定位血清学诊断丙型肝炎病毒感染的研究

应用合成肽抗原检测丙型肝炎病毒(HCV)抗体是诊断HCV感染的重要发展趋势之一。合成肽分子结构简单,成分单一,性质稳定,在检测HCV感染时具有独特的应用价值。本研究用HCV蛋白核心(C)区2条肽(CP_(10)和CP_9)和1条非结构(NS)     

丙型肝炎病毒抗体单片段检测与总抗体检测的比较研究

目的 通过对国产HCV抗体分片段酶联免疫检测试剂与进口第三代抗-HCV检测试剂检测丙型肝炎病毒抗体的研究来了解丙肝病毒抗体单片段检测的意义。方法 采用国产基因重组表达的丙型肝炎病毒不同区(C、NS3、NS4、NS5)特异性抗原分别包被酶标板，以间接EIA法检测75例丙肝患血清中不同区特异性抗体。并以Ab—bott公司第三代抗-HCV试剂进行总抗体检测，同时做HCV—RNA检测。结果 75例血清中HCV不同区抗原片段NS3、HCV～C、NS4、NS5的抗体检出率分别为93．3％(70／75)、92．0％(69／75)、70．7％(53／75)、64．0％(48／75)。含2个片段以上的抗体检出率为94．7％(71／75)；抗-HCV总抗体的检出率为98．7％(74／75)；HCV—RNA检出率为77．4％(58／75)。结论 HCV不同区抗原片段的抗体检出率有差别，NS3、HCV—C检出率较高，其次为NS4、NSS。两种试剂有较好的相关性，HCV抗体单片段试剂可作为检测丙型肝炎病毒抗体的补充试剂，单独片段抗体阳性具有一定意义，动态观察NS3、NS4抗体水平可预测IFN的治疗效果。     

联合运用RT-PCR与DELFIA技术检测丙型肝炎病毒结果分析

目的探讨丙型肝炎病毒(HCV)抗体、HCV RNA联合检测用于丙型肝炎诊断的临床价值,并研究本地区丙型肝炎的感染和流行情况.方法采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测HCV RNA、解离-增强时间分辨荧光免疫分析法(DELFIA)定量检测HCV抗体.结果715例初诊为丙型肝炎的患者中,HCV抗体阳性85例(11.89%),HCV RNA阳性107例(14.96%),两者共同阳性76例(10.63%),其中男性49例(64.47%),女性27例(35.53%),主要集中在35-45岁之间.结论单独检测HCV抗体或HCV RNA均有一定的缺陷,二者联合检测可提高丙型肝炎的检出准确率;RT-PCR技术灵敏度较高,对HCV RNA检出率较高.丙型肝炎在门诊就诊者中阳性检出率较高,且以中青年为主,男女性别感染检出率无差异.     

Study on the possibility of the application of Murex HCV Ag/Ab combination (version 4.0) assay in blood

目的 探讨第4代Murex HCV Ag/Ab联合检测试剂在血液筛查中的应用价值.方法 应用Murex HCV Ag/Ab联合检测试剂与Murex HCV Ab检测试剂,对987份血液筛查中HCV抗体初筛阳性和灰区标本及1份确认窗口期标本进行比较检测,应用RIBA、病毒核酸检测试剂进行补充验证实验,并对结果进行统计学分析.结果 Murex HCV Ag/Ab联合检测试剂与Murex HCVAb试剂阳性检出率分别为73.5％和75.4％,阴性检出率分别为95.8％和90.8％,总检出率分别为85.8％和84.0％,差异有统计学意义(P均＜0.05).Murex HCV Ag/Ab与Murex HCV Ab两种试剂的阳性符合率为76.7％,阴性符合率为94.5％,总符合率为87.6％.两种试剂检出不一致标本123份,其中5份RIBA-/RNA+标本,Murex HCV Ag/Ab检出4份(包括确认窗口期标本),Murex HCVAb试剂检出1份;15份RIBA+/RNA-标本,Murex HCV Ag/Ab检出5份,Murex HCV Ab试剂检出10份.结论 Murex HCV Ag/Ab联合检测试剂对HCV RIBA-/RNA+标本有较高的检出率;与Murex HCV Ab试剂相比符合率不高;Murex Ag/Ab联合检测试剂和Murex Ab试剂均存在抗体检测漏检的可能.联合使用不同的酶联免疫HCV试剂进行血液HCV两次检测,可以最大限度地防止经血HCV的传播.     

