六价铬对L-02肝细胞线粒体功能的影响

目的　探讨六价铬 (Cr(VI) )对肝细胞线粒体与凋亡密切相关功能的影响。　方法　选取 2、4、8、16、3 2、64μmol/L 6个不同浓度的Cr(VI)溶液处理L -0 2人胚肝细胞 6h ,采用MTT法检测细胞活力和线粒体酶抑制率 ;荧光分光光度法检测线粒体膜通透性转运孔 (PTP)的开放程度和线粒体膜电位的 (△ψm)的变化。　 结果　在 2～ 64 μmol/LCr(VI)处理浓度 ,Cr(VI)对L -0 2肝细胞具有明显的细胞毒性 ,其细胞存活率与Cr(VI)处理浓度呈负相关 (相关系数r =-0 .910 )。随着Cr(VI)浓度的增加L -0 2肝细胞线粒体总酶活性受到抑制 ;线粒体PTP孔开放程度增加 ;线粒体膜电位(△ψm)降低 ,且与对照组比较均具有显著性差异 (P <0 .0 5 )。　 结论　Cr(VI)可对L -0 2肝细胞线粒体与凋亡相关的功能产生损伤效应。     

六价铬诱导L-02肝细胞凋亡与线粒体功能损伤的关系研究

目的研究六价铬[Cr(VI)]对L-02肝细胞凋亡率和线粒体功能的影响,初步探讨二者之间的关系。方法选取0、2、4、8、16、32和64μmol/LCr(VI)溶液处理L-02肝细胞6h,采用流式细胞分析检测细胞凋亡率;荧光分光光度法检测线粒体膜通透性转运孔(PTP)的开放程度和线粒体膜电位(△ψm)的变化。结果2~64μmol/LCr(VI)对L-02肝细胞具有细胞毒性,随着Cr(VI)浓度的增加L-02肝细胞凋亡率升高;线粒体PTP开放程度增加;线粒体膜电位(△ψm)降低,且与对照组比较差异均有显著性(P<0·05)。结论Cr(VI)诱导L-02肝细胞凋亡与线粒体功能损伤有关。     

六价铬诱导L-02肝细胞应激损伤的microRNA研究

目的 通过体外实验,在细胞水平探讨六价铬[Cr(Ⅵ)]诱导的L-02肝细胞氧化应激状态及microRNA谱系的改变.方法 实验中设计不同的Cr(Ⅵ)浓度梯度,选择不同的时间点进行观察,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测L-02肝细胞活力,用荧光探针DCFH-DA观察L-02肝细胞氧化应激状态,用实时定量PCR技术检测L-02肝细胞中多个毒物特异性microRNA表达.结果 MTT实验显示5μmol/L浓度的Cr(Ⅵ)是L-02肝细胞70%存活的临界值,在各时间点细胞的存活率分别为84.15%、81.44%、74.25%和68.04%.5μmol/L浓度的Cr(Ⅵ)处理L-02肝细胞8 h可诱发最强的氧化应激状态,ROS相对荧光值达169.2%.在氧化应激最高点检测到的microRNA改变是:miR-370、miR-let-7和miR-125b表达上调,miR-122和miR-137表达下调,miR-298和miR-153表达差异无统计学意义.结论 金属毒物Cr(Ⅵ)可诱导L-02肝细胞氧化应激状态,并出现特征性的microRNA表达谱.     

三价铬与六价铬化合物对L-02肝细胞毒性的比较

目的　评价三价铬 (Cr(III) )和六价铬 (Cr(VI) )对L -0 2肝细胞的细胞毒效应差异。　方法　以L -0 2肝细胞为研究对象 ,用MTT法检测L -0 2肝细胞死亡指数 ,比色法检测细胞内乳酸脱氢酶 (LDH)、天冬氨酸氨基转移酶(ALT)、丙氨酸氨基转移酶 (AST)的渗出程度。　结果　细胞处理 12h ,Cr(VI)处理组的细胞死亡指数明显高于Cr(III)细胞处理组 ,在 4～ 2 5 6μmol/L浓度范围具有明显的浓度 -效应关系 (相关系数r =0 .945 ,P <0 .0 5 )。细胞处理 5h后 ,Cr(VI)低剂量和高剂量组 (16μmol/L和 12 8μmol/L)LDH的漏出比均明显高于相应剂量的Cr(III) (P <0 .0 5 ) ;在Cr(VI)高剂量组 (12 8μmol/L)ALT与AST的漏出比显著高于相同剂量的Cr(III) (P <0 .0 5 )。　 结论　Cr(VI)对L -0 2肝细胞的细胞毒效应明显大于Cr(III)。     

