肝纤维化大鼠血小板衍生生长因子受体β亚单位的表达及其与细胞外基质成分的相关性

目的 研究血小板衍生生长因子(PDGF)受体β亚单位在肝纤维化组织中的动态表达及其与细胞外基质成分的相关性。 方法 将动物分为正常对照组和模型组,用C Cl4复制肝纤维化模型,用免疫组化方法动态检测PDGF受体β亚单位、α～平滑肌抗体(α-SMA)、Ⅰ、Ⅲ型胶原在肝纤维化组织中的表达,将免疫组化结果行图像扫描半定量后进行统计学分析并计算其相关性。 结果 随着肝纤维化程度的加重,PDGF受体β亚单位、α—SMA表达逐渐增加,Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达也逐步增加。在2周时PDGF受体β亚单位与Ⅰ、Ⅲ型胶原的相关性不明显,但与α-SMA呈显著相关,其相关系数为0.6 2(P<0.05);在4周时其与Ⅰ、Ⅲ型胶原和α—SMA的相关系数分别为0.74、0.60和0.69(P<0.05);在6周时其与Ⅰ、Ⅲ型胶原和α-SMA的相关系数分别为0.83、0.67和0.81(P<0.05)。 结论 PDGF受体β亚单位在肝纤维化的发生发展中起重要作用,抑制PDGF受体β亚单位的表达可望能减少细胞外基质的合成。     

抗转化生长因子β1嵌合型核酶在细胞外和肝星状细胞内活性鉴定

转化生长因子β1（transforming growth factor β1,TGFβ1）是调节细胞外基质蛋白产生、降解和聚集的重要的细胞因子,在肝纤维化发病中发挥决定性的作用,因此TGFβ1被认为是肝纤维化治疗的理想靶分子.     

抗血小板衍生生长因子受体的核酶对肝星状细胞生物学特性的影响

目的 研究抗血小板衍生生长因子受体β亚单位(PDGFR-β)核酶在肝星状细胞(HSC)内的切割活性及其对HSC生物学特性的影响。 方法 构建抗PDGFR-β核酶的真核表达载体,将其转染入HSC-T6细胞,G418筛选出阳性细胞克隆;分别用northern blot、western blot和免疫细胞化学检测PDGFR-β表达,用MTT法检测细胞增殖,免疫细胞化学检测α-F滑肌肌动蛋白(α-sMA)和Ⅰ、Ⅲ型胶原表达,用流式细胞仪、吖啶噔荧光染色和电镜分析细胞凋亡。 结果 转染核酶的HSC的PDGFR-β在mRNA和蛋白水平的表达量均显著降低,仅为对照组的43％～51％(t≥3.95 7,P<0.05);增殖活性显著低于对照组(t≥3.858,P<0.0 5),且对血小板衍生生长因子(PDGF)促增殖效应的敏感性显著减弱;Ⅰ、Ⅲ型胶原和α-SMA的表达显著减少(t≥6.790,P<0.01);凋亡发生率显著高于对照组(x2≥14.157,P<0.01),电镜下可见典型凋亡细胞。 结论 抗PDGFR-β核酶的真核表达载体可在细胞内稳定表达,能有效切割靶RNA,抑制HSC增殖及胶原合成,并诱导其凋亡。为抗肝纤维化治疗提供了新的靶点和手段。     

血小板衍生生长因子在肝纤维化发生中的作用

肝纤维化常常伴随于肝脏的各种慢性炎症病变过程中,是发生肝硬化的必经阶段。肝星状细胞(HSC)是细胞外基质的主要合成细胞,在肝纤维化的发生发展中起重要作用。多种细胞因子介质参与了肝星状细胞功能的活化和调节,其中血小板衍生生长因子是目前已知的多肽生长因子中对HSC作用最强的有丝分裂原,多种因素通过这一途径发挥作用。但其具体作用方式目前还不太清楚,本文就血小板衍生生长因子的作用机制、来源、结构、分类、在肝纤维化的临床诊断和治疗中的应用作一综述。     

