适用于基因转染的细胞培养板的研制

目的:研制用于基因转染的细胞培养板.方法:用0.2%的明胶稀释LPEI, BPEI, Superfect,Lipofectamine 2000等转染试剂并将它们固定在96孔细胞培养板上.以绿色荧光蛋白(GFP)基因和荧光素酶基因(Luciferase)为报告基因检测培养板的转染效率,用MTT法检测转染24 h后的细胞毒性,将LPEI包被的培养板放置在37℃环境下进行稳定性研究.结果:所有试剂包被的培养板均有一定的基因转染效率,聚合物类试剂的效率高于脂质体类的Lipofectamine 2000.其中,LPEI包被的培养板的转染效率最高、细胞毒性最低.当LPEI的包被量为3.2 μg/孔时,293细胞在转染24 h后的荧光素酶活性达3.0×108 RLU/mg,细胞存活率为85%左右.LPEI包被的培养板在37℃保温14 d后基因转染效率无明显变化.结论:LPEI包被的转染平板具有转染效率高、细胞毒性低、稳定性好的优点.该平板具有操作简便、节省时间的优点,可用于进行大规模的基因转染研究.     

动物狂犬病中和性抗体竞争ELISA检测试剂盒的研制

目的研制一种能够定量检测狂犬病血清中和抗体的直接竞争ELISA试剂盒,以满足我国动物狂犬病免疫监测的需要。方法以表达狂犬病病毒糖蛋白的真核细胞培养物为包被抗原,捕获抗体为具有病毒中和活性的酶标单克隆抗体,标准血清为经荧光抗体病毒中和试验（FAVN）准确定量的犬血清。结果本试剂盒的最低检测限为0.25U/ml,线性检测范围为0.25～8U/ml,标准曲线的平均板内变异系数为2.8%,板间平均变异系数为4.9%,在4℃下至少可以存放6个月。结论本研究提供了一种操作安全、定量准确的动物狂犬病中和抗体检测试剂盒,具有良好的实际应用前景。     

微孔杂交快速检测主要黄病毒方法的建立

目的建立特异、敏感、实用的登革病毒Ⅰ-Ⅳ型、流行性乙型脑炎病毒及黄热病毒检测及分型方法。方法在系统分析上述病毒基因组序列基础上,分别设计针对6种病毒的特异性包被探针,扩增、克隆、测序后包被聚乙烯微孔板。随后设计检测用PCR引物,并于引物5′端标记生物素,对待检样品进行扩增后用检测探针进行微孔杂交(PCR-ELISA)反应,并对包被DNA浓度、包被时间、杂交温度、杂交时间等反应条件进行优化。结果初步建立了微孔杂交快速检测上述病毒的方法,试验结果直观,阳性标本吸光度(A)值在0.5以上,阴性结果A值在0.1以下,S/N值在10.0以上。结论PCR-ELISA方法敏感、特异,为上述病毒的快速诊断提供了新的方法。     

不同种类细胞外基质材料对胰岛细胞活力和功能的影响

目的　比较在不同细胞外基质材料上培养胰岛细胞对胰岛细胞活力和功能的影响。方法　采用胶原酶Ⅴ型消化法 ,经Fi coll密度梯度离心法纯化获得的胰岛细胞 ,按 10 0 0胰岛当量单位 /ml密度分别在I型胶原、I型和Ⅳ型胶原、Matrigel3种不同细胞外基质材料包被的 2 4孔培养板上培养 ,以不包被组为对照。培养 7天时进行丫啶橙 碘化丙啶 (AO PI)染色。放免法检测培养第 2、4、6、8、10天时胰岛素基础分泌水平及培养 4天时胰岛素刺激分泌水平。结果　AO PI染色显示 :Matrigel包被组和I型与Ⅳ型胶原混合包被组胰岛细胞的活力优于I型胶原包被组和对照组 ,I型胶原包被组的胰岛细胞活力优于对照组 ,Matrigel包被组的胰岛细胞活力最好。糖敏感性和分泌特性检测表明 :Matrigel包被组胰岛细胞的糖敏感性和胰岛素分泌活性最好。Matrigel包被组和I型与Ⅳ型混合胶原包被组中培养的胰岛细胞胰岛素刺激分泌水平优于对照组 (P <0 0 5 ) ,而Ⅰ型胶原包被组和对照组比较差异无统计学意义(P >0 0 5 )。结论　将胰岛细胞在Matrigel和I型与Ⅳ型混合胶原上培养能够改善胰岛细胞的活力和功能。     