还原型谷胱甘肽对六价铬诱导的L-02肝细胞毒性的保护作用

目的探讨还原型谷胱甘肽(GSH)对六价铬[Cr(Ⅵ)]诱导的L-02肝细胞毒性的影响。方法分别设Cr(Ⅵ)、GSH单独作用组、联合作用组和空白对照组,采用MTT法检测细胞生存率的变化。结果在2、4、8、16、32和64μmol/LCr(Ⅵ)处理浓度,Cr(Ⅵ)对L-02肝细胞具有明显细胞毒性,细胞存活率与Cr(Ⅵ)处理浓度呈负相关(r=-0·910)。仅浓度为20μmol/L的GSH对Cr(Ⅵ)诱导的细胞毒性具有拮抗作用,Cr(Ⅵ)+GSH联合组的生存率与Cr(Ⅵ)不同浓度单独处理组比较差异均具有显著性(P<0·05)。结论适宜浓度的GSH可能对Cr(Ⅵ)诱导的L-02肝细胞毒性具有保护作用。     

Bcl-2、Caspase-3与阿尔茨海默病关系的研究进展

随着社会人口老龄化的发展,近年来,阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)的发病率逐年攀升,是继心脏病、肿瘤和中风之后影响老年人健康、导致死亡的第4位原因,但AD病因和发病机制尚未完全清楚,而且也无有效的治疗方法.AD脑内神经元的丢失机制与细胞凋亡密切相关,在凋亡发生机制中最关键的环节之一是Caspase-3和Bcl-2对细胞凋亡的调控.本文从Bcl-2、Caspase-3与阿尔茨海默病关系的研究进展进行综述.     

亚砷酸钠对L-02肝细胞的氧化损伤作用

[目的]探讨亚砷酸钠(NaAsO2)对体外培养的人肝细胞株(L-02)的氧化损伤作用. [方法]用不同浓度NaAsO2(50,100,150 μmol/L)染毒L-02肝细胞24 h,MTT法检测NaAsO2对L-02肝细胞生长的影响;流式细胞仪检测L-02肝细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平;钼酸铵法测定过氧化氢酶(catalase,CAT)活性;单细胞凝胶电泳(single-cell gel electrophoresis,SCGE)法检测DNA损伤. [结果]NaAsO2作用L-02肝细胞24h后,50、100、150 μmol/L浓度NaAsO2组的L-02肝细胞存活率和CAT活性与对照组相比显著降低(P<0.01).且呈剂量-反应关系;100、150μmol/L浓度NaAsO2组ROS生成量显著增多(P<0.01);50 μmol/L的NaAsO2即可引起出现彗星现象的细胞数明显高于对照组,拖尾细胞阳性率明显升高(P<0.01),且呈剂量-反应关系. [结论]NaAsO2对L-02肝细胞的生长具有明显的抑制作用,可引起L-02肝细胞内ROS增多和CAT活性降低,引起细胞DNA损伤.     

亚硝酸钠与亚硫酸钠联合作用对人肝细胞L-02功能影响

目的 探讨亚硝酸钠(Na₂NO₂)与亚硫酸钠(Na₂SO₃)联合作用对人肝细胞L-02功能影响。方法 采用3×3析因设计:实验设对照组、低、高亚硝酸钠组、低、高亚硫酸钠组、低N低S组、低N高S组、高N低S组、高N高S组,培养24 h,噻唑蓝法(MTT)检测细胞活力,酶联免疫吸附法测定乳酸脱氢酶(LDH)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、超氧化物歧化酶(SOD)、还原型谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)含量。结果 与对照组比较,亚硝酸钠、亚硫酸钠组L-02细胞内ALT、MDA含量均升高,呈剂量-效应关系;高N高S组L-02细胞ALT水平低于两者单独作用之和,MDA含量高于两者单独作用之和(P<0.01);高N低S组L-02细胞MDA含量低于两者单独作用之和(P<0.01);Na₂NO₂、Na₂SO₃对L-02细胞内ALT水平、MDA含量影响的交互作用明显(F=3.955、17.402,P<0.05),对LDH、AST、SOD、GSH交互作用不明显(F=1.928、2.238、2.273、2.283,P>0.05)。结论 Na₂NO₂、Na₂SO₃对肝细胞有联合毒性作用,其机制可能与肝细胞膜损伤和氧化应激有关; Na₂NO₂、Na₂SO₃对L-02细胞培养液中ALT水平影响表现为拮抗作用,对L-02细胞内MDA含量影响表现为协同、拮抗作用。     

