卵巢癌组织蛋白双向电泳分析技术的建立

目的:初步建立卵巢癌蛋白质组研究的双向凝胶电泳技术,提高其分辨率及重复性.方法:提取卵巢癌肿瘤组织中蛋白质,以固相pH梯度等电聚焦为第一向,对关键环节如样品处理、上样量分析和水化等进行一系列优化.进一步采用垂直SDS-PAGE进行第二相分离,银染显色、图像分析或软件分析电泳图谱.结果:通过实验条件的反复筛选获得了较为满意的卵巢癌双向凝胶电泳图谱.结论:本文初步建立了卵巢癌蛋白质组双向电泳分析方法,具有较好的分辨率和重复性,为进一步研究卵巢癌的差异表达及特异性分子标志物的筛选奠定了基础.     

血清双向电泳样品制备技术的优化及应用

1 材料和方法 取2.5 μL血清(约200 μg)与含SDS和DTT的缓冲液混合,在95℃下加热5 min,待冷却后用上样缓冲液(含7 mol/L 尿素,2 mol/L 硫脲,40 mol/L CHAPS,65 mmol/L DTT和5 mol/L IPG buffer)稀释至350 μL;取2.5 μL血清直接与347.5 μL的上样缓冲液混合.     

大鼠胰腺蛋白质组研究中双向电泳技术的初步建立

目的：初步建立大鼠胰腺蛋白质组研究中双向电泳技术，提高其分辨率及重复性。方法：应用大鼠成年和胚胎18天胰腺组织提取的总蛋白，对以载体两性电解质pH梯度为第一向的双向电泳关键因素与环节，如样品处理、凝胶制备、电泳参数等进行一系列的优化。结果：获得了分辨率及重复性均很好的双向电泳图谱。结论：通过对各种条件的优化，初步建立了双向电泳技术，为研究胚胎胰腺不同时期特异性蛋白的表达及分子标志打下基础。     

大鼠脊神经蛋白质组研究中双向电泳技术的建立

目的探讨双向凝胶电泳技术在大鼠脊神经组织蛋白质组研究中的应用。方法应用高蛋白溶解度裂解液提取正常大鼠脊神经组织蛋白质，以固相pH梯度等电聚焦电泳和垂直板SDS-PAGE电泳结合的方法进行蛋白质的分离，使用银染和考马斯亮蓝两种方法分别对凝胶进行染色。结果正常大鼠脊神经组织样品在18cmpH3～10非线性固相pH梯度干胶条，12．5％的Acr-Bis PAGE的胶上可分离到900个左右蛋白点，不同凝胶间蛋白点平均匹配率为80％。结论实验所采用的高离液剂体系的裂解液，及对第一向和第二向电泳过程中各个因素及环节的把握，是获得大鼠脊神经组织蛋白质双向电泳图谱的关键。     

不同时段艾灸血清中内生性蛋白组分双向电泳的实验研究

目的:从血清蛋白质组初步探讨艾灸免疫调节中蛋白质分子的变化规律.方法:采用超速离心除盐方法预处理血清,进行一维和二维聚丙烯酰胺凝胶电泳(2-DE)分离,凝胶银染显示各组蛋白质差异表达.结果:2-DE图谱中可辨识的蛋白质斑点达300～400个,除有看家蛋白、特异蛋白外,不同时段存在差异表达蛋白,从十几个至几十个不等.艾灸经穴组的蛋白质组分变化较为明显,以酸性蛋白点缺失和蛋白峰度下降最为主,而非经穴组血清蛋白变化不明显.结论:在特定穴位上艾灸刺激有助于清除血清中的免疫抑制物,使艾灸血清的蛋白质组分发生以酸性蛋白缺失为主的改变.     

大鼠肾脏组织蛋白质组双向电泳分离体系的建立

目的:建立大鼠肾脏组织蛋白质组双向电泳分离体系。方法:提取大鼠肾脏组织的样品蛋白,按标准条件对蛋白质进行双向电泳分离,并对各个关键因素进行优化。结果:最终选择的裂解液配方是1%TBP,4%CHAPS,0.2%Bio-Lyte,40mmol/LTris,8mol/L尿素,2mol/L硫脲;使用pH 4～7的IPG胶条进行被动水化上样,等电聚焦采用缓慢升压模式,电泳参数根据Bio-Rad公司的预设方案进行调整;改良硝酸银法进行蛋白质斑点染色。从而获得了满意的蛋白质组双向电泳图谱。结论:成功建立具有较高分辨率和重复性的大鼠肾脏组织蛋白质组双向电泳分离体系,为后续实验研究提供有力的技术保障。     