人可溶性OX40L蛋白ELISA检测试剂盒的研制及其在自身免疫性疾病诊断中的应用

目的研制特异性检测人可溶性OX40L蛋白（sOX40L）的ELISA试剂盒,探讨其在自身免疫性疾病临床诊断中的应用。方法利用两株识别不同抗原表位的鼠抗人OX40L单克隆抗体1G1和4C12分别作为包被抗体和检测抗体,采用双抗体酶联免疫夹心法研制特异性检测人sOX40L的ELISA方法,并对其稳定性、精确性和特异性进行分析。结果①建立的检测人sOX40L酶联免疫试剂盒在抗原浓度为3.91～250ng/ml范围内有良好的线性关系,并具有良好的稳定性、较高的准确性和特异性。②利用该ELISA方法检测到sOX40L蛋白在肾病综合征和Graves’病患者血清中表达水平均显著高于健康对照组。结论成功建立了检测人sOX40L蛋白的ELISA试剂盒,应用该方法检测到sOX40L在多种自身免疫病患者血清中异常高表达。该试剂盒在OX40L分子基础研究以及自身免疫病的临床诊断方面具有潜在的应用价值。     

纤维结合素对HBV感染原代培养人胎肝细胞的影响

目的 研究纤维结合素对HBV体外感染原代培养人胎肝细胞的影响。方法 用纤维结合素包被培养皿,利用从HBV阳性血清纯化的HBV病毒颗粒感染体外培养的人胎肝细胞。应用ELISA法检测培养上清中HBsAg和HBeAg,免疫组化法检测细胞核中HBcAg,荧光定量。PCR法检测细胞中HBV DNA,巢式PCR法检测细胞中cccDNA,并和未包被的胎肝细胞进行对照。结果 未包被时上清中HBsAg和HBeAg于第5日出现阳性,包被后自第1日起出现阳性;未包被时胎肝细胞核中HPcAg于感染后第2日起出现阳性,阳性率为10％～15％,包被后自第1日起出现阳性,阳性率达90％以上;未包被时细胞中HBV DNA定量自第4日起检出,包被后自第1日起检出;未包被时细胞中HBVcccDNA自第8日出现阳性,包被后自第2日起出现阳性。结论 纤维结合素包被可以促进HBV体外感染原代培养人胎肝细胞,使HBV感染胎肝细胞的时间提前,感染细胞的数量增加。     

整合素ανβ3—RGDS位点相互作用介导纤维蛋白所致的肾小球 …

观察了体外培养的人类肾小球内皮细胞在纤维蛋白凝胶上的生长状态,以及在ＧＥＣ表面覆盖纤维蛋白凝胶对ＧＥＣ表型的影响并进行了干预试验。结果发现,ＧＥＣ在纤维蛋白凝胶包被的细胞培养板上培养可以自发地形成典型的血管样结构。αγβ３整合素单抗２３Ｃ６可以显著促进纤维蛋白介导的血管样结构的形成,而精氨酰－甘氨酰－天门冬氨酰－丝氨酸四肽,放线菌酮,放线菌素Ｄ对血管样结构的形成具有抑制作用。     

麻疹IgM EIA检测试剂盒的研制

 目的 研制检测麻疹IgM抗体的酶联免疫(EIA)试剂盒.方法 以经超滤、PEG沉淀和蔗糖密度梯度超速离心纯化后的沪191株麻疹病毒为包被抗原,经试验确定EIA检测的最佳反应条件,最终建立麻疹病毒IgM EIA检测试剂盒,并与HUMAN麻疹IgM EIA检测试剂盒作比较.结果 经Western-blot证明,纯化后沪191株麻疹病毒特异性符合要求.以该纯化抗原制备的EIA检测试剂盒具有良好的重复性(CV为4.76%～11.96%).4℃放置6个月、37℃放置3 d,该试剂的灵敏度不变,说明其具有良好的稳定性.与HUMAN试剂盒相比,该试剂盒的灵敏度为94.12%,特异度为92.31%,一致性为93.91%.结论 沪191麻疹IgM诊断试剂可以正确反应麻疹病毒的感染情况,可以作为一种可靠、简便、快速诊断麻疹病毒感染的实验室方法.     

MR靶向对比剂前体——VEGF165-适配体与VEGF165体外结合实验研究

目的应用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测MR靶向对比剂前体——血管内皮生长因子165-适配体(VEGF165-aptamer)与VEGF165的体外结合能力,以了解其对VEGF的靶向性。方法实验组采用亲和素96孔酶标板,包被生物素化VEGF165-aptamer,设置递减的浓度梯度(共9组)和空白对照组,采用组间方差分析。结果实验组包被生物素化VEGF165-aptamer浓度在50～0.78pmol/μL时,实验组与空白组及实验各相邻组间差异有统计学意义(P<0.05);实验组包被浓度为0.39、0.195pmol/μL时,两组与空白组间及两组间差异均无统计学意义(P>0.05)。结论采用ELISA检测技术验证了VEGF165-aptamer与VEGF165间的体外结合能力,其有效最低小包被浓度为0.78pmol/μL,VEGF165-aptamer对VEGF165有良好的靶向性。     