血小板衍生生长因子在肝纤维化形成中的作用

肝纤维化(hepatic fibrosis)是指肝脏由于受慢性炎症或其他原因损伤所致的肝内纤维结缔组织增生,细胞外基质(extracellular matrix,ECM)的合成大于降解而导致肝内ECM过度沉积的病理生理过程。是各种慢性肝病的重要病理特征,也是肝硬化发生的必经中间环节。肝星状细胞(hepatic s     

白介素—10血小板衍生生化因子对肝星状细胞表达转化生长因子—β1的影响

目的：探讨IL－10，PDGF对体外培养HSC表达TGF－β1的影响。方法：原位灌流分离HSC，体外培养激活，分别用IL－10，PDGF以及两者共干预，采用半定量RT－PCR方法和免疫细胞化学方法检测各组TGF－β1的mRNA及蛋白表达情况。结果：IL－10干预组TGF－β1表达较对照组减弱，PDGF干预组较对照组明显增强，IL－10干预组较IL－10，DGA共干预组明显减弱（P＜0．01）。结论：PDGF可促进HSC表达TGF－β1，而抑制HSC表达TGF－β1可能是外源性IL－10的抗肝纤维化作用机制之一。     

抗Caspase-12核酶的制备与体外活性鉴定

目的 设计针对小鼠内质网应激凋亡途径中caspase-12mRNA的锤头状核酶(Rz138、Rz218)，通过靶基因及核酶的体外转录、切割，进行核酶活性鉴定，评估其应用前景。方法 小鼠Caspase-12基因的逆转录聚合酶链反应(RTPCR)扩增片段克隆于PGEMT载体的T7启动子下游，通过α-^32P UTP标记的体外转录物作为靶RNA。设计合成针对小鼠Caspase-12 mRNA的核酶，通过PCR方法扩增核酶的转录模板，采用非同位素标记法行体外转录，核酶与靶RNA进行体外切割实验。结果在37℃，Rz138、Rz218均有切割活性，Rz138的切割效率较高，几乎100％。结论 Rz138在体外具有良好的特异催化切割活性，它有望通过切割Caspase-12 mRNA而抑制内质网应激介导的细胞凋亡发生。     

抗转化生长因子β1核酶在胞外和肝星状细胞内对靶RNA的切割作用

目的研究抗转化生长因子B1锤头状核酶的胞外切割作用以及在肝星状细胞内的活性。方法运用计算机设计针对转化生长因子B1的锤头状核酶，制备核酶、失活核酶和靶RNA胞外转录物，进行核酶的胞外切割反应；构建编码核酶、失活核酶的真核表达载体，并转染入活化型肝星状细胞株内，分析核酶和TGFβ1的表达。结果该核酶在胞外具有良好特异的切割活性，在转染的肝星状细胞内高效表达且有效下调TGFβ1的表达；而失活核酶在胞外不具有切割活性，在胞内对TGFβ1表达的抑制作用轻微。结论此核酶在胞外具有特异切割活性，在肝星状细胞内抑制TGFβ1的表达，有望为肝纤维化的治疗提供新的手段。     

白介素-10血小板衍生生长因子对肝星状细胞表达转化生长因子-β1的影响

目的:探讨IL-10、PDGF对体外培养HSC表达TGF-β1的影响.方法:原位灌流分离HSC,体外培养激活,分别用IL-10、PDGF以及两者共干预,采用半定量RT-PCR方法和免疫细胞化学方法检测各组TGF-β1的mR-NA及蛋白表达情况.结果:IL-10干预组TGF-β1表达较对照组减弱,PDGF干预组较对照组明显增强,IL-10干预组较IL-10、PDGF共干预组明显减弱(P＜0.01).结论:PDGF可促进HSC表达TGF-β1,而抑制HSC表达TGF-β1可能是外源性IL-10的抗肝纤维化作用机制之一.     