双向电泳蛋白质组技术在残胃癌组织研究中的应用

目的 探讨双向电泳蛋白质组技术在残胃癌组织研究中的应用效果。方法 选取3对残胃癌及癌旁正常胃黏膜组织,利用双向电泳蛋白质组技术对其进行研究。结果 获得了质量良好的胃癌组织蛋白质组双向电泳图谱。分析之后可得,癌旁组织平均984个蛋白点,残胃癌组织凝胶平均1068个蛋白点。一共有112个差异表达的蛋白点,其中,显著差异(表达差异2倍以上)的蛋白点42个。在这42个蛋白点之中,在残胃癌组织里表达上调的一共有17个点;在残胃癌组织里表达下调的一共有14个点;在残胃癌组织中失表达的一共有8个点;仅在残胃癌组织中表达的一共有3个点。结论 利用双向电泳蛋白质组技术对残胃癌组织进行研究可以获得良好的应用效果。     

海马注射淀粉样蛋白β大鼠与正常大鼠脑蛋白质组双向电泳图谱比较

目的 比较海马注射淀粉样蛋白β(Aβ)大鼠与正常大鼠脑蛋白质组双向电泳(2-DE)图谱差异,从蛋白质水平初步探索阿尔茨海默病(AD)发病机制。方法 以固相pH梯度等电聚焦为第1向,SDS-PAGE垂直电泳为第2向进行2-DE。以图像分析软件ImageMaster 2D-Elite分析电泳图谱。结果 海马注射Aβ大鼠与正常大鼠脑组织2-DE图谱分别检出496和491个蛋白点。对2张电泳图进行匹配后,发现有11个蛋白点仅在海马注射Aβ大鼠脑蛋白2-DE图谱中表达,而有6个蛋白点只在正常对照大鼠检测到。部分蛋白在2组大鼠脑组织中含量发生了明显变化。结论 初步建立了AD动物模型比较蛋白质组学的技术方法;差异点的发现为深入理解AD发病机制及研发新药提供了有益的线索。     

人肝癌胞浆蛋白质双向电泳的研究

用高分辨率的蛋白质双向电泳对人肝癌及正常肝组织的胞浆蛋白质进行检测。结果表明肝细胞癌变后,胞浆蛋白质双向电泳图谱发生了显著改变,总点数增加,蛋白质点的分布向低分子量低等电点偏移,出现了一些新的蛋白质点,有些蛋白质点密度增加,有些蛋白质点密度减少或消失。     

免疫共沉淀结合双向电泳分离相互作用蛋白质的方法优化

目的：建立和优化有针对性的免疫共沉淀（CO-IP）与双向电泳（2DE）-质谱联合的技术来鉴定相互作用蛋白质。方法：利用特异性抗体通过CO-IP对细胞全蛋白中的目标蛋白进行富集,用不同洗脱液洗脱目标及其相互作用蛋白,并行2DE分离。结果：对CO-IP过程、洗脱液成分、上样量等关键步骤进行优化,得到满意的2DE图谱。结论：成功优化CO-IP与2DE分离技术,为通过蛋白质组学研究信号通路中重要蛋白质的相互作用提供有效方法。     

不同种属转移因子的聚丙烯酰胺凝胶电泳分析

不同批号人转移因子(TF-h)和猪转移因子;(TF-p)在聚丙烯酰胺凝胶电泳上均出现一条深色带,其电泳位置较为接近。此外,还可看到电泳位置基本相同的二条浅染色带,提示二种TF主要组成分子所带电荷及分子量都比较接近,这些不同分子带与转移因子生物活性的关系,有待进一步研究确定。     

血清蛋白质组学研究中高丰度蛋白去除方法的建立

目的 建立血清蛋白质组学研究中高丰度蛋白的去除方法并评价其去除效果.方法 应用Sigma公司2006年最新推出的血清白蛋白和IgG去除试剂盒(ProteoPrep Immunoaffinity Albumin and IgG Depletion Kit)去除血清中高丰度的白蛋白和IgG等,再用双向凝胶电泳(2-DE)分析去除的效果.结果 本实验建立的血清中高丰度蛋白的去除方法,约95%的白蛋白和IgG能够被去除,2-DE图谱中蛋白质点更加清楚,部分低丰度蛋白得以显现.结论 成功建立血清中高丰度蛋白的去除方法.可为今后的血清蛋白质组学研究奠定基础.     

