六味地黄汤对实验性骨关节炎兔软骨细胞凋亡与增殖的体内实验

目的：探讨六味地黄汤对实验性膝骨关节炎兔软骨细胞增殖、凋亡的影响。方法：20只新西兰兔用Hulth法造骨关节炎动物模型，随机分成空白对照组、实验组；实验组用六味地黄汤灌胃，空白对照组用生理盐水，治疗第4、8、12、2，4周后每组各取2只动物，用亚硝酸盐还原酶法测定关节滑液NO水平，关节软骨组织HE染色，光镜观察形态学变化、电镜观察软骨细胞内结构变化及原位末端标记（TUN-EL）法观察软骨细胞凋亡病理改变，进行组织病理学评估。结果：空白对照组NO活性在不同时期均高于实验组（8周，P〈0．05；12、24周，P〈0．01），两组间比较有显著性差异（P〈0．05，0．01）；实验组的关节软骨病理变化总积分、软骨细胞病理改变积分和软骨表层病理改变积分均明显低于空白对照组（P〈0．05）；实验组的软骨细胞凋亡指数与对照组的软骨细胞凋亡有显著性差异（P〈0．05），与关节液中NO含量显著相关。结论：六味地黄汤对兔膝关节实验性骨关节炎软骨退变具有保护作用，通过NO诱导途径减少软骨细胞的凋亡，可能是其作用机制之一。     

实验性骨关节炎MMP-3与软骨细胞凋亡

目的:为观察实验性骨关节炎中MMP-3和软骨细胞凋亡情况,并对二者表达作相关分析。方法:采用改良Hulth’s法制造兔骨关节炎模型,分别在8周、16周抽取关节液测定MMP-3的含量,切取关节软骨。采用TUNEL法标记凋亡软骨细胞计数,并对软骨进行HE染色和透视电镜观察。结果:HE染色中,正常组软骨细胞排列规则,关节炎组中软骨细胞排列紊乱。透视电镜观察各组均可见凋亡细胞,但在关节炎组中可见胶原纤维失去正常的结构,排列紊乱,可见钙盐沉积。在MMP-3测定中,早期骨关节炎(20.91±2.48)ng.mL-1和晚期骨关节炎(41.68±5.71)ng.mL-1均高于正常对照组(4.34±2.13)ng·mL-1,差异有统计学意义P0.01;晚期骨关节炎和早期关节炎组比较(P0.01);早期骨关节炎(10.18±1.90)和晚期骨关节炎(35.47±3.46)软骨细胞凋亡指数都高于正常对照组(3.93±1.91),P0.01;晚期骨关节炎早期关节炎组比较,(P0.01)。MMP-3变化和软骨细胞的凋亡在各个时期均存在相关性(r=0.82,P=0.03;r=0.64,P=0.049;r=0.69,P0.029)。结论:实验性骨关节炎中,关节滑液中MMP-3含量在模型组中明显升高,晚期含量升高更明显;软骨细胞的凋亡指数和MMP-3的变化密切相关,MMP-3的升高可能是导致软骨基质破坏,软骨细胞凋亡的重要因素。     

川芎嗪对骨关节炎兔软骨细胞增殖与凋亡的影响及其机制研究

目的探讨川芎嗪对骨关节炎兔软骨细胞增殖与凋亡的影响及其作用机制。方法选取12只兔建立骨关节炎动物模型,体外分离培养软骨细胞,并分为模型组、川芎嗪低剂量组、川芎嗪中剂量组、川芎嗪高剂量组,另选取3只正常兔体外分离培养软骨细胞作为正常对照组。模型组和正常对照组给予10%DMEM培养液进行培养,而川芎嗪低、中、高剂量组分别给予含10μg/m L、20μg/m L、30μg/m L川芎嗪注射液的培养液进行培养。采用流式细胞仪测定兔软骨细胞周期及增殖指数,采用TUNEL法检测细胞凋亡情况,采用MTT法检测软骨细胞活性,采用Western-blot法检测软骨细胞中bax、bcl-2、Caspase-3蛋白表达情况。结果模型组G0/G1期细胞所占比例及PI均明显低于正常对照组(P均<0.05),S期及G2/M期细胞所占比例均明显高于正常对照组(P均<0.05);川芎嗪中、高剂量组G0/G1期细胞所占比例、PI均显著高于模型组和川芎嗪低剂量组(P均<0.05),而S期及G2/M期细胞所占比例均显著低于模型组和川芎嗪低剂量组(P均<0.05)。川芎嗪中、高剂量组软骨细胞凋亡率均明显低于模型组(P均<0.05),川芎嗪高剂量组显著低于低剂量组(P<0.05),而川芎嗪高剂量组与正常对照组比较差异无统计学意义;川芎嗪中、高剂量组软骨细胞活性均显著高于模型组(P均<0.05),川芎嗪高剂量组显著高于低剂量组(P<0.05),而川芎嗪高剂量组仍然低于正常对照组(P<0.05)。模型组软骨细胞中bax及Caspase-3表达量均明显高于正常对照组(P均<0.05),bcl-2表达量显著低于正常对照组(P<0.05);而川芎嗪各剂量组软骨细胞中bax及Caspase-3表达量均明显低于模型组(P均<0.05),bcl-2表达量均明显高于模型组(P均<0.05),且川芎嗪高剂量组各指标改善情况均显著优于低剂量组(P均<0.05)。结论川芎嗪能够促进软骨细胞的增殖,同时还能通过上调抗凋亡因子bcl-2表达,下调软骨细胞促凋亡因子bax以及Caspase-3表达而抑制软骨细胞的凋亡。     