血小板衍生生长因子β受体和细胞外信号调节激酶1/2在大鼠肝纤维化中的表达

血小板衍生生长因子（platelet-derived growth factor．PDGF）对多种细胞均有促增殖和趋化作用，它是HSC最强的有丝分裂原。PDGF受体由两种亚单位α及β构成，静止的HSC只表达α亚单位，激活的HSC才表达β亚单位，PDGFl5受体在肝纤维化过程中的作用尤为突出。[第一段]     

血小板衍生生长因子及其新成员在肝纤维化发生机制中的作用

随着分子生物学技术的广泛应用，在肝纤维化研究领域不断取得新的进展。目前的研究已初步证实，肝星状细胞（hepatic stellate cells，HSC）激活是肝纤维化发生的基础和中心环节。PLT衍生生长因子（platelet-derived growth factor，PDGF）则在肝脏慢性损伤引起HSC激活、发生型的转变过程中起主要作用，尤其是对HSC的增殖和趋化作用。     

血小板衍生生长因子及其受体在肝纤维化患者肝组织中的表达及意义

目的：研究血小板衍生生长因子（PDGF）及受体（PDGFR）在慢性肝炎纤维化和肝硬化患者肝组织中的表达，分布和意义。方法：用免疫组织化学方法检测了21例慢性肝炎，42例肝硬化患者肝组织中PDGF－A，PDGF－B，PDGFR－α，PDGFR-β及α－平滑肌肌动蛋白（α－SMA）的表达，分布状况，定量和相关性分析。结果：慢性肝炎和肝硬化组织PDGF及其受体和α－SMA的表达主要分布于汇管，纤维间隔和炎细胞浸润聚集区，尤其见带分支突出的梭形细胞（活化的HSC）有大量表达。PDGF－B和PDGFR－β表达分别强于PDGF－A和PDGFR－α，两组间差异有显著性（P＜0．05－0．01）。α－SMA与PDGF－A，PDGF－B及PDGFR－α，PDGFR－β的表达，分布基本一致，定量分析呈正相关，相关系数分别为0．606（P＜0．001），0．772（P＜0．001），0．684（P＜0．001），0．825（P＜0．001）。结论：PDGF及其受体在肝纤维化发生发展中起重要作用，是通过活化HSC发挥效应，研究抑制PDGF及其受体的产生和作用是防治肝纤维化的新途径。     

转化生长因子β信号传导阻断对鼠肝星状细胞培养激活的影响

目的 研究转化生长因子β(TGF-β)信号传导通路的阻断,对鼠肝星状细胞(HSC)培养激活的影响。 方法 利用腺病毒AdT β-ExR的表达产物阻断HSCs中TGF-β信号传导。用酶联免疫吸附试验,Western blot及免疫组织化学等方法检测HSCs中Ⅰ型胶原蛋白、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达及细胞增殖。 结果 感染AdT β—ExR与感染AdLacZ的HSCs相比,Ⅰ型胶原蛋白的表达量为对照组的42.99％(q=9.100,,P<0.001),α-SMA的表达明显被抑制,而细胞增殖指标5-溴脱氧尿苷的参入量,后者为前者的49.24％(q=7.835,.P<0.001)。 结论 阻断TGF-β信号传导能显著地抑制HSCs的培养激活,但促进HSCs的分裂。通过腺病毒AdT β-ExR的表达产物阻断TGF-β信号传导作为抑制肝纤维化的方法,还需深入一步的研究。     

Smad 7与转化生长因子β1受体后信息调控

Smad蛋白家族是转化生长因子β(transforming growthfactor-β,TGF-β)受体后信息分子,参与调控细胞的增殖、转化、合成、分泌和凋亡。这一超家族成员中,Smad 7具有与其它信息分子不同的负性调节作用。在肝脏,它表现为抑制肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)的转化和胶原等细胞外基质的合成与分泌[1,2]。现将Smad 7的研究进展综述如下。     

肝复康对大鼠肝组织血小板衍生生长因子表达及对胶原合成的影响

目的探讨中药肝复康对大鼠肝组织血小板衍生生长因子(PDGF)表达的影响及其对胶原合成的调节作用。方法制备四氯化碳诱导的肝纤维化大鼠模型,应用肝复康干预;测定各组大鼠血清白蛋白、球蛋白、谷丙转氨酶和谷草转氨酶的含量;采用免疫组织化学法检测肝组织PDGF表达;采用RT-PCR法测定肝组织及HSC-T6细胞Ⅰ型胶原mRNA水平的变化。结果治疗组与模型组相比,血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶和球蛋白水平均降低,白蛋白及白/球比例则升高(P<0.01);模型组肝组织PDGF的表达上调,而肝复康治疗组表达则下调(P<0.01);模型组肝组织及HSC-T6细胞Ⅰ型胶原mRNA水平较正常对照组明显上调(P<0.01),而肝复康治疗组则明显下调(P<0.01)。结论肝复康通过降低PDGF的表达,抑制Ⅰ型胶原的合成,对肝纤维化具有一定的防治作用。     

