疏水性肺表面活性物质蛋白质的提纯及其生物活性研究

采用柱层析方法从人羊水提纯Ｍｒ１７．５×１０￣２（ＳＰＢ）及Ｍｒ６×１０￣３（ＳＰＣ）两种疏水性肺表面活性物质蛋白质，研究其表面活性作用。结果显示：人工合成磷脂与不同量蛋白质配比的肺表面活性物质（ＰＳ）具有不同的肺表面活性作用，人工合成磷脂分别加入ＳＰＢ与ＳＰＣ均能降低ＰＳ表面张力，提高其生物活性，但以联合ＳＰ（ＳＰＢ与ＳＰＣ混合者）效果最佳。人工合成磷脂与ＳＰ的最适比例为１００：２。     

疏水性肺表面活性物质蛋白质的提纯及其生物活性研究

采用柱层析方法从人羊水提纯Ｍｒ１７．５×１０＾２及Ｍｒ６×１０＾３两种疏水性肺表面活性物质蛋白质，研究其表面活性作用，结果显示：人工合成磷脂与不同量蛋白质配比的肺表面活性物质具有不同的肺表面活性作用，人工合成磷脂分别加入ＳＰＢ与ＳＰＣ均能降低ＰＳ表面张力，提高其生物活性，但以联合ＳＰ效果最佳，人工合成磷脂与ＳＰ的最知比例为１００：２。     

固相合成肺表面活性物质蛋白质B的活性作用

为今后制备人工ＰＳ打下基础，用固相合成成熟段ＳＰ－Ｂ，用膜天平测定法和大鼠肺出血模型，观察它在体内、外的活性作用。结果：人工合成的磷脂加入合成的ＳＰ－Ｂ在体外能降低表面张力至１０ｍＮ／ｍ以下，并增加滞后环面积；在体内能预防大鼠肺出血，使肺指数从０．７３降至０．５８，血清脂质过氧化物从４．８３降至２．７４，肺泡血浆蛋白质渗出从７０．５８降至２１．９８。合用人工合成的ＳＰ－Ｂ优于单纯应用人工合成磷脂组     

固相合成肺表面活性物质蛋白质B的活性作用

为今后制备人工ＰＳ打下基础，用固相合成成熟段ＳＰ－Ｂ，用膜天平测定法和大鼠肺出血模型，观察它在体内、外的活性作用。结果：人工合成的磷脂加入合成ＳＰ－Ｂ在体外能降低表面张力至１０ｍＮ／ｍ以下，并增加滞后环面积；在体内能预防大鼠肺出血，使肺指数从０．７３降至０．５８（Ｐ＜０．０５），血清脂质过氧化物（ｎｍｏｌ／Ｌ）从４．８３降至２．７４（Ｐ＜０．０１），肺泡血浆蛋白质（ｇ／ｋｇ干肺）渗出从７０．５８降至２１．９８（Ｐ＜０．０１）。合用人工合成的ＳＰ－Ｂ优于单纯应用人工合成磷脂组，并与应用天然ＰＳ组相仿。     

淡水淹溺大鼠肺表面活性物质相关蛋白质A表达变化的研究

目的观察淹溺后大鼠呼吸、血气、病理及肺表面活性物质相关蛋白质A(SP-A)的变化特点。方法将24只健康雄性大鼠随机分为对照组(6只)和淹溺组(18只),再将淹溺组分为淹溺后2h组、淹溺后4h组和淹溺后6h组,每个亚组6只大鼠。于上述时间点记录大鼠的呼吸频率,经颈动脉采血测血气。处死大鼠后取肺组织行HE染色,观察淹溺后肺组织普通病理变化,采用免疫组织化学法检测SP-A在灌注后不同时间点的变化。结果淹溺组大鼠淡水灌注后呼吸先增快,以后逐渐减慢,但未降至正常范围。PaO2在灌入淡水后5min显著下降[(48.7±3.93)mmHg比(93.65±6.02)mmHg,P<0.05],之后虽有回升,但维持在较低水平。PaCO2在灌入淡水后5min显著上升[(36.20±4.41)mmHg比(55.96±4.60)mmHg,P<0.05],随后降低,显著低于正常水平(P<0.05)。对照组大鼠SP-A主要以膜状形式连续分布于肺泡腔表面。淹溺组大鼠肺泡壁有不同程度的断裂,肺泡腔内可见红细胞聚集,间质水肿明显,呈局灶性肺不张,SP-A主要以颗粒状聚集在肺泡腔内表面和渗液表面,SP-A表达量较对照组显著降低(P<0.05)且进行性下降。结论淡水淹溺后造成肺损伤,导致SP-A的质和量发生改变。     

肺表面活性物质蛋白SP-D与肺疾病相关性研究进展

肺表面活性物质蛋白SP-D为亲水性蛋白,在维持肺泡腔内肺表面活性物质磷脂正常结构和功能,调节局部免疫和炎症等过程中起重要作用,有助于机体对病原体清除,其表达水平与某些肺部疾病直接或间接相关。     

