β射线对NIH3T3成纤维细胞细胞周期的影响及牛磺酸的干预作用

目的：观察β射线对NIH3T3成纤维细胞周期的影响,探讨β放射损伤的机制及牛磺酸（taurine）的辐射防护作用。方法：以不同剂量的高能电子射线模拟β射线照射NIH3T3细胞,加药组分别为（50mg／L、100mg／L、200mg／L）选择15Gy照射剂量,采用流式细胞术检测各组细胞的细胞周期率。结果：β辐射后细胞发生G2期阻滞,且与照射剂量呈正相关（P≤0．01）。在0-15Gy剂量范围内,β辐照12h后未观察到细胞发生凋亡。加入牛磺酸后,G2期受阻现象得到缓和,G2／M期百分率与药物剂量呈负相关（P≤0．01）。结论：β辐射后NIH3T3细胞属于G2期延迟细胞,牛磺酸可通过一定机制使受损的细胞不能通过G1期,从而有助于加强对细胞受损DNA的修复,起到辐射防护的作用。     

SMYD3与细胞增殖相关性及其对细胞周期的影响

目的:研究SMYD3与细胞增殖间的相关性及其对细胞周期的影响。方法:应用RT-PCR对SMYD3基因在人不同组织来源肿瘤细胞系中的表达情况进行检测。通过RT-PCR从肝癌细胞SMMC7721中扩增获得人SMYD3基因并克隆到真核表达载体pcDNA3.1(-)中,利用阳离子脂质体转染NIH3T3细胞,G418筛选建立稳定表达细胞株。RT-PCR检测转染后SMYD3的mRNA表达水平;MTT法测定细胞生长曲线;流式细胞术检测细胞周期分布。结果:SMYD3在人类主要组织来源的癌细胞系中均高度表达,重组表达载体pcDNA-SMYD3构建成功。转染NIH3T3细胞后,外源SMYD3基因获得了有效的转录与稳定表达,并且S期细胞明显减少,而G2/M期细胞增多。结论:SMYD3可以通过加快细胞周期S期进程从而提高细胞增殖速度,其高度表达与细胞增殖具有广泛的相关性。     

钒化钠对小鼠成纤维细胞NIH3T3细胞株增殖影响的研究

目的探讨不同浓度钒化钠(sodium vanadate,SV)对小鼠成纤维细胞NIH3T3细胞株增殖作用的影响。方法将培养的NIH3T3细胞给予不同浓度及时间的SV刺激,以噻唑蓝(MTT)比色法检测小鼠成纤维NIH3T3细胞增殖及增殖抑制情况。结果与对照组比较,0.1μM对细胞增殖无影响(P>0.05);1.0、5.0、10.0μM SV可以促进细胞增殖,而200μM SV抑制其增殖(P<0.01),不同处理时间变化趋势一致;100μM SV对细胞作用随处理时间不同而不同。结论SV对NIH3T3细胞增殖作用因处理剂量和时间不同而呈现差异。     

乙醇对NIH 3T3成纤维细胞成脂分化的影响

目的观察乙醇对NIH 3T3成纤维细胞分化为脂肪细胞的作用,及其对成脂转录因子PPARγ表达的影响.方法以不同浓度乙醇作为诱导剂处理NIH 3T3成纤维细胞14 d,苏丹Ⅳ染色,采用电子计算机图像分析软件Image Pro Plus 4.1,确定脂肪细胞百分比.采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术,检测细胞PPARγ mRNA的表达.结果以递增浓度(0.03 mol/L、0.06 mol/L、0.09 mol/L、0.15 mol/L、0.21 mol/L)乙醇处理NIH 3T3成纤维细胞14 d,在0.06 mol/L、0.09 mol/L、0.15 mol/L、0.21 mol/L乙醇组中,脂肪细胞百分比和PPARγ mRNA表达均比对照组明显增高,差异均有统计学意义(P<0.001).0.03 mol/L乙醇组与对照组间的脂肪细胞百分比和PPARγ mRNA表达差异均无统计学意义(P>0.05).结论乙醇能够直接诱导NIH 3T3成纤维细胞大量分化为脂肪细胞,这可能是乙醇性骨坏死时骨髓内脂肪增多的原因之一.     