HCV感染的不同临床型HCV核心非结构区抗体检测结果和稳定性研究

目的:研究HCV感染的不同临床型HCV核心区、非结构区抗体检测结果及其稳定性。方法:采用酶联免疫试验(EIA)检测不同功能区抗体，聚合酶链反应(PCR)测定其逆转录病毒。结果C区C11与C22抗体检测结果各临床型均具良好的一致性；NS3区C7区与C33抗体检测结果差异较大。单片段C区C11抗体与Ns3区抗体C7抗体具有早期检测的价值，各临床型反应性较强(S／CO值较高)；且二者互补性较强，尤其HCV相关肝癌。HCV抗体检测不能见出所有HCV感染者，抗HCV阳性者可部分或大部分RT—PCR阳性；RT—PCR能检出HCV阴性标本，且均为急性感染和无症状ALT正常者。HCV相关肝癌HCV抗体和RT—PCR反应性较低。单片段C11抗体极易缺失或(和)变异，阳性者均出现病毒血症中；NS3抗体单独阳性多见，却少与病毒血症共存；NS4．5抗体亦可单独阳性。结论:C、NS3抗体出现较早，反应性强，检出率高，具有早期诊断价值。NS4、Ns5抗体出现较晚，在慢性感染时检出率较高，HCV抗体检测加入NS4、NS5抗体可提高其检测水平。RT—PCR对确诊HCV感染具有重要意义。     

维、汉族HCV抗体确认及与肝功能损害关系的探讨

目的:探讨HCV分段抗体是否存在民族差异及与肝功能损害间的关系。方法:采用HCV分段抗体确认试验对39例慢性丙型肝炎患者和19名健康者进行检测。结果:民族间慢性丙型肝炎患者HCV分段抗体血清模式的分布或构成无统计学显著性差异(调整前概率P=0.4392,调整后概率P=0.3631),以C/NS3/NS4/NS5分段抗体最多见,其次为C/NS3和C/NS3/NS4,尚可见单一的C(7.69％)和NS3(2.56％)型HCV分段抗体。各种血清检测模式间ALT和AST及ALT/AST比值呈现出统计学显著性差异(F=4.35,P=0.0024;F=2.72,P=0.0304;P=2.91,P=0.0233);C/NS3/NS4抗体段ALT水平较其它分段抗体和对照组明显升高(q检验,p),C/NS3/NS4抗体段AST水平较对照组的显升高(q=5.11,P<0.01),C/NS3/NS5抗体段ALT/AST比值明显低于对照组(q=5.45,P<0.01),而其它分段抗体和对照组各指标间均无统计学显著性差异(q检验,P>0.05)。结论:HCV分段抗体检测有助于HCV感染的确证,其分段抗体型别与肝功能损害间的相互关系有待于进一步研究。     

血透患者血清庚型肝炎病毒RNA及抗体检测

目的:了解血透患者庚型肝炎病毒(HGV)感染率及与其他肝炎病毒重叠感染的情况。方法:收集57份血透患者血清标本,根据HGV RNA保守片段5′非编码区序列,设计了两对引物,采用逆转录巢式PCR扩增HGV RNA,以及EIA法检测HGV IgG抗体。同时还检测了HBV DNA及HCV IgG抗体。结果:57份标本中,4份HGV RNA阳性(7.0％),2份HGV IgG抗体阳性(3.5％)。HGV RNA与HGV IgG抗体呈“分离”现象。4份HGV RNA阳性标本中2份为HBV DNA阳性,2份为HCV IgG抗体阳性;其中1份标本HBV DNA和HCV IgG抗体均为阳性。结论:血透患者HGV感染率高于健康献血员和正常人群,HGV可与HBV和HCV重叠感染。     

