天津市蚊虫西尼罗病毒携带调查

目的了解天津市蚊虫携带西尼罗病毒（WNV）情况。方法以灯诱法进行蚊虫采集,采用荧光定量PCR检测方法对WNV进行检测。结果天津市有候鸟栖息的湖泊、洼地周边主要蚊种为淡色库蚊（占93．68％）,同时存在凶小库蚊和三带喙库蚊。对1091只蚊虫进行西尼罗病毒检测,结果均为阴性。结论本次调查未发现蚊虫携带WNV,为预防和控制WNV传人及可能发生的流行,有必要开展对媒介蚊虫及WNV的长期监测。     

西尼罗病毒的蔓延及提示

西尼罗病毒是一种蚊媒病毒，能够侵袭人的中枢神经系统，引发致命性脑炎。其原发于非洲，20世纪90年代在罗马尼亚、俄罗斯和以色列流行，1999年传入北美，纽约市的脑炎大爆发首次检测到该病毒。1999～2003年，西尼罗病毒席卷北美全境，并继续在西半球大规模扩散。本文就其病原学、发病机制、流行情况、治疗及预防作了综述。     

致纽约脑炎的新病毒:西尼罗病毒

本文介绍了在美国纽约爆发的圣路易脑炎的流行情况、传播途径和临床表现,并提出导致的原因为西尼罗病毒.作者针对旅行者提出预防措施.     

西尼罗病毒研究进展

西尼罗病毒(West Nile virus)是1937年12月从非洲乌干达西尼罗地区1例发热女患者的血液标本中首先分离的，并因此而得名。最初，人们只认为它是非洲的一种地方病，直到1957年以色列发生西尼罗病毒性脑膜脑炎爆发后，才真正认识到该病毒的危害。此后，法国、南非也相继发生了该病的流行。 年)、     

西尼罗病毒研究现状

西尼罗病毒病（West Nile virus disease）是由西尼罗病毒（West Nile virus,WNV）感染引起的一种人畜共患的急性传染病。该病毒最初是1937年从乌干达西尼罗地区一名发热的妇女血液中分离发现而得名。WNV感染人类后可引起西尼罗热和WNV性脑炎。鸟类是WNV的贮存宿主,人和哺乳动物是偶然宿主,传播媒介主要为蚊。     

西尼罗病毒PCR检测方法的建立

[目的]应用通用引物建立快速、敏感、特异的PCR检测方法,用于西尼罗病毒感染相关疾病的实验室监测和早期诊断。[方法]以西尼罗病毒感染者血清分离得到的病毒RNA逆转录cDNA为检测样本,通过对多株病毒基因组序列各区段保守性进行分析比较,在基因组非编码区设计引物和探针,分别用巢式PCR和荧光定量PCR方法对样本进行扩增。[结果]以西尼罗病毒RNA逆转录cDNA为模板,采用所建立的两种PCR方法,均可得到阳性检测结果。[结论]本研究设计的PCR扩增引物具有较好的通用性;建立的实时荧光定量PCR结合巢式PCR用于检测WNV的分析方法具有互补性,为研制成熟的西尼罗病毒检测试剂盒提供实验基础。     

西尼罗病毒的蔓延及提示

西尼罗病毒是一种蚊媒病毒,能够侵袭人的中枢神经系统,引发致命性脑炎。其原发于非洲,20世纪90年代在罗马尼亚、俄罗斯和以色列流行,1999年传人北美,纽约市的脑炎大爆发首次检测到该病毒。1999～2003年,西尼罗病毒席卷北美全境,并继续在西半球大规模扩散。本文就其病原学、发病机制、流行情况、治疗及预防作了综述。     

候鸟及其在西半球传播的西尼罗病毒（连载）

西尼罗病毒感染致人死亡的例子值得重视。因现代交通运输极为便捷，这种以鸟一蚊途径传到人的铁于实现，所以密切地注视和研究它具有重要意义。本文所述主要为传播方式及其特点探索，就传染源、传播媒介、宿主和易感者的关系作了综合性报告。     