海桐皮汤熏蒸对兔实验性膝骨关节炎软骨细胞凋亡的影响

目的:探讨海桐皮汤熏蒸对实验性兔膝关节骨性关节炎软骨细胞凋亡的影响。方法:取45只新西兰大白兔,随机取10只作为正常对照组(A组),其余35只采用Hulth方法造模,1周后取30只元膝关节感染实验兔,随机分为3组(每组10只):并随机分为模型组(B组)、水蒸气熏蒸组(C组)和海桐皮汤熏蒸组(D组)。分别采取相应的处理方法4周后处死取材,采用流式细胞术检测软骨细胞凋亡状况。结果:正常组兔关节软骨细胞凋亡率为18.57%,模型组29.41%,水治疗组和药物治疗组分别为28.26%、21.09%。与正常组相比,模型组、水蒸气熏蒸组、海桐皮汤熏蒸组有显著差异(P<0.05);与模型组相比水蒸气熏蒸组、海桐皮汤熏蒸组有显著差异(P<0.05);与水蒸气熏蒸组相比海桐皮汤熏蒸组有显著差异(P<0.05)。结论:海桐皮汤熏蒸可显著减少实验性兔膝关节骨性关节炎软骨细胞凋亡,从而延缓关节软骨的退变,促进软骨修复的作用。     

六味地黄汤对实验性肾虚动物牙周组织的影响

本实验通过药物造成肾虚动物模型,观察动物牙周组织的改变。同时以六味地黄汤灌喂实验动物,观察其对牙周组织的影响。结果表明,由药物造成肾虚动物模型可加重牙周组织的损害。六味地黄汤对牙周病阴虚模型动物的牙周组织有保护作用。具有修复牙周组织损害的作用。灌喂六味地黄汤的实验动物的体重和活力均较对照组增加。     

益肾为主对兔膝骨关节炎模型软骨细胞凋亡的影响

目的:观察益肾为主治法对兔骨关节炎软骨细胞凋亡的影响。方法:取新西兰白兔20只,随机分为三组,模型组、中药组用石膏外固定兔右后肢膝关节造模,造模后同空白组分别灌服生理盐水、益肾方和生理盐水,6周后取兔膝关节软骨,肉眼、光镜观察形态学变化,用原位末端标记法观察软骨细胞凋亡。结果:中药组软骨细胞凋亡指数明显低于模型组(P<0.01)。结论:益肾为主能减少兔膝实验性膝骨关节炎软骨细胞的凋亡,具有关节软骨保护作用。     

苏红透骨散对骨关节炎模兔去分化软骨细胞影响的实验研究

目的：探讨苏红透骨散对膝骨性关节炎模兔软骨细胞增殖、凋亡的影响。方法：60只新西兰大白兔用HuIth法造骨关节炎动物模型,随机分成空白对照组、实验组;实验组用苏红透骨散灌胃,空白对照组用生理盐水。治疗第4、8、12、24周后每组各取6只动物,用亚硝酸盐还原酶法测定关节滑液NO水平。关节软片组织HE染色,光镜观察形态学变化、电镜观察软骨细胞内结构变化及原位末端标记（TLNEL）法观察软骨细胞凋亡病理改变,进行组织炳理学评估。结果：空白对照组NO活性在不同时期均高于实验组（8周,P〈0.05;12、24周,P〈0.01）,两组间比较有显著性差异（P〈0.05,0.01）：实验组的关节软骨病理改变总积分、软骨细胞病理改变积分和软片表层病理改变积分均明显低于空白对照组（P〈0.05）;实验组的软骨细胞凋亡指数与对照组的软骨细胞凋亡有显著性差异（P〈0.05）,与关节液中NO含量显著相关。结论：苏红透骨散对兔膝关节实验性骨关节炎软骨退变具有保护作用,通过NO诱导途径减少软骨细胞的凋亡,可能是其作用机制之一。     