马钱子碱中毒脑神经细胞Bcl-2和Caspase-3表达的研究

目的观察马钱子碱中毒后不同时间、不同剂量Bcl-2和Caspase-3表达的变化。方法选用20只Wistar大鼠为正常对照组,44只Wistar大鼠复制马钱子中毒模型,应用免疫组织化学和图像分析方法研究大鼠脑神经细胞马钱子中毒后Bcl-2与Caspase-3蛋白表达的变化规律。结果大鼠在马钱子中毒低、中剂量后的1~7 d不同时间段内,脑神经细胞Bcl-2与Caspase-3蛋白阳性表达细胞数均高于正常对照组,与相应的对照组比较,差异均有统计学意义(P0.05)。结论Bcl-2与Caspase-3参与了马钱子中毒的病理生理过程。     

氢醌对L-02肝细胞损伤的研究

[目的]探讨氢醌(HQ)对L-02肝细胞损伤及其可能的作用机制。[方法]应用噻唑蓝(MTT)比色法检测浓度分别为0、5、10、20、40、80、160和320gmol/L的HQ作用24h后对L-02肝细胞存活率的影响;利用万能倒置显微镜观察不同浓度HQ染毒之后L-02肝细胞的形态学改变并摄影成像;利用全自动生化分析仪检测不同浓度HQ染毒24h后L-02肝细胞的乳酸脱氢酶(LDH)漏出率和丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)活性,以观察HQ对L-02肝细胞膜完整性的影响。[结果]在0～80μmol/L浓度的范围内染毒24h后,HQ对L-02肝细胞的存活率没有明显的影响(P>0.05);浓度≥160μmol/L时,染毒24h后,存活率则明显下降(P<0.01),LDH漏出率、ALT和AST活性均有随着HQ浓度的增加而升高的趋势;160和320μmol/L组LDH漏出率与对照组比较有明显升高(P<0.01)。但ALT和AST活性只在320μmol/L组与对照组比较才有明显增加(P<0.01)。此外,160和320μmol/L组L-02肝细胞的形态与对照组相比发生了明显的改变。[结论]HQ可能是通过损伤细胞膜而对L-02肝细胞产生毒性影响。     

重度子痫前期胎盘组织中Bcl-2和Caspase-3的表达及意义

目的:探讨重度子痫前期患者胎盘组织中Bcl-2和Caspase-3的表达及其与重度子痫前期发生、发展的关系。方法:采用免疫组织化学染色方法检测20例正常晚期妊娠孕妇(对照组)、40例重度子痫前期患者(重度子痫前期组,其中早发型20例,晚发型20例)的胎盘组织进行Bcl-2和Caspase-3的定位,并用计算机图像分析系统进行定量分析。结果:与对照组比较,重度子痫前期组Bcl-2的表达显著降低和Caspase-3的表达显著升高,且两者呈负相关(r=-0.334,P=0.009),早发型重度子痫前期与晚发型重度子痫前期比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:在胎盘组织中Bcl-2低表达和Caspase-3的高表达,可能与重度子痫前期的发生有关。     

亚硫酸钠对人肝细胞L-02损伤机制的研究

目的:探讨食品添加剂亚硫酸钠对人肝细胞L-02的损伤机制。方法:将L-02肝细胞分别暴露于含0、2.5、5、10 mmol/L的亚硫酸钠培养液中24 h,MTT法检测细胞活力,酶联免疫吸附法测定培养液中乳酸脱氢酶(Lactate dehydrogenase,LDH)、谷丙转氨酶(Alanine aminotransferase,ALT)、谷草转氨酶(Aspartate aminotransferase,AST)、超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)、还原型谷胱甘肽(Reduced glutathione,GSH-Px)、丙二醛(Malondialdelyde,MDA)含量。结果:与对照组相比,各剂量组L-02的存活率、SOD、GSH-Px均降低,且随着Na2SO3染毒剂量的增加而逐渐降低,Slow、Smidlle、Shigh组间比较差异均有统计学意义(P0.01);LDH、ALT、AST均升高,且随着Na2SO3染毒剂量的增加而逐渐升高,Slow、Smidlle、Shigh组间比较差异均有统计学意义(P0.01);Na2SO3与存活率、SOD、GSH-Px间均为负相关关系(P0.01),与LDH、ALT、AST、MDA间为正相关关系(P0.01)。结论:亚硫酸钠对肝细胞有毒性作用,其机制与肝细胞细胞膜损伤和氧化应激有关,ALT可作为亚硫酸钠对肝细胞损伤的早期敏感生物学标志物。     

