大鼠局灶性脑缺血再灌注致多器官功能障碍综合征模型Caspase-3的表达

目的：建立大鼠局灶性脑缺血再灌注致多器官功能障碍综合征模型，观察Caspase-3的表达。 方法：实验于2004—10／12在徐州市中心医院神经内科实验室完成。选择健康雄性Wistar大鼠4｜D只，随机分为正常对照组（5只）、假手术组（5只）及手术组（30只），手术组分2，12，24，48，72h，7d6个时相点，每个时相点5只。采用线栓法制作大鼠局灶性脑缺血再灌注致多器官功能障碍综合征模型。观察并检测大鼠生命体征、血生化指标及主要官病理形态学改变。免疫组织化学方法检测脑、肺及肾脏Caspase-3表达的阳性神经元细胞与数耳。 结果：纳入动物40只，均进入结果分析。①生命体征观察及血生化检测：手术组大鼠的体温升高，呼吸、心率增快，血生化各项指标亦明显增高，与正常对照组、假手术组相比差异显著。②各组大鼠脏器的病理改变：正常对照组各脏器组织细胞超微结构正常；假手术组病理学改变轻微；手术组主要表现为功能障碍器官以炎症为主的非特异性改变。脑：细胞核固缩，核仁消失，胞浆疏松，染色变浅，问质水肿，细胞密度减少。肺：可见渗出、间质增宽，肺泡内有带状、片状或广泛水肿、血管周围水肿套、部分包膜下水肿；间质大量炎细胞浸润，分类以单核细胞浸润为主；局灶性肺不张，个别小支气管内可见少量渗出物。肝：肝细胞高度肿胀和炎性细胞浸润。肾：肾小球充血肿胀，白细胞浸润或肾小管管腔可见均质蛋白管型，间质明显淤血。③免疫组织化学检测Caspase-3的表达：正常对照组和假手术组脑、肺和肾脏有微量Caspase-3表达；手术组再灌注2h后亦有少量Caspase-3阳性表达，但与正常对照组、假手术组相比差异无显著性，12h明显增多，24h达到高峰，然后逐渐下降，至7d时仍有少量表达。12．24，48h与正常对照组及手术组相比差异显著，以肾脏Caspase-3表达增高最为明显。 结论：局灶性脑缺血再灌注致多器官功能障碍综合征后Caspase-3表达上调，脑缺血后细胞凋亡可能与脑源性多器官功能障碍综合征有关。     

大鼠局灶性脑缺血后水分子弥散的异常

背景:有研究表明,弥散加权成像可以在脑缺血后数分钟即出现异常信号。目的:观察大鼠大脑中动脉脑缺血后表观弥散系数的表现及变化规律。设计:随机对照实验。单位:重庆医科大学临床学院神经内科。材料:实验于2004-04/07在重庆医科大学附属第一医院放射科完成,选择成年Wistar清结级大鼠18只。随机分为正常对照组,假手术组和脑缺血组,每组6只。方法:采用右侧大脑中动脉栓塞法制作脑缺血模型,假手术组栓塞线仅插入颈内动脉未深及大脑中动脉的起始处,正常对照组麻醉后不作任何处理。于术后7,15,30min,1,3,6,12,24h,3,7,15d,1,2个月做1HMRS检查,获得弥散加权成像和表观弥散系数值。主要观察指标:大鼠脑梗死区域和对侧半球相应区域表观弥散系数值的变化。结果:大鼠缺血组DWI于术后7min出现异常高信号,此时T1WI,T2WI扫描示正常。T1WI,T2WI于缺血后1～3h出现异常高信号,随时间的推移,异常高信号的区域扩大,12h后右侧基底节和额顶叶皮质梗死,以后梗死面积增加不明显。表观弥散系数值于7min时发现降低,30min时表观弥散系数明显升高,1h后开始降低,12h时降到最低水平,24h以后又开始上升,2个月时表观弥散系数值较最低水平约增加5倍,而且随访的2个月中表观弥散系数始终保持明显上升的趋势。相对表观弥散系数显示出相反的变化。结论:表观弥散系数均可以超早期揭示脑缺血的发生,同时对脑血管疾病慢性期也非常敏感。     

