透明质酸对白细胞介素-1β诱导软骨细胞iNOS活性和表达的影响

目的:研究透明质酸对重组大鼠白细胞介素-1β(rrIL-β)诱导体外骨关节炎软骨细胞iNOS活性和表达的影响,并探讨其作用机制.方法:体外分离、培养大鼠软骨细胞成功后,加入不同浓度的透明质酸(10,20,40 mg/L)1 h后,以10 μ g/L IL-1β刺激,培养24 h后,通过RT-PCR检测诱导型一氧化氮合酶(iNOS) mRNA的表达;以Griess反应测定上清液中一氧化氮(NO)浓度,并通过iNOS催化L-精氨酸和分子氧反应生成NO推算iNOS的活力.结果:透明质酸可有效抑制IL-1β诱导骨关节炎软骨细胞iNOS的活性和NO的产量;RT-PCR检测显示透明质酸能抑制iNOS的mRNA表达,且呈现剂量依赖的趋势.结论:透明质酸能通过降低iNOS的活性和其蛋白表达,来抑制骨关节炎软骨细胞上清液中NO的含量.     

白藜芦醇对IL-lβ诱导体外培养人骨关节炎软骨细胞蛋白聚糖代谢的影响

目的通过体外培养骨关节炎(OA)软骨细胞体系,了解白藜芦醇对白细胞介素(IL)-lβ诱导OA软骨细胞蛋白聚糖代谢的影响。方法软骨细胞采自OA患者,采用分阶段酶消化法体外原代培养人软骨细胞。在培养液中加入IL-lβ诱导剂,设立兔血清对照组、实验对照组和白藜芦醇加药组;给予实验兔以白藜芦醇剂量灌胃后,抽取含药血清培养细胞。采用3种方法了解蛋白聚糖的代谢水平:1)用二甲基亚甲蓝分光光度法(DMMB法)检测细胞中及培养液中的糖安多糖(GAG)含量;2)酶联免疫吸附法检测培养液中蛋白聚糖的不同代谢片段(Mab-3B3和5D4);3)反转录聚合酶链反应(RT-PCR)半定量法检测软骨细胞的蛋白聚糖、基质金属蛋白酶-1(matrix metalLoproteinases,MMPs-1)和MMPs-3的mRNA表达水平。结果各浓度白藜芦醇含药血清组体外培养的软骨细胞释放入培养液中GAG百分比均值明显低于对照组,两者相比差异有统计学意义(P<0.01),随白藜芦醇的增加,释放入培养液中GAG的百分比逐渐降低;3B3含量的均值较对照组相比明显增高(P<0.01),与白藜芦醇浓度呈正相关,释放入培养液中5D4含量的均值则明显降低(P<0.05),与白藜芦醇浓度呈负相关;白藜芦醇可以增加OA患者软骨细胞和IL-1β诱导的OA患者软骨细胞蛋白聚糖mR-NA表达,减低MMPs-1、MMPs-3 mRNA的表达。结论白藜芦醇可以抑制IL-1β对OA患者软骨细胞蛋白聚糖代谢的促进作用,达到保护软骨,防止OA的目的 。     

透明质酸/壳聚糖微球对骨关节炎软骨细胞iNOS活性和表达的影响

目的:研究透明质酸/壳聚糖微球对重组大鼠白细胞介素-1β(rrIL-1β)诱导体外骨关节炎软骨细胞诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)活性和表达的影响,并初步探讨其作用机制。方法:体外分离、培养大鼠软骨细胞成功后,以10ng/L IL-1β刺激模拟软骨细胞炎性级联反应,培养1h后分别加入透明质酸微球、壳聚糖微球和透明质酸/壳聚糖微球,继续培养24h。通过RT-PCR检测iNOS mRNA的表达,利用Griess反应测定上清液中一氧化氮(NO)的浓度,通过iNOS催化L-精氨酸和分子氧反应生成NO推算iNOS的活性。结果:透明质酸/壳聚糖微球能有效抑制IL-1β刺激诱导的软骨细胞iNOS的活性和NO的产量;RT-PCR检测显示透明质酸/壳聚糖微球能抑制iNOS mRNA的表达。结论:透明质酸/壳聚糖微球能通过抑制骨关节炎软骨细胞iNOS活性及蛋白表达来减少骨关节炎软骨细胞中NO的产生。     

