实时RT-PCR定量检测前列腺癌患者外周血DD3 mRNA及其临床意义

目的探讨前列腺癌（PCA）患者外周血DD3mRNA的检测方法及其临床意义。方法建立SYBRGreenⅠ实时RT-PCR定量检测DD3mRNA,分别检测39例不同分期PCA患者（PCA组）、32例前列腺良性增生（BPH组）患者和26名健康男性（健康组）外周血中DD3mRNA含量,并进行对比分析。结果建立的SYBR Green实时RT-PCR方法最少可检测到10拷贝的核酸,在原始模板101-107拷贝范围内,CT值与起始模板浓度具有良好的线性关系;扩增后仅有的溶解曲线峰显示很好的特异性;批间变异系数范围为6.0%～14.8%。健康组DD3mRNA均为阴性,27例BPH组患者中4例结果检测在101数量级,而39例PCA组中26例阳性。PCA组未治疗患者和去势治疗患者DD3mRNA阳性率及定量值比较差异均有统计学意义（P〈0.01）,PCA组无骨转移患者和骨转移患者阳性率和定量值比较差异也均有统计学意义（P〈0.05）。结论基于双链嵌合染料SYBRGreen建立的RT-PCR定量检测DD3mRNA方法具有敏感性高、线性检测范围广、特异性强及重复性较好的特点。外周血DD3mRNA的丰度与前列腺癌的发生、发展及转归都有密切关系。     

前列腺癌患者前列腺癌基因3的表达

目的评价前列腺癌基因3（PCA3）在前列腺癌诊断中的临床应用价值。方法选取我院2009年11月~2010年11月收治的30例前列腺癌（前列腺癌组）、22例前列腺增生（前列腺增生组）患者及12例健康男性（对照组）,采用逆转录聚合酶链式反应方法检测其外周血中PCA3 mRNA表达情况。结果对照组及前列腺增生组外周血标本中未见PCA3 mRNA阳性表达,而前列腺癌组患者外周血标本中PCA3 mRNA阳性率为99.3%（28/30）,差异有高度统计学意义（χ2=65.283,P〈0.01）。结论前列腺癌中PCA3 mRNA有明显组织特异性的阳性表达,有望成为前列腺癌诊断的新肿瘤标志物。     

尿液中PCA3mRNA和融合基因TMPRSS2：ERGmRNA的检测在前列腺癌早期临床诊断中的应用

目的研究前列腺按摩后尿液中PCA3mRNA联合融合基因TMPRSS2：ERG亚型T1E4mRNA的定量检测在早期前列腺癌临床诊断中的应用价值。方法收集前列腺癌（PCa）患者53例和前列腺增生（BPH）患者37例,收集前列腺按摩后尿液,离心取细胞沉淀物,提取总RNA,用实时荧光定量RT—PCR的方法检测PSAmRNA、PCA3mRNA和T1E4mRNA的含量,以PSAmRNA来校正尿液中的前列腺癌细胞。以PCA3mRNA／PSAmRNA表示PCA3mRNA的含量,以T1E4mRNA／PSAmRNA表示融合基因T1E4mRNA的含量。用ROC曲线对T1E4mRNA及PCA3mRNA诊断PCa的性能进行分析。结果尿T1E4mR．NA／PSAmRNA比值诊断PCa的ROC曲线下面积（AUC）为0．802（95％CI：0．709～0．895）,以0．007为截断值时,其诊断前列腺癌的敏感度和特异度分别为56．6％和94．6％。尿PCA3mRNA／PSAmRNA比值诊断PCa的ROC曲线下面积（AUC）为0．646（95％CI：0．533—0．758）,以0．001为截断值时,其诊断前列腺癌的敏感度和特异度为47．2％和73．0％。PCa组PCA3mRNA（P=0．009）及T1E4mRNA（P=0．000）的含量均高于BPH组,T1E4mRNA联合PCA3mRNA定量检测的敏感度为81．1％,比单独应用PCA3mRNA和T1E4mRNA检测的敏感度分别提高了33．9％和24．5％。结论前列腺癌按摩后尿沉渣中可以检测到TMPRSS2：ERG亚型T1E4mRNA,联合PCA3mRNA和T1E4mRNA两个指标定量检测,可以显著提高检出前列腺癌的敏感度。此联合检测方法可以用于早期的前列腺癌诊断。     

