大蒜新素对MCMV感染小鼠脾细胞Th1/Th2类细胞因子水平的影响

目的:探讨大蒜新素对鼠巨细胞病毒(MCMV)感染小鼠脾细胞Th1/Th2类细胞因子水平的影响及其抗MCMV作用机制.方法:复制小鼠巨细胞病毒感染模型,将模型小鼠随机分成大蒜新素治疗组和安慰剂组,于MCMV感染后48 h开始分别给予大蒜新素一般剂量(25 mg·kg-1/d)和等量9.0 g/L氯化钠注射液腹腔注射;另设大蒜新素处理组和空白对照组,不接种病毒,分别给予大蒜新素一般剂量(25 mg·kg-1/d)和等量9.0 g/L氯化钠注射液腹腔注射.用ELISA法检测小鼠脾细胞Th1类细胞因子IL-2、IFNγ和Th2类细胞因子IL-4,IL-10水平.结果:MCMV感染可导致BALB/c小鼠Th1类细胞因子IL-2表达明显下降(P《0.01),Th2类细胞因子IL-10表达显著增高(P《0.01).大蒜新素能诱导正常BALB/c小鼠和MCMV感染模型鼠脾细胞Th1类细胞因子IL-2和IFNγ的表达显著增加(P《0.01),Th2类细胞因子IL-10表达明显下降(P《0.01).结论:大蒜新素能显著上调正常和MCMV感染模型小鼠脾细胞 Th1类细胞因子IL-2和IFNγ的表达,并抑制Th2类细胞因子IL-10的表达,通过诱导和促进特异性Th1优势应答反应来发挥抗CMV效应.     

大蒜新素体内外抑制小鼠巨细胞病毒感染诱导的调节性T细胞扩增实验研究

目的 在体内外水平研究大蒜新素对小鼠巨细胞病毒 (murine cytomegalovirus, MCMV) 感染导致调节性 T 细胞 (regulatory T cells, Treg) 异常扩增的抑制作用。方法 72 只 MCMV 感染小鼠随机分为安慰剂组和大蒜新素治疗组;并设 72 只同期模拟感染小鼠为对照,随机分为模拟感染对照组和大蒜新素对照组。分别于大蒜新素处理后 1、7、14、28、60、120 d 处死小鼠,获得脾细胞待测。采用 Western blotting 法检测脾细胞中 Foxp3 的蛋白表达强度;流式细胞术分析 CD4+CD25+Foxp3+Treg 细胞在脾细胞中所占比率的变化。采用小鼠胚胎成纤维细胞对大蒜新素的最大耐受浓度处理 MCMV 感染的胚胎成纤维细胞 3 d 后,采用 Realtime PCR 法和 Western blotting 法分别检测 T 细胞中 Foxp3 mRNA 和蛋白的表达水平。结果 整体研究发现,大蒜新素对正常小鼠脾细胞中 Foxp3 蛋白表达和 Treg 细胞比率均无显著影响;但是在 MCMV 感染小鼠,大蒜新素可在感染慢性期显著减少 Foxp3 蛋白表达强度、降低调节性 T 细胞比率。体外细胞模型发现,最大耐受浓度的大蒜新素加入共培养体系后可部分拮抗 MCMV 诱导的 Foxp3 基因和蛋白表达上调。结论 大蒜新素在体内外均可显著纠正 MCMV 感染导致的 Treg 异常扩增。大蒜新素通过影响 Treg 增殖进而增强抗病毒免疫而有利于机体清除 CMV 病毒,可能是大蒜新素诱导抗 CMV 免疫的另一重要机制。     

小鼠巨细胞病毒(MCMV)的潜伏感染和激活的研究

巨细胞病毒(CMV)是一种普遍存在的双股DNA病毒,其感染后的特点之一是形成潜伏感染。近十几年来小鼠巨细胞病毒(MCMV)感染已广泛用作研究人CMV潜伏感染和激活的实验模型。我们已经发现在我国普通级小鼠群中MCMV抗体阳性率达50%以上,但对334只小鼠颌下腺病毒分离则均为阴性。这种情况是否表明MCMV的自然感染是以隐性感染或潜伏感染的方式存在呢?为了探讨这个问题,我们建立了MCMV潜伏感染和免疫抑制激活模型,在此基础上对不同来源的50只普通级小鼠免疫抑制后分离病毒。现报道如下。材料和方法一、病毒MCMV-Smith株自美国引进,在鼠胚纤维母细胞内传代滴度为10~(4.5)TCID_(50)/0.2ml。     