三氯乙烯对L-02肝细胞Rho GDIα、ANXA3及GLO1表达的影响

目的 研究三氯乙烯(trichloroethylene,TCE)处理L-02肝细胞后,Rho鸟苷二磷酸分离抑制因子(Rho GDI α)、膜联蛋白A3(ANXA3)及乙二醛酶Ⅰ(GLO1)的表达变化.方法 以40 μmol/LTCE对L-02肝细胞进行染毒处理,DMSO做溶剂对照.分别采用蛋白质印迹(Western blot)法和实时荧光定量反转录一聚合酶链反应(real-time quantitative RT-PCR)法检测Rho GDIα、ANXA3及GLO1在蛋白质和mRNA水平的表达变化.结果 Western blot法分析结果 显示,TCE处理后Rho GDI α、ANXA3和GLO1蛋白表达水平均上调,差异有统计学意义(P<0.05);实时荧光定量RT-PCR结果 显示,TCE处理后ANXA3和GLO1 mRNA表达的相对值分别为2.786±0.492和1.893±0.402,而Rho GDIα的mRNA表达的相对值为0.563±0.106,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05).结论 TCE刺激后,RhoGDI α、ANXA3和GLO1蛋白分别在蛋白质和转录水平发生了相应变化,为进一步研究和揭示TCE致肝细胞损伤的分子机制奠定了基础.     

Cr（Ⅵ）对L-02肝细胞线粒体能量代谢的影响

目的 探讨六价铬（D（Ⅵ））对L-02肝细胞线粒体能量代谢的影响。方法 用浓度为2、4、8、16、32、64、128、256、512μmol／LCr（Ⅵ）溶液作用于L-02肝细胞培养12h，以MTT法检测细胞存活指数以及线粒体中琥珀酸脱氢酶的活性；选取细胞存活率大于70％的5个D（Ⅵ）浓度，用高效液相色谱法检测不同浓度D（Ⅵ）对肝细胞中腺苷酸（ATP，ADP，AMP）含量的影响，并分析ATP／ADP比值以及负荷能量（EC）的变化。结果在2～512μmol／LCr（Ⅵ）处理浓度，Cr（Ⅵ）对L-02肝细胞具有明显的细胞毒性，其细胞存活指数与G（Ⅵ）处理浓度呈明显负相关（r=-0．933）；在4～32μmol／L Cr（Ⅵ）浓度范围，染毒组肝细胞内腺苷酸（ATP，ADP，AMP）含量以及ATP／ADP比值随Cr（Ⅵ）染毒浓度的增加呈明显下降趋势，与对照组比较P〈0．05。而EC无明显变化（P〉0．05）。结论 Cr（Ⅵ）对L-02肝细胞线粒体能量代谢存在明显抑制作用。     

马钱子碱中毒肾小管上皮细胞Bcl-2和Caspase-3表达的观察

以60只Wistar大鼠制作马钱子中毒模型,应用免疫组织化学方法研究大鼠肾小管上皮细胞中毒后Bcl-2与Caspase-3蛋白表达的变化规律.大鼠在中毒后肾小管上皮细胞Bcl-2与Caspase-3蛋白阳性表达数均高于正常对照组,Bcl-2与Caspase-3在1 d后出现表达,2～3 d达高峰,5 d和7 d两种蛋白表达逐渐下降.提示Bcl-2与Caspase-3参与了马钱子中毒的病理生理过程.     