前列腺癌特异DD3基因实时荧光定量PCR检测方法建立及初步应用

目的：建立实时荧光定量PCR检测特异DD3基因方法,探讨其在前列腺癌早期诊断中的应用价值．方法：根据Genebank中的DD3 mRNA全序列,设计DD3基因的特异引物和探针,构建用于制备DD3基因检测的定量标准品的克隆载体;建立DD3基因的实时荧光定量方法,分别用于前列腺癌患者全血、尿液、前列腺液标本的检测．结果：经稳定性、特异性、重复性和敏感性实验评价,DD3基因实时荧光定量PCR方法的最低检测限为1．64×10^3拷贝／L,线性范围为1．64×10^3～1．64×10^15拷贝／L．对临床收集的19份前列腺癌患者,20份非前列腺癌患者、30份健康者的全血、尿液及前列腺液标本进行检测．19份前列腺癌患者标本中阳性率分别为100％（全血）、80％（尿液）、100％（前列腺液）;20份非前列腺癌患者标本中只有1份前列腺液出现低拷贝值（1×10^5拷贝／L）;30份健康者标本均为阴性．在全血、尿液、前列腺液标本中,前列腺癌患者DD3 mRNA含量明显高于非前列腺癌患者和健康者（P〈0．05）．结论：DD3基因是一种用于前列腺癌早期诊断的特异性指标,可用于生物体液中少量癌细胞的检测,在前列腺癌早期诊断、微转移诊断、预后判断、指导治疗等方面均具有潜在的应用价值．     

前列腺癌患者PSA、PSAD、PSAT测定

目的：探讨前列腺特异抗原（PSA）及前列腺特异抗原密度（PSAD）、前列腺特异抗原移行区密度（PSAT）作为前列腺癌肿瘤标志物的临床价值。方法：选择前列腺癌患者30例、前列腺增生患者30例、健康志愿者20例，采用放射免疫法检测PSA并计算PSAD、PSAT，比较3组间的变化情况。结果：前列腺增生组PSA升高，与对照组相比差异有统计学意义（P＜0．05），前列腺癌组PSA、PSAD、PSAT均升高，与对照组及前列腺增生组对比差异有统计学意义（P＜0．001）。结论：PSA作为前列腺癌肿瘤标志物有重要临床价值，但单纯测定血PSA含量有时不易区分前列腺增生与前列腺癌；PSAD、PSAT在前列腺增生与前列腺癌的鉴别诊断中优于PSA。     

前列腺特异性膜抗原新型剪接变异体PSM-E在外周血的定量表达

【目的】检测分析前列腺特异性膜抗原（PSMA）及其新型剪接变异体（PSM．E）在前列腺癌（PCA）及良性前列腺增生（BPH）患者外周血中的表达,探讨其意义。【方法】通过实时荧光定量PCR方法对PSM—E、PSMA在前列腺癌（53例）和前列腺增生（79例）两组患者外周血中定量表达,分析其差异。【结果】PSM．E相对表达量在PCA组（-8．22±0．32）高于BPH组（-9．99±0．41）,P〈0．001;PSMA相对表达量在PCA组（-12．514-0．31）高于BPH组（-13．72±0．48）,差异有统计学意义,P〈0．05;PCA组和BPH组内PSMA与PSM—E相对表达量有相关性（r=0．36,P〈0．05;r=0．65,P〈0．01）,与血清PSA均不相关。【结论】外周血定量检测PSM—E表达差异可用于区分良性前列腺增生和前列腺癌;与PSMA相比PSM．E表达量更高,其检测的灵敏度更高,PSM—E诊断前列腺癌的敏感性和特异性更好。     