大蒜新素预防和治疗鼠巨细胞病毒性肝炎的实验研究

目的　探讨大蒜新素在体内对鼠巨细胞病毒 (m urine cytom egalovirus,MCMV)感染小鼠的预防及治疗作用。方法　建立 BAL B/c小鼠 MCMV重组病毒 (插入 L ac Z基因 )性肝炎模型 ,采用 X- gal染色测定β- gal在肝、肾及肺组织中的表达。 70只雌性 BAL B/c小鼠随机分为大蒜新素预防 +治疗组 (n=2 0 ) ,大蒜新素治疗组(n=2 0 ) ,更昔洛韦治疗组〔6 0 m g/(kg· d) ,n=10〕,安慰剂组 (n=10 )及空白对照组 (n=10 )。其中前两组又各均分为低、高剂量组〔2 5 ,75 m g/(kg· d)〕,检测血浆丙氨酸转氨酶 (AL T)水平和评估肝组织组织学活动性指数(HAI) ,并用原位杂交法检测肝组织中 MCMV DNA水平。结果　大蒜新素预防 +治疗组及治疗组与安慰剂组相比较 ,AL T、肝脏 HAI评分及 MCMV DNA杂交的积分光密度均明显降低 (P<0 .0 5 ) ,与更昔洛韦治疗组相比无显著差异 ;大蒜新素预防用药及加大用药剂量并不能显著降低 AL T、肝脏 HAI评分及 MCMV DNA积分光密度水平。结论　大蒜新素能减轻 MCMV性肝炎模型鼠肝功能损害 ,改善肝脏病理变化和降低肝组织内病毒 DNA负荷量 ,其治疗效果与更昔洛韦无显著差异 ,大蒜新素预防用药及加大用药剂量不能增加其病毒抑制效应。     

大蒜新素抑制小鼠巨细胞病毒感染诱导调节性T细胞扩增的体外研究

目的 在细胞水平研究大蒜新素对小鼠巨细胞病毒(MCMV)感染鼠胚肺成纤维细胞(MEF)诱导调节性T细胞(Treg)异常扩增的抑制作用.方法 建立MEF和T淋巴细胞的共培养体系,采用MEF对大蒜新素的最大耐受浓度(MTC)处理MCMV感染的MEF 3 d后,再用实时定量PCR检测T细胞中叉头蛋白3(Foxp3)mRNA表达水平,流式细胞术检测效应性T细胞哑群杀伤性T细胞Ⅰ型(Tc1)、杀伤性T细胞Ⅱ型(Tc2)、辅助性T细胞Ⅰ型(Th1)和辅助性T细胞Ⅱ型(Th2)的百分比,双抗体夹心酶联免疫吸附法检测共培养体系中自细胞介素10(IL)-10和转化生长因子(TGF)-β的蛋白表达,标准蚀斑法检测共培养体系中的病毒负荷量,并与安慰剂组进行统计学分析比较.结果 MEF对大蒜新素的MTC浓度为9.83μg/ml.MTC浓度的大蒜新素可部分拮抗MCMV诱导的Foxp3基因表达上调(87±5比114±8,P<0.01);分别上调Tc1、Tc2和Th1百分比至(12.42±1.23)%、(4.28±0.56)%、(13.25±0.68)%,与安慰剂组[(6.85±0.92)%、(2.34±0.42)%、(9.32±0.86)%]比较差异均有统计学意义(均P<0.01);使IL-10和TGF-β蛋白表达水平分别降至(29.98±3.15)pg/ml和(3.48±0.23)ng/ml,均显著低于安慰剂组水平[(38.21±4.02)pg/ml和(5.31±0.59)ng/ml,均P<0.05];同时将体系中的病毒负荷量由(6.79±0.39)降至(5.03±0.08)(均P<0.01).结论 大蒜新素在体外可通过抑制Treg途径来增强抗病毒免疫.     

