉素的敏感性。应用RNAi技术,能够逆转卵巢癌细胞对化疗药物的耐药性。     

去磷酸化RB蛋白表达状况对阿霉素诱导人乳腺癌细胞凋亡和抑制其增殖的关系

目的探讨去磷酸化RB蛋白表达状况对阿霉素(ADR)诱导人乳腺癌细胞(MCF-7/S)凋亡和抑制其增殖的影响。方法应用MTT比色法检测ADR对MCF-7/S细胞增殖抑制作用,同时应用末端标记(TUNEL)法测定ADR诱导MCF-7/S细胞凋亡程度。采用免疫细胞化学法检测去磷酸化RB蛋白的表达状况。结果ADR抑制MCF-7/S细胞增殖,呈剂量依赖性,半数抑制浓度(IC50)为0.128mg.L-1;ADR作用组MCF-7/S细胞的凋亡率及去磷酸化RB蛋白的表达量分别与对照组细胞相比明显增高。结论去磷酸化RB蛋白的表达量与ADR抑制MCF-7/S细胞增殖和诱导MCF-7/S细胞凋亡呈正相关。     

miR-200家族在乳腺癌中的表达及其临床意义

目的探讨miR-200家族成员在乳腺癌中的表达及其临床意义。方法实时定量PCR和原位杂交分析乳腺癌组织中miR-200家族5个成员的表达情况。单因素和多因素分析miR-200a、miR-200b和miR-200c表达与乳腺癌临床病理参数和预后之间的相关性。结果 miR-200a、miR-200b和miR-200c在乳腺癌组织中的表达明显低于正常乳腺上皮组织,差异有统计学意义(P0.01)。miR-200a和miR-200b低表达与乳腺癌分期更晚、分级更高有关,而miR-200c低表达仅与分期更晚有关。多元回归分析表明,miR-200a、miR-200b和miR-200c低表达与乳腺癌患者生存期更短有关(P0.01),miR-200a、miR-200b和miR-200c是乳腺癌患者预后的独立预测因子。结论 miR-200a、miR-200b和miR-200c表达下调能够促进肿瘤进展,是预测乳腺癌患者预后的可靠指标,miR-200a、miR-200b和miR-200c也具有成为乳腺癌靶向治疗靶点的潜力。     

槲皮素逆转人乳腺癌MCF - 7细胞阿霉素耐药及其相关机制的研究

目的 探讨槲皮素（quercetin,Que）逆转人乳腺癌MCF - 7细胞阿霉素（doxorubicin,Dox）耐药及其相关机制。方法 用不同浓度的槲皮素处理MCF - 7细胞及其阿霉素耐药的MCF - 7/dox细胞,MTT法筛选无毒剂量的槲皮素用于实验。用无毒剂量的槲皮素联合不同浓度的阿霉素处理MCF - 7和MCF - 7 /dox细胞,MTT法检测细胞增殖率,Transwell法检测细胞侵袭能力,流式细胞法检测细胞凋亡率和人乳腺癌干细胞表面标志物CD44+/CD24 - /low的表达, Western - blot检测人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源的基因（Phosphatase and tensin homologue deleted on chromosome 10 ,PTEN）及磷酸化的丝氨酸/苏氨酸激酶（Phosphorylated serine/threonine kinases,p - AKT）的表达。结果 与MCF - 7细胞组相比较,MCF - 7/dox细胞组的乳腺癌干细胞表面标志物CD44+/CD24 - /low表达增高(P＜0.01),且PTEN的表达降低、p - AKT的表达升高(P＜0.05);与单用阿霉素组相比较,阿霉素与槲皮素联合应用能抑制细胞增殖和侵袭、诱导细胞凋亡、杀死肿瘤干细胞,并能上调PTEN、下调p - AKT的表达。结论 槲皮素能有效逆转人乳腺癌MCF - 7细胞阿霉素耐药,其机制可能与槲皮素协同阿霉素杀死人乳腺癌干细胞,调控PTEN/AKT信号通路有关。     