前列腺液中DD3mRNA定量检测无侵入性诊断前列腺癌的意义

目的探讨前列腺按摩后前列腺液沉渣中DD3mRNA含量在前列腺癌诊断中的应用价值。方法在前列腺穿刺活检前或术前麻醉后收集前列腺按摩后患者的前列腺液。其中前列腺癌（Pca）患者31例,前列腺增生患者（BPH）59例,离心取细胞沉淀物,用荧光实时定量逆转录-聚合酶链反应（Real time RT-PCR）方法检测DD3mRNA和PSAmRNA含量,以PSAmRNA作为管家基因校正前列腺液沉渣中的前列腺细胞,以DD3mRNA/PSAmRNA比值表示DD3mRNA含量。SPSS 13.0分析相关数据,以穿刺活检或术后病理检查结果为金标准,用受试者工作特征曲线（ROC）对DD3mRNA诊断性能进行分析,并与血清tPSA进行比较,同时探讨前列腺液DD3mRNA相对定量值阳性率与病理分级的关系。结果前列腺癌患者前列腺液DD3mRNA表达量明显高于BPH,差异具有统计学意义（P〈0.05）。ROC曲线分析结果显示,曲线下面积（ROC-AUC）=0.879（95%CI=0.795～0.964）。DD3mRNA相对定量值截断值取0.015313时,其诊断效能最大。其灵敏度为0.806,特异度为0.864,准确性0.67,阳性预测值75.8%,阴性预测值89.5%,阳性似然比、阴性似然比分别为5.97、0.224。若血清tPSA分别以4ng/ml和10ng/ml为截断值时,灵敏度分别为83.8%和54.84%,特异度分别为61.02%和83.05%,不同病理分级之间DD3mRNA的阳性率差异无统计学意义（P〉0.05）。结论前列腺液中DD3mRNA测定的诊断性能明显高于血清PSA,作为前列腺癌的一种非损伤性诊断方法具有良好的应用前景。     

DD3 mRNA及DD3 mRNA/D定量检测对前列腺特异性抗原灰区前列腺癌诊断的临床价值

目的研究前列腺组织中DD3 mRNA及DD3 mRNA/D定量检测在前列腺特异性抗原(PSA)灰区前列腺癌临床诊断中的应用价值。方法选择sPSA 4~10 ng/ml的前列腺增生(BPH)患者1 12例和前列腺癌(PC)患者25例,进行RT-PCR、PSA检测、B型超声检查及前列腺穿刺活检。观察其DD3 mRNA、DD3 mRNA/D、血清PSA(sPSA)、前列腺穿刺活检标本PSA(uPSA)、总PSA/游离PSA比值(f/tPSA)、s/uPSA、PSA密度(PSAD)等参数的差异,并应用ROC曲线分析各参数的诊断价值。结果 2组患者年龄、前列腺体积比较差异无统计学意义(t=12.87、12.31,P>0.05);tPSA、PSAD比较差异均有统计学意义(t=7.31、6.89,P<0.05);PC组DD3 mRNA/PSA mRNA比值明显高于BPH组(t=7.86,P=0.009);PC组DD3 mRNA/D比值明显高于BPH组(t=7.28,P=0.05)。ROC曲线分析结果表明,以0.27为截断值,DD3 mRNA/PSA mRNA的曲线下面积为0.841(95%C1 0.666~0.997);以2.01为截断值,DD3 mRNA/D的曲线下面积为0.907(95%C1 0.790~0.869)。结论 DD3 mRNA含量、DD3 mRNA/D定量检测可以显著提高检出PSA灰区前列腺癌的敏感度,对PSA灰区前列腺癌的早期筛查诊断意义重大,DD3 mRNA/D具有更好的诊断效能。     