氧化苦参碱下调小鼠Colon26肿瘤细胞免疫抑制作用的体外实验

目的:研究氧化苦参碱(MOX)对Colon26肿瘤细胞免疫抑制的体外影响. 方法:获取体外经MOX作用后再培养的Colon26培养上清,以不经MOX作用的Colon26同步培养上清作对照,观察其对小鼠脾细胞MTT法测定的NK杀伤和ConA诱导转化以及流式细胞计数分析的IL-2Rα,CD3ε ζ 和CD3ε-ζ 表达5项免疫功能指标的影响,定量ELISA法测定这些上清中TGF-β1,VEGF,IL-4,IL-6和IL-10 5种免疫抑制分子的含量,分析MOX下调Colon26分泌免疫抑制分子与上清免疫抑制作用的关系. 结果:不经MOX作用同步培养的Colon26上清,5种免疫抑制分子均可被测到,以TGF-β1含量最高;该上清对小鼠脾细胞5项免疫功能指标,均有显著抑制作用. MOX作用后的Colon26,其第一次再培养上清,TGF-β1和IL-10含量及对除NK杀伤以外的其余4项免疫功能指标的抑制,均明显降低(P值分别为0.0045,0.032,0.001,0.0095,0.0005,0.000);与第一次再培养上清相比,其第二次再培养上清,TGF-β1含量继续显著降低(P=0.002),VEGF含量及对除NK杀伤以外的其余4项免疫功能指标的抑制,均明显提高(P值分别为0.029,0.0075,0.0495,0.0005,0.0005),其余无显著变化. 结论:MOX可明显下调Colon26肿瘤细胞TGF-β1和IL-10的分泌,通过下调所测5种以外的其他免疫抑制分子的分泌而影响Colon26肿瘤细胞的免疫抑制效应. 下调肿瘤细胞免疫抑制作用,可能是MOX的抗瘤效应机制之一.     

巨细胞病毒脑内感染小鼠听觉诱发电位的变化

目的 探讨脑内感染小鼠巨细胞病毒（murine cytomegalovirus,MCMV）后脑干听觉诱发电位（auditory brainstem response,ABR）的变化,以明确经脑内感染MCMV后小鼠ABR是否出现异常改变,从而验证经脑内感染MCMV能否建立巨细胞病毒（CMV）感染致听力损伤的动物模型,并在此基础上观察更昔洛韦对CMV感染致听力损伤的干预效果.方法 将24只新生小鼠按窝随机分成正常对照组、模型组、干预组3组,对照组经脑内注射无菌生理盐水10 μl,模型组与干预组经脑内接种TCID50为1×105 U/ml的MCMV病毒悬液10 μl,同时干预组在接种MCMV后第2天开始腹腔注射更昔洛韦60 mg/（kg·d）,连用2周.2周后在小鼠麻醉状态下应用脑干听觉诱发电位仪在电屏蔽装置中检测小鼠的ABR,并记录ABR的波形以及Ⅰ波的潜伏期、波幅.结果 模型组与正常对照组相比潜伏期延长、波幅降低（F=9.151,P=0.011;F=5.095,P=0.043）,更昔洛韦干预组与模型组相比潜伏期缩短、波幅升高（F=13.797,P=0.003;F=14.587,P=0.002）,差异有统计学意义.结论 经脑内感染MCMV可以引起小鼠ABR的异常改变,脑内感染MCMV可建立CMV感染致听力损伤的动物模型,婴幼儿CMV感染后早期应用更昔洛韦对CMV感染致听力损伤的进行性发展有一定的抑制作用.     

赤芍总苷对荷瘤鼠体内IL-10、IL-12、TGF-β1分泌及细胞免疫功能的影响

目的 观察赤芍总苷对荷瘤鼠免疫功能的调控作用.方法 分组给药7d后,处死小鼠测定胸腺指数、脾指数;IL-10、IL-12、TGF-β1测定采用ELISA法;流式细胞仪检测血液中CD4+、CD8+T细胞的数目比例.结果 赤芍总苷使荷瘤鼠的胸腺指数和脾指数都增加,能降低IL-10和TGF-β1分泌,增加IL-12分泌,纠正荷瘤机体的Th1/Th2漂移现象,维持Th1的优势状态.结论 赤芍总苷具有调节IL-10、IL-12、TGF-β1细胞因子分泌的作用,增加CD8+T细胞数量,调节荷瘤鼠的免疫功能.     