Twist、E—cadherin及Vimentin在表达及意义宫颈鳞状上皮癌变的

目的探讨宫颈鳞状上皮癌变过程中Twist、E-cadherin、Vimentin的表达规律及临床意义。方法以慢性宫颈炎为对照,检测宫颈上皮内瘤变（CIN）及宫颈鳞状细胞癌组织标本中Twist（原位杂交）、E-cadherin、Vimentin（SABC免疫组化法）的表达情况,分析其相关性。结果（1）慢性宫颈炎、CINI、CINII、CINIU及宫颈癌组中：Twist的阳性率分别为10．O％、28．1％、29．6％、42．9％、64．3％,其中Twist在宫颈鳞癌的表达均明显高于其他组（P〈0．05）。E-cadherin、Vimentin的阳性率分别为80．O％、68．8％、55．6％、51．4％、39．3％和0、6．3％、7．4％、31．4％、32．1％,其中两者在宫颈鳞癌组、CINⅢ组中的表达与慢性宫颈炎组比较差异均有统计学意义（P〈0．05）,（2）分析全部CIN及宫颈癌病例,Twist的表达与E-cadherin呈负相关（r=-0．37,P〈0．01）,与Vimentin呈正相关（r：0．23,P〈0．05）。结论宫颈组织中Twist的异常表达与宫颈鳞状上皮癌变发生关系密切,Twist可能通过调控E-cadherin、Vimentin的表达参与宫颈鳞状细胞癌的发生。     

2004-2005年广东省妇女乳腺癌和宫颈癌患者死亡分析

目的分析广东省第3次死因回顾性调查样本中妇女乳腺癌和宫颈癌患者死亡流行特征,为制定降低两癌死亡的策略提供科学依据。方法收集广东省第3次死因回顾性抽样调查数据,采用描述性流行病学分析方法对乳腺癌、宫颈癌死亡率、死亡构成等指标进行分析。结果本次调查样本中女性7457302人,其中城市2220483人,农村5 236 819人。乳腺癌死亡率为5．5／10万,标化率为5．3／10万,城市标化死亡率（5．9／10万）高于农村（5．0／10万）（P〈0．01）;城市女性乳腺癌死亡率随着年龄的增加而升高,以≥85岁年龄组最高（50．1／10万）（P〈0．01）;农村女性乳腺癌死亡率则以45～54岁年龄组最高（16．7／10万）（P〈0．01）。宫颈癌死亡率为3．2／10万,标化率为2．9／10万,城市标化死亡率（2．3／10万）低于农村（3．3／10万）（P〈0．05）;城市女性宫颈癌死亡率以≥85岁年龄组最高（30．0／10万）（P〈0．01）,农村女性宫颈癌死亡率则是随着年龄的增加而升高（P〈0．01）。结论在广东省妇女两癌死亡的防制中,女性乳腺癌以城市中青年为重点人群,宫颈癌以农村中青年为重点人群;建议加强妇女两癌防制的健康教育,针对重点人群开展大规模的肿瘤筛查,遏制其死亡率的增长。     

炎性乳腺癌新辅助化疗疗效和影响因素分析

目的探讨炎性乳腺癌（IBC）的分子生物学特点与新辅助化疗疗效的关系及影响化疗疗效的相关因素。方法收集2005年1月至2013年6月收治的103例术前化疗的IBC患者临床资料,应用免疫组织化学方法检测乳腺癌组织的雌激素受体（ER）、孕激素受体（PR）、人表皮生长因子受体2（HER-2）及E钙黏蛋白（E—cadherin）的表达,评价IBC新辅助化疗的疗效。结果103例IBC患者ER阴性48例,PR阴性51例,HER．2阳性45例,E．cadherin阳性66例。总体化疗有效率为72．8％（75／103）,联合紫杉类为主化疗方案的患者（紫杉组,62例）化疗有效率显著高于蒽环类为主化疗方案的患者（蒽环组,41例）[80．6％（50／62）比61．0％（25／41）],差异有统计学意义（P〈0．05）;ER阴性、PR阴性、E—cadherin阴性的患者化疗有效率均显著高于其对应的ER阳性、PR阳性、E—cadherin阳性的患者[83．3％（40／48）比63．6％（35／55）、82．4％（42／51）比63．5％（33／52）、83.8％（31／37）比66．7％（44／66）],差异有统计学意义（P〈0．05）;紫杉组E—cadherin阳性表达的患者化疗有效率显著高于蒽环组[77．5％（31／40）比50．0％（13／26）],差异有统计学意义（P〈0．05）;HER-2的表达与炎性乳腺癌患者的化疗疗效无相关性（P〉0．05）。结论ER、PR及E—cadherin阴性的患者对IBC患者化疗敏感,E．cadherin的阳性表达可能是影响IBC患者化疗耐药的重要因素,选择含紫杉类药物联合化疗方案有助于提高E．cadherin阳性IBC患者的化疗疗效。     