双重实时荧光逆转录聚合酶链反应检测尿液DD3/PSA mRNA比值及其应用

目的建立双重实时荧光逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）检测尿液DD3／PSAmRNA比值,评价其初步应用。方法分别在前列腺特异性抗原（PSA）基因外显子1和2、差异显示编码3（DD3）基因外显子1和3之间设计一对引物和一条探针,PSA和DD3基因的TaqMan—MGB探针5’分别标记HEX和FAM荧光素,建立双重实时荧光RT—PCR检测尿液DD3／PSAmRNA比值的方法,并对方法学进行评价。对34例前列腺癌（PCa）、44例良性前列腺增生（BPH）患者前列腺按摩后尿液中的DD3／PSAmRNA比值进行检测,评价其临床应用价值。结果扩增产物经测序证明为PSA和DD3特异性片段。以LNCaP细胞cDNA作模板,PSAmRNA和DD3mRNA最低检测限分别为0,6细胞／反应和60细胞／反应。DD3／PSAmRNA比值批内、批间变异系数分别为3．8％-4,7％和4．1％-4,9％。PCa组尿液DD3／PSAmRNA比值明显高于BPH组（P〈0．01）。尿液DD3／PSAmRNA比值诊断PCa的ROC曲线下面积（AUC）为0．746（95％CI：0．630—0．862）,当截断值为0．254时其敏感度和特异度分别为64．7％和77.3％,其阳性率与临床和病理分级均无关。结论成功建立了双重实时荧光RT—PCR检测尿液DD3／PSAmRNA比值的分子生物学诊断方法。该方法对PCa诊断具有较高特异度和敏感度,且节省操作时间、降低实验成本,有望成为PCa早期诊断的有效方法。     

SYBR GreenⅠ实时荧光定量逆转录聚合酶链反应检测前列腺癌抗原3mRNA表达水平

目的采用SYBR Green I实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术,建立检测前列腺癌抗原3(DD3)mRNA的标准,定量检测人体不同组织中该基因的表达水平。方法从LNCaP细胞中采用RT- PCR法扩增特异性DD3基因片段,将其与pMD18-T载体连接,转化宿主菌JM109,对质粒标准进行聚合酶链反应(PCR)检测及测序。纯化后检测质粒拷贝浓度,制备梯度浓度标准品。应用LightCycler荧光定量PCR仪对标准品进行检测。取正常人乳腺组织、膀胱、结肠、尿道、肺、睾丸、精囊、卵巢、正常前列腺组织、前列腺增生及前列腺癌组织,定量检测DD3 mRNA表达。结果建立稳定的检测DD3 mRNA的标准,正常人乳腺、膀胱、结肠、尿道、肺、睾丸、精囊、卵巢中无DD3 mRNA表达,在正常前列腺及前列腺增生组织中低表达,两者间差异无显著性 (P>0．05);在前列腺癌中高表达(P<0．05)。结论应用SYBR Green I实时荧光定量RT-PCR技术检测 DD3 mRNA表达水平简便、可行、经济。DD3基因的表达具有良好的前列腺癌特异性。     

标准化ADC值鉴别移行带前列腺癌与间质为主增生结节

【目的】采用磁共振弥散加权成像比较绝对表观弥散系数(ADC)值及标准化ADC值在鉴别移行带前列腺癌及间质为主增生结节的效能?【方法】 55例临床怀疑前列腺癌的男性患者行MRI平扫及弥散加权成像检查,使用b值为0?1 000 s/mm2?所有患者在MR检查后1个月内行经直肠超声引导下前列腺穿刺活检?分别比较外周带前列腺癌及移行带前列腺癌的ADC值及标准化ADC值,移行带前列腺癌与间质为主增生结节的ADC值及标准化ADC值?使用受试者工作特征曲线评估标准化ADC值与ADC值在鉴别移行带前列腺癌与增生结节的效能?【结果】 共36例经病理证实前列腺癌的患者纳入分析?包括移行带癌灶26个,外周带癌灶37个,移行带癌与外周带癌的ADC值及标准化ADC值差异无统计学意义P分别为0.204?0.308?移行带癌灶的ADC值及标准化ADC值均明显低于移行带间质增生结节(P < 0.05)?标示准化ADC值和绝对ADC值鉴别移行带前列腺癌和间质增生结节的ROC曲线下面积无统计学差异,分别为1.000?0.997(P = 0.4111);但当特异性设定为100%时,标准化ADC值较绝对ADC值具有更高的敏感性,分别为100%和92.3%?【结论】 标准化ADC值鉴别移行带前列腺癌与间质为主增生结节的效能与绝对ADC值相当,在保持高特异性的同时标准化ADC值较绝对ADC值具有更高的诊断敏感性?     