用SDS-PAGE和双向肽谱法比较SRS病毒蛋白和Moloney小鼠白血病病毒蛋白

用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)法,测定SRS病毒(SRSV)蛋白的分子量,比较SRSV蛋白和Moloney小鼠白血病病毒(M-MuLV)蛋白的电泳速度,发现前者p30比后者p30的电泳速度快,推测SRSV是N-向性病毒。用微晶纤维素薄膜制备两株病毒p30的双向肽谱,显示出一些不同的肽段。结果表明SRS V 和M-MuLV是两株不同的小鼠白血病病毒。     

聚丙烯酰胺凝胶电泳中一种快速敏感的蛋白质双染色法

本文报道了我们在聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)中改良了一种考马斯亮兰(Coomassic Brillant Blue,CBB)与铬银染色法相结合的新的蛋白质双染色法。这种方法比单一的CBB染色或单一的银染色敏感,比CBB与氨银双染法简便,一般实验室也能采用本法。     

血清蛋白质组双向凝胶电泳技术的建立

目的：建立血清蛋白质组双向凝胶电泳（2-DE）技术。方法：对血清蛋白质2-DE的各种条件进行调整、优化。结果：建立了稳定的2-DE技术。结论：已建立的血清蛋白质2-DE技术，将为进一步开展疾病的血清蛋白质组学研究奠定基础。     

猪囊尾蚴蛋白质的聚丙烯酰胺凝胶电泳和等电聚焦电泳分析

应用聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)和薄层水平等电聚焦电泳(IEF)对猪囊尾蚴囊液、头节囊壁和全囊的可溶性蛋白质进行了分析比较。PAGE结果表明,囊液和头节囊壁各分离出15条蛋白带,全囊分离出16条蛋白带。在激光光密度扫描中分别可见4个主峰。IEF结果表明,囊液分离出28条蛋白带,头节囊壁和全囊分离出34条蛋白带。在激光光密度扫描中分别可见9,11、11个主峰。     

双向凝胶电泳分析脾脏蛋白组学的方法研究

目的优化双向凝胶电泳的实验步骤,总结一套适用脾脏组织的双向凝胶电泳技术。方法对双向电泳实验中的关键环节：蛋白沉淀方法;胶条PH的选择;聚焦条件等进行研究与优化,考马斯亮蓝染色后进行凝胶图像比较。结果Cleaningup沉淀蛋白,聚焦电压达到11000伏小时（110kvhs）,可以得到多达1000个蛋白点的2Dgel（two—dimensionalpolyacrylamidegel）。结论建立了脾脏双向电泳的具体方法,得到分辨率高重复性好的2Dgel,为脾脏的蛋白质组学研究奠定了基础。     

米索前列醇用于晚期妊娠引产的临床观察

目的 :探讨米索前列醇 ( MP)阴道放药对晚期妊娠引产的效果和安全性。方法 :89名晚期妊娠妇女随机分成两组在阴道放药途径下 ,一组给予MP1 0 0μg;另一组给予前列腺素 E2 凝胶 ( PGE2 　 gel) 1 mg;6h后如未临产给予静点催产素。结果 :6h后两组宫颈评分增加 ;引产至分娩时间 ,催产素使用率 MP组显著短于 PGE2 ( P<0 .0 5) ;2 4 h分娩率 MP组显著高于 PGE2 ( P<0 .0 5)组 ;子宫过度刺激综合症发生率两组之间差别无统计意义。结论 :阴道内放置 MP片用于晚期妊娠宫颈成熟和引产效果优于 PGE2 　gel,其副作用不增加     

血清双向凝胶电泳技术的建立和优化

目的建立起较好及较稳定的的血清双向凝胶电泳技术。方法对血清双向凝胶电泳中血清标本的收集、保存,血清高丰度蛋白的去除,电泳条件,上样量,IPG干胶条的选择及缓冲液的配制等多种条件和技术方法进行调整和优化。结果建立了较稳定和较好重复性的血清双向凝胶电泳技术,分辨率得到一定的提高,有效分离的蛋白质点明显增多,许多低丰度蛋白被分离出来。结论通过不断的摸索和验证,可以建立起较好的血清双向凝胶电泳技术,为进一步的分析、鉴定和寻找与疾病相关的血清蛋白质奠定一定基础。     

淡色库蚊越冬过程中血淋巴蛋白质/多肽的二维电泳分析

本文首次用二维电泳技术对淡色库蚊越冬过程中血淋巴蛋白质/多肽的变化进行了研究。越冬前期、越冬期及越冬后期分别查出分子量及等电点不同的蛋门质/多肽点133个、121个和159个。分子量在13.9～67.0KD 的斑点占96.23～100%,等电点在5.52～7.34的斑点占66.92～86.16%。越冬过程中三个时期共有的斑点为92～117个。越冬前期、越冬期及越冬后期各期特有的斑点分别为26个、29个和42个,变异率分别为19.55%、23.97%和26.42%,总变异率为23.49%。因用于采集血淋巴的蚊虫胃血均为 Sellal 期,卵巢发育不超过休止期,故可排除胃血和卵巢后期发育对结果的影响。