电子直线加速器照射对NIH 3T3细胞的细胞周期及凋亡的影响

目的 探讨电子直线加速器照射对细胞周期及细胞凋亡的影响。方法 采用直线加速器对NIH 3T3细胞进行照射，观察细胞周期及细胞凋亡的改变情况；同时测定损伤前后p53蛋白的表达情况。结果 照射后细胞凋亡数增加，p53蛋白表达量上升。结论 电子直线加速器照射损伤可诱导细胞凋亡。     

核仁磷酸蛋白突变基因表达对NIH3T3细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨核仁磷酸蛋白(nucleophosmin,NPM)突变基因对小鼠NIH3T3成纤维细胞系体外增殖和凋亡的影响以及其分子机制。方法通过脂质体介导将真核表达载体pEGFP-C1-NPMc+转染NIH3T3细胞,G418筛选稳定表达NPM突变蛋白细胞株,RT-PCR和Western blot检测NPM突变基因和蛋白的表达。MTT、克隆形成实验检测细胞体外增殖能力;FCM检测细胞周期分布及凋亡水平的改变,并通过对周期调控因子p21及凋亡相关分子Caspase-3活性检测,初步探讨NPM突变参与细胞恶性增殖的分子机制。结果建立了稳定表达NPM突变基因的NIH3T3细胞株。NPM-mA实验组细胞较对照组细胞增殖能力及平板克隆形成率明显增高(P<0.05);甲基纤维素集落形成实验显示各组细胞在甲基纤维素上均不能形成集落;与对照组比较,NPM-mA实验组细胞中G1期细胞比例(42.27±0.86)%显著减低(P<0.01),S期细胞比例(43.08±0.74)%显著增加(P<0.01),同时伴有p21 mRNA水平下降,稳定表达NPM突变基因的NIH3T3细胞凋亡率(1.00±0.13)%明显降低(P<0.01),C...     

钒化钠对小鼠成纤维细胞NIH3T3细胞株Cyclin D1表达的影响

目的：研究钒化钠对小鼠成纤维细胞NIH3T3细胞株细胞周期蛋白（Cyclin）D1表达的影响,探讨钒化钠在细胞生长中的作用机制。方法：以体外培养小鼠成纤维细胞NIH3T3细胞株为研究对象,给予0、0．1、1．0、5．0、10．0、100．0、200．0μmol／L钒化钠,培养4小时后,用Western blot技术检测小鼠成纤维细胞NIH3T3细胞株Cyclin D1表达情况。结果：5．0、10．0μmol／L钒化钠组培养4小时后,Cyclin D1蛋白表达均增高;100．0、200．0μmol／L钒化钠组培养4小时后,Cyclin D1蛋白表达均降低。结论：钒化钠可通过上调和下调Cyclin D1的蛋白表达的双重作用,来影响细胞的生长。     

STK15的表达对NIH3T3细胞的影响

目的构建pcDNA3.1-STK15表达质粒,探讨STK15基因对小鼠成纤维细胞(NIH3T3)的影响。方法构建pcDNA3.1-STK15质粒,将其转染NIH3T3,应用RT-PCR、免疫细胞化学和Western印迹方法检测STK15的表达;MTT法检测细胞增殖能力;Transwell检测细胞侵袭能力。结果转染pcDNA3.1-STK15质粒的NIH3T3细胞在48 h有STK15的表达,而且该细胞的增殖速度和穿透Matrigel胶的细胞数均明显高于对照组(P0.05)。结论STK15基因具有增加细胞增殖和细胞侵袭力的功能,进而形成肿瘤。     

水凝胶递送碱性成纤维细胞生长因子对氧糖剥夺后NIH3T3细胞功能的影响

目的：探讨水凝胶递送碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）对氧糖剥夺（OGD）后小鼠成纤维NIH3T3细胞功能的影响,并阐明负载bFGF的水凝胶对OGD条件下成纤维细胞氧化应激反应的改善作用。方法：制备bFGF明胶水凝胶,将对数生长期NIH3T3细胞分为空白组、20%明胶组和20%明胶+戊二醛组,采用CCK-8法检测6、12和24 h水凝胶浸出液共培养的NIH3T3细胞活性。将NIH3T3细胞分为对照组、OGD组和OGD+不同质量bFGF负载组（OGD+1 ng bFGF组、OGD+10 ng bFGF组和OGD+100 ng bFGF组）。采用Western blotting法检测各组细胞中α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、Ⅰ型胶原蛋白和Ⅲ型胶原蛋白表达水平。检测各组细胞中丙二醛（MDA）水平和乳酸脱氢酶（LDH）及超氧化物歧化酶（SOD）活性。采用酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测bFGF体外释放率。结果：CCK-8法检测,与空白组比较,不同浸出时间20%明胶组和20%明胶+戊二醛组NIH3T3细胞活性差异无统计学意义（P>0.05）。Western blotting法检测,与...     