兔膝骨关节炎软骨细胞凋亡调控基因的研究

目的:观察凋亡调控基因bcl-2在骨关节炎(OA)关节软骨中的表达,试图探讨bcl-2在OA发病中的作用机制。方法:参照Hulth的造模方法于无菌条件下,以健康青紫兰家兔左侧膝关节制作OA动物模型,并以右侧膝关节作为正常对照,应用免疫组织化学方法对第8周兔膝关节软骨中bcl-2进行检测。结果:OA组关节软骨bcl-2的阳性表达强度显著高于正常组,主要分布于关节软骨的浅层和中层,但OA组关节软骨深层胶原化区中bcl-2表达无明显变化。结论:OA组关节软骨细胞凋亡调控基因bcl-2表达较正常对照组明显增强,因此bcl-2的调节作用可能是OA病理过程进展缓慢的一个重要原因。     

六味地黄汤含药血清对软骨细胞增殖、凋亡影响的体外实验研究

目的:研究六味地黄汤含药血清对软骨细胞增殖、凋亡的影响。方法:取1月龄新西兰兔关节软骨经胶原酶Ⅱ消化,建立软骨细胞体外培养体系,随机分为3组,分别加入培养液、空白血清和中药血清继续培养72小时后,用MTT比色法检测其OD值变化,采用流式细胞仪检测软骨细胞凋亡及细胞周期的变化。结果:中药血清组的OD值显著高于正常对照组、空白血清组(P<0.05);流式细胞仪细胞周期检测显示中药血清能够刺激软骨细胞由G0/G1期进入S期和G2/M期,并呈现时间的依赖性,其G0/G1期细胞比例降低,S期与G2/M期细胞之和增加,与空白血清组对比有显著性差异(P<0.05)。结论:六味地黄汤能有效促进软骨细胞增殖、抑制软骨细胞凋亡。     

六味地黄汤对糖尿病肾病大鼠肾功能及细胞凋亡的影响

目的探讨六味地黄汤对糖尿病肾病(DN)大鼠肾脏功能保护作用的量效关系及对细胞凋亡的影响。方法采用单侧肾脏结扎术+腹腔注射链脲佐菌素(STZ)的方法建立DN模型,2周实验结束时测定大鼠血糖、肌酐清除率、尿蛋白定量;2、4、8周实验结束时分析大鼠肾皮质细胞DNA降解的琼脂糖凝胶电泳,TUNEL法观察大鼠肾皮质细胞凋亡发生的部位,流式细胞仪测定细胞凋亡率。结果 2周实验结束时,3个剂量给药组均可不同程度降低DN大鼠血糖,减少尿蛋白的排泄,有效降低肌酐清除率;中、低剂量间显示出一定的量效关系,中剂量24.96 g/kg作用最佳;模型组大鼠8周时肾皮质细胞DNA琼脂糖凝胶电泳可出现100~300 bp的条带。TUNEL法检测模型组肾皮质细胞凋亡提示,2周时凋亡极少发生,4周时凋亡明显增多,多数在远端肾小管,8周时除远端肾小管外,近端肾小管亦可见散在的凋亡细胞,但肾小球未见凋亡细胞。流式细胞仪分析各组细胞凋亡率,4周及8周时DN模型大鼠存在肾脏皮质细胞凋亡率增加,给药组与之相比细胞凋亡率显著下降。结论六味地黄汤干预DN大鼠2周后,可以显著降低血糖、减少尿蛋白排泄量、改善肌酐清除率,从而起到保护DN大鼠肾功能的作用,24.96 g/kg为最佳剂量,六味地黄汤可以通过抑制DN大鼠肾皮质细胞凋亡来改善DN肾脏病理变化。     

六味地黄汤对生精障碍模型大鼠精子及其血清NO的影响

目的:观察六味地黄汤对生精障碍模型大鼠促进生精的作用及其对大鼠血清一氧化氮(NO)的影响。方法:用醋酸棉酚建造Wistar雄性大鼠生精障碍模型后,用分煎和合煎的六味地黄汤灌胃给药治疗,以市售六味地黄丸和甲基睾酮为对照,计数各组精子数量,观察各组精子的活力,测定大鼠血清NO水平。结果:模型组大鼠的精子数量与六味地黄汤分煎组、六味地黄汤合煎组、市售六味地黄丸对照组、西药对照组比较,差异有非常显著性意义(P<0.01);各治疗组、对照组的精子活力也显著优于模型组。模型组大鼠血清NO水平与各组比较,差异有非常显著性意义(P<0.01);血清NO水平和精子数量、精子质量基本成正相关。结论:六味地黄汤对生精障碍大鼠有显著的促生精作用,同时可升高大鼠血清NO水平,显著提高大鼠精子的质量。     

