SARS冠状病毒S基因序列及细胞抗原表位预测

目的 比较SARS冠状病毒各分离株S基因序列及氨基酸序列之间的差异，预测SARS-CoV的S蛋白的抗原表位。方法 利用Lasergene软件包中的EditSeq从21株SARS冠状病毒分离株截取S基因序列并翻译成氨基酸序列，然后用ClustalX软件对截取序列进行比较分析，确定基准株，最后用Protean软件对基准株进行抗原表位预测。结果 在21株分离株的S基因中有8株核苷酸序列、13株氨基酸序列没有发生点突变；预测出78个可能性抗原表位。结论 SARS-CoV的S蛋白相当保守，只发生个别点突变，可能性抗原表位多，且在其中的14个区域中可能性最显著。     

3种ELISA试剂对SARS冠状病毒血清抗体的检测分析

目的 了解目前常用的SARS冠状病毒血清抗体酶联免疫吸附试验(ELISA)诊断试剂对人和动物的检测结果。方法 收集人类SARS接触者和动物血清标本,用2-3种ELISA试剂分别检测SARS冠状病毒血清抗体。结果 华大试剂检测阳性率最高为4．41％,3种试剂各自独立实验间的相关系数在0．431-0．932之间,除万泰试剂和华大试剂的检测结果有相关性(r=0．827)外,其余试剂间的结果均无相关性。结论 不同试剂的抗体检出阳性率有部分差异,相同试剂两次检测结果具有相关性,不同试剂间的检测结果不一定有相关性。     

SARS冠状病毒S蛋白部分序列的克隆与表达

〔目的〕表达SARS冠状病毒S蛋白部分序列S1。〔方法〕采用逆转录 -多聚酶链反应 (RT -PCR)技术从SARS冠状病毒RNA中扩增出编码S1蛋白的基因片段 ,鉴定后将目的片段与原核表达载体pQE3 0连接 ,构建重组表达质粒pQE3 0 -S1,IPTG诱导该重组质粒转化的大肠杆菌产生S1重组蛋白。〔结果〕(1)RT -PCR扩增获得长约 115 0bp的S1基因片段。 (2 )SDS -PAGE证明 ,S1重组蛋白的分子量约为 40kDa。 (3 )表达的蛋白能与SARS病人血清反应。〔结论〕成功构建了SARS冠状病毒S1蛋白的重组表达质粒 ,该质粒在大肠杆菌中表达了S1蛋白     

登革病毒E蛋白抗原表位研究进展

提要登革病毒是虫媒病毒B组的一个成员,其RNA编码3种结构蛋白和7种非结构蛋白。研究发现,病毒抗原中既存在有中和性抗原表位,又有免疫增强抗原表位。本文阐述了登革病毒主要抗原E蛋白的表位研究进展。     

汉坦病毒核衣壳蛋白抗原表位的研究进展

汉坦病毒核衣壳蛋白具有很强的抗原性和免疫原性，其氨基端约１００个氨基酸大多具有亲水性，且能被患者和免疫动物的血清及许多抗汉坦病毒的单克隆抗体所识别，是汉坦病毒核衣壳蛋白的主要抗原表位区。本文就近年来 一方面的研究作一简要综述。     

汉坦病毒核衣壳蛋白抗原表位的研究进展

汉坦病毒核衣壳蛋白具有很强的抗原性和免疫原性,其氨基端约100个氨基酸大多具有亲水性,且能被患者和免疫动物的血清及许多抗汉坦病毒的单克隆抗体所识别,是汉坦病毒核衣壳蛋白的主要抗原表位区。本文就近年来这一方面的研究作一简要综述。     

基于结核分枝杆菌多表位抗原的诊断试剂研制及临床评价

目的:基于结核分枝杆菌多表位抗原研制的新型结核免疫诊断试剂进行临床评价,评价其灵敏度和特异性,探讨其应用价值。方法:采用建立的间接ELISA方法,分别检测结核病和肺部其他疾病及健康人群血清样品。结果:508份肺结核患者样品中,检出阳性433份,灵敏度85.23%(433/508),健康人523份中,检出阳性49份,特异性90.63%(49/523)。结论:研制的新型的结核抗体免疫诊断试剂灵敏度高,特异性强,可用于结核感染的大规模筛查试验。     