哺乳动物细胞西尼罗病毒样颗粒表达、纯化及其鉴定

目的利用哺乳动物细胞表达含有西尼罗病毒(WNV)prM和E蛋白,形成病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs),为西尼罗病毒感染的免疫诊断试剂的研制奠定基础。方法筛选典型西尼罗病毒株,构建重组质粒,转染293T细胞,表达并纯化西尼罗病毒prM-E蛋白,利用透射电镜、免疫印迹试验、间接免疫荧光实验(IFA)和酶链免疫吸附试验(ELISA)对表达产物进行鉴定。结果重组质粒转染细胞后产生病毒样颗粒(viruslike particles VLPs),转染细胞上清纯化物中透射电镜观察到重组蛋白形成的球型颗粒,免疫印迹试验和间接免疫荧光试验表明,表达的病毒样颗粒蛋白能够与抗西尼罗病毒抗体特异结合,具有良好的抗原性;间接ELISA证实,重组蛋白可以作为抗原用于检测患者血清特异性抗体。结论在哺乳动物细胞中表达的西尼罗病毒样颗粒具有良好的抗原性,为西尼罗病毒感染快速特异诊断试剂研制奠定了基础。     

出血性大肠杆菌单克隆抗体的制备与鉴定

以肠出血性大肠埃希氏菌 (EnterohaemorrhagicE .coli,EHEC)O15 7∶H7免疫Balb c小鼠 ,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞Sp2 0融合、筛选 ,经 3次亚克隆建立了一个稳定分泌抗大肠杆菌O15 7单克隆抗体的杂交瘤细胞株 ,命名为 3A5。分泌抗体属IgM亚型 ,腹水的抗体效价达 1∶1× 10 6 。以辛酸 饱和硫酸铵法纯化后抗体的工作浓度为 1∶2× 10 4 ,检出限为 10 5～ 10 6 cfu ml。该抗体对大肠杆菌O15 7有较高特异性 ,同时抗出血性大肠杆菌O113∶H2 1抗原     

抗人巨细胞病毒重组抗原gp52单克隆抗体的研制及应用研究

目的 :为了获得抗人巨细胞病毒 (HCMV)单克隆抗体 (McAb) ,并将其用于人HCMV感染后的抗体检测。方法 :采用杂交瘤技术获得抗重组HCMV(rhCMV)gp 5 2蛋白的McAb。并用抗人 μ链抗体包被、rhCMVgp5 2蛋白作抗原和HRP -McAb作标记抗体 ,建立了检测抗HCMV抗体的捕获ELISA。用该法检测献血员、病毒性肝炎患者及疑似CMV感染的肝炎综合征患者血清共计 939份。结果 :最终获得 4株 (3E9,5A6 ,4G1 2 ,2H2 )能稳定分泌高效价抗rhCMVMcAb的杂交瘤细胞。它们分别识别gp5 2蛋白上的 2个不同抗原表位 ,2H2识别gp5 2蛋白上的一个表位 ,3E9,5A6和 4G1 2则共同识别另一个表位。用其建立的捕获ELISA ,gp5 2蛋白抗原最佳浓度为1 μg·mL- 1,酶标单抗的工作浓度为 1 :1 6 0 0 ,批内平均变异系数 3.7% ,批间平均变异系数 7.9%。6 34例献血员IgM抗体阳性 1 7例 (2 .7% ) ;2 88例病毒性肝炎患者 ,阳性 1 0例 (3.5 % ) ;1 7例肝炎综合征患者 ,阳性 1 1例 (6 4.7% )。均经免疫印迹法证实。结论 :用gp5 2蛋白及其单抗建立的捕获ELISA ,特异性强 ,灵敏度高 ,不受类风湿因子的影响 ,结果可靠 ,优于全病毒抗原构成的检测试剂 ,适用于临床诊断和流行病学调查     