白藜芦醇对肥胖者骨性关节炎软骨细胞的作用及对 TLR4、NF-κBmRNA表达的影响

目的:探讨白藜芦醇是否可通过抑制TLR4/NF-κB信号通路发挥抗骨性关节炎的作用。方法:采用两步酶消化法分离培养肥胖者骨性关节炎软骨细胞。免疫细胞化学染色及甲苯胺蓝染色对细胞进行表型鉴定。应用MTT法测定白藜芦醇对软骨细胞增殖活力的影响。ELISA法检测细胞培养基上清TNF-α的水平。RT-PCR法检测TLR4、NF-κBm RNA表达水平。结果:软骨细胞Ⅱ型胶原免疫细胞化学染色及蛋白多糖甲苯胺蓝染色呈阳性。白藜芦醇浓度在6.25~100μmol·L-1时对细胞增殖均无抑制作用,其中低浓度的白藜芦醇(6.25~12.5μmol·L-1)能促进细胞增殖(P<0.05)。IL-1β(10 ng·ml-1)能抑制细胞增殖(P<0.05)。白藜芦醇浓度在6.25~12.5μmol·L-1时,对IL-1β诱导的细胞活力降低有显著抑制作用。相比对照组,IL-1β诱导组的培养基上清中TNF-α水平及软骨细胞TLR4、NF-κBm RNA表达均明显增加(P<0.01),而加入白藜芦醇(6.25~12.5μmol·L-1)处理后,TNF-α水平及TLR4、NF-κBm RNA表达均显著降低(P<0.01)。结论:白藜芦醇可能通过抑制TLR4/NF-κB信号通路发挥抗骨性关节炎效应。     

膝痹通络方通过调节MAPK-MEK信号通路延缓对白细胞介素1β诱导的关节软骨细胞退变

【目的】观察膝痹通络方对白细胞介素1β(IL-1β)诱导的软骨细胞退变的影响,并从丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)-MAPK激酶(MEK)信号通路探讨其机制。【方法】提取新生SD大鼠四肢关节软骨细胞,选择P1代细胞进行实验,共设5组:正常对照组,IL-1β组,高、中、低浓度中药组。正常对照组软骨细胞加入正常大鼠血清培养;IL-1β组软骨细胞加入正常大鼠血清、20 ng/mL IL-1β培养;高、中、低浓度中药组软骨细胞分别加入对应浓度的膝痹通络方含药血清进行培养,并加入20 ng/mL IL-1β。24 h后倒置显微镜下观察软骨细胞大小、密度、形态,采用实时定量聚合酶链反应(qPCR)检测软骨细胞基质金属蛋白酶3(MMP3)、聚蛋白多糖酶4/5(ADAMTS4/5)、蛋白多糖(A-CAN)、性别决定区Y框蛋白(SOX9)等软骨退变相关基因的表达,蛋白免疫印迹(Western Blot)法检测软骨细胞SOX9、基质金属蛋白酶13(MMP13)、磷酸化原癌基因丝苏氨酸蛋白激酶(P-Raf1)、Raf-1、磷酸化丝裂原活化蛋白激酶激酶(P-MEK1)、MEK1的蛋白表达。【结果】倒置显微镜下可见,经IL-1β炎性因子诱导后的软骨细胞出现退变形态;q PCR结果显示,与IL-1β组比较,各浓度中药组MMP3、ADAMTS4/5的mRNA表达水平降低(P0.05),A-CAN的mRNA表达水平升高(P0.05),高浓度中药组SOX9的mRNA表达水平升高(P0.05);Western Blot结果显示,与IL-1β组比较,各浓度中药组软骨细胞MMP13蛋白表达,Raf1、MEK1磷酸化水平降低(P0.05),SOX9蛋白表达水平升高(P0.05)。【结论】膝痹通络方可延缓IL-1β诱导的软骨细胞退变,其机制可能与调节MAPK-MEK信号通路相关蛋白及基因表达有关。     