乳腺癌化疗患者生活质量调查及影响因素分析

目的了解和分析乳腺癌化疗患者的生活质量。方法采用自填问卷和中国癌症患者化学生物治疗生活质量量表（QLQ-CCC）对98例接受化疗的乳腺癌患者进行调查,了解他们的生活质量及影响因素。结果化疗后乳腺癌患者生活质量总分提高,与化疗前比较差异有统计学意义（P〈0．01）。化疗后乳腺癌患者在生理方面、精神及心理方面、社会方面和其他方面评分都有所改善,差异有统计学意义（P〈0．01或〈0．05）。年龄、临床分期对化疗中和化疗后患者的生活质量影响显著（p〈0．01）;文化程度对化疗后患者的生活质量有显著影响（P〈0．01）。结论乳腺癌患者化疗过程中生活质量下降,化疗后临床分期早的患者生活质量优于临床分期晚的患者。     

膳食因素与乳腺癌患病风险的病例对照研究

目的探讨青岛地区膳食因素与乳腺癌患病风险的关系,为乳腺癌的病因研究及一级预防提供科学的理论依据。方法采用病例对照研究设计,通过半定量食物频率表法,对200例乳腺癌患者和200例对照进行问卷调查,调查内容包括基本情况和膳食情况两大部分。结果经单因素和多因素非条件logistic回归分析,结果显示,食物种类中,与低水平蔬菜摄入量相比,较高水平的蔬菜摄入量可能降低乳腺癌的患病风险（OR=0．429,95％CI：0．223～0．827,P=0．012）;与低水平红肉摄入量相比,较高水平的红肉摄入量可能增加乳腺癌的患病风险（OR=2．185,95％CI：1．077～4．431,P=0．030）。膳食营养素中,与低水平脂肪摄入量相比,中、高及较高水平的脂肪摄入量均可能增加乳腺癌的患病风险,且随着脂肪摄入量增多,其OR值也递增,且差异均有统计学意义（OR值分别为2．478、2．533、2．799,95％CI分别为1．245～4．933、1．130～5．675、1．449～5．470,P〈0．05,P〈0．01）;与低水平蛋白质摄入量相比,中、高及较高水平的蛋白质摄入量均可能增加乳腺癌的患病风险（OR值分别为3．484、3．860、3．467,95％CI分别为1．872～6．848、1．972～7．554、1．778～6．762,P〈0．01）;而与低水平铁摄入量相比,中、高及较高水平的铁则可能降低乳腺癌的患病风险（OR值分别为0．528、0．479、0．340,95％CI分别为0．297～0．939、0．241～0．953、0．153～0．758,P〈0．05,P〈0．01）;与低水平视黄醇当量相比,中、高及较高水平视黄醇当量则可能降低乳腺癌的患病风险（OR值分别为0．428、0．409、0．175,95％CI分别为0．227～0．806、0．217～0．769、0．080。0．385,P〈0．01）。结论建议调整饮食结构,增加蔬菜类摄入量,减少肉类摄入量。     

新辅助化疗前后乳腺癌患者凝血相关指标变化与化疗疗效的关系研究

目的 探讨新辅助化疗前后乳腺癌患者凝血相关指标变化与化疗疗效的关系.方法 选取90例乳腺癌患者,分别于新辅助化疗（TAC方案）前后检测凝血相关指标的变化,并分析其与化疗疗效的关系.结果 化疗后纤维蛋白原（Fib）、血小板计数（PLT）较化疗前显著升高[（3.42±0.50） g/L比（2.44±0.46） g/L、（267.83±61.34）×109/L比（174.18±48.65）×109/L],D-二聚体（D-D）较化疗前显著降低[（176.32±101.41） mg/L比（214.55±106.34） mg/L],差异均有统计学意义（P＜0.01）.其余指标化疗前后比较差异无统计学意义（P＞0.05）.化疗后D-D降低68例,其中化疗有效53例（77.9％,53/68）,无效15例（22.1％,15/68）;升高22例,其中化疗有效9例（40.9％,9/22）,无效13例（59.1％,13/22）,比较差异有统计学意义（P=0.000）.化疗后PLT降低10例,其中化疗有效3例（3/10）,无效7例（7/10）;升高80例,其中化疗有效59例（73.8％,59/80）,无效21例（26.3％,21/80）,比较差异有统计学意义（P=0.044）.结论 乳腺癌患者容易出现凝血相关指标的异常,化疗后可能导致Fib、PLT升高,D-D降低,因此化疗期间有必要监测Fib、PLT、D-D水平.D-D和PLT水平是乳腺癌患者新辅助化疗疗效评价的有效指标.     