一株抗腮腺炎病毒Fab抗体克隆的筛选

[目的]获得抗腮腺炎病毒Fab段基因工程抗体。[方法]将腮腺炎病毒抗原（MUV-Ag）包被在固相ELISA板中,采用＂吸附-洗脱-扩增＂的方法,对已构建的抗腮腺炎病毒噬菌体抗体库进行富集。从富集后的抗体库中筛选抗腮腺炎病毒阳性克隆,并交叉筛选鉴定其特异性。[结果]在对176个克隆筛选后,再用麻疹病毒抗原（MEV-Ag）、混合副流感病毒抗原（mPIV-Ag）和呼吸道合胞病毒抗原（RSV-Ag）进行交叉筛选,最终获得特异性抗MUV-Ag阳性克隆2个（B206和D210）。对其中1株B206序列分析表明它的κ轻链V基因属于VκⅠ（O12）亚群,J基因属于Jκ1;γ链V基因属于VH1-69亚群,D基因来自D3-10,J基因则来自JH6。[结论]用腮腺炎病毒抗原成功地从抗体库中筛选到特异性阳性克隆,构建的噬菌体抗体库是有效的。     

B型肉毒毒素单克隆抗体杂交瘤株的建立

[目的]制备、筛选稳定分泌B型肉毒毒素单抗的杂交瘤克隆,为相关研究提供工具。[方法]采用纯化的B型肉毒毒素免疫BALB/c小鼠,用免疫小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞Sp2/0融合,筛选阳性克隆。[结果]得到10株稳定分泌B型肉毒毒素单抗的杂交瘤克隆,1株为IgM,其余9株分泌IgG,亚类为IgG2a。10株单克隆抗体均与B型肉毒毒素呈特异性反应,而与标准A型肉毒毒素无交叉反应,腹水单抗的效价均在105以上。[结论]10株杂交瘤细胞株均能分泌抗B型肉毒毒素单克隆抗体,为B型肉毒毒素的检测和研究提供了工具。     

单克隆抗体亲和层析纯化日本脑炎病毒E糖蛋白的研究

本文探讨了用JEV—E McAb制备亲和层析柱纯化E糖蛋白的方法。结果表明,超声粉碎法裂解病毒囊膜不影响HA活性,而用NP40、去氧胆酸钠、Tri—ton X-100处理病毒原始材料,则导致HA活性的丧失;pH11.5、0.05M二乙胺洗脱剂对E的生物活性影响较少,而3M KSCN对E的HA活性有明显影响;用亲和力适中的McAb2F_2和mC_3亲和层析柱纯化E糖蛋白,其HA活性的回收率分别为30～40%及30～60%,蛋白收获量分别为0.33～1.26mg及0.21～0.66mg,相对HA比活性分别提高3～8倍及8～30倍;经SDS—PAGE考马斯亮兰染色,显示一条带,分子量相当于E糖蛋白;纯化的E糖蛋白可诱导小鼠产生HI抗体及NT抗体。     

单克隆抗体对甲_1型流感病毒的抗原分析和快速诊断的研究

用宁夏地区分离的甲,型流感毒株宁防86—27(H_1N_1)制备了抗甲_1型流感病毒血凝素的McAb39株,其血抑滴度在1:2000—1:256000,Ig亚类为IgG_1、IgG2a、IgG2b。用自制的McAb对宁夏历年分离的甲_1型毒株的抗原分析表明:抗原漂移存在,且以1981和1987年的毒株抗原漂移明显。用我们的McAb对甲_1型毒株的间接免疫荧光试验,证实此法特异性好,敏感性高,确有早期快速诊断的意义。     