鹿茸多肽对IL-1β诱导退变的椎间盘终板软骨细胞保护作用

目的:观察不同浓度的鹿茸多肽对IL-1β诱导的大鼠椎间盘终板软骨细胞的影响,分析其对终板软骨细胞保护的作用机制。方法:选取1月龄的健康SD大鼠,并对其椎间盘终板软骨细胞进行分离与培养,诱导组单加入10μg/L的IL-1β,药物处理组分3组,分别在培养基中加入10μg/L的IL-1β和10、30、50μg/mL的鹿茸多肽,MTT比色法检测3个时间节点(24、48、72 h)各组椎间盘终板软骨细胞的增殖情况;流式细胞仪检测大鼠椎间盘终板软骨细胞的凋亡;qPCR法检测Collagen Ⅱ、Collagen X、caspase-3、MMP-13、Bax、Bcl-2基因的表达水平。结果:在24、48、72 h时间点,MTT法检测10μg/mL鹿茸多肽组在各时间点终板软骨细胞增殖情况与IL-1β诱导组比较,差异不具有统计学意义(P0.05);而30μg/mL组和50μg/mL组均能拮抗IL-1β对软骨终板细胞増殖的抑制作用,差异具有统计学意义(P0.05,P0.01);流式分析结果表明,不同浓度的鹿茸多肽均能够降低IL-1β诱导的大鼠椎间盘软骨终板细胞的凋亡比例(P0.05,P0.01);qPCR检测结果表明,IL-1β诱导组的Cllagen Ⅱ、Bcl-2基因的表达减弱,Collagen X、caspase-3、Bax、MMP-13基因的表达增强,与空白对照组对比差异具有统计学意义(P0.05);各浓度鹿茸多肽组均能够上调Cllagen Ⅱ、Bcl-2基因的表达(P0.05,P0.01),下调Collagen X、caspase-3、Bax、MMP-13基因的表达(P0.05,P0.01),以50μg/mL组效果最为显著(P0.01)。结论:一定浓度的鹿茸多肽通过抑制软骨终板细胞的凋亡,促进其増殖,调控其相关基质蛋白及基质降解酶、凋亡因子等基因的表达,起到了对退变的椎间盘终板软骨细胞的保护作用。     

USP49抑制IL-1β诱导的软骨退行性改变

目的 了解USP49对IL-1β诱导的软骨细胞凋亡及细胞外基质降解的影响。方法 首先基于数据库了解USP49在骨关节炎患者中的表达水平。原代培养软骨细胞并鉴定,使用不同浓度的IL-1β预处理软骨细胞,检测USP49基因表达与蛋白水平后,选择合适的IL-1β浓度模拟骨关节炎。使用IL-1β处理构建的USP49过表达软骨细胞,检测软骨细胞凋亡,测定USP49、β-catenin及软骨降解相关蛋白MMP-1、MMP-13表达。结果 较正常人样本,USP49在骨性关节炎患者中表达显著降低。原代软骨细胞经不同浓度IL-1β预处理后,USP49表达明显抑制,且随浓度增加,抑制作用增强。USP49过表达可显著减弱IL-1β诱导的细胞凋亡,抑制β-catenin、MMP-1、MMP-13表达。结论 USP49可能通过Wnt/β-catenin通路抑制软骨细胞凋亡及细胞外基质降解,减轻IL-1β诱导的软骨退变。     

