FISH技术在产前诊断胎儿染色体数异常中的应用

目的 探讨荧光原位杂交(FISH)技术在快速产前诊断胎儿染色体非整倍体异常中的价值.方法 使用荧光原位杂交技术,选用荧光素标记的双色13/21染色体位点特异性探针和三色18/X/Y染色体着丝粒探针,检测760例胎儿羊水细胞.结果 采用双色13/21号和三色18/X/Y染色体荧光探针检测间期未培养羊水细胞,发现8例21三体综合征,1例13三体综合征,1例45,XO,1例47,XXX,3例性染色体嵌合体.荧光原位杂交检测结果 和常规细胞遗传学检测结果 相比,两者符合率为99%.结论 荧光原位杂交技术在产前快速诊断胎儿染色体非整倍体异常有很高的临床价值.     

人类精子非整倍体率检测的研究进展

男性不育与染色体异常有很大关系,随着生殖医学实验技术的发展,目前对精子染色体数目异常与不育关系的研究日益增多,采用的研究方法和指标、结果分析也有差别,综述了通过荧光原位杂交检测精子染色体非整倍体率的研究方法、指标和结果,对于寻找临床男性不育原因及处理有一定指导意义。     

人类精子非整倍体率检测的研究进展

男性不育与染色体异常有很大关系,随着生殖医学实验技术的发展,目前对精子染色体数目异常与不育关系的研究日益增多,采用的研究方法和指标、结果分析也有差别,综述了通过荧光原位杂交检测精子染色体非整倍体率的研究方法、指标和结果,对于寻找临床男性不育原因及处理有一定指导意义.     

STR在产前诊断中的应用

短串联重复序列(ShortTandemRepeatSTR)即微卫星位点,是一种广泛存在于人类基因组、以2～6个碱基为单位的串联重复排列的序列。STR具有高度多态性,可以作为一种理想的遗传标记,广泛应用于连锁图和单基因病等遗传病的相关基因定位。     

STR在产前诊断中的应用

短串联重复序列(Short Tandem Repeat,STR)即微卫星位点,是一种广泛存在于人类基因组、以2～6个碱基为单位的串联重复排列的序列.STR具有高度多态性,可以作为一种理想的遗传标记,广泛应用于连锁图和单基因病等遗传病的相关基因定位.     

STR在产前诊断中的应用

短串联重复序列(Short Tandem Repeat,STR)即微卫星位点，是一种广泛存在于人类基因组、以2～6个碱基为单位的串联重复排列的序列。STR具有高度多态性，可以作为一种理想的遗传标记，广泛应用于连锁图和单基因病等遗传病的相关基因定位。     

人类精子非整倍体率检测的研究进展

男性不育与染色体异常有很大关系，随着生殖医学实验技术的发展，目前对精子染色体数目异常与不育关系的研究日益增多，采用的研究方法和指标、结果分析也有差别，综述了通过荧光原位杂交检测精子染色体非整倍体率的研究方法、指标和结果，对于寻找临床男性不育原因及处理有一定指导意义。     

NIPT应用于胎儿非整倍体畸形诊断的研究进展

伴随着1997年于孕妇的外周血中发现胎儿来源的基因片段(cfDNA)以及基因组测序技术、生物信息学技术的不断进步,无创性产前诊断技术(non—invasive prenatal testing,NIPT)得以迅速发展。NIPT是一项通过分析母血中胎儿染色体成分的分子诊断技术,目前主要应用于胎儿非整倍体畸形(21-三体综合征、18-三体综合征及13-三体综合征)的产前诊断。该文就NIPT技术在产前诊断,特别是在胎儿非整倍体畸形中的研究进展及面临的挑战进行总结,以期为产科及遗传咨询等相关专业人员提供有益的理论参考。     

女性年龄与卵细胞染色体非整倍体异常的相关关系

目的直接从卵细胞水平研究女性年龄与其卵细胞染色体非整倍体间的相关关系.方法取试管婴儿助孕技术后未能受精成功的卵细胞,采用多色荧光原位杂交方法检测卵细胞13,16,18,21和22号染色体的情况.结果卵细胞的非整倍体率为27.1%,随着女性年龄的增加,卵细胞的非整倍体率也随之上升,两者呈较强的正相关关系(r=0.88,P<0.001).结论女性年龄与其染色体非整倍体异常间存在相关性,对于35岁以上行试管婴儿助孕术的妇女应同时进行遗传咨询.     

荧光原位杂交法检测人精子染色体非整倍体

荧光原位杂交法(FISH)是检测精子非整倍体的简便快速的方法.本文综述了国外采用FISH方法检测精子非整倍体的最新进展.最新的研究表明,精子形态特别是某些特殊畸形如巨头或大头伴多尾的精子与精子非整倍体存在相关性;无精症患者中非阻塞性无精症睾丸精子的非整倍体率显著高于阻塞性无精症附睾精子和正常射精精子;化学物质如丙烯腈、吸烟、睾丸癌化疗等均可导致精子非整倍体率增加.     

