纯钛表面牙周韧带细胞形成物骨钙素的表达

目的：以骨钙素为细胞分化指标，探讨商用纯钛表面牙周韧带细胞形成物的特征。方法：将牙周韧带细胞和纯钛进行复合培养，分别在第8天，第16天和第24天取材，免疫荧光染色原位观察骨钙素的表达，结果：第8天后，牙周韧带细胞在纯钛表面即可形成复层生长，并持续高表达骨钙素，结论：牙周韧带细胞在纯钛表面有向成骨样细胞分化的趋势，表现为形成高度表达骨钙素的类组织。     

牙周韧带细胞在纯钛表面的附着特征

目的　观察牙周韧带细胞在商用纯钛表面的附着特征。方法　MTT法分析牙周韧带细胞在商用纯钛表面的早期粘附 ,采用落射荧光观察细胞的粘附形态。结果　牙周韧带细胞在纯钛表面的早期粘附 2h达到饱和态 ,且呈现不同的粘附时相。细胞之间逐渐以丝状结构联接 ,丝状结构与钛片的打磨走向一致 ,最后融合成片。结论　牙周韧带细胞在纯钛表面的粘附具有规律性 ,纯钛的表面处理方法对细胞的生长极性有明显影响     

牙周韧带细胞及成骨样细胞在纯钛表面附着的形态学比较

目的：从形态学上比较牙周韧带细胞及成骨样细胞在纯钛表面的附着及增殖情况。方法：在相同的培养条件下，商用纯钛表面分别接种牙周韧带细胞和成骨样细胞，采用倒置显微镜及扫描电镜进行形态学观察。结果：两种细胞在纯钛表面均附着、生长良好，7天后细胞即连接成片，并在钛片边缘存在“细胞聚集”现象，呈现复层生长。扫描电镜显示两种细胞附着早期呈“伪足”样伸展，附着后期形成大量的细胞外基质成份。两种细胞在细胞形态、“伪足”形态及钛片周边聚集形态上均存在明显差异。结论：牙周韧带细胞和成骨样细胞与纯钛均有良好的生物相容性，在体外培养过程中，呈现不同细胞形态、“伪足”形态及钛片周边聚集形态，提示两种细胞在分化过程中可能存在差异。     

牙周韧带细胞在纯钦表面的附着特征

目的 观察牙周韧带细胞在商用纯钛表面的附着特征。方法 MTT法分析牙周韧带细胞在商用纯钛表面的早期粘附，采用落射荧光观察细胞的粘附形态。结果 牙周韧带细胞在纯钛表面的早期粘附2h达到饱和态，且呈现不同的粘附时相。细胞之间逐渐以丝状结构联接，丝状结构与钛片的打磨走向一致，最后融合成片。结论 牙周韧带细胞在纯钛表面的粘附具有规律性，纯钛的表面处理方法对细胞的生长极性有明显影响。     

牙周韧带细胞在商用纯钛表面生物学行为的实验研究

目的采用形态学、计量学和免疫组织学方法,观察牙周韧带细胞(periodontalligamentcells,PDLCs)在商用纯钛(commerciallypuretitanium,cpTi)表面的附着和分化特征,探讨牙种植体与PDLCs之间的界面关系。方法PDLCs在cpTi表面接种后,分别采用荧光显微镜、扫描电子显微镜观察细胞的附着形态,MTT法分析细胞粘附,免疫荧光观察细胞骨钙素(osteoclin,OC)的表达。结果PDLCs在cpTi边缘逐步伸展,扫描电子显微镜示细胞呈长梭形,并逐渐以“伪足”沿cpTi表面伸展;荧光显微镜显示,细胞附着早期有多种附着相;细胞计数显示,细胞数量在2h后趋于稳定,4h内持续增加。7d后细胞形成与cpTi打磨方向一致的单层。细胞及基质成分中表达OC。结论PDLCs在cpTi表面的粘附过程有一定的规律性,细胞的早期附着是一个动态过程,附着后期具有矿化趋势。     

纯钛表面牙周韧带细胞形成物的组织学和免疫组织化学研究

目的：探讨牙周韧带细胞在商用纯钛表面的增殖与分化。方法：牙周韧带细胞在纯钛表面进行培养,14天后刮取形成物,进行HE染色及Ⅰ型胶原免疫组织化学分析。结果：牙周韧带细胞在纯钛表面生长良好,14天后形成单层,形成大量细胞基质,其成份主要为Ⅰ型胶原。结论：牙周韧带细胞能够在纯钛表面生长、增殖,并形成大量细胞外基质,细胞外基质的主要成份为Ⅰ型胶原。     