3种非甾体抗炎药对大鼠骨关节炎关节软骨细胞IL-1β、TNF-α、IL-1α表达的影响

目的:探讨长期应用塞来昔布、布洛芬、吲哚美辛对大鼠骨关节炎(osteoarthritis,OA)关节软骨细胞白细胞介素-1β(in-terleukin-1β,IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor,TNF-α)、细胞白细胞介素-1α(interleukin-1α,IL-1α)表达的影响。方法:采用左侧跟腱切除术建立Wistar大鼠同侧膝关节OA模型,分4组,每日给赛来昔布24 mg/kg(celecoxib,CE)组、布洛芬72 mg/kg(ibuprofen,IBP)组、吲哚美辛9 mg/kg(indomethacin,IN)组及生理盐水(normal saline,NS)组。用免疫组织化学法观察3、6、9个月后关节软骨细胞IL-1β、TNF-α、IL-1α表达的变化。结果:①连续用药3月,CE对软骨细胞IL-1β、TNF-α表达无明显影响,抑制IL-1α的表达;IBP促进软骨细胞IL-1β、TNF-α的表达,对IL-1α的表达无明显影响;IN轻度促进软骨细胞IL-1β表达,增强TNF-α的表达,对IL-1α的表达无明显影响。②连续用药6月,CE对软骨细胞IL-1β表达无明显影响,轻度抑制TNF-α、IL-1α表达;IBP轻度促进软骨细胞IL-1β的表达,促进TNF-α表达,轻度抑制IL-1α的表达;IN轻度抑制软骨细胞IL-1β,抑制TNF-α表达,轻度抑制IL-1α的表达。③连续用药9月,CE明显抑制软骨细胞IL-1β的表达,抑制TNF-α、IL-1α的表达;IBP抑制软骨细胞IL-1β、TNF-α的表达,轻度抑制IL-1α的表达。结论:CE抑制软骨细胞IL-1β、TNF-α、IL-1α的表达,可减轻OA关节软骨的损害,IBP、IN在不同时期对软骨细胞IL-1β、TNF-α、IL-1α表达的影响有所不同,其总体抑制效应不明显。     

瘦素通过JAK/STAT途径对IL-1β诱导的软骨细胞增殖和炎性反应的影响

目的 探讨瘦素通过JAK/STAT途径对IL-1β诱导的软骨细胞增殖和炎性反应的影响及机制研究。方法 提取SD大鼠的软骨细胞并进行鉴定;CCK-8筛选瘦素最佳浓度;集落形成实验检测细胞增殖能力;ELISA检测炎性细胞因子(IL-6、IL-8、TNF-α)的表达;Western blot法检测JAK/STAT途径相关蛋白的表达。结果 瘦素的最佳作用浓度为10、20、40ng/ml;瘦素呈剂量依赖性使IL-1β刺激诱导的软骨细胞的增殖能力增强(P<0.05),且抑制了由IL-1β刺激诱导的软骨细胞中炎性细胞因子的上调(P均<0.05)。此外,瘦素抑制IL-1β刺激诱导JAK/STAT途径的激活,JAK和STAT3蛋白的磷酸化水平降低(P均<0.05)。结论 瘦素通过抑制JAK/STAT途径的激活,从而提高软骨细胞的增殖能力,抑制炎性反应,从而对骨关节炎具有潜在的治疗作用。     

川芎嗪对IL-1β诱导的兔原代软骨细胞iNOS表达和NO合成的影响

目的观察川芎嗪(tetramethylpyrazine,TMP)对IL-1β(interleukin-1β,IL-1β)诱导的兔原代软骨细胞诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)表达及一氧化氮(NO)合成的影响。方法体外培养兔软骨细胞,用甲苯胺蓝染色检测蛋白多糖,免疫荧光检测兔原代软骨细胞Ⅱ型胶原;用IL-1β10 ng/ml和(或)不同浓度(5、10、15、20μg/ml)川芎嗪共培养兔原代软骨细胞48 h后,RT-PCR和免疫组化检测iNOS基因及蛋白表达;用硝酸还原法检测细胞培养上清液NO的表达。结果软骨细胞呈三角形或多角形,蛋白多糖表达于细胞质中,Ⅱ型胶原主要表达于细胞质,少见于细胞核。与对照组比较,IL-1β单独作用软骨细胞iNOS和NO的表达显著增加(P<0.01);IL-1β和川芎嗪联合作用后,软骨细胞iNOS和NO的表达较IL-1β单独作用显著降低(P<0.05,P<0.01),但仍显著高于对照组(P<0.01)。结论川芎嗪能有效抑制IL-1β诱导兔软骨细胞iNOS的表达和NO的合成。     