主要黄病毒E蛋白抗原表位分析与初步鉴定

目的 对主要黄病毒结构蛋白的抗原表位情况进行系统分析,鉴别共同及特异性抗原表位并对可能的特异性抗原表位进行原核表达.方法 分别利用DNAStar及ANTHEPROT软件对登革病毒1～4型、流行性乙型脑炎(乙脑)病毒及黄热病毒E蛋白的亲水性、抗原性、可塑性、表面可及性和Garnier-Robson的二级结构进行分析,预测可能的抗原表位.在此基础上,根据表位位置和氨基酸序列的相似性,分析6种病毒的共有及特异性抗原表位,并参考GenBank中的序列信息,对预测的抗原表位进行比对,进一步分析抗原表位在不同病毒株中的保守性.然后利用pET32及pMAL-c2x系统对可能的特异性抗原表位进行高效原核表达、Western blot验证其抗原性.结果 经系统的生物信息学分析,共预测获得登革病毒1～4型、乙脑病毒及黄热病毒共有抗原表位15个,病毒特异性抗原表位47个.利用pET32及pMAL-c2x系统对6种病毒部分可能的特异性抗原表位进行了高效表达.Western blot结果显示登革病毒1型及2型表达抗原片段表现良好的抗原反应原性,并与试验中所用其他黄病毒及甲病毒多克隆抗体无明显的交叉反应.而所表达的登革病毒3型和4型、乙脑病毒及黄热病毒片段无抗原反应原性.结论 6条原核表达抗原片段经Western blot验证,获得登革病毒1型和2型特异性抗原片段.     

丙型肝炎病毒核心区多肽的抗原表位分析和原核表达

目的 分析HCV核心区多肽的抗原表位,选择具有优势抗原表位的多肽用原核表达载体表达,并获得该表达载体的稳定表达菌株. 方法 根据软件分析选取带有优势抗原表位的HCV核心区多肽,找出对应DNA序列,逆转录PCR扩增目的基因,克隆到原核表达载体中进行诱导表达.表达的目的蛋白用His Bind Columns纯化,用ELISA法检测其免疫活性. 结果 获得了序列正确的HCV-core基因和表达良好的该基因原核表达载体pET-28a-core,该表达载体表达的目的蛋白可被很好地纯化并具有良好的HCV抗原活性. 结论 成功地重组了HCV核心区蛋白,获得了HCV抗原性良好的HCV核心区抗原.     

麻疹病毒血凝素蛋白抗原表位的预测与分析

目的 探讨麻疹病毒(MeV)流行株血凝素蛋白(H)抗原表位上氨基酸(aa)变异对病毒抗原性的可能影响。方法 利用生物信息学软件预测MeV H蛋白上B细胞线性表位,设计并合成来源于疫苗株和流行株表位以及同一区域非表位上的多肽对。间接ELISA法检测合成多肽的免疫原性,并制备多肽免疫血清。采用交叉ELISA法分析两条多肽间的抗原性差异,计算抗原比。结果 合成的多肽均能与MeV免疫血清结合,其中设计在表位区的多肽对CW23/CW22(273～282 aa)结合能力最强,而非表位区多肽对CW150/CW151(418～427 aa)结合能力最弱。多肽对中来源不同两条多肽间抗原性差异较大,其中CW23(疫苗株来源)与CW22(流行株来源)间抗原比为16,CW123(疫苗株来源)与CW124(流行株来源)(236～246 aa)间的抗原比为2.877±0.583。非表位多肽对中,CW125与CW126(356～364 aa)间抗原比为1.631±0.481,而CW150与CW151间抗原比为10.367±1.617。结论 麻疹流行株上仍存在保守的抗原表位,但预测的抗原表位及非表位区上的部分aa变异导致疫苗株与流行株间抗原性存在差异。     

检测SARS冠状病毒的套式RT-PCR方法的建立与初步应用

[目的]建立套式RT-PCR检测SARS冠状病毒的方法。[方法]从广东地区SARS患者尸解肺组织、咽拭子、嗽口水及本实验室分离的SARS冠状病毒（SAPS—CoV）组织培养上清中提取RNA，利用针对SARS冠状病毒多聚酶基因的特异性引物，进行逆转录及套式PCR扩增。扩增出的阳性片段连接入pGEM—T载体中，测序后比较其与其他已知SARS冠状病毒的同源性。[结果]从SARS患者尸解肺组织、咽拭子、嗽口水及SARS冠状病毒组织培养上清中均可扩增出阳性片段，经测序后证实是SARS冠状病毒特有序列。[结论]针对SARS冠状病毒多泵酶基因所建立的套式RT—PCR方法适用于临床标本及组织培养标本中SARS冠状病毒的检测。     