加味地黄汤调理创伤小鼠腹腔巨噬细胞功能及DTH的初步研究

目的:观察加味地黄汤对创伤小鼠腹腔巨噬细胞(M)功能及迟发型超敏反应(DTH)的调理作用。方法:采用手法致小鼠双股骨干单纯性闭合性骨折创伤模型,将小鼠随机分为正常对照组、创伤对照组和创伤治疗组,正常对照组为非造模组,创伤对照组和创伤治疗组造模后,创伤治疗组即灌胃给予加味地黄汤煎剂,正常对照组、创伤对照组分别于相同时间用相同方法给予等体积的冷开水,均于第6d测定免疫指标。结果:创伤对照组小鼠第6d的腹腔Mφ功能和DHT均明显低于正常对照组小鼠水平(P<001),而创伤治疗组小鼠的DTH未受抑制,腹腔Mφ功能与正常对照组相比无显著性差别。结论:加味地黄汤对创伤小鼠腹腔巨噬细胞功能有改善作用。     

六味地黄汤对大鼠烫伤后免疫功能的影响

利用烫伤大鼠实验模型,采用ＭＴＴ比色法等技术,分别测定了烫伤大鼠及烫伤大鼠六味地黄汤治疗后免疫功能指标。结果显示：六味地黄汤能拮抗烫伤抑制大鼠腹腔Ｍφ吞噬活性,脾脏淋巴细胞转化增殖、ＩＬ－２分泌、ＮＫ细胞活性、ＲＢＣ－Ｃ３ｂｒＲ花环率、ＲＢＣ－ＩＣ花环率作用并且拮烫伤引起的促进腹腔Ｍφ分泌ＴＮＦ、增加血清ＩＬ－６水平作用。     

加味六味地黄汤治疗复发性口腔溃疡疗效分析

目的:初步探讨使用中药经方六味地黄汤加减治疗复发性口腔溃疡的疗效.方法:120例患者随机分为3组,中药治疗组:内服六味地黄汤加减;西药治疗组:口服左旋咪唑片;观察对照组:口服复合维生素B2片;观察用药3d、6d时溃疡面积的变化,疼痛缓解程度,对比观察其临床疗效.结果:中药治疗组与西药治疗组间无显著性差异(P＞0.05),但中药比西药更安全,中药治疗组与维生素B2组、西药治疗组与维生素B2组间有显著性差异(P＜0.05).结论:六味地黄汤在复发性口腔溃疡的治疗上有效而安全,值得进一步研究和推广.     

六味地黄汤相关成分对蛋白酪氨酸磷酸酶1B的影响

目的 研究六味地黄汤中芍药苷、没食子酸、丹皮酚、梓醇、马钱苷、莫诺苷、桃叶珊瑚苷、23-乙酰泽泻内酯醇B、薯蓣皂苷元9种重要单体成分对蛋白酪氨酸磷酸酶1B (PTP-1B)的影响,以筛选PTP-1B的有效抑制剂.方法PTP Assay Kit 1(R-R-L-I-E-D-A-E-pY-A-A-R-G)中孔雀绿磷酸检测法.结果所有单体均有不同程度的抑制PTP-1B的作用,其中莫诺苷、马钱苷、丹皮酚、23-乙酰泽泻内酯醇B、芍药苷、桃叶珊瑚苷的作用较明显,与对照组比较有显著性差异(P＜0.05,P＜ 0.01).结论莫诺苷、马钱苷、丹皮酚、23-乙酰泽泻内酯醇B、芍药苷、桃叶珊瑚苷等成分可明显抑制PTP-1B,这可能是六味地黄汤降糖、降脂机制之一.     

六味地黄汤对大鼠巨噬细胞Ia抗原表达的影响

六味地黄汤能够明显提高正常大鼠腹腔Ｍψ表面Ｉａ抗原表达的阳性率，强度与阳性对照绵人参皂甙组相似，该方还能够使ＣＯＲＴ肌肉注射所致“阴虚”模型大鼠ＭψＩａ抗原表达率的抑制得以明显改善。方中三味补药六味地ＭψＩａ抗原表达的主要成功，三味泻药单用对正常及模型大鼠ＭψＩａ的抗原表达均无直接影响。但民三配伍后同能够提高其对ＭψＩａ抗原表达的阳性率。     

六味地黄汤免疫调节活性成分化学分离的药理学导向评价

为定向追踪分离六味地黄汤发挥免疫调节作用的活性成分进行导向评价。方法；运用化学与药理学密切合作的研究方法，以环磷酰胺处理小鼠为模型，抗体生成反应为活性评价指标，对每一步化学分离所得组分进行活性评价，确定活性部位。