氟灭酸对豚鼠微动脉平滑肌细胞BKCa通道的增强作用

目的 观察氟灭酸对微动脉平滑肌细胞电生理学特性的影响.方法 应用全细胞膜片钳技术在离体豚鼠脑动脉(BA)和肠系膜动脉(MA)的平滑肌细胞上,观察氟灭酸(100～1 000 μ mol/L)对微动脉平滑肌细胞膜电流的影响.结果 4-氨基吡啶(1 mmol/L)和四乙胺(1mmol/L)都可以部分抑制微动脉平滑肌细胞膜电流.氟灭酸可以浓度依赖的增强微动脉平滑肌细胞膜电流,100、300和1000μmol/L氟灭酸分别使BA平滑肌细胞膜电流幅度(+40 mV)增强了(36±14)％、(136±26)％和(223±24)％,使MA平滑肌细胞膜电流幅度(+40mV)分别增强了(45±11)％、(166±24)％和(278±24)％.氟灭酸增强平滑肌细胞膜电流具有电压依赖性,氟灭酸主要增强0～+40 mV电压区间的激活电流,其中对+40 mV激活电流的增强作用最强.背景灌流四乙胺(1mmol/L)能显著抑制氟灭酸对微动脉平滑肌细胞膜电流的增强作用.结论 氟灭酸可以浓度和电压依赖的激活微动脉平滑肌细胞膜上BKCa通道.     

急性缺氧对豚鼠耳蜗螺旋动脉平滑肌细胞电生理特性的影响

目的 观察急性缺氧对豚鼠耳蜗螺旋动脉平滑肌细胞电生理特性的影响.方法 应用全细胞膜片钳技术观察急性缺氧对微动脉段上平滑肌细胞膜电流、膜电位(RP)、膜电容(Cinput)、膜电导(Ginput)或膜电阻(Rinput)的影响.结果 ①急性缺氧显著增加平滑肌细胞Rinput,降低Ginput和Cinput.Rinput从( 480±88)MΩ增加到(2229±310)MΩ(P ＜0.01),Cinput从(77.3±8.3)pF减少至(11.4±0.7)pF(P ＜0.01).48％(15/31)急性缺氧净电流的I/V曲线几乎是线性,翻转电位(-32.6±2.5 )mV与细胞静息膜电位(-35.8±4.5 )mV十分接近(P＞0.05).②急性缺氧电压依赖的增强部分平滑肌细胞(16/31)外向电流,主要增强0～+40 mV区间的电流幅度,背景灌流18β-甘草次酸阻断细胞间的缝隙连接后,急性缺氧使0 mV激活电流幅度从(27.8±7.5)pA增加到(89.3±12.8)pA(P＜0.01),+20 mV从(88.0±18.5)pA增加到(211.1±32.5)pA(P ＜0.01),+40 mV从(213.9±21.6 )pA增加到(448.0±46.5 )pA(P ＜0.01).预灌流四乙胺后,急性缺氧对SMA平滑肌细胞外向电流的增强作用显著减弱.结论 急性缺氧通过激活SMA平滑肌细胞膜上大电导Ca2+激活K+通道,血管舒张,保证耳蜗循环的血液供应,同时通过抑制SMA平滑肌细胞间缝隙连接使急性缺氧产生的伤害信息局限在局部.     

乙酰胆碱对豚鼠SMA平滑肌细胞的作用

耳蜗血流障碍与听力丧失有着密切联系。乙酰胆碱(Ach)作为一种神经递质和血管舒张物质参与了许多血管床的调节活动。实验已证实，在大鼠和猫的脑血管床有大量的胆碱乙酰化酶免疫反应阳性的神经纤维；Ach和它的模拟剂能引起内耳螺旋动脉(spiral modiolar artery，SMA)的舒张，并且蕈毒碱的拮抗剂能减少耳蜗血流     

激活豚鼠耳蜗螺旋动脉平滑肌细胞连接蛋白43下调衰老蛋白P16和P21的表达

目的 通过D-半乳糖(D-galactose,D-gal)干预制备豚鼠耳蜗螺旋动脉(SMA)平滑肌细胞衰老模型,分析连接蛋白43(Cx43)与衰老相关蛋白P16和P21表达的相关性,探讨Cx43在细胞衰老中可能发挥的作用.方法 用贴壁法培养豚鼠SMA平滑肌细胞,应用免疫荧光技术检测平滑肌细胞标记物.实验分对照组、D-g...     