大鼠局灶性脑缺血后水分子弥散的异常

背景：有研究表明，弥散加权成像可以在脑缺血后数分钟即出现异常信号。 目的：观察大鼠大脑中动脉脑缺血后表观弥散系数的表现及变化规律。 设计：随机对照实验。单位：重庆医科大学临床学院神经内科。 材料：实验于2004-04／07在重庆医科大学附属第一医院放射科完成，选择成年Wistar清结级大鼠18只。随机分为正常对照组，假手术组和脑缺血组，每组6只。 方法：采用右侧大脑中动脉栓塞法制作脑缺血模型，假手术组栓塞线仅插入颈内动脉未深及大脑中动脉的起始处，正常对照组麻醉后不作任何处理。于术后7，15，30min，1，3，6，12，24h，3，7，15d，1，2个月做^1H MRS检查，获得弥散加权成像和表观弥散系数值。主要观察指标：大鼠脑梗死区域和对侧半球相应区域表观弥散系数值的变化。 结果：大鼠缺血组DWI于术后7min出现异常高信号，此时T1WI，T2WI扫描示正常。T1WI，T2WI于缺血后1～3h出现异常高信号，随时间的推移，异常高信号的区域扩大，12h后右侧基底节和额顶叶皮质梗死，以后梗死面积增加不明显。表观弥散系数值于7min时发现降低，30min时表观弥散系数明显升高，1h后开始降低，12h时降到最低水平，24h以后又开始上升，2个月时表观弥散系数值较最低水平约增加5倍，而且随访的2个月中表观弥散系数始终保持明显上升的趋势。相对表观弥散系数显示出相反的变化。 结论：表观弥散系数均可以超早期揭示脑缺血的发生，同时对脑血管疾病慢性期也非常敏感。     

大鼠局灶性脑缺血再灌注后脑组织的氧化损伤

目的：通过观察大鼠局灶性脑缺血再灌注后脑组织超氧化物歧化酶活性和丙二醛含量的变化，进一步探讨大鼠局灶性脑缺血再灌注后氧化损伤的病理生理改变。方法：实验于2004-09／2005-01在泸州医学院神经生物学教研室进行。将雄性成年Wistar大鼠60只随机分为2组：假手术组30只和缺血再灌注组30只。每组分3个观察时间点，分别为手术后6，12，24h，每个时间点10只。采用线栓法制成大脑中动脉闭塞模型，假手术组手术过程同缺血再灌注组，但未插栓线，不造成脑缺血。测定手术后不同时点脑组织超氧化物歧化酶活性和丙二醛水平。结果：在实验过程中有6只大鼠死亡，缺血再灌注组有8只大鼠手术后模型评价为0级，被排除实验，随机补充14只大鼠，最终进入结果分析仍为60只大鼠。①缺血再灌注组术后6，12，24h超氧化物歧化酶活性均低于假手术组[（289．72&;#177;10．67），（534．77&;#177;22．67）μkat／L；（330．57&;#177;18．17），（539．11&;#177;11．50）μkat／L；（377．58&;#177;14．67），（550．78&;#177;11．50）μkat／L，P〈0．05]。②缺血再灌注组术后6，12，24h丙二醛水平显著高于假手术组[（15．06&;#177;0．59），（6.78&;#177;0．25）μmoL／L；（13．53&;#177;1．11），（6．78&;#177;0．26）μmol／L；（11．31&;#177;0．97），（6．80&;#177;0．26）μmoL／L，P〈0．05]。结论：脑缺血再灌注后，缺血大鼠脑组织内丙二醛水平升高，超氧化物歧化酶活性降低，说明自由基参与了脑缺血再灌注损伤的病理生理过程。     

改良线栓法建立SD大鼠局灶性脑缺血再灌注模型

目的:建立一种SD大鼠局灶性脑缺血再灌注改良模型,以降低模型制备难度,提高模型的稳定性。方法:SD雄性大鼠30只,随机分为模型组24只和假手术组6只。采用经改良的颈外动脉进线栓法建立模型,并通过神经功能缺损评分、伊文思蓝(EB)染色及TTC染色进行综合评价。结果:该改良方法建模成功率为87.5%,梗死区可明显看到EB渗出,TTC染色显示梗死体积占大脑总体积的(10.65±4.41)%。结论:经改良后,明确了颈总动脉结扎位置,以及颈外动脉结扎、剪断位置,采用颈外动脉残端直接进线栓建立模型,降低了模型制备难度,提高了模型的稳定性和成功率。     