小牛肺表面活性物质的提取及化学成分理化特性的测定

从新生小牛的气管灌洗液中用差速离心法提取了肺表面活性物质,其脂质提取物中含磷脂86.1±2.1％(X±SD)、蛋白质1.8±1.1％,以及少量胆固醇、脂肪酸、甘油酯和碳水化合物。磷脂中主要是卵磷脂(83.4±5.6％),其中双饱和卵磷脂占76.0±4.7％。我们用自己研制的改良的Wilhelmy式膜天平测定了提取物的理化特性。最小表面张力是2.4±1.5 mN/m,稳定系数1.78±0.15,当表面张力为10mN/m时,压缩系数0.022±0.004 m/mN,磷脂表面浓度1.112±0.283 nmol/Cm~2。这种提取物能很快吸附到气液界面,并迅速扩展开来。结果表明,我们提取的小牛肺表面活性物质的化学成分和理化特性的各项指标符合替代疗法研究的要求。     

猪肺表面活性物质的提取和分析

我院从猪肺灌洗液中提取肺表面活性物质(PS),取得成功。先将猪肺灌洗液离心取得PS粗制品,然后用乙醚乙醇提炼得到精制品。每1000ml猪肺灌洗液大约可提取0.247gPS,其中主要成分磷脂占78.5％,蛋白质含量仅0.33％,磷脂和蛋白质比值高达224.8,说明磷脂纯度极高,其表面活性能将表面张力降至10mN/m以下,与人羊水和牛肺PS基本相似。     

猪肺表面活性物质提取及评价

采用高速离心和化学萃取的方法从猪肺灌洗液中提取肺泡表面活性物质经测定磷脂含量极高，占８８％，蛋白质含量仅为０．３１％，其表面活性能将最小表面张力降至１０ｍＮ／ｍ以下，生理盐水肺灌洗家兔模型应用表面该制剂能迅速改善肺顺应性和低氧血症。     

人羊水中肺表面活性物质的提取和理化分析

本实验采用差速离心及不连续密度梯度离心法从人羊水中提取到肺表面活性物质,并分析其化学成分,测定其表面活性。肺表面活性物质的主要成分为磷脂,具有显著降低表面张力的作用,最小表面张力为7.2mN/m;当表面张力为10mN/m时压缩性为0.039m/mN,表面磷脂浓度为1.086nmol/Cm~2。为临床用以治疗新生儿呼吸窘迫综合征做准备,进行了无菌试验、热原试验、局部刺激试验等,均达到要求。     

大鼠烫伤后脂质过氧化物变化及其对肺表面活性物质的影响

本研究用TBA荧光法测定大鼠烫伤后肺组织和血浆脂质过氧化物的含量,用薄层层析法及膜天平技术测定肺表面活性物质的磷脂组成与功能的变化。观察到大鼠体表烫伤后血浆和肺组织匀浆脂质过氧化物含量明显增高。支气管-肺泡灌洗液内卵磷脂比例减少,双饱和卵磷脂在卵磷脂中的百分比减少,溶血卵磷脂和磷脂酰乙醇胺比例增加,肺表面活性物质功能降低。实验结果提示,肺表面活性物质功能降低与脂性成分自身的变化有关,可能是肺组织脂质过氧化物增加致双饱和卵磷脂合成减少。     

甲状腺功能低下对肺表面活性物质影响

肺表面活性物质主要成分为磷脂,为维持肺功能主要物质。作者等将大白鼠(10只)口服丙基硫氧嘧啶,制成甲状腺功能低下模型。与对照组(10只)比较肺指数、肺灌洗液总蛋白、总磷脂值。结果发现,甲状腺功能低下时,总磷脂值明显降低(P<0·001)。为今后开展应用甲状腺激素制剂防治PS不足提供依据。     

新生儿肺出血时肺表面活性物质变化

作者等测定15例新生儿肺出血气道吸出物(TA)和13只兔肺出血模型支气管肺泡灌洗液(BALF)中肺表面活性物质(PS)的生化成分和表面活性。结果发现:肺出血时PS总磷酯(TPL)和主要成分卵磷脂(PC)、磷脂酰甘油(PG)明显减少,总蛋白(TPr)显著增高,表面活性减弱。PS活性减弱的原因可能与TPL、PC、PG的减少及蛋白质对PS的抑制有关。作者提出用外源性PS制剂治疗肺出血,可能会有一定的疗效。     

人羊水肺表面活性物质治疗新生儿肺透明膜病

作者用人羊水肺表面活性物质(PS)治疗一例肺透明膜病取得成功。PS剂量为150mg磷脂/kg,从气管插管一次滴入。临床症状,经皮测氧(TcPO_2)和吸入氧浓度(FiO_2)24h后明显好转,气道吸出物中的卵磷脂/鞘磷脂(L/S)比值、磷脂酰甘油(PG)和最低表面张力(γmin)逐渐恢复。肺部X线片原示毛玻璃样改变,PS治疗后3d明显改善,第6天病情基本恢复,最后痊愈出院。