转化生长因子β_1、白细胞介素-1β、白细胞介素-6在豚鼠分泌性中耳炎动物模型中的表达

目的:检测转化生长因子β1(TGF-β1)、白细胞介素-1β(IL-1β),白细胞介素-6(IL-6)在分泌性中耳炎(SOM)动物模型鼓室黏膜中的表达,探讨TGF-β1、IL-1β、IL-6在SOM发病和转归中的作用。方法:应用灭活肺炎链球菌注入豚鼠中耳腔,制作SOM动物模型,采用免疫组织化学方法检测致病鼠鼓室黏膜上皮在注入细菌后6h、1 d、3 d、7 d、14 d及30 d后TGF-β1,IL-1β,IL-6的表达。结果:第3天造模成功,SOM动物模型的鼓室黏膜上皮中TGF-β1、IL-1β,IL-6急性期均有表达。IL-1β术后3 d达高峰,IL-6术后1 d达高峰,TGF-β1在术后7 d表达明显增强,第30天时达高峰。结论:灭活肺炎链球菌致SOM中,IL-1β,IL-6在SOM早期发挥作用,TGF-β1可能与SOM慢性迁延有关。     

鼠巨细胞病毒感染诱导小鼠精子凋亡及线粒体调控机制研究

为研究鼠巨细胞病毒（MCMV）感染对小鼠精子凋亡的影响,探讨MCMV感染诱导小鼠精子凋亡的线粒体调控机制。建立小鼠睾丸MCMV急性感染模型（n=15）,以正常小鼠作为对照（n=15）,采用流式细胞术（FCM）与激光扫描共聚焦显微术（LCSM）对不同感染时段的小鼠附睾尾部成熟精子进行凋亡与线粒体膜电位的检测,同时应用电镜观察不同感染时段的精子线粒体超微结构的改变。     

Effects of allitridin on the expression of transcription factor T-bet mRNA of cytomegalovirus-induced myocarditis in mice

INTRODUCTIONT he cardiovascular disease myocarditis is character ized by inflammation and necrosis of cardiac mus cle. The disease ranges from transient inflammation to afulminant syndrome with manifestations that may includeheart failure, arrhythmias, and sudden death. This dis ease has been associated with various viral etiologies.Although enterovirus infections are recognized as a lead ing cause of myocarditis, at the present studies havedemonstrated that cytomegalovirus…     

TGF-β_1抑制剂灯盏花素对肿瘤诱导的小鼠免疫抑制的逆转作用

目的:观察灯盏花素对肿瘤诱导的小鼠免疫抑制的影响。方法:小鼠脾脏细胞体外培养观察灯盏花素对淋巴细胞增殖和淋巴细胞因子分泌的的影响;lewis肺癌荷瘤小鼠迟发型变态反应、血清淋巴细胞因子水平及CD8+T细胞对lewis肺癌的细胞毒作用检测灯盏花素对小鼠免疫抑制的逆转作用。结果:灯盏花素体外对刀豆蛋白(ConA)诱导的小鼠脾脏细胞增殖有增强作用,能抑制转化生长因子β1(TGF-β1)和白细胞介素4(IL-4),促进的干扰素λ(IFN-λ)和白细胞介素2(IL-2)。体内灯盏花素能逆转荷瘤小鼠迟发型变态反应、血清淋巴细胞因子水平及CD8+T细胞对lewis肺癌的无能作用,并一定程度抑制肿瘤生长。结论:灯盏花素作为TGF-β1抑制剂对肿瘤诱导的小鼠免疫抑制有逆转作用。     

The Role of TGF-β_1 in Mice Hepatic Fibrosis by Schistosomiasis Japonica

lthasalreadybeenestab1ishedthatthehepaticfibrosisischaracterizedbyhyperplasiaandabnormaldepositofextrahepatocellularmatrix,especiallycolla-gen.Transforminggrowthfactor--5,(TGF--5,)isre-gardedasanimportantmodulationfactorinprocessofhepaticfibrosisformation.Tofurthere1ucidatetheroleofTGF--P,inhepaticfibrosisformationcausedbySchistosomiasisiaponl/a,weusedELISAandVGstainingtostudythechangeofthelevelofserumTGF--0,andlivercollagenfiberandreticularfiberinmlce.1MATERIALSANDMETHODS1.1Expe…     

Hp感染对胃黏膜FOXP3和TGF-β1及IL-10表达的影响

目的研究Hp感染对胃黏膜FOXP3、TGF-β1、IL-10表达的影响。方法采用原位杂交和ELISA法检测Hp感染与未感染患者胃黏膜活检组织中FOXP3m RNA、TGF-β1m RNA的表达和IL-10的含量;用ELISA法检测胃黏膜上皮细胞GES-1与Hp共培养后的TGF-β1、IL-10含量。结果 (1)Hp感染阳性患者胃黏膜组织中FOXP3m RNA、TGF-β1m RNA的阳性表达率及IL-10的含量较Hp感染阴性患者明显增高(分别为P0.05、P0.05和P0.01);(2)Hp感染阳性患者胃黏膜组织FOXP3m RNA的表达与TGF-β1m RNA和IL-10的表达呈正相关(分别为P0.05和P0.01);(3)胃黏膜上皮细胞GES-1与Hp共培养1h后,TGF-β1及IL-10的表达量均较阴性对照组明显增高(P0.05)。结论 Hp感染可上调胃黏膜局部CD4+CD25+FOXP3+Treg细胞,诱导胃黏膜细胞分泌TGF-β和IL-10,从而抑制胃粘膜局部免疫,促进Hp的免疫逃逸和持续性感染。     