大鼠局灶性脑缺血再灌注后脑组织的氧化损伤

目的:通过观察大鼠局灶性脑缺血再灌注后脑组织超氧化物歧化酶活性和丙二醛含量的变化,进一步探讨大鼠局灶性脑缺血再灌注后氧化损伤的病理生理改变。方法:实验于2004-09/2005-01在泸州医学院神经生物学教研室进行。将雄性成年Wistar大鼠60只随机分为2组:假手术组30只和缺血再灌注组30只。每组分3个观察时间点,分别为手术后6,12,24h,每个时间点10只。采用线栓法制成大脑中动脉闭塞模型,假手术组手术过程同缺血再灌注组,但未插栓线,不造成脑缺血。测定手术后不同时点脑组织超氧化物歧化酶活性和丙二醛水平。结果:在实验过程中有6只大鼠死亡,缺血再灌注组有8只大鼠手术后模型评价为0级,被排除实验,随机补充14只大鼠,最终进入结果分析仍为60只大鼠。①缺血再灌注组术后6,12,24h超氧化物歧化酶活性均低于假手术组眼(289.72±10.67),(534.77±22.67)μkat/L;(330.57±18.17),(539.11±11.50)μkat/L;(377.58±14.67),(550.78±11.50)μkat/L,P<0.05演。②缺血再灌注组术后6,12,24h丙二醛水平显著高于假手术组眼(15.06±0.59),(6.78±0.25)μmol/L;(13.53±1.11),(6.78±0.26)μmol/L;(11.31±0.97),(6.80±0.26)μmol/L,P<0.05演。结论:脑缺血再灌注后,缺血大鼠脑组织内丙二醛水平升高,超氧化物歧化酶活性降低,说明自由基参与了脑缺血再灌注损伤的病理生理过程。     

Nox1和Nox4在小鼠局灶性脑缺血再灌注损伤中的表达

目的:观察Nox1和Nox4在小鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后时间和空间的表达变化。方法:24只雄性昆明小鼠,随机分为大脑中动脉缺血(MCAO)组和假手术(Sham)组,MCAO组建立MCAO模型,Sham组不造成缺血,分别于再灌注后1、3 d检测脑组织梗死体积比,检测梗死侧Nox1和Nox4的mRNA表达,原位杂交组织学检测其表达部位,DCFH-DA法检测术后活性氧族产物(ROS)产量的变化。结果:MCAO组小鼠脑缺血再灌注第1、3天,梗死体积比分别为(13.60±1.23)%、(8.46±0.82)%,与Sham组比较,有显著性差异(P<0.001)。与Sham组比较,MCAO组梗死侧Nox1第1天表达升高(3.32±0.24)倍(P<0.001),第3天下降至接近正常;与非梗死侧相比,海马表达增高,皮质出现表达。Nox4第1天表达升高(2.21±0.16)倍(P<0.05),第3天表达升高(4.03±0.25)倍(P<0.001),主要表达于海马;与非梗死侧相比表达量增多,位置不变。与Sham组相比,MCAO组于术后第1天ROS产量增至(586.90±14.23)(P<0.05),术后第3天ROS产量为(461.00±15.71)(P<0.001)。结论:Nox1在缺血早期表达升高,可能与早期的病理损伤过程密切相关,Nox4在缺血后逐渐升高,可能与缺血再灌注后期的病理修复过程有较大的相关性。     