前列腺癌相关基因PAX5启动子甲基化的临床意义

目的：探讨PAX5基因启动子甲基化作为前列腺癌生物标志物的临床价值。 方法：采用Real time RT-PCR检测前列腺细胞系（RWPE-1、LNCaP、PC-3、DU145）中PAX5 mRNA的表达,甲基化特异性PCR(MSP)法分析4株前列腺细胞的甲基化状态;去甲基化药物处理后,Real time RT-PCR法检测肿瘤细胞PAX5基因mRNA表达; Real time MSP法检测64例前列腺癌患者、22例前列腺增生患者与47例健康体检者血清中PAX5基因启动子甲基化水平,并统计分析血清PAX5基因启动子甲基化水平与临床病理参数的相关性;运用ROC曲线分析PAX5基因启动子甲基化在前列腺癌诊断中的价值。结果：Real time RT-PCR结果显示,与正常前列腺上皮细胞RWPE-1相比,PAX5 mRNA在3株前列腺癌细胞中均表达下调;LNCaP、PC-3、DU145前列腺癌细胞均可检测到PAX5基因启动子甲基化,而正常前列腺上皮细胞RWPE-1不存在PAX5基因启动子甲基化;去甲基化药物可恢复PAX5基因mRNA表达;Real time MSP结果显示,前列腺癌患者的血清PAX5基因启动子甲基化水平显著高于前列腺增生患者和健康体检者;前列腺癌患者的血清PAX5基因启动子甲基化率与Gleason评分和TNM分期有关;ROC结果显示PAX5基因的诊断价值优于PSA。结论：本研究结果提示启动子甲基化是前列腺癌细胞中PAX5基因表达下调的主要原因,血清PAX5启动子甲基化是一种潜在的前列腺癌诊断标志物。     

经直肠彩色多普勒超声检查对前列腺癌的诊断与鉴别诊断价值

目的采用经直肠腔内彩色多普勒超声对前列腺增生症及前列腺癌进行检测,通过其血流动力学特点,反映前列腺增生症与前列腺癌血供情况,评价对前列腺增生症与前列腺癌诊断与鉴别诊断的意义。方法应用经直肠彩超对50例良性前列腺增生症（BPH）和30例前列腺癌（Pca）进行检测,测量前列腺大小,观察尿道前列腺动脉,对前列腺内动脉血流情况进行分级,测量阻力指数（ResistanceIndex。RI）。结果前列腺增生症（BPH）组体积明显增大,多为强回声结节,主要分布在内腺。前列腺癌（Pea）组体积增大,多为低回声结节。主要分布在外腺且双侧叶不对称。前列腺癌血流分级、阻力指数（RI）均高于前列腺增生。两组各项指标间差异有统计学意义（P〈0．01）。前列腺癌的血流丰富,阻力指数RI〉0．75。结论经直肠彩色多普勒超声显示的血流分级及血流参数RI对前列腺增生和前列腺癌的诊断与鉴别诊断具有重要作用。     

前列腺疾病患者血清前列腺特异性抗原检测分析

目的　了解慢性前列腺炎、急性尿潴留、前列腺癌患者及正常对照组血清总前列腺特异性抗原 (tPSA)水平 ,为临床诊断及治疗前列腺癌提供参考。方法　酶免法检测 35例慢性前列腺炎患者 ,2 4例前列腺增生急性尿潴留患者 ,11例前列腺癌患者及 12 8例健康体检者的血清tPSA水平。结果　正常对照组血清tPSA检测值为 1 15± 0 95ng/ml,急性尿潴留和前列腺癌患者的血清tPSA水平显著高于正常对照组 (P <0 0 1) ,慢性前列腺炎组与正常对照组相比差异也具有显著意义 (P <0 0 1) ,但其值仍在较低水平。结论　临床应用血清tPSA诊断前列腺癌时应注意避免盲目活检     