HIV—1多表位膜蛋白在E.coli中的表达及在血清检测中的应用

目的：获得具有较多保守抗原表位的ＨＩＶ－１膜重组抗原，提高ＨＩＶ筛选ＥＬＩＳＡ试剂的质量。方法：利用分子克隆与ＰＣＲ方法，获得了新的ＨＩＶ－１膜重组抗原的基因克隆，编码ｇｐ１２０Ｃ端亲水区３７个氨基酸残基（ｅｎｖ４８２～５１８）以及ｇｐ４１膜外部分的１２８个氨基酸残基（ｅｎｖ５４８～６７５）。将该基因克隆到ｐＧＥＭＥＸ－１载体上融合表达，表达蛋白经纯化后，以１μｇ／ｍｌ的浓度包被ＥＬＩＳＡ板，用来     

憎水涂层多孔板对水升华器散热性能影响的实验研究

目的 探讨水升华器用憎水涂层多孔板的实现方法，并对所研制的憎水涂层多孔板进行实验研究。方法 利用Teflon溶液和特制的双疏涂层溶液对多孔板进行憎水涂层处理，并对所研制的憎水涂层多孔板进行物理特性测试。重新设计了水升华器实验件，对涂覆憎水涂层的多孔板、对水升华器散热性能的影响进行了实验研究。结果 憎水涂层多孔板的水滞留能力显著提高，但其渗透压降也不同程度地增加。两种涂层板的散热性能有所不同。采用双疏涂层溶液涂覆的多孔板相对好一些。结论 在对Teflon和双疏涂层溶液的涂覆参数及工艺进行优化后，憎水涂层多孔板可以提高水升华器的工作性能。     

双夹心酶联免疫法检测生物样品中的人源化抗体MIL50

目的：建立酶联免疫吸附分析方法（ ELISA ）检测待测样品中的人源化抗体MIL50。方法用原核表达的重组蓖麻毒素（ ricin） A链（ RTA）突变体（ RiVax）为包被抗原，与辣根过氧化物酶（ HRP）标记的羊抗人IgG建立的夹心ELISA，检测生物样品中的人源化抗体MIL50。结果以蓖麻毒素和RiVax包被抗原，ELISA检测MIL50的结果显示，RiVax可与MIL50特异性结合，结合能力不低于全毒素蛋白，可以用于MIL50的定量分析。 RiVax的包被浓度为3 mg/L，对于溶解于含有吐温20（Tween 20）磷酸缓冲液（PBST）中的MIL50的检测灵敏度可达0．030 mg/L；与PBST样品相比较，含有同样浓度MIL50的大鼠血清ELISA的阳性结果明显减弱，不同的大鼠组织匀浆对于MIL50的检测有不同程度的干扰。结论夹心ELISA能够有效地用于人源化蓖麻毒素抗体MIL50的检测分析。     

甲氨蝶呤口腔崩解片的制备及质量标准研究

目的 研究甲氨蝶呤口腔崩解片的质量控制方法.方法 以崩解时限为指标,用正交试验筛选片芯处方,并采用高效液相色谱法检测制备的甲氨蝶呤口腔崩解片的含量及降解产物.结果 本工艺制备的甲氨蝶呤口腔崩解片稳定性良好,其性状、溶出度、含量及相关物质检查均符合2005版药典规定.结论 制定的甲氨蝶呤口腔崩解片的控制标准,能够全面反映该制剂的质量,方法简便、可行.     

挤出-滚圆法制备盐酸文拉法辛缓释胶囊及体外释放性考察

目的制备盐酸文拉法辛缓释胶囊并考察其体外释药特性。方法采用挤出-滚圆法制备盐酸文拉法辛素丸,采用Eudragit NE30D水分散体作为成膜材料,流化床底喷法对素丸进行包衣,单因素考察对处方和工艺进行筛选和优化。结果挤出-滚圆法制备的丸芯粒度分布16～30目,缓释包衣增重为22%～30%时,与上市品(怡诺思)释放速率基本一致,4种包衣增重的f2值分别为68、78、71和50。结论该方法制备的盐酸文拉法辛缓释胶囊处方和制备工艺可靠,重现性好。     