小鼠耳蜗螺旋神经节细胞Ih电流的研究

目的了解小鼠耳蜗螺旋神经节细胞超极化激活阳离子通道电流（Ih电流）的基本电生理学特性。方法应用全细胞构型电压钳制技术,采用不同的阻断剂,记录Ih电流。结果实验记录到了Ih电流,对BaCl2不敏感,但可被5mMCsCl抑制,冲洗后电流恢复,符合Ih电流的药理学特点,其反转电位为-40．5±7．2my,二分之一最大活化电压（V1／2）为-103．3mv,斜率（K）为10．5;在-160mv钳制电压条件下其活化过程符合二次幂方程,时间常数分别为66．2ms和403．7ms,不同部位之间Ih电流的活化时间常数无明显差异（P〉0．05）。结论Ih电流对不同部位耳蜗螺旋神经节细胞完成其功能所起的作用可能是相似的,但需要进一步的深入研究。     

强噪声对豚鼠耳蜗内电位(EP)及耳蜗动作电位(AP)影响的实时分析

本文对10只豚鼠,在接受强噪声(125dB LP)前、接受噪声同时及噪声后的耳蜗内电位(EP)及耳蜗动作电位(AP)结果进行了分析,发现强噪声对EP值影响较小,对AP参量影响较大。提示:在强噪声作用下,蜗内电位(EP)参量对噪声性声损伤的作用不敏感;噪声对耳蜗损伤的靶器官并不是在血管纹,而是直接损伤毛细胞和神经末梢。     

三七总皂甙对快兴奋性突触后电位作用及机制的实验研究

目的 :探讨三七总皂甙 (PNS)对大鼠星状神经节快兴奋性突触后电位的影响及机制。方法 :用细胞内生物电记录技术 ,测定 PNS对大鼠星状神经节 (SG)的快兴奋性突触后电位 (f- EPSP)、膜电位、膜电阻及对外源性乙酰胆碱引起的膜除极化反应的影响。结果 :PNS在 0 .10～ 0 .16 g/ L 浓度范围内可使 f- EPSP可逆性减小 (P <0 .0 1) ,但对膜电位、膜电阻及外源性氯化乙酰胆碱 (Ach)引起的膜除极反应均无显著的影响。结论 :PNS对大鼠星状神经节 f- EPSP有可逆性抑制作用 ,抑制是通过突触前机制产生。     

急性缺氧对豚鼠肠系膜动脉平滑肌细胞电生理特性的影响

目的 观察急性缺氧对豚鼠肠系膜动脉平滑肌细胞电生理特性的影响.方法 直径＜100 μm的豚鼠肠系膜动脉进一步去除结缔组织后,应用全细胞膜片钳技术观察急性缺氧对微动脉段上平滑肌细胞膜电流、膜电位、膜电容、膜电导或膜电阻的影响.结果当钳制电压为-40 mV时,急性缺氧引起一个反应幅度(76 ±23)pA的外向电流,细胞静息膜电位从(-22.5±1.2)mV超级化到(-42.0 ±2.8)mV(P ＜0.01).急性缺氧可以电压依赖地增强细胞外向电流,且主要增强0～+40 mV电压区间的电流,激活电流幅度0 mV时从(140±18)pA增加到(660±124)pA(P ＜0.01),+20 mV时从(282±23)pA增加到(1120±186)pA(P ＜0.01),+40 mV时从(423±40)pA增加到(1800±275)pA(P ＜0.01).背景灌流1 mmol/L大电导Ca2+激活K+通道(BKca)阻断剂四乙胺后,这一增强作用显著减弱.急性缺氧使细胞膜电阻从(446 ±55)MΩ增加到(2187±290)MΩ(P＜0.01),膜电容从(184.3±75.0)pF减少至(17.6±2.2)pF(P＜0.01).联合应用30 μmoL/L缝隙连接阻断剂18β-甘草次酸和10 mmol/L四乙胺后,急性缺氧对细胞膜电流的影响基本消失.结论 急性缺氧通过激活肠系膜动脉平滑肌细胞膜上BKca通道,引起K+外流,细胞超极化,血管舒张,保证肠系膜微循环的血液供应.同时通过抑制细胞间缝隙连接使其产生的伤害信息局限化.     