局灶性脑缺血及脑缺血再灌注动物模型的制作

目的：介绍一种简便易行的大鼠局灶性脑缺血再灌注模型的制备方法。 方法：实验于2003-03／2005-03在泰山医学院神经生物学实验室完成。选择健康成年清洁级SD大鼠48只，随机数字表法分为假手术组6只，脑缺血组24只，脑缺血再灌注组18只。选择韩国产的3号圆柱形尼龙钓鱼线，直径0．2864mm，剪成长30mm若干段，将其一端粘少许用乙醇稀释合适浓度的指甲油，可形成一薄层保护膜，使插线前端光滑无锐缘，且插线前端无明显膨大，然后垂直倒放，自然凉干，于距处理端18，20mm处做黑色标记备用。自制插线从颈外动脉经颈内动脉插入，栓塞大脑中动脉，形成脑缺血状态，分别缺血30min，24h，2，3d，每个时相点6只。精确控制栓塞时间30min，拔出插线，形成脑缺血再灌注状态，分别再灌注24h，2，3d，每个时相点6只。观察动物模型的成功率，大鼠脑组织溴化2，3，5-氯化三苯基四氮唑红染色结果，光镜下脑组织尼氏小体的显示结果，脑细胞电镜观察结果，凋亡细胞观察结果。 结果：①假手术组动物模型成功率为100％，脑缺血组动物模型成功率为91．7％，脑缺血再灌注组动物模型成功率为94．4％。②溴化2，3，5-氯化三苯基四氮唑红染色结果：脑缺血30min肉眼几乎分辨不出梗死灶；脑缺血24h梗死灶主要累及大脑皮质额叶颞侧及其纹状体颞侧靠近大脑皮质下的边缘部分；脑缺血2d梗死灶几乎累及缺血侧大脑半球额顶叶的全部及其纹状体的大部分；脑缺血3d梗死灶累及缺血侧的全部脑组织，甚至累及部分对侧脑组织；脑缺血再灌注显示梗死灶主要累及缺血侧大脑皮质颞侧及纹状体的颞侧部分。③尼氏染色结果显示脑缺血30min，脑组织结构无明显变化；脑缺血24h，脑损伤侧梗死区内广泛细胞坏死，部分细胞自溶；脑缺血30min再灌注24h，脑损伤侧呈现点状坏死灶；脑缺血2d，脑损伤侧呈现较多片状坏死灶；脑缺血30min再灌注2d脑细胞边界呈现毛刺样；脑缺血&;#183;3d，损伤侧脑组织大片状坏死；脑缺血30min再灌注3d，脑损害趋向稳定。④电镜结果显示：脑缺血30min，神经细胞结构、层次破坏不明显；脑缺血24h，细胞内出现许多高密度中毒颗粒。脑缺血30min再灌注24h，神经细胞胞质内出现少量小的空泡及高密度中毒颗粒；脑缺血2d，很少见到能分辨的细胞结构；脑缺血30min再灌注2d，神经细胞膜性结构继续破坏，结构尚可辨认；脑缺血3d，未见形态可辨的神经细胞；脑缺血30min再灌注3d，能够分辨细胞残存的部分膜性结构。⑤脑缺血组、脑缺血再灌注组凋亡细胞高于假手术组，差异有显著性意义[分别为（75．0&;#177;2.3），（47．0&;#177;3．7）。（8．0&;#177;1.2）个。F=12.3，P=0．019〈0．05]。 结论：该方法简便快捷（手术时间不足15min），结果可靠，稳定性好，是较理想的一种大鼠局灶性脑缺血再灌注动物模型。     

莫诺苷对大鼠局灶性脑缺血再灌注模型脑梗死体积的影响

目的观察莫诺苷对大脑中动脉阻塞法（MACO）致脑缺血再灌注模型大鼠脑梗死体积的影响。方法用线栓法制备局灶性脑缺血再灌注大鼠模型,缺血30min,再灌注7d。采用2,3,5-氯化三苯基四氮唑（TTC）染色,检测大鼠的脑梗死体积。结果与假手术组相比,模型组及给药组出现明显梗死灶;与模型组相比,莫诺苷（90mg/kg,270mg/kg）脑梗死体积显著减少,维生素E（35mg/kg）组脑梗死体积未出现明显改变。结论莫诺苷可减少局灶性脑缺血再灌注大鼠脑梗死体积,对脑缺血再灌注损伤有保护作用。     

Recombinant factor XIII diminishes multiple organ dysfunction in rats caused by gut ischemia-reperfusion injury

Plasma factor XIII (FXIII) is responsible for stabilization of fibrin clot at the final stage of blood coagulation. Because FXIII has also been shown to modulate inflammation and endothelial permeability, we hypothesized that FXIII diminishes multiple organ dysfunction caused by gut I/R injury. A model of superior mesenteric artery occlusion (SMAO) was used to induce gut I/R injury. Rats were subjected to 45-min SMAO or sham SMAO and treated with recombinant human FXIII A2 subunit (rFXIII) or placebo at the beginning of the reperfusion period. Lung permeability, lung and gut myeloperoxidase activity, gut histology, neutrophil respiratory burst, and microvascular blood flow in the liver and muscles were measured after a 3-h reperfusion period. The effect of activated rFXIII on transendothelial resistance of human umbilical vein endothelial cells was tested in vitro. Superior mesenteric artery occlusion-induced lung permeability as well as lung and gut myeloperoxidase activity was significantly lower in rFXIII-treated versus untreated animals. Similarly, rFXIII-treated rats had lower neutrophil respiratory burst activity and ileal mucosal injury. Rats treated with rFXIII also had higher liver microvascular blood flow compared with the placebo group. Superior mesenteric artery occlusion did not cause FXIII consumption during the study period. In vitro, activated rFXIII caused a dose-dependent increase in human umbilical vein endothelial cell monolayer resistance to thrombin-induced injury. Thus, administration of rFXIII diminishes SMAO-induced multiple organ dysfunction in rats, presumably by preservation of endothelial barrier function and the limitation of polymorphonuclear leukocyte activation.     