米诺环素对人牙周韧带细胞矿化能力的影响

目的探讨米诺环素对人牙周韧带细胞(periodontal ligament cells，PDLCs)碱性磷酸酶(alkaline phosphatase，ALP)活性及矿化结节形成能力的影响。方法将不同浓度的米诺环素(0，1，5，20，100，200mg／L)加入体外培养的第4代HPDLCs中，孵育4天后，检测其对细胞ALP活性的影响；将第4代的PDLCs在体外进行长期培养，实验组加入矿化液和米诺环素(20mg／L或100mg／L)，对照组只加矿化液。28天后用茜素红与VonKossa染色检测矿化结节的形成。结果20mg／L和100mg／L的米诺环素能显提高PDLCs的ALP活性．其中20mg／L具有最大的促进效应，对体外矿化结节的形成，亦有一定程度的促进作用。结论米诺环素有促进牙周韧带细胞向成骨细胞方向转化的趋势，从而有助于牙周新附着的形成。     

体外培养的人牙髓细胞、牙周韧带细胞几种基质表达和碱性磷酸酶分泌的研究

目的：研究并比较培养的５～７代人牙髓细胞和牙周韧带细胞几种基质表达和碱性磷酸酶分泌的情况。方法：细胞培养、免疫组化、碱性磷酸酶活性分析。结果：两种细胞均在培养的第９天进入生长静止期，两种细胞培养液中碱性磷酸酶活性在增殖期达到高峰，以后活性下降。两种细胞均表达ＦＮ、Ⅲ型胶原、ＢＭＰ。当培养的细胞密度较高时，ＦＮ和Ⅲ型胶原以纤维状结构覆盖于细胞表面。结论：传代的人牙髓细胞和牙周韧带细胞的上述几种基质表达方式、碱性磷酸酶活性相似。     

釉基质蛋白对人牙囊和牙周膜细胞黏附增殖的影响

目的 比较釉基质蛋白（EMP）对人牙囊细胞（hDFC）和人牙周膜细胞（hPDLC）在钛片表面黏附和增殖能力的影响。方法 分离培养hDFC和hPDLC,双喷砂加酸蚀处理钛片表面。实验分为4组：hDFC＋EMP诱导组、hDFC组、hPDLC＋EMP诱导组、hPDLC组。采用噻唑蓝（MTT）法和细胞免疫荧光染色法,定量分析细胞在钛片表面的黏附和增殖情况,扫描电子显微镜观察细胞在钛片表面1～7 d的生长情况。结果 1～7 d各组间MTT值的差异无统计学意义（P〉0.05）;加有EMP诱导的2组细胞较2组单纯细胞培养组的形状系数（Sf）值更高（P〈0.05）,hDFC组和hPDLC两组间Sf值差异无统计学意义（P〉0.05）,hDFC＋EMP诱导组较hPDLC＋EMP诱导组Sf值高（P〈0.05）。结论 EMP能促进hPDLC和hDFC在钛片表面的黏附,且对hDFC的促进作用更强;但对接种在钛片表面的hPDLC和hDFC短期增殖没有影响。     

三种太金属表面处理方法对牙周膜成纤维细胞附着和生长的影响

目的：比较三种不同表面处理方法对牙周膜细胞在钛金属表面附着和生长影响。方法：将三种经不同方法表面处理的钛金属（纯钛,钛75,钛表面氮化处理）试件放在12孔培养板内,取生长良好的第5代人牙周膜成纤维细胞（PDLF）接种在试件表面,分别在接种后24h和72h进行贴壁细胞计数,并在扫描电镜下观察细胞在金属表面附着情况.结果：接种24h后纯钛表面的贴壁细胞数多于钛75金属表面的细胞数（P＜0．05）,但在接种后72h时这种差异消失,不论接种后24h或72h钛表面氮化处理金属表面的细胞数都明显少于另外两种金属表面的细胞数（P＜0．05）,扫描电镜结果表明PDLF在纯钛和钛75表面伸展,而在钛表面氮化处理的金属表面细胞基本不伸展。结论：人PDLF在纯钛,钛75表面的生物性附着优于在表面氮化处理的钛金属表面。     