粉刺净胶囊剂质量控制研究

采用薄层色谱法对制剂中的大黄、赤芍进行了定性鉴别 ;用消化—配位滴定法对硫酸锌进行了含量测定 ,方法简便 ,专属性及重现性好 ,可作为该制剂的质量控制指标。     

Dual-lumen catheters: Quality control tests for radiopacity

A protocol utilizing a single-point densitometer was developed for the quality control (Q.C.) of the radiopacity of dual-lumen radiographic catheters where x-rays generated at 80 kVp are typically used. Catheter contrast, defined as the difference between catheter radiopacity and background optical density (O.D.) when an aluminum plate is imaged, forms the basic Q.C. parameter. When a given catheter is repeatedly measured, catheter contrast varies with a standard deviation of 0.013 O.D. units. The effects of minor background O.D. variations on contrast are significant, but empirically correctable. A variation in measured contrast of approx. 0.01 O.D. units is observed per 10 kVp energy variation. Aluminum plate thickness has a significant effect on the results; however, other details of the protocol geometry are less important. Variations due to catheter orientation were examined and imaging of packaged catheters was demonstrated.     

CR在传统口腔曲面断层摄影中的探索和改进

目的：介绍传统口腔全景机获得数字化影像的一种简便和实用的方法,并探讨其应用的临床价值。方法：利用现有的岛津曲面断层机设备,自制盛装IP板的特制软皮套载体,在摄影时用它把IP板的软和IP板盒的硬进行互相转化,摄影完后用西门子数字成像处理系统对已摄影好的IP板进行扫描,再用Sony相机打印,从而得到口腔全景数字化影像。结果：改进技术后得到了高质量的数字化影像,随机搜集200例影像资料,进行质量评比和统计分析,其优片率达97%以上。结论：此技术可获得与其它CR一样优点众多的口腔曲面全景数字化影像,可与医院设备支持匹配,合理优化资源,且具有动态范围调节灵活、投资小、收效大等优点。     

Using oral microbial DNA analysis to identify expirated bloodspatter

Distinguishing expirated bloodstains (blood forced by airflow out of the nose, mouth or a chest wound) from impact spatter (blood from gunshots, explosives, blunt force trauma and/or machinery accidents) is an important challenge in forensic science. Streptococcal bacteria are only found in the human mouth and saliva. This study developed a polymerase chain reaction (PCR) method that detects DNA from these bacteria as a sensitive tool to detect the presence of saliva. The PCR method was very specific to human oral streptococci, with no PCR product being made from human DNA or DNA from other microbes that were tested. It was also very sensitive, detecting as little as 60 fg of target DNA. The PCR amplification gave product with 99 out of 100 saliva samples tested. PCR was not inhibited by the presence of blood and could detect target DNA in expirated bloodstains in a range of materials and for up to 92 days after deposit on cardboard or cotton fabric. In a blind trial, the PCR method was able to distinguish three mock forensic samples that contained expirated blood from four that did not. Our data show that bacteria present in the oral cavity can be detected in bloodstains that contain saliva and therefore can potentially be used as a marker in forensic work to distinguish mouth-expirated bloodstains from other types of bloodstains.     

A phantom for dose-image quality optimization in chest radiography

Optimization in chest radiography requires evaluation of patient dose and image quality. This study is aimed at proposing a simple geometrical phantom that realistically simulates the important anatomical regions of the thorax. For this purpose, the standard LucAl chest phantom is modified by adding an "anthropomorphic" insert and image quality test plate. Different test objects are arranged on the plate in three important anatomical areas; lung, cardiac, and subdiaphragmal regions. The aim is to simultaneously find two types of image quality index, objective and subjective, which can be used to compare different images in order to select the better image. Two objective indices are proposed, areal contrast index DeltaC(a) and scatter fraction P(s) and two subjectively estimated, a low contrast visualization index P(low) and a high contrast visualization index P(high). To demonstrate the potential of this phantom method it was applied to an X-ray unit to find the optical film density that ensures optimal visualization in different anatomical areas. It was found for the X-ray system under investigation that the automatic exposure control could be set to produce an optical density of about 1.8 in the lung field. The reported method is easily implemented in any clinical situation where optimization of chest radiography is needed.     

蚓激酶基因在真核细胞COS-7中的表达

目的：为了实现蚓激酶基因片段F-3，F-5在真核细胞COS-7中的表达，获得具有生物学活性的重组蚓激酶蛋白。方法：将F-3，F-5与分泌表达载体pcDNA3，1( )连接，构建重组表达质粒pcDNA-3和pcDNA-5，利用COS-7细胞进行基因F-3和F-5的瞬时表达；纤维蛋白平板法对培养液上清进行活性检测。结果：蚓激酶基因片段F-3，F-5在真核细胞COS-7中实现了表达；SDS-PAGE显示蛋白质条带，纤维蛋白平板法检测培养液上清有明显的纤溶活性。结论：蚓激酶基因片段F-3，F-5可在真核细胞COS-7中分泌表达，表达产物具有一定的纤溶活性。