去甲斑蝥素致大鼠多脏器功能失常综合征的动态观察

目的：探讨多脏器功能失常综合征（ＭＯＤＳ）病程中重要脏器功能的变化以及与氧自由基的关系。方法：用ＳＤ大鼠制作ＭＯＤＳ模型,动态检测脏器功能及血清超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）、谷胱甘肽过氧化物酶（ＧＳＨ Ｐｘ）和丙二醛（ＭＤＡ）的变化。结果：血清丙氨酸氨基转移酶（ＡＬＴ）、肌酸激酶及其同工酶（ＣＫ 和ＣＫ ＭＢ）和肌酐（Ｃｒ）均明显升高,其中ＣＫ ＭＢ于１２ 小时明显升高,１８ 小时达到高峰（Ｐ＜ ０．０１）;ＣＫ于１２小时最先达到衰竭标准（Ｐ＜ ０．０１）;ＡＬＴ与Ｃｒ均在２４ 小时后达到衰竭标准（Ｐ＜ ０．０５）。同时ＳＯＤ、ＧＳＨ Ｐｘ活性降低和ＭＤＡ含量增多（Ｐ均＜ ０．０５）。ＭＤＡ与ＣＫ、ＡＬＴ和Ｃｒ之间呈正相关关系,ｒ值分别为０．８４７、０．６３４和０．５６７（Ｐ均＜ ０．０１）。结论：在去甲斑蝥素致大鼠ＭＯＤＳ的病程中,心功能衰竭出现在先,然后为肾和肝功能衰竭。器官功能受损与氧自由基有关。     

Massive rhabdomyolysis and multiple organ dysfunction syndrome caused by leptospirosis

We report a case of leptospiral infection in a 63-year-old man who acquired the infection while swimming in canals and streams in Hawaii. The patient's course was atypical in that he was anicteric and had no evidence of meningitis when he presented with fever, rapidly progressive and severe rhabdomyolysis, thrombocytopenia, acute renal failure, and respiratory distress syndrome. Although he recovered after a protracted illness, he required major life support, including mechanical ventilation and hemodialysis. Initial antimicrobial therapy was designed to cover major bacterial and atypical pathogens, including leptospires. An in-depth work-up for causes of this catastrophic illness confirmed acute leptospirosis. Although rare, leptospirosis is a potentially lethal infection classically associated with hepatitis, azotemia, and meningitis. Most patients experience self-limited illness, with fever, myalgias, and malaise followed by an immune-mediated aseptic meningitis. A small proportion develop shock and multiple organ dysfunction. Whereas myalgias are ubiquitous in leptospiral infection, and most patients show mildly elevated muscle enzymes, life-threatening rhabdomyolysis is rare. This atypical case is reported to urge clinicians to consider leptospirosis in the evaluation of a patient with cryptogenic sepsis who develops multiple organ dysfunction associated with rhabdomyolysis. Appropriate antimicrobial therapy, with penicillin or doxycycline, can be life-saving. Received: 24 November 1999 Final revision received: 15 February 2000 Accepted: 7 March 2000     

脑缺血并发多器官功能障碍综合征后脏器组织CD14mRNA的表达

背景急性脑血管病导致的多器官功能障碍综合征(multiple organ dysfunction syndrome,MODS)在临床上是常见的,而对其发生的机制研究较少.目的探讨脑缺血模型内毒素受体CD14mRNA在肺、肝、肠和肾组织的表达变化规律及并发MODS的机制.设计随机对照的前瞻性研究.地点和对象在山东大学齐鲁医院实验动物中心将54只Wistar大鼠分为正常对照组、假手术组及缺血后5个亚组(12,24,36,48,72 h组).干预实验人员采用两侧颈总动脉阻断法建立前脑缺血模型.主要观察指标观察术后动物的一般情况,包括意识、精神状态、行动等.检测麻醉后大鼠的肛温和呼吸频率,测定血常规、肝功、肾功.观察缺血后各脏器大体标本的形态变化,检测各脏器组织CD14mRNA的表达.结果大鼠急性前脑缺血后MODS发生率为53%;缺血后12,24,36,48,72 h时相点动物肺、肝、肠和肾组织均有不同程度的损害,以肺脏和小肠改变为著;缺血后12 h各脏器组织CD14mRNA表达升高,24～36 h达高峰,48 h后下降,以肺脏变化最显著(P＜0.001);正常对照组和假手术组中各脏器组织CD14mRNA均有不同程度的表达,其中两组肺脏CD14mRNA的表达有显著性差异(P＜0.01).结论脑缺血后各脏器组织CD14mRNA的异常表达和病理改变为肠道内毒素易位和内毒素血症的发生提供条件,为研究脑缺血后MODS的发生机制提供客观依据.     