JNK信号通路在NaAsO2诱导L-02肝细胞 凋亡过程中的作用

摘要:目的　研究JNK在NaAsO2诱导L-02肝细胞凋亡中的作用。方法　用不同浓度NaAsO2染毒L-02肝细胞,采用流式细胞术检测L-02肝细胞凋亡率;Western-blot检测L-02肝细胞中Jnk、p-Jnk、Caspase-3蛋白的相对表达量。结果　0、50、100 和 150 μmol/L组细胞凋亡率分别为3.33%±0.30%、7.49%±0.23%、9.48%±0.49%和 14.87%±2.17%,染毒组的细胞凋亡率随NaAsO2浓度的增加而升高,差异有统计学意义（P＜0.05）;染毒组细胞内Jnk、p-Jnk、Caspase-3蛋白相对表达量均增高,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论　NaAsO2能诱导L-02肝细胞凋亡的发生,这可能与激活JNK,增加JNK磷酸化水平,继而激活凋亡调控基因Caspase-3有关。     

氢醌诱导L-02肝细胞凋亡的研究

目的探讨氢醌(HQ)对体外培养L-02肝细胞凋亡(apoptosis)的影响和HQ毒性作用的分子机制。方法采用噻唑蓝(MTT)比色法测定不同浓度HQ(0,5,10,20,40,80,160和320μmol/L)作用24 h后L-02肝细胞的相对存活率;采用DNA琼脂糖凝胶电泳和流式细胞术检测HQ染毒后的细胞凋亡状况。结果HQ在0~80μmol/L的染毒剂量范围内,对L-02肝细胞的存活率没有明显的影响(P>0.05),当HQ染毒剂量超过160μmol/L时,L-02肝细胞的存活率则明显地下降(P<0.01)。10,20,40,80,160和320μmol/L组L-02肝细胞DNA琼脂糖凝胶电泳出现凋亡特征性梯状条带,并且随着HQ染毒剂量增加而渐趋明显。流式细胞术检测显示,HQ各染毒剂量组(5,10,20,40,80,160和320μmol/L)作用24 h后均可引起L-02肝细胞的调亡,并呈现出一定的剂量—反应关系;此外,还可出现明显的亚二倍体峰。结论HQ在体外能够诱导L-02肝细胞发生凋亡。     

不同宫颈病变患者血液中Bcl-2、P53和Caspase-3的表达及其相互关系

目的:探讨Bcl-2、P53和Caspase-3在不同宫颈病变发生、发展中的作用及其相互关系。方法:对37例宫颈炎、39例宫颈内瘤变、24例宫颈癌患者抽取血液,采用Elisa方法检测血清中Bcl-2、P53和Caspase-3蛋白的含量,采用流式细胞术检测血细胞中Bcl-2、P53和Caspase-3的阳性率,结合临床病理特点分析。结果:宫颈炎患者血清中Bcl-2、P53蛋白含量及血细胞中Bcl-2、P53阳性率明显低于宫颈内瘤变和宫颈癌患者(P<0.01),且宫颈内瘤变患者明显低于宫颈癌患者(P<0.05);宫颈炎患者血清中Caspase-3蛋白含量及血细胞中Caspase-3的阳性率明显高于宫颈内瘤变和宫颈癌患者(P<0.01),且宫颈内瘤变患者明显高于宫颈癌患者(P<0.05)。结论:Bcl-2、P53和Caspase-3蛋白在宫颈癌发生、发展过程中发挥着即独立又协同的作用。     

Cr(VI)对L-02肝细胞线粒体能量代谢的影响

目的探讨六价铬(Cr(VI))对L-02肝细胞线粒体能量代谢的影响。方法用浓度为2、4、8、16、32、64、128、256、512μmol/LCr(VI)溶液作用于L-02肝细胞培养12h,以MTT法检测细胞存活指数以及线粒体中琥珀酸脱氢酶的活性;选取细胞存活率大于70%的5个Cr(VI)浓度,用高效液相色谱法检测不同浓度Cr(VI)对肝细胞中腺苷酸(ATP,ADP,AMP)含量的影响,并分析ATP/ADP比值以及负荷能量(EC)的变化。结果在2~512μmol/LCr(VI)处理浓度,Cr(VI)对L-02肝细胞具有明显的细胞毒性,其细胞存活指数与Cr(VI)处理浓度呈明显负相关(r=-0.933);在4~32μmol/LCr(VI)浓度范围,染毒组肝细胞内腺苷酸(ATP,ADP,AMP)含量以及ATP/ADP比值随Cr(VI)染毒浓度的增加呈明显下降趋势,与对照组比较P<0.05,而EC无明显变化(P>0.05)。结论Cr(VI)对L-02肝细胞线粒体能量代谢存在明显抑制作用。