卡氏肺孢子虫kexin蛋白抗原表位预测

[目的]预测卡氏肺孢子虫kexin蛋白的抗原表位。[方法]应用互联网服务器及相关生物软件预测卡氏肺孢子虫kexin蛋白抗原表位,进行生物信息学分析。[结果]kexin蛋白存在多个潜在的抗原表位,其中T细胞表位按积分位于第367～381,38～52,128～156,351～388,426～440位氨基酸等区域,B细胞表位位于第133～215,300～442及660～733位氨基酸区域。[结论]kexin抗原表位可能主要位于第38～215及300～442氨基酸序列区域内或其附近,抗原表位的预测可以有目的地克隆kexin重组基因片段,为研究高效卡氏肺孢子虫疫苗奠定基础。     

P-糖蛋白、Survivin蛋白在卵巢上皮性癌中的表达及其意义

[目的]研究上皮性卵巢癌组织中P-糖蛋白、Survivin蛋白的表达及其临床意义。[方法]采用免疫组化法检测64例卵巢上皮性癌、22例卵巢良性上皮性肿瘤、10例正常卵巢组织P-糖蛋白、Survivin蛋白的表达。[结果]卵巢癌组织中P-糖蛋白、Survivin蛋白的阳性表达率分别为34.85%（21/64）及51.52%（31/64）,正常卵巢组织及卵巢良性上皮性肿瘤中两者均未表达。卵巢癌组织中P-糖蛋白阳性表达率以卵巢黏液性囊腺癌最高,与其他两组相比存在显著性差异（P﹤0.05）;分化程度越低阳性表达率越高,各组相比差异有统计学意义（P﹤0.05）;早期（Ⅰ～Ⅱ期）阳性率低于晚期（Ⅲ～Ⅳ期）,两组相比差异有统计学意义（P﹤0.01）;Survivin蛋白的阳性表达率浆液性囊腺癌及黏液性囊腺癌高于内膜样癌,差异有统计学意义（P﹤0.05）;高、中、低分化组阳性表达率逐渐升高,各组相比差异无统计学意义（P﹥0.05）;晚期（Ⅲ、Ⅳ）阳性表达率高于早期（Ⅰ、Ⅱ）,两组相比差异有统计学意义（P﹤0.05）。[结论]联合检测P-糖蛋白、Survivin蛋白的阳性表达率对卵巢癌预后判断有重要参考价值。     

乳腺癌中nm 23-H1 mRNA及其蛋白低表达的研究

目的 :为探讨nm 2 3-H1mRNA及其蛋白低表达之间相关性及与乳腺癌生物学行为的关系。方法 :应用RT/PCR及免疫组化方法对 5 8例乳腺癌中nm2 3-H1mRNA及其蛋白的表达进行检测。结果 :分别为 44 8% ,48 2 %的乳腺癌伴有nm2 3 -H1mRNA或该基因编码蛋白的低表达 ;nm2 3-H1mRNA与其蛋白表达虽有相关性 ,但并不完全吻合。低水平的nm2 3-H1mRNA或其蛋白与乳癌淋巴结转移呈显著相关。结论 :通过nm2 3 -H1水平的检测对乳癌的转移潜能及预后的判断有较重要的意义     

人重组内皮抑素基因的克隆与融合表达

目的构建人内皮抑素(endostatin)融合蛋白表达载体,并在大肠杆菌中表达。方法用反转录多聚酶链反应(RT—PCR)得到人内皮抑素全基因,连接PGEM—T载体,测序确认,定向克隆重组入pTRX表达载体,转化大肠杆菌B121(DE3),IPTG诱导表达。结果经SDS—PAGE分析,出现特异性蛋白质条带,大小与预期相符合。结论人内皮抑素基因在原核细胞表达载体pTRX中获得成功表达,为应用内皮抑素进行肿瘤的抗血管生成治疗奠定了基础。     

人源S100A1蛋白的表达纯化与鉴定

目的 构建pBV220-S100A1表达栽体,表达并纯化人源S100A1蛋白,为进一步研究人源S100A1蛋白相关的生物学功能及应用于临床诊断奠定基础.方法 采用全基因合成法合成人源S100A1基因;通过GeneBank查询人源S100A1蛋白的氨基酸序列,进行序列优化设计,同时引入Ecor Ⅰ 和BamH Ⅰ 酶切位...     