耳蜗螺旋动脉上连接蛋白43与老年性耳聋的关系研究

背景　老年性耳聋是指随着年龄的增长而缓慢出现听力阈值增加的疾病,耳蜗螺旋动脉（SMA）在维持耳蜗血供和听力方面发挥重要的作用。连接蛋白43（Cx43）在血管壁上广泛表达,对血管的舒缩功能有着重要的影响,但Cx43在SMA上的表达与老年性耳聋的关系尚不清楚。目的　以D-半乳糖（D-gal）诱导的老年性耳聋豚鼠为研究对象,研究SMA上Cx43与老年性耳聋的关系。方法　2018年5月,将无耳疾3月龄SPF级豚鼠36只随机分为Control组、NS组、D-gal组,各12只。D-gal组在正常饲养的基础上,颈背部皮下注射D-gal 500 mg•kg-1•d-1;NS组在正常饲养的基础上,颈背部皮下注射0.9%氯化钠溶液（体积等同D-gal组）;对照组正常饲养,不做任何处理;共6周。取Control组豚鼠交配产下的3只新生豚鼠,处死分离SMA,贴壁法培养原代SMA血管平滑肌细胞（VSMCs）,鉴定后取第3代SMA VSMCs制备细胞衰老模型：对照组为正常培养 48 h;衰老组为在正常培养基础上加入30 g/L D-gal培养48 h;AAP10组为在正常培养的基础上加入100 nmol/L AAP10预处理,而后加入30 g/L D-gal培养48 h。采用Morris水迷宫测试实验检测Control组、NS组、D-gal组豚鼠测试第1、2、3、4、5天逃避潜伏期及第6天穿越平台的次数;比较Control组、NS组、D-gal组豚鼠听性脑干反应（ABR）阈值,肝组织、脑组织、血清超氧化物歧化酶（SOD）活性、丙二醛（MDA）水平,SMA上Cx43 mRNA及Cx43表达水平。比较对照组、衰老组、AAP10组VSMCs内SOD活性、MDA水平,VSMCs中Cx43表达水平。结果　组别与时间在豚鼠逃避潜伏期中存在交互作用（F交互=6.99,P交互<0.05）;组别与时间在豚鼠逃避潜伏期中主效应显著（F组间=53.43,F时间=38.15;P组间<0.05,P时间<0.05）。D-gal组豚鼠测试第3、4、5天逃避潜伏期长于Control组和NS组（P<0.05）;D-gal组豚鼠测试第6天穿越平台次数少于Control组和NS组（P<0.05）。D-gal组豚鼠ABR阈值高于Control组和NS组,肝组织、脑组织、血清SOD活性低于Control组和NS组,肝组织、脑组织、血清MDA水平高于Control组和NS组（P<0.01）。衰老组VSMCs内SOD活性低于对照组和AAP10组,MDA水平高于对照组和AAP10组（P<0.01）;AAP10组VSMCs内SOD活性低于对照组,MDA水平高于对照组（P<0.01）。D-gal组豚鼠SMA上Cx43 mRNA及Cx43表达水平低于Control组和NS组（P<0.01）。衰老组VSMCs中Cx43表达水平低于对照组和AAP10组（P<0.05）;AAP10组VSMCs中Cx43表达水平低于对照组（P<0.05）。结论　D-gal致衰老情况下豚鼠SMA上Cx43表达水平的变化可能与老年性耳聋有关,为临床后续的研究方向奠定了基础。     

大鼠子宫动脉和冠状动脉平滑肌细胞表现型的差异

目的:探讨大鼠体内雌激素对子宫动脉和冠状动脉的作用与两者的平滑肌细胞(SMC)表现型的关系.方法:HE染色观察子宫动脉和冠状动脉的的组织形态学结构.间接免疫荧光染色比较子宫动脉和冠状动脉SMC中平滑肌特异性肌动蛋白α-SM actin和非肌细胞型肌动蛋白β-NM actin平均荧光强度.Western blot检测子宫动脉和冠状动脉SMC的α-SM-actin和β-NM-actin含量,并检测β-雌二醇刺激下两者β-NM actin含量变化情况.结果:冠状动脉SMC以收缩型SMC为主,高表达α-SM actin;子宫动脉SMC以合成型SMC为主,高表达β-NMactin.在生理浓度β-雌二醇刺激下子宫动脉SMC的β-NM actin含量显著上升.结论:冠状动脉和子宫动脉的SMC表现型存在明显差异,前者显示收缩型SMC特点,后者接近合成型SMC.雌激素能够刺激合成型SMC的增殖.     