采用胶原酶加肝素构建大鼠脑出血致多器官功能障碍综合征模型

目的:利用Ⅶ型胶原酶加肝素构建大鼠脑出血致多器官功能障碍综合征模型,为进一步探讨急性脑血管病致多器官功能障碍综合征的发病机制提供实验模型依据。方法:实验于2003-11/2004-02在山东省医学科学院完成。①选取清洁级5～8月龄健康雄性Wistar大鼠96只,随机数字表法分为4组:正常对照组6只、假手术组6只、Ⅶ型胶原酶6.668nkat 肝素钠组42只、Ⅶ型胶原酶13.336nkat 肝素钠组42只,后两组又分为4,8,12,24,36,48,72h7个时相点,6只/时相点。②除正常对照组外,其余组均采用立体定向术在大鼠尾状核注入Ⅶ型胶原酶加肝素建立脑出血致多器官功能障碍综合征模型。在立体定向仪的引导下,用微量注射器(针头直径约0.6mm)沿钻孔垂直进针6mm,Ⅶ型胶原酶6.668nkat 肝素钠组缓慢注入Ⅶ型胶原酶6.668nkat和3.5IU肝素钠混合液2μL;Ⅶ型胶原酶13.336nkat 肝素钠组注入VII型胶原酶13.336nkat和3.5IU肝素钠混合液2μL,留针10min后缓慢退出。假手术组注射等体积生理盐水。③观察术后各时相点大鼠症状及体征变化,检测外周血白细胞、肝肾功能及心肌酶学的改变,光镜下观察脑、肺、肝、肾和小肠组织病理变化,计算全身炎症反应综合征、多器官功能障碍综合征的发生率。结果:实验选取清洁级健康雄性Wistar大鼠96只,全部进入结果分析。①各组大鼠术后脑大体形态观察结果:假手术组未见明显血肿;Ⅶ型胶原酶6.668nkat 肝素钠组、Ⅶ型胶原酶13.336nkat 肝素钠组在术后4h均形成血肿,24h后血肿基本不再增大。Ⅶ型胶原酶13.336nkat 肝素钠组形成的血肿大于Ⅶ型胶原酶6.668nkat 肝素钠组。②各组大鼠术后神经功能的变化:假手术组神经功能评分为0分;Ⅶ型胶原酶13.336nkat 肝素钠组神经功能评分明显高于Ⅶ型胶原酶6.668nkat 肝素钠组[(3.32±0.49),(1.64±0.18)分,P<0.01]。③各组大鼠术后呼吸、心率、体温、外周血白细胞、肝功、肾功、心肌酶学的变化:与正常对照组比较,假手术组上述各项指标均无明显差异(P>0.05);Ⅶ型胶原酶6.668nkat 肝素钠组、Ⅶ型胶原酶13.336nkat 肝素钠组均明显升高(P<0.01),且Ⅶ型胶原酶13.336nkat 肝素钠组各指标升高幅度显著高于Ⅶ型胶原酶6.668nkat 肝素钠组(P<0.05)。④各组大鼠术后主要脏器病理的改变:正常对照组和假手术组各器官组织结构基本正常。Ⅶ型胶原酶6.668nkat 肝素钠组肺、肝、小肠、肾等脏器各时相点的病理改变以非特异性炎症反应为主。Ⅶ型胶原酶13.336nkat 肝素钠组肺、肝、小肠、肾等脏器各时相点的炎性病理改变均较Ⅶ型胶原酶6.668nkat 肝素钠组更加明显、持久。⑤脑出血后全身炎症反应综合征、多器官功能障碍综合征的发生率:Ⅶ型胶原酶6.668nkat 肝素钠组分别为75.4%和21.4%,Ⅶ型胶原酶13.336nkat 肝素钠组分别为100%和67.9%。结论:大鼠尾状核注入13.336nkatⅦ型胶原酶加肝素法可以成功构建脑出血致多器官功能障碍综合征模型。     