葡聚糖纳米磁颗粒的制备及表征

目的制备一种性能良好的葡聚糖纳米磁颗粒,为磁颗粒的进一步应用奠定基础。方法采取化学沉降法制备6种磁颗粒,利用透射电镜和扫描电镜、光子相关光谱法、Benedict实验及红外吸收光谱法等仪器和方法对磁颗粒的理化性质进行了检测。结果制备出一种粒径约为50nm,磁性核心为5nm,大小均一,具有核壳结构和超顺磁性颗粒(剩磁Br=0.375emu·g-1);在pH4~10范围内颗粒结构都能保持稳定,保存1年检测结果无明显变化。结论成功制备出葡聚糖纳米磁颗粒,该磁颗粒具有很好的悬浮稳定性和磁响应性。     

抗旋毛虫鸡卵黄抗体的制备与鉴定

[目的]制备高效价特异性鸡卵黄免疫球蛋白(immunoglobulin of yolk,IgY).[方法]用纯化的旋毛虫幼虫抗原免疫育龄种鸡,经水稀释法初步纯化浓缩后,用ELISA鉴定其免疫学活性,测定纯化后蛋白含量,并用SDS-PAGE进行分析鉴定.[结果]获得ELISA效价为1×106的抗旋毛虫卵黄抗体,蛋白含量为9.67 mg/ml.经SDS-PAGE分析,出现2条蛋白带,纯度达到88%以上.[结论]用旋毛虫抗原加弗氏佐剂免疫种鸡制备的卵黄抗体产量大、效价高,这种抗体可进一步用于旋毛虫感染的研究.     

青年人群血清甲_3型流感抗体检测和流行株的抗原性分析

采集４５０例战士血清标本，分别用国家代表株甲３／济防／１５／９０（Ｈ３Ｎ２）和甲３／北京／３２／９２（Ｈ３Ｎ２）作血清血凝抑制抗体测定，青年对甲３型抗体阳性率为６０％～６７％，其ＧＭＴ为３４～４５。１９９４～１９９５年两年中在军营人群中分离到３株Ｈ３Ｎ２毒株流行株，分别应用国际、国家和地方代表株作抗原性分析，证明流行株与它们之间抗原性有明显差异。本文分离到的３株流行株均上送国家流感中心鉴定，证实为Ｈ３Ｎ２亚型毒株。     

壬基酚人工抗原及多克隆抗体的制备

目的制备壬基酚人工抗原和多克隆抗体,为采用免疫学方法检测壬基酚做准备。方法利用碳二亚胺(DCC)法制备人工抗原,并用紫外扫描法初步验证,用所制备的人工抗原对家兔免疫制备多克隆抗体,并用ELISA法检测抗体滴度。结果初步验证人工抗原中壬基酚与匙孔嘁血蓝蛋白的结合比为18∶1,ELISA法测定抗体效价为1∶32 000。结论用碳二亚胺法成功合成了壬基酚人工抗原,并获得了较高效价的多抗血清,制备壬基酚多克隆抗体所用的时间不足3 d。     

抗日本血吸虫Sjp40鸡卵黄抗体的制备及其生物学特性鉴定

目的制备抗日本血吸虫蛋白（sjp40）鸡卵黄抗体（eggyolkimmunoglobulinY,IgY）,以期为日本血吸虫病的免疫学诊断提供一种特异性强、灵敏度高的优势抗体。方法以纯化的sjp40抗原免疫健康SPF级产蛋鸡,初次免疫2周后开始每日收集的鸡蛋为样本,采用水稀释硫酸铵沉淀法从鸡蛋中初步提取抗sjp40IgY,进一步经透析袋、DEAE-FF阴离子交换柱纯化IgY。用SDS—PAGE、WesternBlot及ELISA对纯化后的抗sjp40IgY进行分析鉴定。结果纯化的特异性抗Sjp40IgY,抗体效价1：10。。相对分子质量为180kDa,SDS．PAGE可见有2条主要蛋白带,分别约为66kDa和35kDa。并可被sj040特异性识别。结论成功制备具有良好免疫反应性、特异性强、灵敏度高的抗Sip40特异性IgY抗体。