纤维连接蛋白与钙磷复合涂层的初步研究(一)复合涂层的制备

目的 探讨商用纯钛表面纤维连结蛋白与钙磷复合涂层的可行性。方法 采用纤维连结蛋白，钙磷共沉积的方法，对商用纯钛表面进行复合涂层的表面改性，结果 扫描电镜显示，单纯钙磷涂层和复合涂层的纯钛表面均见有晶体形成，但晶体形态存在一定的差异；EDX显示晶体的主要成份为钙磷，Ca/P=1.50。结论 本研究表明通过纤维连结蛋白与钙磷复合涂层对纯钛的表面改性具有可行性。     

釉基质蛋白对牙周膜细胞增殖和牙骨质相关蛋白基因表达的影响

目的 通过研究釉基质蛋白(enamel matrix proteins,EMP)对人牙周膜细胞增殖及牙骨质相关蛋白基因表达的影响,探讨EMP促进牙骨质形成的机制.方法 分别用质量浓度为0(对照组)、50、100、200、300 mg/L的EMP作用于培养的人牙周膜细胞(periodontal ligament cells,PDLC),在培养的第1、3、5、7天用甲基噻唑基四唑法检测细胞增殖活性;在培养的第7天用荧光实时定量反转录聚合酶链反应法检测各组细胞牙骨质附着蛋白(cementum attachment protein,CAP)和牙骨质蛋白23(cementum protein-23,CP-23)mRNA表达量.结果 EMP质量浓度在50 ～ 200 mg/L范围内可以促进人PDLC增殖,在300 mg/L时抑制细胞增殖;EMP质量浓度为100、200 mg/L时可以显著促进CAP mRNA(分别为4.661 ±0.154、5.923±0.788)和CP-23mRNA的表达(分别为1.222±0.089、3.795±0.640)与对照组(CAP:1.006±0.062,CP-23:1.012±0.163)相比差异均有统计学意义(P＜0.05),且以200 mg/L EMP的促表达效果最佳.结论 EMP在一定浓度范围内能促进人PDLC增殖及CAP和CP-23基因表达,提示EMP可能通过促进细胞增殖和牙骨质相关蛋白的表达促进牙骨质的形成.     

纤维连接蛋白与钙磷复合涂层的初步研究(二)复合涂层对细胞粘附的影响

目的：探讨纯钛表面纤维连结蛋白、钙磷复合涂层对细胞粘附的影响。方法：采用纤维连结蛋白、钙磷共沉积的方法，对商业纯钛表面进行复合涂层的表面改性，MTT法分析细胞的早期粘附（4小时内），荧光显微镜原位观察细胞在复合涂层表面的分布情况。结果：复合涂层较单独涂层更能促进细胞的早期附着，荧光原位观察显示细胞在复合涂层表面分布均匀，呈现不同的粘附时间。结论：通过纤维连结蛋白、钙磷复合涂层对纯钛的表面改性能够提高其表面的生物学活性。     

Immunohistochemical investigation on the pattern of vimentin expression in regenerated and intact monkey and human periodontal ligament

The expression of vimentin is well documented in the intact animal and human periodontal ligament (PDL), but there is limited information on the pattern of vimentin expression in the regenerated PDL. The aim of the present study was to investigate the pattern of vimentin expression in the regenerated and intact monkey and human PDL. A total of 12 chronic recession-type defects were created in three monkeys (Macaca fascicularis) and treated either with guided tissue regeneration (GTR), or with an enamel matrix protein derivative (EMD). After 5 months, the animals were sacrificed and specimens containing the defects and surrounding tissues were dissected free, decalcified in EDTA and embedded in paraffin. Sections were labelled immunohistochemically by using monoclonal antibody against vimentin (VIM 3B4). Twelve patients, each of whom displayed one deep intrabony defect scheduled for extraction were treated with GTR, EMD or combination of EMD+natural bone mineral (NBM). Following a healing period of 6 months, the teeth were extracted "en block" and immunohistochemically analysed according to the same protocol as described in monkeys. The results revealed that in both monkeys and humans the newly formed PDL was labelled similarly for vimentin to the intact (non-treated) PDL. In all specimens, the newly formed PDL was in continuation with the intact parts of PDL, thus suggesting that the mesenchymal cells capable of regenerating the attachment apparatus may have their origin in the intact PDL. In conclusion, the present findings indicate that (a) the reformed PDL displayed a similar expression of vimentin to the intact (original) PDL, and (b) the cells capable of regenerating new PDL and new cementum appear to be of mesenchymal origin and their source may be in the intact PDL.