丙型肝炎病毒不同编码区His融合抗原的表达与纯化

目的:表达和纯化丙型肝炎病毒(HCV)-Core、NS3和NS4的His融合抗原H-C、H-NS3和H-NS4,并初步探讨其在抗体检测中的应用。方法:用重组基因工程技术,构建3种重组质粒C-pET-28a-c( )、NS3-pET-28a-c( )和NS4-pET-28a-c( )以及相应的工程菌;质粒经双酶切、PCR和测序鉴定正确后,IPTG诱导抗原表达,从IPTG使用浓度、诱导温度与时间3个方面优化抗原表达条件;用NTA柱纯化抗原后,分别用单片段重组抗原和混合抗原以酶联免疫吸附试验(ELISA)检测100份HCV抗体阳性血清和40份健康人血清。结果:用单片段重组抗原和混合抗原检测的100份HCV抗体阳性血清中,H-C、H-NS3和H-NS4的抗体阳性率分别为91%、75%和52%,而H-C、H-NS3和H-NS4混合抗原的抗体检出率为100%;检测40份健康人血清,结果全部为阴性。结论:HCV不同编码区单片段His融合抗原具有不同的抗体检出率,但均低于混合抗原的阳性率;在开发HCV抗体诊断试剂时,应采用HCV混合抗原。     

HCV感染后机体保护性免疫缺陷原因探讨

目的　探讨丙型肝炎患者保护性免疫缺陷的原因 .方法　根据 HCVC区和 NS4区基因序列设计并人工合成 3条合成肽 ,采用抗原捕捉酶联免疫吸附试验检测 HCV感染者血清中抗 - HCV Ig G抗体轻链κ/λ比值 .同时以正常人血清做对照 .结果　抗 - HCV SP42 ,CP10和 CP9抗体轻链的表达呈明显的偏斜 ;116例抗 - HCV阳性者中 113例 (97.41% ) ,抗 - HCV Ig G抗体轻链κ/ λ比值偏高 .所有病例追踪观察 1a(其中 11例抗 - HCV阳性者随访 2 a) ;30例患者接受 α-干扰素治疗 ,发现抗 - HCV抗体 κ/ λ比值恒定不变 .结论　 HCV感染者抗 - H…     

丙型肝炎病毒感染外周血单个核细胞的进一步研究

为进一步研究外周血单个核细胞 (PBMC)感染丙型肝炎病毒 (HCV)的状况。用逆转录聚合酶链反应 (RT-PCR)、地高辛标记 HCV探针作原位杂交和链酶亲和素 -生物素 (SABC)作免疫组化三项技术 ,检测血清和 PBMC中的 HCV RNA和 HCV NS5 抗原。结果显示 RT- PCR检测的 2 0例慢性丙型肝炎患者 ,除去 4例接受干扰素治疗者 ,余16例中有 14例 (87.5 % )血清 HCV RNA阳性 ,2例血清 HCV RNA阴性者的 PBMC- HCV RNA阳性。对 RT- PCR检测的 9例 PBMC- HCV RNA阳性患者 ,进一步用原位杂交和免疫组化技术 ,分别检测 PBMC中的 HCV RNA和HCV NS5 抗原。显示这几种方法的检测结果是基本一致的 ,呈正相关关系。患者的 PBMC中的 HCV RNA和 HCV NS5抗原呈散在颗粒状或弥漫分布 ,主要位于胞浆中 ,HCV NS5 抗原还分布于胞膜上。证实 HCV可以感染 PBMC,并在其中复制 ,复制部位在胞浆。     

几种合成寡肽联合检测HCV感染

利用3个合成寡肽和抗-C100试剂盒,检测了165例慢性肝病中的HCV感染率,结果发现 68％(58/85)的慢性肝炎、68％(33/48)的肝硬化和59％(19/32)的肝癌均与 HCV感染有关。     

抗HCV NS3抗原单克隆抗体的研制与初步鉴

目的：为研制抗丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）ＮＳ３抗原单克隆抗体,用于检测丙肝患者血清中的ＨＣＶＮＳ３抗原。方法：用基因工程表达的ＨＣＶ非结构区ＮＳ３蛋白与鼠血清白蛋白交联后,免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠,用杂交瘤技术获得能分泌单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的细胞株。结果：获得有实用价值的两株ＭｃＡｂ。两株ＭｃＡｂ与免疫抗原有较强的抗原－抗体反应,与ＨＣＶＮＳ４、ＮＳ５及核心区Ｃ３３肽、ＣＰ９、ＣＰ１０抗原无反应性,在竞争ＥＬＩＳＡ中,对ＨＣＶ－ＩｇＧ阳性血清有较好的抑制作用。结论：用基因工程表达的ＨＣＶ非结构区ＮＳ３蛋白,能够制备出有实用价值的单克隆抗体。     