谷氨酰胺下调大鼠肝细胞诱导型一氧化氮合酶的表达

目的 利用原代培养的大鼠肝细胞,观察谷氨酰胺(Gln)在体外对白细胞介素-1β(IL-1β)刺激下一氧化氮合酶(iNOS)过度表达的影响.方法 原位胶原酶灌注法获取原代大鼠肝细胞,分别用生理盐水、IL-1β(1 nmol/L)以及IL-1β(1 nmol/L)联合不同浓度的Gln(2、5、10 mmol/L)刺激24 h,留取细胞和堵养液,采用生化法测定培养液一氧化氮(NO)的水平,采用实时定量逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)法及蛋白质印迹法检测肝细胞内iNOS信使RNA和蛋白质水平,采用电泳迁移率转变试验检测肝细胞核内核因子κB(NF-κB)的活性.结果 IL-1β刺激后培养液NO的平均浓度为72.7 μmol/L明显高于生理盐水组41.7 μmol/L,肝细胞iNOS蛋白和mRNA水平分别增加了35%和90%,同时给予Gln能够抑制iNOS的过度活化减少NO的产生,并且这种抑制作用随着Gln浓度的增加而增强;IL-1β刺激后肝细胞核内NF-κB的结合活性增强约50%,Gln对NF-κB的活化没有抑制作用,在5、10 mmol/L浓度时反而对NF-κB有进一步的激活.结论 谷氨酰胺能够下调肝细胞在炎症应激诱导下iNOS基因的过度表达,减少NO的产生,这一作用不是通过NF-κB信号通路实现的.     

黄芪多糖对体外培养大鼠软骨细胞内糖胺多糖合成的影响及其机制

目的:研究黄芪多糖对大鼠退变软骨细胞糖胺多糖(GAG)合成的影响。方法:分离大鼠关节软骨细胞传代培养并加入IL-1β造模,分别将100,10,1,0.1 mg/L的黄芪多糖作用于该软骨细胞,以4.5 mg/L的硫酸氨基葡萄糖作为阳性对照。其后检测细胞增殖、细胞内GAG含量、细胞内葡萄糖醛酸转移酶Ⅰ(GlcAT-1)mRNA含量和透射电镜观察细胞形态学改变。结果:各浓度的黄芪多糖均对大鼠软骨细胞增殖率无影响。100 mg/L的黄芪多糖可以增加软骨细胞内GAG的合成(P<0.01);1,10,100 mg/L的黄芪多糖能够增加GlcAT-1 mRNA的表达。结论:黄芪多糖能逆转IL-1β对体外培养的大鼠软骨细胞GAG合成的抑制作用,其主要机制可能与促进GlcAT-1的表达有关。     

葛根素对IL-1β损伤大鼠关节软骨细胞增殖的影响

目的 观察葛根素（Pue）对IL-1β损伤大鼠关节软骨细胞增殖的影响.方法 取10日龄大鼠膝关节软骨做体外细胞培养,培养后软骨细胞随机分为六组：正常组、IL-1β组、地塞米松组、Pue50组、Pue100组、Pue200组.其中,IL-1β组、地塞米松组、Pue50组、Pue100组、Pue200组分别加入IL-1β（5μg/L）10 μmol、IL-1β （5μg/L） 10 μmol＋地塞米松10-9 mol/L、IL-1β（5μg/L）10μmol＋Pue 50μmol/L、IL-1β（5μg/L）10.μmol＋Pue 100μmol/L、IL-1β（5μg/L）10 μmol＋Pue200 μmol/L,使用酶标仪测定570 nm光吸收值,计算各组软骨细胞的增殖率.结果 正常组、IL-1β组、地塞米松组、Pue50组、Pue100组、Pue200组软骨细胞的增殖率分别为0、-11.044％、0.471％、-2.424％、2.828％、5.387％,地塞米松组、Pue50组、Pue100组、Pue200与IL-1β组比较,差异有统计学意义（P＜0.05）,且随着Pue剂量升高,使增殖率逐步上升.结论 葛根素具有一定的促进软骨细胞增殖的作用,为防治骨性关节炎提供理论依据.     