猪冠状动脉平滑肌细胞的简易培养

目的：培养猪冠状动脉平滑肌细胞(SMCs)。方法：分离猪心冠状动脉，用贴块法进行操作。结果：细胞传至第4代时，锥虫蓝染色检查细胞存活率95％，用光学显微镜、免疫组织化学法进行α-肌动蛋白染色来鉴定SMCs，其纯度约96％。结论：该法经济而简单易行。     

通脉宁胶囊对LPC诱导血管平滑肌细胞增殖及细胞周期的影响

目的观察通脉宁胶囊不同剂量药物血清对溶血磷脂酰胆碱(LPC)诱导的血管平滑肌细胞增殖活性及细胞周期的影响.方法组织贴块法进行血管平滑肌细胞(VSMC)培养,应用血清药理学的方法,LPC10-8 mol/L作为刺激因子,将通脉宁胶囊分为大、中、小3个剂量组.MTT法测定细胞增殖活性,流式细胞仪检测细胞周期.结果通脉宁大、中、小剂量组可明显降低细胞的OD值呈剂量依赖性地抑制LPC诱导的VSMC增殖. 明显降低细胞的S期数目百分比,增加G0/G1期数目百分比,使VSMC阻滞在G0/G1期,抑制细胞进入S期.结论从细胞分子水平说明通脉宁胶囊主要是通过影响细胞内DNA合成,减少有丝分裂,增加G0/G1期数目百分比,减少S期数目百分比而发挥抑制VSMC增殖作用.     

通脉宁对AngⅡ及LPC诱导的血管平滑肌细胞内钙超载的影响

目的观察通脉宁全方及拆方药物血清对AngⅡ及LPC诱导的血管平滑肌细胞内钙超载的影响.方法组织贴块法进行血管平滑肌细胞(VSMC)培养,应用血清药理学研究的方法,AngⅡ 10-6mol/L、LPC 10-8mol/L作为刺激因子,制备通脉宁全方、益气拆方、活血拆方药物血清.采用Fluo-3染色荧光探针标记测定钙离子荧光强度.结果通脉宁全方及拆方药物血清对AngⅡ及LPC诱导的VSMC内钙超载具有明显的干预作用,且通脉宁全方组的干预作用明显优于益气拆方组及活血拆方组.结论通脉宁药物血清抑制AngⅡ及LPC诱导的VSMC增殖与部分阻断AngⅡ及LPC细胞内的信号转导途径有关,这可能是通脉宁抑制VSMC增殖的作用途径之一.     

不同浓度雌激素对大鼠膀胱颈平滑肌细胞增殖与凋亡的影响

目的:探讨不同浓度17β-雌二醇(E2)对大鼠膀胱颈平滑肌细胞(BSMC)增殖与凋亡的影响。方法:无菌切取大鼠膀胱颈,应用酶消化法行原代细胞培养。取3-4代传代细胞,用α-平滑肌肌动蛋白抗体免疫组织化学法鉴定细胞成分,选取平滑肌成分大于85%者,分别加入不同浓度E2(0.1-100 nmol/L)。于处理72 h后收获细胞,应用流式细胞仪检测细胞周期、细胞凋亡及其相关蛋白CyclinD1,应用Western blotting法检测Bcl-2和Bax表达。结果:E2(0.1-10 nmol/L)促进BSMC从G1期向S过渡(G0/G1期比率显著低于对照组细胞,而S期和G2/M期比率显著高于对照组细胞,P<0.05),并伴随Cyclin D1蛋白表达显著增高。而大剂量E2(100 nmol/L)则使细胞凋亡率显著升高,并伴随Bax表达显著增加。结论:小剂量E2能够促进合成型BSMC增殖,其机制是影响Cyclin D1表达,加速G1期向S过渡;大剂量E2则通过增加Bax促进细胞凋亡。     

糜酶途径对人脐动脉平滑肌细胞增殖及细胞内ERK1/2表达的影响

目的从细胞和分子水平探讨糜酶途径对平滑肌细胞(SMC)增殖的影响及其可能机制。方法以血管紧张素Ⅰ(AngⅠ)刺激SMC的生长,并通过卡托普利、糜酶抑素及氯沙坦分别阻断血管紧张素转换酶途径、糜酶途径及AT1受体,用MTT法检测各组SMC的增殖情况,用Western blot检测各组SMC内细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)的表达变化。结果AngⅠ组、卡托普利组、糜酶抑素组、氯沙坦组与对照组相比SMC均增殖活跃(P<0.05),糜酶抑素组、氯沙坦组与AngⅠ组相比明显抑制SMC的增殖(P<0.05)。各组SMC内ERK1/2表达量无明显变化(P>0.05)。结论糜酶对SMC的增殖起重要作用,其分子机制有待进一步研究。     