采用胶原酶加肝素构建大鼠脑出血致多器官功能障碍综合征模型

目的：利用Ⅶ型胶原酶加肝素构建大鼠脑出血致多器官功能障碍综合征模型，为进一步探讨急性脑血管病致多器官功能障碍综合征的发病机制提供实验模型依据。 方法：实验于2003-11／2004—02在山东省医学科学院完成。①选取清洁级5～8月龄健康雄性Wistar大鼠96只，随机数字表法分为4组：正常对照组6只、假手术组6只、Ⅶ型胶原酶6．668nkat＋肝素钠组42只、Ⅶ型胶原酶13．336nkat＋肝素钠组42只，后两组又分为4，8，12，24，36，48，72h7个时相点，6只／时相点。②除正常对照组外，其余组均采用直体定向术在大鼠尾状核注入Ⅶ型胶原酶加肝素建立脑出血致多器官功能障碍综合征模型在立体定向仪的引导下，用微量注射器（针头直径约0．6mm）沿钻7L垂赢进针6mm，Ⅶ型胶原酶6．668nkat＋肝素钠组缓慢注入Ⅶ型胶顾酶6．668nkat和3．5lU肝素钠混合液2μL；Ⅶ型胶原酶13．336nkat＋肝素钠组注入Ⅶ型胶原酶13．336nkat和3．5lU肝索钠混合液2μL，留针10min后缓慢退出。假手术组注射等体积生理盐水。（参观察术后各时相点大鼠症状及体征变化。检测外周血白细胞、肝肾功能及心肌酶学的改变，光镜下观察脑、肺、肝、肾和小肠组织病理变化，计算全身炎症反应综合征、多器官功能障碍综合征的发生率。 结果：实验选取清洁级健康雄性Wistar大鼠96只，全部进入结果分析。①各组大鼠术后脑大体形态观察结果：假手术组未见明显血肿；Ⅶ型胶原酶6．668nkat＋肝素钠组、Ⅶ型胶原酶13．336nkat＋肝素钠组在术后4h均形成血肿．24h后血肿基本不再增大。VⅡ型胶原酶13．336nkat＋肝素钠组形成的血肿大于Ⅶ型胶原酶6．668nkat＋肝素钠组。②各组大鼠术后神经功能的变化：假手术组神经功能评分为0分；Ⅶ型胶原酶13．336nkat＋肝素钠组神经功能评分明显高于Ⅶ型胶原酶6．668nkat＋肝素钠组[（3．32&;#177;0。49），（1．64&;#177;0．18）分，P〈0．01]。③各组大鼠术后呼吸、心率、体温、外周血白细胞、肝功、肾功、心肌酶学的变化：与正常对照组比较，假手术组上述各项指标均无明显差异（P〉0．05）；Ⅶ型胶原酶6．668nkat＋肝素钠组、Ⅶ型胶原酶13．336nkat＋肝素钠组均明显升高（P〈0．01），且Ⅶ型胶原酶13．336nkat＋肝素钠组各指标升高幅度显著高于Ⅶ型胶原酶6．668nkat＋肝素钠组（P〈0．05）一各组大鼠术后主要脏器病理的改变：正常对照组和假手术组各器官组织结构恭本正常。Ⅶ型胶原酶6．668nkat＋肝素钠组肺、肝、小肠、肾等脏器各时棚点的病理改变以非特异性炎症反应为主．Ⅶ型胶原酶13．336nkat＋肝素钠组肺、肝、小肠、肾等脏器各时相点的炎性病理改变均较Ⅶ型胶原酶6．668nkat＋肝素钠组更加明显、持久：⑤脑出血后全身炎症反应综合征、多器官功能障碍综合征的发生率：Ⅶ型胶原酶6．668nkat＋肝素钠组分别为75．4％和21．4％，Ⅶ型胶原酶13．336nkat＋肝素钠组分别为100％和67．9％。 结论：大鼠尾状核注入13．336nkatⅦ型胶原酶加肝素法可以成功构建脑出血致多器官功能障碍综合征模型.     

脑缺血再灌注糖尿病大鼠海马CA1区凋亡基因的表达

目的 观察凋亡基因Bcl-2、Bax在糖尿病大鼠脑缺血再灌注海马CA1区神经元损伤中的表达。方法 采用链脲佐菌素（STZ）诱导和线栓法制备糖尿病大脑中动脉闭塞模型（MCAO）,应用HE染色和免疫组化方法比较糖尿病脑缺血再灌注组与缺血再灌注组海马CA1区神经元缺失、凋亡基因Bcl-2、Bax的表达。结果 糖尿病脑缺血再灌注组海马CA1区神经元缺失,明显高于缺血再灌注组（P〈0.05）;缺血再灌注组及糖尿病脑缺血再灌注组大鼠海马CA1区Bcl-2、Bax阳性染色阳性细胞与正常对照组及假手术组比增多,差异显著（P〈0.05）,而糖尿病脑缺血再灌注组比缺血再灌注组增加得更明显,差异有显著性（P〈0.05）,其中Bax上调幅度大。结论 糖尿病大鼠脑缺血再灌注损伤后海马CA1区细胞发生凋亡,Bcl-2、Bax介导的细胞凋亡机制可能是糖尿病加重脑缺血再灌注海马神经元损伤机制之一。     