Effects of emodin on the proliferation of the glomerular mesangial cell and correlative cytokines in rats

Objective：To investigate the effects of emodin（EMD） on cell proliferation and correlative cytokines secretion of glomerular mesangial in rats. Methods：The effects of EMD on cell proliferation and IL-6, TGF-β1 secretion of glomerular mesangial in rats were observed. Cell proliferation was measured by MTT method. IL-6 and TGF-β1 secretion was detected with ELISA. Results：EMD was able to inhibit the cell proliferation and down-regulate the IL-6 and TGF-β 1 secretion of glomerular mesangial, as compared to the model group in rats （P 〈 0.05）. Conclusion：EMD could significantly inhibit the cell proliferation, and reduce the creation of extracellular matrix（ECM）, this indicated that it could play an important role in alleviation and prevention of glomerular sclerosis. The mechanism may be that EMD can reduce the IL-6 and TGF-β1 secretion ofglomerular mesangial cell in rats.     

参芪扶正注射液对Lewis肺癌小鼠免疫逃逸相关细胞因子的影响

目的:观察参芪扶正注射液及其配合化疗对Lewis肺癌小鼠免疫逃逸相关细胞因子的调控作用。方法:观察参芪扶正注射液及其配合化疗对Lewis肺癌荷瘤小鼠的抑瘤作用,同时观察其对小鼠体重的影响。采用酶联免疫吸附法(ELISA法)检测各实验组小鼠血清中的IL-2、IL-10、TGF-β1及γ-IFN等细胞因子的含量。结果:参芪扶正注射液及化疗对Lewis肺癌移植瘤的抑制率总体趋势为中药加化疗组单纯化疗组纯中药组,中药加化疗组抑瘤率最高,而单独参芪扶正注射液抑瘤作用并不明显。荷瘤小鼠体内IL-2、γ-IFN均不同程度的低于阴性对照组,而IL-10及TGF-β1均不同程度的高于阴性对照组。单纯扶正中药可增加荷瘤小鼠IL-2、γ-IFN的含量,但降低IL-10、TGF-β1的作用并不明显。化疗可降低IL-2、γ-IFN、IL-10、TGF-β1的含量,而中药加化疗组降低IL-10和TGF-β1的作用优于单纯化疗及单纯中药组。结论:此结果初步证明了参芪扶正注射液可改善荷瘤小鼠体内存在的Th1/Th2细胞因子失衡的现象,一定程度上阐释了中医扶正培本治则调控机体免疫功能的分子机理。     

慢病毒载体介导的TGF-β1基因修饰小鼠未成熟树突状细胞的实验研究

目的探讨慢病毒载体介导的转化生长因子β1(TGF-β1)基因修饰小鼠未成熟树突状细胞(iDCs)的方法。方法体外原代培养小鼠骨髓细胞,经粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和白细胞介素4(IL-4)诱导以及抗CD11c抗体包被的免疫磁珠分选获得iDCs,取部分iDCs经肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导为成熟DCs(mDCs),用光学显微镜观察细胞形态,流式细胞术分析细胞的表面分子。将iDCs分为感染组[感染携带绿色荧光蛋白(GFP)与TGF-β1基因的慢病毒颗粒]、感染对照组(感染携带GFP、不携带TGF-β1基因的慢病毒颗粒)及空白对照组(未感染慢病毒颗粒)。采用倒置荧光显微镜及酶联免疫吸附试验(ELISA)对各组iDCs中GFP及TGF-β1的表达进行检测。结果经体外诱导培养及免疫磁珠分选后,获得大量高纯度iDCs,随培养时间延长,iDCs表现出典型的树突状形态;iDCs表面MHCⅡ、CD80及CD86表达水平均明显低于mDCs。感染组iDCs中GFP与TGF-β1蛋白表达水平明显高于对照组(P<0.05)。结论携有TGF-β1基因的慢病毒成功感染小鼠iDCs,并使其表达目的蛋白。