不良孕产史夫妇男性精子染色体畸变情况研究

目的 研究男性精子染色体畸变状况以及生育情况。方法 采用三色荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)方法,利用DNA染色体计数探针(chromesome enumeration DNA probes,CEP)X、Y、18与二硫苏糖醇(dithiothreitol,DTT)处理过的有不良孕产史夫妇(研究组)的男性(15例)精子核杂交,计数杂交信号,与对照组(生育过健康子女符合二胎生育指标想再生育的8名男性)进行比较。结果 研究组精子染色体X、Y、18二体率、X+Y缺体比率高于对照组(P<0.05),研究组精子的非整倍体染色体异常率高于对照组;研究组在避免接触有害物质和补充叶酸片剂等3～6个月后再行检查精子染色体X、Y、18的二体率和二倍体率,显示有所降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 FISH技术是一种快速、准确、简单、实用性强的检测精子染色体畸变的方法。     

CS2作业工人的精子X染色体非整倍体率

目的进一步探讨二硫化碳（ＣＳ２）对男性生殖系统的毒性。方法用生物素标记的α－卫星Ｘ染色体特异ＤＮＡ探针与接触ＣＳ２工人精子ＤＮＡ进行荧光原位杂交（ＦＩＳＨ），测定Ｘ染色体非整倍体率。结果厂空气中ＣＳ２平均浓度高于国家最高容许浓度１～３倍，ＣＳ２作业工人血睾酮（Ｔ）含量降低，间质细胞刺激素（ＦＳＨ）及黄体生成素（ＬＨ）含量升高；１１位工人总共计数６０３４４条Ｘ精子，Ｘ精子双体率为０．０８２％±０．０２２％，高于正常健康人的０．０６３％±０．０１３％，差异有显著性（Ｐ＜０．０５）。结论接触ＣＳ２男工妻子流产率增加可能与男工精子染色体非整倍体率增加有关。     

FISH技术快速诊断胎儿染色体数目异常

目的:使用荧光原位杂交(FISH)技术对胎儿染色体数目异常进行快速检测并评估其临床应用价值。方法:使用第13、18、21、X和Y5条染色体特异性的FISH探针对245例孕妇采用未经培养的新鲜羊水进行产前诊断,并与同时进行的羊水染色体检查结果进行对照。另外,选取36例染色体分析结果异常的存档标本(包括20例羊水标本和16例外周血/脐带血标本)对该检测技术进行验证。结果:使用FISH方法成功诊断唐氏综合征9例,18-三体综合征2例,性染色体数目异常3例,和同时进行的常规羊水染色体检查结果一致。但有4例经羊水染色体检出的染色体数目和结构异常,FISH因固有技术限制无法检出。在验证实验中,36例存档标本,全部染色体数目异常均能成功检出,成功率100%。结论:荧光原位杂交(FISH)技术检测第13、18、21、X和Y数目异常是准确快捷的产前诊断方法,值得推广应用。     

建立非重复序列FISH探针及在21/13三体产前诊断中的应用

目的建立21/13号染色体的非重复序列荧光原位杂交(FISH)探针,比较其与商品化含重复序列的探针在对羊水脱落细胞进行快速产前诊断21/13三体的效能方面的差异。方法分析DSCR区域和RB基因区域DNA序列,剔除重复序列后进行PCR扩增和荧光标记,制备21/13号染色体FISH计数探针,与G显带中期淋巴细胞杂交,鉴定探针的杂交位置。选取50例孕周为18～35周的孕妇,经羊膜腔穿刺取羊水标本,分别在培养前后采用Cytocell的21/13号染色体FISH计数探针和自制的非重复序列FISH计数探针进行杂交,计算探针杂交率,并以核型分析结果作为参考,计算探针的准确率。两组数据间差异采用t检验进行统计学分析。结果非重复序列探针位置准确,荧光信号明确,背景更低;两种探针与培养后细胞杂交的杂交率和准确率无明显差异;但对于未培养的羊水间期细胞,非重复序列探针杂交的准确率明显优于普通探针,杂交率两者相似。结论采用非重复序列PCR方式制备21/13染色体计数探针用于羊水间期细胞杂交能明显改善探针的杂交效率和信噪比,有利于提高检测的准确度。     

应用STR在妊娠早期进行苯丙酮尿症产前诊断的研究

目的：应用基因短片段重复序列（STR）对4例曾生育过经典型苯丙酮尿症（PKU）患者的孕妇，在妊娠8－11周进行产前诊断。方法：采用盲取法吸取绒毛组织，提取DNA。应用聚合酶链反应扩增STR，经变性凝胶电泳，再用银染显色方法，分析苯丙氨酸羟化酶（PAH）基因内含子3中TCTA重复序列的多态性。结果：3例胎儿为携带者，1例为正常胎儿。结论：应用STR可在妊娠早期进行苯丙酮尿症的产前诊断。     