siRNA沉默Pim-3对T24细胞增殖和细胞周期的影响

目的:研究小干扰RNA(siRNA)沉默Pim-3对膀胱癌细胞增殖和周期的影响。方法:膀胱癌T24细胞分为3组:未处理组(不作任何处理)、对照siRNA组(采用50nmol/L对照siRNA转染)和Pim-3siRNA组(采用50nmol/LPim-3siRNA转染)。采用Westernblot检测转染48hPim-3、CyclinD1、Cdk2、P21蛋白表达的变化,CCK-8试剂检测转染24、48、72、96h细胞的增殖速率,流式细胞术检测转染48h细胞周期的变化。结果:3组膀胱癌T24细胞Pim-3、CyclinD1、Cdk2、P21蛋白表达比较,差异有统计学意义(F=32.506、49.573、23.079、44.758,P<0.05),与未处理组和对照siRNA组相比,Pim-3siRNA组Pim-3、CyclinD1和Cdk-2蛋白的表达下降,P21蛋白表达升高(P<0.05)。转染Pim-3siRNA48、72和96h后,膀胱癌T24细胞的增殖速率均明显受到抑制(F=50.067、132.504、277.389,P<0.001)。3组G0/G1、S和G2/M期膀胱癌T24细胞比例比较,差异有统计学意义(F=107.970、20.039和66.872,P<0.05),Pim-3siRNA组G0/G1期膀胱癌T24细胞比例高于未处理组和对照siRNA组(P<0.05),而S和G2/M期膀胱癌T24细胞比例低于未处理组和对照siRNA组(P<0.05)。结论:Pim-3有望成为治疗膀胱癌潜在的分子靶点。     

iASPP真核表达载体的构建及其对NIH3T3细胞增殖的影响

目的：构建iASPP真核表达载体,稳定转染小鼠成纤维细胞（NIH3T3）并检测其表达,观察其对NIH3T3细胞增殖的影响。方法：设计引物以源克隆PCMV-iASPP为模板PCR扩增其中的CDS区,亚克隆入FLAG-pcDNA3.0,将该重组质粒转化DH5α感受态大肠埃希菌,筛选阳性克隆,经酶切、测序鉴定后,用脂质体介导转染NIH3T3细胞,G418加压筛选28 d,RT-PCR、West-ern blotting检测基因、蛋白表达;MTT法观察细胞增殖能力。结果：重组质粒鉴定正确,筛选所得阳性克隆中可以检测到iASPP基因的转录和表达,且该iASPP阳性表达细胞株增殖能力明显增强。结论：成功构建iASPP真核表达载体并成功构建稳定表达iASPP的NIH3T3细胞株,证明该基因的稳定表达在体外能显著增强NIH3T3细胞增殖能力。     

用血清药理学方法观察眼血散对NIH/3T3成纤维细胞的抑制作用

目的运用血清药理学方法,体外观察中药复方眼血散对NIH/3T3成纤维细胞生长的影响。方法给正常兔连续灌服眼血散煎剂浓缩液3d,制备含药血清。将3种浓度的眼血散煎剂浓缩液及含药血清作用于成纤维细胞,用MTT(噻唑蓝)比色法,观察细胞抑制率。结果3种浓度的眼血散及含药血清均能抑制NIH/3T3细胞的生长,6.25mg/ml、12.5mg/ml、25mg/ml眼血散煎剂浓缩液抑制率分别是30.00±2.90、51.35±2.01、59.95±1.34;5%、10%、20%含药血清抑制率分别是4.03±3.15、31.75±31.38、51.11±1.73。结论眼血散可抑制NIH/3T3细胞生长,可能是其防治增殖性玻璃体视网膜病变的作用机理之一。     