老龄急性缺血性脑卒中后多器官功能障碍综合征模型大鼠的免疫功能变化

目的：观察老龄大鼠急性缺血性脑卒中后多器官功能障碍综合征（multiple organ dysfunction syndrome in the elderly，MODSE）后免疫功能的变化。 方法：实验于2005—10／12在解放军兰州军区总医院动物实验室进行。取46只健康老龄Wistar大鼠中，鼠龄24个月，随机抽出6只作为对照组，不干预，其余40只实施双侧颈动脉夹闭30min再灌注，建立老龄大鼠急性缺血性脑卒中后多器官功能障碍综合征模型。在术后1，3，5d时相点用流式细胞仪分析实验大鼠胸腺、脾脏、外周血中T淋巴细胞、B淋巴细胞、自然杀伤细胞数量变化，以及胸腺、脾脏中淋巴细胞的凋亡数量变化。 结果：①40只实施双侧颈动脉夹闭的老龄大鼠，术后1d死亡6只，在34只存活大鼠中，根据血气及生化指标检测结果，发生多器官功能障碍综合征有19只（MODSE组），未发生者15只（无MODSE组）。②外周血和脾脏、胸腺内免疫细胞的变化：术后1d，无MODSE组和MODSE组大鼠的免疫细胞数量均低于对照组（P〈0．05，0.01）；MODSE组大鼠T，B，自然杀伤细胞数量在外周血较对照组低3～5倍，脾脏内低两三倍。③脾脏、胸腺内凋亡细胞变化：术后1d，无MODSE组和MODSE组老龄大鼠免疫细胞凋亡比例增加，均高于对照组（P〈0.05，0．01），MODSE组高于无MODSE组（P〈0.01）。 结论：老龄大鼠急性缺血性脑卒中后，免疫细胞的凋亡增加，外周和中枢免疫器官内免疫细胞数量明显下降，导致细胞免疫和体液免疫功能的下降，发生多器官功能障碍综合征者变化更明显。这提示急性缺血性脑卒中后多器官功能障碍综合征的发生与免疫功能的下降有密切关系。     

老龄急性缺血性脑卒中后多器官功能障碍综合征模型大鼠的免疫功能变化

目的:观察老龄大鼠急性缺血性脑卒中后多器官功能障碍综合征(multipleorgandysfunctionsyndromeintheelderly,MODSE)后免疫功能的变化。方法:实验于2005-10/12在解放军兰州军区总医院动物实验室进行。取46只健康老龄Wistar大鼠中,鼠龄24个月,随机抽出6只作为对照组,不干预,其余40只实施双侧颈动脉夹闭30min再灌注,建立老龄大鼠急性缺血性脑卒中后多器官功能障碍综合征模型。在术后1,3,5d时相点用流式细胞仪分析实验大鼠胸腺、脾脏、外周血中T淋巴细胞、B淋巴细胞、自然杀伤细胞数量变化,以及胸腺、脾脏中淋巴细胞的凋亡数量变化。结果:①40只实施双侧颈动脉夹闭的老龄大鼠,术后1d死亡6只,在34只存活大鼠中,根据血气及生化指标检测结果,发生多器官功能障碍综合征有19只(MODSE组),未发生者15只(无MODSE组)。②外周血和脾脏、胸腺内免疫细胞的变化:术后1d,无MODSE组和MODSE组大鼠的免疫细胞数量均低于对照组(P<0.05,0.01);MODSE组大鼠T,B,自然杀伤细胞数量在外周血较对照组低3～5倍,脾脏内低两三倍。③脾脏、胸腺内凋亡细胞变化:术后1d,无MODSE组和MODSE组老龄大鼠免疫细胞凋亡比例增加,均高于对照组(P<0.05,0.01),MODSE组高于无MODSE组(P<0.01)。结论:老龄大鼠急性缺血性脑卒中后,免疫细胞的凋亡增加,外周和中枢免疫器官内免疫细胞数量明显下降,导致细胞免疫和体液免疫功能的下降,发生多器官功能障碍综合征者变化更明显。这提示急性缺血性脑卒中后多器官功能障碍综合征的发生与免疫功能的下降有密切关系。