益气活血汤抑制实验兔PDGF表达和血管平滑肌细胞表型转变的研究

目的:观察益气活血汤对高脂饲料喂养的实验兔机械损伤后血管平滑肌细胞(VSMC)表型转变和血小板衍生生长因子-B(PDGF-B)表达的研究。方法:将32只健康新西兰大耳白兔随机分为4组:正常对照组(A)、模型组(B)、西药组(C)和中药组(D),分别给予普通饲料、高脂饲料、高脂饲料加来适可胶囊和高脂饲料加益气活血汤灌胃喂饲。实验第5周,B、C、D组均行右侧腹-髂动脉内膜球囊损伤术。7周末采取球囊损伤血管以及正常组相对应部位血管在透射电镜下进行病理形态学观察并用逆转录-聚合酶链反应方法观察PDGF-B的表达。结果:PDGF-B模型组表达量高于中药组及西药组(P<0.05)。模型组家兔血管平滑肌细胞表型由收缩型转变为合成型。结论:动脉损伤后PDGF表达增加,益气活血汤组家兔PDGF表达与模型组比较明显减少,提示益气活血汤对PDGF表达一定抑制作用。模型组血管平滑肌细胞由收缩型转变为合成型,而益气活血汤组家兔表型转变不明显,提示益气活血汤可能通过影响PDGF表达影响平滑肌细胞表型转变。     

调肝导浊中药对大鼠主动脉平滑肌细胞增殖及胞内钙离子影响的实验研究

运用体外培养技术,以加高脂血清和调肝导浊中药等不同培养基分组培养大鼠主动脉平滑肌细胞(SMC),用免疫组化等方法进行指标检测.结果:调肝导浊中药可明显抑制高脂血清培养下SMC的增殖,其细胞增殖核抗原(PCNA)阳性率低于造模组,并可降低胞内Ca2+含量.提示调肝导浊中药可对SMC增殖起到良好调控作用,从而阻止AS发生发展.     

ATP敏感性钾通道开放对内皮素-1诱导平滑肌细胞增殖和凋亡的作用

目的:探讨ATP敏感性钾通道开放剂拉马克啉(Levcromakalim,Lev)对内皮素-1(ET-1)诱导的血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖及凋亡的影响。方法:体外培养Wistar大鼠主动脉VSMCs,用ET-1诱导其增殖,用不同浓度拉马克啉共培养,MTT法评价VSMCs增殖情况,3H-TdR检测DNA合成;流式细胞术检测VSMCs凋亡。免疫细胞化学检测Bcl-2/Bax表达。结果:①Lev显著抑制对ET-1诱导的VSMCs增殖,呈浓度依赖效应,Lev组MTT细胞活性含量和3H-TdR掺入量都明显低于ET-1组(P<0.05)。②Lev组VSMCs凋亡较ET-1组明显增多(P<0.05);与对照组比较,Lev组细胞凋亡率也显著增加(P<0.01)。③Lev使VSMCs Bcl-2表达下调,Bcl-2/Bax比率下降。结论:ATP敏感性钾通道开放可抑制ET-1诱导的VSMCs增殖作用,通过调节Bcl-2/Bax表达增加VSMCs凋亡。     

替普瑞酮对香烟提取物引起的气道平滑肌细胞凋亡中p-JNK表达的影响

目的:探讨替普瑞酮(GGA)诱导的热休克蛋白70(HSP70)在香烟提取物(CSE)引起的气道平滑肌细胞(ASMCs)凋亡中对C-Jun N-terminal激酶(JNKs)的影响。方法:在体外培养Wistar大鼠的气道平滑肌细胞中,给予GGA处理前后,给予CSE刺激3 h。用流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡情况,Western blot的方法检测HSP70和p-JNK的表达。结果:CSE诱导ASMCs凋亡随CSE浓度的增加而逐渐增加,两者相比有显著性差异(P<0.05);GGA预处理后再加入不同浓度的CSE处理的气道平滑肌细胞的凋亡较单纯CSE组相比有显著性差异(P<0.05)。在给予CSE刺激后,各组中的HSP70的表达较对照组有明显的降低,而且随CSE浓度越高降低越明显(P<0.05);p-JNK的表达随CSE浓度的增高而增多(P<0.05)。GGA预处理后的各组细胞的HSP70的表达与对照组比较有明显的增多(P<0.05)。在给予GGA预处理后,再加入CSE处理的气道平滑肌细胞中,与对照组比较HSP70的表达有所降低但无显著差异,p-JNK的表达在GGA+CSE组中的表达较单纯CSE组中有所下降(P<0.05)。结论:较高浓度的CSE能引起气道平滑肌细胞的凋亡并且伴随p-JNK的表达的增多。GGA处理气道平滑肌细胞后引起HSP70表达的增加,并且抑制较高浓度CSE所致的平滑肌细胞的凋亡,这可能与HSP70下调p-JNK的活性有关。