葛根素对IL-1β损伤大鼠关节软骨细胞核因子-κB的影响

目的：观察葛根素（Pue）对IL-1β损伤大鼠关节软骨细胞核因子-κB（NF-κB）的影响。方法取10日龄大鼠关节软骨作体外细胞培养,培养后软骨细胞随机分为正常组、IL-1β组、地塞米松组、Pue50组、Pue100组、Pue200组等6组。后5组分别给药后24h,用实时定量PCR法检测各组NF-κBp65的表达。结果 IL-1β损伤软骨细胞核内NF-κBp65的表达明显增强,后4组与IL-1β组比较差异有统计学意义（P＜0.05）,且随着剂量上升（50μmol/L、100μmol/L、200μmol/L）使其NF-κB的表达量逐步下降。结论葛根素具有一定的抑制NF-κBp65活化的作用,为防治骨性关节炎提供新的途径。     

血管内皮生长因子对软骨细胞凋亡的作用

目的探讨血管内皮生长因子（VEGF）对软骨细胞凋亡的影响。方法乳鼠关节软骨细胞体外培养成功后,实验分为三组。每组加入不同处理因素进行干预,对照组：不加任何处理因素;VEGF组：VEGF 10 ng/m L;白介素（IL）-1β组：IL-1β10 ng/m L,连续培养48 h。采用流式细胞仪检测软骨细胞的凋亡率,采用蛋白免疫印迹法（Western Blot）检测增殖细胞核抗原（PCNA）蛋白的表达,通过硝酸还原酶法检测上清液中一氧化氮（NO）的含量。结果软骨细胞的凋亡率VEGF组[（9.28±2.35）%]及IL-1β组[（17.14±5.07）%]明显高于对照组[（2.83±0.77）%];软骨细胞PCNA蛋白表达VEGF组（0.86±0.24）及C组（0.72±0.05）明显低于对照组（1.01±0.11）;软骨细胞分泌的NO含量VEGF组[（112.31±12.73）μmol/L]及IL-1β组[（150.02±15.34）μmol/L]显著高于对照组[（49.35±6.68）μmol/L],差异均有高度统计学意义（P〈0.01）。结论 VEGF能够介导软骨细胞凋亡,抑制软骨细胞的增殖活性。     

脱氢表雄酮对白细胞介素-1β诱导的人骨关节炎软骨细胞退变的影响

目的:研究脱氢表雄酮(DHEA)对白细胞介素(IL-1β)诱导的人骨关节炎软骨细胞退变的影响。方法:分离人骨关节炎软骨细胞传代培养并加入IL-1β,分别将50,25和12.5μmol/L的DHEA作用于该软骨细胞。其后检测细胞增殖、上清液糖胺聚糖(GAG)和NO含量、细胞凋亡以及质金属蛋白酶-1及其组织抑制剂-1(MMP-1和TIMP-1)含量。结果:50,25和12.5μmol/L的DHEA均能促进软骨细胞增殖和GAG合成(均P<0.01),抑制IL-1β诱导的软骨细胞凋亡(均P<0.01)以及MMP-1合成(均P<0.01);50和25μmol/L的DHEA可抑制IL-1β诱导的软骨细胞NO形成(均P<0.01),还可抑制软骨细胞自身的凋亡(均P<0.01)和MMP-1合成(均P<0.05),其效应呈浓度依赖性;50μmol/L的DHEA还可改善IL-1β对骨关节炎软骨细胞TIMP-1合成的抑制作用(P<0.05)。结论:脱氢表雄酮能在一定程度上对抗IL-1β诱导的人骨关节炎软骨细胞退变。     