重组白细胞介素13对成纤维细胞增殖的影响

目的：观察重组白细胞介素13（rIL-13）对NIH3T3细胞增殖作用的影响，探讨肺纤维化的发病机制。方法：NIH313细胞分为rIL-13组和不含rIL-13的对照组，rIL-13组加入不同浓度的rIL-13，作用24及48h。透射电镜观察313细胞的超微结构，Hoechst试剂盒观察细胞DNA形态变化，噻唑蓝比色试验（MTT法）测定细胞增殖率。结果：rIL-13呈剂量依赖方式刺激313细胞细胞生长。经rIL-1380ng／ml孵育的细胞DNA合成增加，细胞核增大，细胞质中可见较多核糖体及线粒体。rIL-13组细胞增殖率增加，与对照组比较有显著性差异（P〈0．05）。结论：rIL-13可能通过促进成纤维细胞增殖，在肺纤维化的发病机制中发挥重要作用。     

Galectin-3重组真核表达载体的构建及其在NIH/3T3细胞中的表达

目的:构建半乳糖凝集素-3(Gal-3)的真核表达载体,在NIH/3T3细胞中表达,并检测其表达?方法:通过DNA重组技术和PCR方法从人肿瘤细胞克隆Gal-3基因,插入真核表达载体pEGFP-N1中,通过酶切和测序鉴定重组载体的正确性;采用脂质体转染技术将重组质粒pEGFP-Gal-3瞬时转染NIH/3T3细胞,经荧光和Western blot方法检测Gal-3表达,MTT法检测Gal-3对NIH/3T3细胞增殖的影响?结果:限制性内切酶鉴定和核酸序列测序证实成功构建含Gal-3的重组真核表达载体pEGFP-Gal-3?以重组质粒瞬时转染NIH/3T3细胞,检测到Gal-3蛋白表达,并证实Gal-3蛋白促进NIH/3T3细胞增殖?结论:成功构建的pEGFP-Gal-3真核表达载体在小鼠NIH/3T3细胞中成功表达,并促进NIH/3T3细胞增殖?     

灵芝萃取物对人类肝癌细胞株Hep3B增殖及细胞周期的影响

目的 探讨灵芝萃取物中是否存在影响人类肝癌细胞增殖及细胞周期的有效成份.方法 以甲醇为萃取液,提取灵芝有效成分.人类肝癌细胞Hep 3B(5×103 个/100 μL DMEM/孔,96孔板)经由灵芝萃取物处理48及72 h,灵芝萃取物最终浓度设置为5、10、20及40 μg/mL.以MTT比色分析法评估对细胞增殖的影...     

受体介导甲胎蛋白对NIH3T3细胞增殖的促进作用

目的:探讨甲胎蛋白(alpha-fetoprotein,AFP)促新生细胞增殖作用的分子机理。方法:从人脐带血中提取的AFP作用于体外培养的NIH3T3细胞;用3H-TdR参入法观察AFP对细胞DNA合成的影响以及放射受体分析法分析NIH3T3细胞膜表面AFP受体分布;观察在AFP作用下细胞内的第二信使物质环磷酸腺苷(cAMP)浓度及依赖cAMP激活的蛋白激酶A(PKA)活性的改变;Westernblot分析AFP对增殖相关的P21ras表达的影响。结果:10～80mg/L的AFP对NIH3T3细胞的DNA合成有明显的促进作用,与对照组比较最大增幅为121.9%;在NIH3T3细胞膜表面存在2种不同解离平衡常数(KD)的AFP受体,KD1=2.722nmol/L(12810位点/细胞);KD2=89.305nmol/L(119700位点/细胞);AFP能显著提高NIH3T3细胞内的cAMP浓度及PKA活性;对P21ras的表达也有明显的促进作用。结论:AFP促NIH3T3细胞增殖是通过细胞膜表面受体介导,经跨膜cAMP-PKA信号转导途径,影响基因表达来实现的。     

体外观察维甲酸对NIH／3T3细胞的抑制作用

目的 评价维甲酸（RA）对NIH／3T3细胞生长的影响。方法 体外观察5种浓度RA对NIH／3T3细胞生长的作用。结果 5种浓度的RA均能抑制NIH／3T3细胞的生长,且随着浓度的升高,RA抑制细胞增殖的作用增强。结论 RA能抑制NIH／3T3细胞的增殖。     