Sema4D和HER-2在乳腺癌组织中的表达及临床意义

目的探讨Sema4D和人类表皮生长因子受体2（HER-2）在乳腺癌组织中的表达及临床意义。方法采用免疫组织化学sP法检测110例乳腺癌组织中Sema4D和HER-2的表达,并检测肿瘤微淋巴管密度（Microlymphtic vessel density,MLVD）。结果乳腺癌组织中Sema4D和HER-2蛋白的阳性表达率分别为71．82％（79／110）和33．64％（37／110）,与对照组比较差异有统计学意义（P〈0．01）：淋巴结转移阳性组的Sema4D阳性表达率和MLVD值显著高于淋巴结转移阴性组（P〈0．01）;Sema4D和HER-2阳性表达与组织学分级、TNM分期、淋巴结转移及ER表达状态显著相关（P〈0．05）,而与肿瘤大小及PR表达状态无关（P〉0．05）。相关分析结果显示Sema4D与HER-2表达呈正相关（r=0．535,P〈0．01）;单因素生存分析显示,Sema4D高表达组的5年生存率（74．19％）高于低表达组（53．16％）,其差异有统计学意义（P〈0．05）。结论Sema4D可能对乳腺癌的发生、发展起重要作用。     

三羟异黄酮对乳腺癌异种移植瘤血管生成影响

目的 探讨三羟异黄酮(genlstein)对原癌基因(HER-2／neu)高表达乳腺癌血管形成的影响及其与血管内皮生长因子(VEGF)的关系。方法 应用基因转染技术建立HER—2／neu高表达的乳腺癌细胞(MCF—7／HER—2)。免疫缺陷裸鼠(BALB／c)皮下接种乳腺癌(MCF—7和MCF—7／HER—2)细胞，其中接种MCF—7／HER—2细胞的裸鼠随机分为3组：对照组；genistein处理组：HER—2／neu抗体处理组。应用免疫组化法观察移植瘤内微血管密度(microvessel density，MVD)和VEGF的表达变化。结果 MCF—7／HER—2移植瘤与MCF—7移植瘤相比血管密度较大。VEGF表达增强；MCF—7／HER—2移植瘤经genistein和HER—2／neu抗体处理后。移植瘤的血管密度减少，VEGF表达降低。结论 HER—2／neu高表达能促进乳腺癌的血管生成，genistein可能通过下调VEGF的表达从而抑制HER—2／neu高表达乳腺癌的血管生成。     

MRI动态增强时间强度曲线与乳腺癌微血管密度的相关性研究

目的探讨MRI动态增强在乳腺癌检测中的应用。方法对80例乳腺癌疑似患者进行MRI平扫及动态增强扫描和病理标本组织学检测,绘制出ROI的DCE—MRI时间信号强度曲线（TIC）,测量、计算病灶动态强化参数和肿瘤微血管密度（MVD）。结果（1）80例乳腺癌疑似患者经MRI扫描,发现80例患者（81处病灶）TIC曲线呈廓清型。（2）80例患者的DCE—MRI扫描结果与组织病理学诊断结果一致性较高,呈正相关（r=0．935,P〈0．05）;（3）乳腺癌癌组织部分微血管密度（MVD）计数为34．74±12．05,明显高于正常组织18．36±3．16（t=6．47,P〈0．05）;（4）80例乳腺癌DCE-MRI扫描最大增强线形斜率ss值为2．38±0．40,增强峰值PH为（619．22±123．53）HU,与MVD呈正相关（r=0．72,P〈0．05;r=0．66,P〈0．05）;信号强度峰值时间Tpeak为（56．10±10．13）t／s,与MVD呈负相关（r=-0．53,P〈0．05）。结论DCE—MRI参数能间接反映乳腺癌血管生成状况．有望成为非创伤性早期发现和诊断乳腺癌的萤耍手段。