慢性肝病和肝癌中HCV核心区三种寡肽抗原的抗体检测

检测１４８例慢性肝病和肝癌患者血清中丙型肝炎病毒核心区３种寡肽抗原的抗体，结果显示其阳性率在慢性迁延型肝炎、慢性活动型肝炎、肝炎肝硬化和原发性肝癌患者分别为７．７％，２３．１％，，２３．５％和１６．３％。在抗体阳性者中８０％以上有乙型肝炎病毒感染证据，提示我国ＨＢＶ和ＨＶＣ重叠感染较为常见。     

延吉市丙型肝炎病毒感染状况初步分析

目的:了解吉林省延吉市丙型肝炎(丙肝)病毒感染状况,为延吉市丙型肝炎防治提供基本依据。方法:采用酶联免疫吸附试验(ELISA)对就诊于延边大学福祉医院的体检、门诊患者和住院患者血清中HCV抗体进行检测。结果:延吉市人群丙肝血清抗体总阳性率为2.54%;其中,男性阳性率为2.64%,女性阳性率为2.41%,差异无统计学意义(P<0.05)。不同职业丙肝抗体阳性率分析,医护人员最高。并且HCV抗体阳性率随着年龄的增长而增高。结论:延吉市丙型肝炎感染率与年龄和职业相关。     

HCV核心抗原C33肽单克隆抗体的研制与初步鉴定

用ＨＣＶ核心抗原（Ｃ３３肽）与鼠血清白蛋白交联后免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，用杂交瘤技术获得有实用价值的二株ＭｃＡｂ。此二株ＭｃＡｂ除与免疫抗原有较强的抗原－抗体反应外，与ＨＣＶ核心抗原ＣＰ１０也有很好的反应；但与ＨＣＶＮＳ３、ＶＳ５及核心区ＣＰ９抗原无反应性。在竞争ＥＬＩＳＡ中对抗ＨＣＶ－ＩｇＧ阳性血清有较好的抑制作用。     

应用合成肽检测病毒性心肌炎患者血清中柯萨奇B组病毒抗体

目的研究应用合成肽代替完整病毒检测柯萨奇Ｂ组病毒（ＣＶＢ）抗体及其在病毒性心肌炎（ＶＭＣ）病因诊断中的作用。方法从ＣＶＢ衣壳蛋白ＶＰ１及ＶＰ３的保守区及ＣＶＢ３衣壳蛋白ＶＰ２的非保守区各选出一段多肽（分别称为ＶＰ１－１肽、ＶＰ３－１肽、ＶＰ２－１肽）进行化学合成,应用酶联免疫吸附法（ＥＬＩＳＡ）检测这几条多肽与型特异性ＣＶＢ１～６抗体的结合反应。以ＶＰ１－１肽、ＶＰ３－１肽作包被抗原,用间接ＥＬＩＳＡ检测患者血清中ＣＶＢＩｇＧ及ＶＣＢＩｇＭ抗体。结果ＶＰ１－１肽和ＶＰ３－１肽与型特异性ＣＶＢ１～６抗体均有良好的结合反应。８５例健康人、６７例急性ＶＭＣ、３９例慢性ＶＭＣ患者血清ＣＶＢＩｇＧ阳性率分别为２３．５％、５３．７％、３８．５％,ＣＶＢＩｇＭ阳性率分别为７．１％、４９．３％、２８．２％。ＣＶＢＩｇＭ抗体与中和抗体检测结果之间有良好的相关性（Ｐ＜０．００１）,阳性率无明显差别（Ｐ＞０．０５）。结论应用合成肽抗原检测ＣＶＢＩｇＭ抗体有较好的敏感性和特异性。     

Hepatitis C virus infection in different groups of children in Wuhan area

Summary To investigate the incidence of child’s HCV infection in our area, 637 children with different background, including 65 posttransfusion cases, 419 hepatitis patients (250 cases of acute hepatitis A, 156 cases of chronic hepatitis B and 13 cases of non-A, non-B hepatitis), 50 infantile hepatitis syndrome (1HS) infants and 103 healthy day-cared children were tested for serum anti-HCV antibody (EIA) and HCV RNA (nested PCR). It was found that posttransfusion children had significantly higher anti-HCV positive rate (30. 8%) and HCV infection incidence (43.1%) than hepatitis patients (4.3% and 5.3%), IHS infants (6.0% and 8.0%) and daycared children (2.9% and 2.9%). 25 of 33 cases with posttransfusion hepatitis (PTH) developed hepatitis C, which was the leading cause of PTH (75.8%) and NANB PTH (25/30, 83.3%). The incidence of HCV infection in NANBH patients was 23.1% (3/13) which was apparently higher than that in day-cared children (P <0. 02) and lower than that in PTH patients (P<0. 001), but not statistically different from that in AHA and CHB patients (P>0. 05). Mother-infant paired study in IHS group showed that 4 pairs of mother-infant had HCV infection, one boy aged 8 months and his mother were anti-HCV positive, and another 3 pairs possessed HCV RNA in sera. 3 of 103 healthy day-cared children were found to have inapparent HCV infection, who were anti-HCV and HCV RNA positive.     