Expression change of nuclear receptor corepressor （NCoR） in androgen independence prostate cancer and its clinical significance

Objective：To explore the expression of nuclear receptor corepressor （NCoR） in androgen independence prostate cancer （AIPC） and its clinical significance. Methods：The expression of NCoR and androgen receptor （AR） in prostatie tissues, from 15 cases with AIPC, 20 cases with androgen dependence prostate cancer （ADPC） and 20 cases with benign prostatic hyperplasia （BPH）, was detected by immunohistoehemistry respectively. Results：The expression of NCoR was observed mainly in the nucleus and slightly in the nucleus. The positive cell percentage of NCoR in AIPC was significantly lower than that in ADPC and BPH （P〈0. 01）. The NCoR expression was significantly lower in low differentiation prostate cancer （Pca） than that in high differentiation Pca （P〈0. 05）. The rate of NCoR expression was significantly higher in low stage Pca than that in high stage Pca （P〈0. 05）. AR, expressing in the nucleus, was found to be negative in one case of AIPC, while was strongly expressed in other cases of AIPC, and all eases of ADPC and BPH. Conclusion： The transition to AIPC of Pea may be correlated with the decrease of NCoR protein.     

前列腺腺癌中DD3（Pca3）基因的表达及其意义

目的评价DD3（Pca3）检测在前列腺腺癌活检标本病理诊断中的应用价值。方法观察DD3（Pca3）基因在196例前列腺腺癌和相关疾病前列腺标本中的原位杂交表达情况。结果在149例前列腺腺癌病例中,DD3（Pca3）染色阳性率为94.6%,染色情况与Gleason评分、患病年龄、血清总PSA值的关系无统计学意义。52例癌周有前列腺上皮内肿瘤（PIN）4,7例DD3（Pca3）阳性;149例腺癌癌巢周18例DD3（Pca3）阳性。在42例良性前列腺增生（BPH）中1例DD3（Pca3）阳性（2.38%）。结论 DD3（Pca3）是诊断前列腺腺癌有价值的阳性标记物。     

前列腺上皮内瘤的三维磁共振波谱成像特点的初步研究

目的:探讨并评价三维磁共振波谱成像(3D MRSI)在前列腺内皮瘤(PIN)中的成像特点。方法:对38例前列腺特异性抗原(PSA)升高疑为前列腺癌的患者行MRI+3D MRSI检查,再经直肠彩色多普勒超声引导定位下对可疑位点穿刺行病理检查,另外收集20例同时期良性前列腺增生患者的MRI及MRS资料,回顾性分析前列腺病变部位、常规MRI特征、MRS检查结果,计算(胆碱+肌酸)/枸橼酸盐(CC/C)。采用重复测量方差分析比较良性前列腺增生(BPH)组、前列腺癌(PCa)组、低级别PIN(LG PIN)及高级别PIN(HG PIN)的CC/C差异。结果:20例BPH组患者CC/C值为0.62±0.21;7例LG PIN的CC/C为0.76±0.22,两组患者无明显统计学差异;11例HG PIN患者的T2WI患者外周带有明显或可疑低信号区,3D MRSI示枸橼酸盐峰值稍下降,胆碱峰变化不明显,CC/C值为1.72±0.49;20例PCa患者的T2WI的外周带明显低信号区,3DMRSI示枸橼酸盐峰值几乎均下降明显,胆碱峰升高,CC/C值3.49±1.64,LG PIN组与HG PIN及PCa组差异有统计学意义,与BPH组差异无统计学意义,HG PIN的CC/C值与其它各组的值差异有统计学意义(F=95,P<0.05);结论:LG PIN的3D MRSI表现类似于良性前列腺增生,而HG PIN的3D MRSI改变则更接近于前列腺癌。