大肠癌发生过程中p16蛋白的表达及其临床意义

目的 :探讨p16蛋白在大肠癌中的表达及意义。方法 :采用免疫组化ABC法观察 80例大肠癌、大肠腺瘤及正常粘膜中 p16蛋白的表达情况。结果 :大肠癌组织 p16蛋白阳性表达率为 40 0 % ,低于正常粘膜及腺瘤中的表达(P <0 .0 5 ) ,其阳性表达率在癌组织的分化程度、有无淋巴结转移及病人生存时间等方面有显著性差异 (P <0 .0 5 )。结论 :大肠癌组织中存在 p16蛋白的缺失和突变 ,且p16蛋白在大肠癌癌细胞的增殖和分化中起重要的调控作用     

抗人巨细胞病毒重组抗原gp52单克隆抗体的研制及应用研究

目的 :为了获得抗人巨细胞病毒 (HCMV)单克隆抗体 (McAb) ,并将其用于人HCMV感染后的抗体检测。方法 :采用杂交瘤技术获得抗重组HCMV(rhCMV)gp 5 2蛋白的McAb。并用抗人 μ链抗体包被、rhCMVgp5 2蛋白作抗原和HRP -McAb作标记抗体 ,建立了检测抗HCMV抗体的捕获ELISA。用该法检测献血员、病毒性肝炎患者及疑似CMV感染的肝炎综合征患者血清共计 939份。结果 :最终获得 4株 (3E9,5A6 ,4G1 2 ,2H2 )能稳定分泌高效价抗rhCMVMcAb的杂交瘤细胞。它们分别识别gp5 2蛋白上的 2个不同抗原表位 ,2H2识别gp5 2蛋白上的一个表位 ,3E9,5A6和 4G1 2则共同识别另一个表位。用其建立的捕获ELISA ,gp5 2蛋白抗原最佳浓度为1 μg·mL- 1,酶标单抗的工作浓度为 1 :1 6 0 0 ,批内平均变异系数 3.7% ,批间平均变异系数 7.9%。6 34例献血员IgM抗体阳性 1 7例 (2 .7% ) ;2 88例病毒性肝炎患者 ,阳性 1 0例 (3.5 % ) ;1 7例肝炎综合征患者 ,阳性 1 1例 (6 4.7% )。均经免疫印迹法证实。结论 :用gp5 2蛋白及其单抗建立的捕获ELISA ,特异性强 ,灵敏度高 ,不受类风湿因子的影响 ,结果可靠 ,优于全病毒抗原构成的检测试剂 ,适用于临床诊断和流行病学调查     

流行性出血热病毒地方株细胞抗原片制备及应用的研究

本文用流行性出血热病毒(EHFV)HU、B_2地方毒株接种Vero-E_(?)细胞后,用PBS制备细胞悬液直接点片经CO_2培养法制备EHFV细胞抗原片,与国家标准株(A_(?))细胞抗原片同时检测野鼠型病毒免疫血清,家鼠型病毒免疫血清,EHF病人血清及健康人血清抗体,其结果均一致,现已推广应用于基层临床早期诊断,在健康人群隐性感染调查中也取得满意效果。     

缺锌对大鼠睾丸金属结合蛋白的诱导及其与睾酮水平的关系

本研究通过观察缺锌大鼠及缺锌后补锌大鼠睾丸金属结合蛋白（ｔｅｓ－ｔｉｓｍｅｔａｌ－ｂｉｎｄｉｎｇｐｒｏｔｅｉｎ，ＴＭＢＰ）、睾丸和血清锌和睾酮含量的变化，探讨缺锌及低睾酮对ＴＭＢＰ的诱导，揭示ＴＭＢＰ在睾丸的功能。结果表明，营养性缺锌可诱导ＴＭＢＰ大幅度升高。缺锌引起的睾丸睾酮下降也可能是诱导ＴＭＢＰ的因素，缺锌时睾丸锌和睾酮含量与ＴＭＢＰ含量呈负相关。