羧甲基壳聚糖抑制白细胞介素-1β诱导软骨细胞基质金属蛋白酶-1,3的表达

目的:探讨羧甲基壳聚糖抑制重组人白细胞介素-1β(rhIL-1β)刺激下的兔软骨细胞合成基质金属蛋白酶-1,3(MMP-1,3)的作用机制。方法:分离、培养兔软骨细胞,用rhIL-1β刺激,同时加入不同浓度的羧甲基壳聚糖(CM-chitosan)或L-精氨酸甲酯(L-NAME),培养24h后,检测上清液中的一氧化氮含量和软骨细胞内的诱导性一氧化氮合酶(iNOS)活力。提取细胞总RNA,采用逆转录聚合酶链方法(RT-PCR)检测iNOS,MMP-1,MMP-3的mRNA表达。通过ELISA方法检测上清液中MMP-1,MMP-3的含量。结果:IL-1β能够增加软骨细胞一氧化氮的释放及iNOS的酶活性,诱导细胞iNOS,MMP-1,3的mRNA表达,增加MMP-1,3的分泌。羧甲基壳聚糖对软骨细胞一氧化氮的释放,iNOS酶活力及iNOSmRNA表达均有抑制作用,不同浓度的抑制效果相近;它对软骨细胞的MMP-1,3mRNA的表达及MMP-1,3的分泌也有明显的抑制作用,且呈剂量依赖性。L-NAME对软骨细胞的MMP-1,3mRNA的表达及分泌也有抑制作用,但L-NAME与羧甲基壳聚糖对一氧化氮的影响相似时,羧甲基壳聚糖对MMP-1,3mRNA表达和分泌的抑制作用强于L-NAME。结论:羧甲基壳聚糖抑制软骨细胞合成MMP-1,MMP-3是部分通过降低iNOS表达,减少一氧化氮合成来实现的。     

梓醇抑制骨关节炎发病机制的研究

目的 探讨梓醇(CAT)对白介素-1β(IL-1β)诱导的软骨细胞炎症模型以及大鼠骨关节炎(OA)关节退变的机制研究。 方法 为探讨CAT在骨关节炎中的作用及其特定的作用机制，随机选取12只SD大鼠膝关节软骨细胞进行原代培养，将培养后的软骨细胞随机分成4组，即对照组(Control组)、IL-1β刺激组、IL-1β+CAT 10 μg/mL组、IL-1β+CAT 50 μg/mL组。动物实验中随机选取12只大鼠分为3组，Sham组、OA组及OA+CAT组，每组4只，OA组行右侧前交叉韧带横断和半月板切除术，实验组即OA+CAT组在切除完右侧前交叉韧带横断和半月板后，给予CAT[5 mg/(kg·d)]腹腔注射，随机方法均采用抽签法。利用Western blotting方法、实时定量RT-PCR和免疫荧光染色检测软骨细胞的代谢、凋亡水平及相关信号通路。同时，应用番红-固绿染色和国际骨关节炎研究学会评分(OARSI)系统，对实验性大鼠软骨退变程度进行了评估。 结果 ①CAT可抑制IL-1β诱导的软骨细胞凋亡；②CAT在软骨细胞中抑制IL-1β介导的分解代谢酶的释放，同时抑制IL-1β诱导的细胞外基质的降解；③CAT抑制IL-1β介导的NF-κB通路，同时减少IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的释放；④CAT在大鼠OA模型中可部分逆转软骨的退化。 结论 本实验结果提示，CAT能抑制NF-κB通路，减轻IL-1β诱导的大鼠软骨细胞的炎症反应和分解代谢水平，同时能抑制软骨细胞凋亡水平，所有的结果提示CAT具有治疗OA的作用。