丙型肝炎病毒标志物测定的临床应用

目的 :探讨丙型肝炎病毒 (HCV)感染者血清及初乳中该病毒标志物存在状况。　方法 :对 2 44份 HCV感染者、33份对照血清和 35份 HCV特异性 Ig G抗体阳性的产妇、41份健康产妇的初乳进行 HCV四种标志物测定。抗HCV- Ig G、Ig M和 GOR抗体采用间接 EL ISA法 ,HCV C33抗原采用双抗体夹心 EL ISA法。　结果 :抗 HCV- Ig G、抗 HCV- Ig M、HCV C33和抗 GOR抗体四种标志物在慢性活动性丙型肝炎组检出率最高 ,分别为 10 0 .0 %、85 .7%、46 .4%和 6 4.3% ;急性输血后丙型肝炎组检出率为 6 6 .7%、10 0 .0 %、2 2 .9%和 42 .9% ;慢性稳定性丙型肝炎组为 94.1%、2 6 .5 %、17.6 %和 5 2 .9% ;血透患者组为 6 2 .6 %、31.3%、4.8%和 45 .6 %。血清抗 HCV Ig G阳性组初乳为 17.1%、2 .9%、8.5 %和 37.1%。血清和初乳对照组除 1例献血员血清抗 HCV- Ig G阳性外 ,其余均为阴性结果。　结论 :除抗 HCV- Ig G外 ,抗 HCV- Ig M、HCV C33和 GOR抗体三种标志物在 HCV感染的相关疾病组中 ,有一定的阳性检出率 ,均可作为 HCV感染的标志 ,可用于 HCV感染后的实验室诊断。     

Clinical application and analysis of hepatitis C virus NS3 antigen detection by ELISA in human serum

Background Hepatitis C virus （HCV） core antigen assays have been produced to exclude infectious donations collected during the preseroconversion window phase （PWP）. For the same purpose, we evaluated the specificity and sensitivity of a novel hepatitis C virus NS3 antigen detection immunoassay and the application of this assay in clinical diagnosis. Methods Samples from 77 healthy subjects, 173 anti-HCV positive patients and 3708 hepatitis patients other than HCV positive were tested with the HCV NS3 antigen assay. Some HCV NS3 antigen positive samples were further validated with HCV-RNA, neutralization and immunodot assays. Twenty-five sequential samples from 11 HCV NS3 antigen positive patients were subjected to kinetic study. Results Only 48 （1.3%） of 3708 anti-HCV negative samples were positive for HCV NS3 antigen. Among them, 44 of 3030 samples from patients only infected with HBV were HCV NS3 antigen positive, 4 of the 445 samples from patients infected with other type hepatitis were HCV NS3 antigen positive. In addition, 42 （24.3%） of 173 anti-HCV positive samples were HCV NS3 antigen positive and all 77 samples from healthy subjects were negative to HCV NS3 antigen assay. Of the 15 HCV NS3 antigen positive samples, 9 （60%） were HCV-RNA positive. The neutralization and positive percentage of immunodot assay for 23 HCV NS3 antigen positive sera were 87.0% （20/23） and 69.6% （16/23） respectively. Of the 25 sequential samples from 11 HCV NS3 antigen positive patients, there was a negative correlation between the OD values and the duration of test （r=-0.989, P〈0.05）, and there were correlations among their HCV NS3 antigen, HCV-RNA and anti-HCV Utres. The anti-HCV antibodies of two sera were detected while their OD values of HCV NS3 antigen decreased gradually. Conclusions The HCV NS3 antigen detection assay showed perfect specificity and high sensitivity. Thus, it would be useful and economical as a routine test in laboratories for early diagnosis of HCV infection and prevention.