抗Caspase-3核酶的体外制备与活性鉴定

目的 研究针对大鼠凋亡基因Caspase-3设计的核酶（Rz107和Rz544）的体外转录,切割及活性鉴定。方法 大鼠Caspase-3基因的PCR片段克隆于T载体T7启动子下游,32^P标记的体外转录物作为靶RNA。设计合成并克隆针对大鼠Caspase-3 mRNA的核酶（Rz107和Rz544）,32^P标记转录,核酶与靶RNA按一定比例进行体外切割实验。结果 Rz107在37℃有活性。在一定温度范围内,其切割效率随温度升高而升高,最适温度为50℃。其米氏常数（km）为14.13mol/L,酶催化反应速度常数（kcat）为2.31/min。而Rz544则无切割活力。结论 体外制备的Rz107具有良好的特异催化切割活性,它有望通过切割（Caspase-3)而抑制凋亡发生,可发展为新一代抗肝炎症的核酸药物。     

慢性乙型肝炎血清血小板衍生生长因子与肝纤维化的相关性

多种因素参与肝纤维化的形成,其中细胞因子之间因相互调节网络失衡,最终导致肝纤维化的作用逐渐受到重视.笔者通过研究慢性乙型肝炎(CHB)患者血清血小板衍生生长因子(PDGF)水平与肝纤维化指标之间的相关性,为肝纤维化的诊断和治疗提供思路.     

鼠反义转化生长因子βⅠ型受体真核表达质粒的构建与鉴定

目的:构建鼠反义转化生长因子βⅠ型受体(TβRⅠ)基因pcDNA3.1( )真核表达质粒,为进一步研究通过TβRⅠ干预肝纤维化的发生发展提供实验基础.方法:将取冰冻保存的大鼠肝组织,应用TRIzol法提取总RNA,琼脂糖凝胶电泳检测RNA完整性,并用紫外分光核酸蛋白分析仪测定RNA浓度和纯度.使用一步法逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)试剂盒获得目的基因TβRⅠcDNA片段,采用巢式PCR扩增TβRⅠ基因片断.用CaCl2法诱导感受态细胞.将真核表达载体pcDNA3.1( )在多克隆位点处用EcoRⅠ、XholⅠ双酶切线性化,切胶纯化回收;TβRⅠ基因片断双酶切后切胶纯化回收;将纯化回收的pcDNA3.1( )线性化载体和TβRⅠ基因片段定向及反向连接,构建以pcDNA3.1( )为载体的反义TβRⅠ基因真核表达质粒.转化JM109大肠杆菌.酶切证实的阳性克隆行测序分析.结果:琼脂糖凝胶电泳检测RNA完整性,见28S,18S条带完整,而且28S条带亮度为18S的1倍左右,认为RNA完整性良好;并用紫外分光核酸蛋白分析仪测定RNA纯度A260/A280=1.9150,认为RNA纯度良好;RNA浓度为770mg/L.阳性克隆质粒经双酶切后行10g/L琼脂糖凝胶电泳在DNAMarker430bp和线性化纯化后pcDNA3.1( ),5.3kb附近可见两条明显条带,与所需目的片段大小相符,证实为阳性克隆,重组质粒构建成功.DNA测序结果与预期目的片段序列一致.结论:鼠反义TβRⅠ/pcDNA3.1( )真核表达重组质粒构建成功.     

抗TGF-β受体治疗肝纤维化的作用研究进展

活化的肝星状细胞(HSC)在肝纤维化的形成发展中起着至关重要的作用.转化生长因子(TGF-β)被认为是HSC活化最有效的刺激因子.拮抗TGF-β的作用已成为抗纤维化治疗策略的重要目标.此文就TGF-β受体的结构和功能以及近几年针对该受体的抗肝纤维化研究进展作一综述.