荧光原位杂交技术在产前染色体疾病诊断中的应用性研究

目的:优化荧光原位杂交技术(FISH)检测未经培养羊水细胞的方法学平台,规范操作程序,探讨荧光原位杂交技术在检测胎儿染色体数目异常的临床诊断中的临床应用价值。方法:收集适合进行产前诊断的羊水标本25 ml,取5 ml进行FISH(13、21、18、X、Y)检测;同时将20 ml羊水细胞进行细胞培养,收获后制片,常规进行染色体核型分析。结果:应用FISH检测技术,共检测90例标本。均获得诊断结果,检测出1例非整倍体,1例46,XX/46,XY嵌合体,FISH检测标本均能在24～48 h内出结果。FISH结果与核型分析结果一致。结论:FISH技术具有实验方法稳定,结果准确可靠,需用标本量少等特点,因此在临床上有很高的应用价值。     

FISH技术在诊断唐氏综合征及植入前遗传学诊断中的临床应用

目的:探讨优化现有荧光原位杂交(FISH)技术用于产前诊断唐氏综合征及其单细胞植入前遗传学诊断(PGD)的临床应用价值。方法:应用21号和X染色体特异性荧光素标记的双色混合探针对正常人体标本和25例唐氏综合征患儿外周血以及10例血清筛查阳性孕妇羊水进行FISH分析,同步进行羊水细胞培养,行常规细胞染色体核型分析,并以核型分析结果为金标准,建立一套稳定的FISH方法。在常规体外受精-胚胎移植(IVF-ET)技术方法基础上,用该方法分别对13例未受精卵、卵裂球进行唐氏综合征遗传学诊断。结果:正常羊水间期细胞和拟诊唐氏综合征羊水间期细胞经FISH分析,结果与染色体核型分析的结果一致,符合率100%。结论:建立的FISH方法具有快速、简便、准确性高、特异性强的特点,是快速进行产前唐氏综合征筛查及扩大PGD技术应用的简易可靠技术,有很好的临床应用价值。     

产前诊断中限制性胎盘嵌合体病例的发现及检测

目的探讨在产前诊断中限制性胎盘嵌合体(CPM)的发现及意义。方法收集2013年至2020年在广州市妇女儿童医疗中心于产前诊断中无创胎儿DNA检测结果或早孕期11~13+6周绒毛样本染色体非整倍体检测结果与羊水或脐血染色体非整倍体检测结果不一致的病例6例;胎儿分娩后留取胎盘组织,多位点取样,用荧光定量聚合酶链反应(QF-PCR)方法对胎盘组织进行染色体非整倍体检测,并进行分析。结果在6例病例中,羊水或脐血样本检测结果分别为:21号染色体单亲二倍体(UPD21)、46,XX、46,XX、46,XY、46,XX、46,XY;而其胎盘组织中均检测到两种核型类型的细胞嵌合,分别为UPD21/47,XX,+21、46,XX/45,XO、46,XX/45,XO、46,XY/47,XY,+13、46,XX/45,XO、46,XY/47,XY,+21,确认均为CPM。结论CPM可导致以胎盘绒毛或胎盘来源物为检测靶标的核型检测结果与胎儿实际核型结果不一致,在产前诊断中认识到限制性胎盘嵌合现象的存在可以解释绒毛样本检测结果与羊水或脐血样本结果不一致的现象,避免因CPM导致误诊的发生。     

潍坊地区自然流产的遗传学病因研究

目的探讨潍坊地区自然流产的主要遗传学因素。方法选取2011年8月至2014年8月在潍坊市妇幼保健院自愿接受检查的812对自然流产夫妇及其清宫术后的812例流产胚胎进行染色体检查,同时选取100对至少生育过1胎且生育史正常的夫妇作为对照组,分析流产胚胎染色体异常与双亲染色体、孕妇年龄、自然流产次数和孕周的关系。结果①自然流产胚胎组织812例,其中染色体异常397例,异常率为48.89%;②812对(1 624例)自然流产夫妇存在染色体异常者61例,异常率为3.76%;对照组100对(200例)夫妇存在染色体异常者2例,异常率为1.00%,两者间比较差异有统计学意义(x^2=4.056,P<0.05);③61对双方之一存在染色体异常的夫妇,其流产胚胎存在染色体异常者45例(73.77%),751对双方染色体均正常的自然流产夫妇,其流产胚胎染色体异常352例(46.87%),两者间比较差异有统计学意义(x^2=16.337,P<0.05);流产胚胎染色体异常与双亲染色体异常具有相关性(c=0.140,P<0.05);④812例自然流产胚胎根据孕妇年龄、自然流产发生次数及流产发生的孕周不同分组,其异常率与孕妇年龄、流产发生孕周有关,经比较差异均有统计学意义(x^2值分别为19.044和8.827,P<0.05)。结论①胚胎染色体异常是导致潍坊地区自然流产发生的主要因素;②自然流产夫妇染色体异常率高于正常人群;③胚胎染色体异常与双亲染色体异常有相关性。