腺病毒介导人血管内皮细胞生长因子基因感染NIH3T3细胞的实验研究

目的:探讨腺病毒介导人血管内皮细胞生长因子(hVEGF)基因感染NIH3T3细胞后目的基因表达情况及其对细胞增殖分化的影响,并观察体内移植后的表达情况及其血管生成效应.方法:构建含hVEGF基因重组腺病毒Ad.hVEGF,体外感染NIH3T3细胞,采用荧光显微镜和流式细胞术检测其转染效果和转染率,采用免疫组化、RT-PCR和ELISA法分别检测转染后的NIH3T3细胞VEGF的表达情况.将转染后的NIH3T3细胞移植于小鼠背部皮肤缺损模型上,1周后取创面覆盖的脱细胞真皮组织标本,免疫组化检测组织VEGF的表达,并行组织新生血管计数.结果:携带hVEGF基因的重组腺病毒对于NIH3T3细胞具有较高的转染效率,转染效率与病毒感染复制数(multiplicities of infection,MOI)具有量效关系.MOI为100倍时,转染效率达95%.RT-PCR和免疫组化检测到,Ad.hVEGF感染NIH3T3细胞24 h后即可在基因和蛋白质水平表达,ELISA法检测到VEGF第3日表达分泌较高,7 d时达到表达高峰(1052 pg/ml),13 d后仍可检测到VEGF的表达.2周内MTT法动态检测D值,转染组细胞与未转染组细胞比较无显著性差异(P＞0.05).转染细胞体内种植后在组织中亦可明显表达VEGF,实验组新生血管数显著高于对照组(P＜0.01).结论:腺病毒介导的VEGF基因可有效转染NIH3T3细胞,体内外均可有效表达目的基因,并可促进移植组织血管新生.     

DJ-1L166P与DJ-1M26I基因对NIH3T3细胞增殖和凋亡的比较

目的 在细胞学水平比较DJ、DJ-1M261、DJ-1L166P基因对NIH 3T3细胞增殖速率与凋亡的关系,为建立转基因动物模型及帕金森疾病发病机制研究奠定基础.方法 分别将pcDNA3.1/myc-His-DJ-1、pcDNA3.1/myc-His-DJ-1L166P和pcDNA3.1/myc-His-DJ-1M261重组质粒脂质体方法转染NIH 3T3细胞,500 μg/ml G418压力筛选稳定克隆,对3种转染细胞在DNA水平、RNA水平和蛋白质水平进行鉴定,采用MTT染色方法和Annexin V-FITC试剂盒进行转染阳性克隆细胞的细胞活力与细胞凋亡检测.结果 pcDNA3.1/myc-His-DJ-1、pcDNA3.1/myc-His-DJ-1L166P和pcDNA3.1/myc-His-DJ-1M261重组质粒转染NIH 3T3细胞经G418筛选后,PCR方法检测分别获得1个、4个、3个阳性细胞克隆,RT-PCR及Western blot方法进行DJ-1-His基因表达检测,结果均证明外源插入基因的表达,Caspase-3 RNA水平检测DJ-1L166P和DJ-1M261组表达高于正常NIH 3T3细胞组,而DJ-1组caspase-3转录水平相对最低,MTT实验结果初步证明转染DJ-1L166P和DJ-1M261基因的NIH3T3阳性细胞组细胞增殖速率均低于DJ-1组和正常NIH 3T3细胞组(P＜0.05),转染DJ-1基因的NIH 3T3阳性细胞增殖速率与正常NIH 3T3细胞相比无明显差别;细胞凋亡检测表明转染DJ-1L166P和D J-1M261基因的NIH3T3阳性细胞凋亡率均高于正常NIH 3T3细胞,转染DJ-1基因的NIH 3T3阳性细胞凋亡率低于正常NIH 3T3细胞(P＜0.05).结论 DJ-1L166P和DJ-1M261基因突变均降低NIH3T3细胞增殖速率,DJ-1L166P和DJ-1M261基因突变更易导致NIH 3T3细胞的凋亡,DJ-1L166P和DJ-1M261基因突变对NIH3T3细胞增殖速率和细胞凋亡影响是相似的.