TRAIL联合顺铂诱导肝癌细胞HepG2凋亡的研究

目的 探讨顺铂增加TRAIL诱导肝癌细胞HepG2凋亡的分子机制，提供TRAIL应用肝癌临床治疗的一种新的用药模式。方法 以肝癌细胞HepG2为研究对象，应用流式细胞仪分析顺铂联合应用TRAIL对细胞周期的影响，Western blot检测顺铂作用前后HepG2细胞在TRAIL诱导凋亡过程中Caspase-8、Caspase-3、DR4、DR、DcR，c—FLIP及RIP的表达变化。结果 顺铂能够增强TRAIL诱导HepG2细胞凋亡的能力，两者联合应用具有明显的协同作用，顺铂预先处理能够下调c-FLIP及RIP的表达及增加DR的表达。结论 TRAIL联合顺铂可以诱导肝癌细胞HepG2凋亡，其机制是通过下调c-FLIP及RIP的表达，解除Caspase-8受抑，恢复凋亡信号的传导来实现的。死亡受体D＆的表达上调也可能参与了这一变化过程。     

反义DcR3寡核苷酸协同顺铂诱导胶质瘤细胞凋亡

目的 观察陷阱受体3(DcR3)反义核苷酸(ASODN)与顺铂对胶质瘤细胞的影响.方法 设计DcR3反义核苷酸,转染U251细胞,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blot方法观察DcR3 mRNA和蛋白有无降低,用噻唑蓝(MTT)比色法、荧光显微镜DAPI染色分别检测对照组、顺铂组、反义核苷酸组、协同作用组对胶质瘤细胞U251的影响.结果 反义DcR3寡核苷酸组可有效地降低DcR3 mRNA和蛋白表达,DcR3/β-actin比值分别为(12.4±3.1)%和(13.5±4.2)%,错义链组、脂质体组、对照组mRNA和蛋白分别为(68.8±4.5)%、(74.5±5.0)%、(71.3±6.4)%和(78.2±6.8)%、(79.8±4.5)%、(76.4±5.6)%,差异有统计学意义(P<0.05).顺铂与反义寡核苷酸组细胞凋亡率分别为(18.32±2.32)%和(20.43±3.45)%,较对照组(5.21±0.45)%,差异有统计学意义(P<0.05),两者与协同处理组(45.23±6.78)%比较,差异有统计学意义(P<0.05).结论 DcR3反义核苷酸与顺铂协同作用可有较强的促胶质瘤细胞凋亡作用.     

顺铂与肾小管上皮细胞凋亡

顺铂剂量依赖的肾毒性而限制了其临床治疗肿瘤的效果。研究发现,顺铂通过线粒体途径和死亡受体途径诱导的肾小管上皮细胞凋亡在顺铂引起的肾毒性中发挥着重要作用。     

细胞自噬在食管癌研究中的进展

细胞自噬(autophagy)是一个在各种外界因素影响下,真核细胞通过溶酶体降解其内部受损的细胞器、错误折叠的蛋白质和侵入其内的病原体并产生可以重新参与生命活动的物质和能量的生物学过程,在维持机体内环境稳定等方面发挥着重要的作用。目前,我国食管癌患者的发病率和病死率均远高于世界平均水平,放化疗联合靶向药物治疗已逐渐应用于食管癌的临床治疗,而这些新兴治疗措施与细胞自噬有着一定的关系。该文就细胞自噬在食管癌发生发展中的作用和调控机制进行综述。     

脑源性神经生长因子对顺铂诱导的神经母细胞瘤细胞株生长与凋亡的影响

目的　通过观察脑源性神经生长因子 (BDNF)对顺铂诱导的神经母细胞瘤 (NB)细胞株生长与凋亡的影响 ,探讨TrKB BDNF通路在NB化疗耐药中的作用。方法　应用四甲基偶氮蓝比色 (MTT)法检测不同浓度BDNF对顺铂诱导人NB细胞株SH SY5Y的生长的影响 ,应用流式细胞仪 (FCM )检测BDNF对顺铂诱导的人NB细胞株SH SY5Y的凋亡率的影响。结果　BDNF可阻断顺铂对TrkB表达的SH SY5Y细胞的杀伤作用 ,且其阻断能力的大小与BDNF浓度有关 ,但不能阻断顺铂对无TrkB表达的SH SY5Y细胞的杀伤作用。顺铂对NB细胞的杀伤作用是通过诱导细胞凋亡 ,BDNF对顺铂这一作用的阻断是通过抑制细胞凋亡而实现的。结论　TrkB BDNF通路在TrkB表达的NB化疗耐药机制中起重要作用。     

自噬调节在结肠癌细胞化疗耐药性的作用机制研究

目的:探究自噬调节在结肠癌细胞化疗过程中耐药性的作用机制.方法:以顺铂诱导人结肠癌细胞系EC9706细胞自噬,观察自噬抑制剂3-MA对EC9706细胞的影响.CCK8法测定细胞生长情况.流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期.MDC检测自噬.Western blot法检测Beclin-1、PI3K Ⅲ、LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ...     

缺氧诱导因子-1α小干扰RNA联合顺铂诱导人食管鳞癌细胞凋亡

目的 观察缺氧诱导因子(HIF)-1α小干扰RNA联合顺铂(DDP)对人食管鳞癌TE-1细胞凋亡的影响.方法 人工合成HIF-1α小干扰RNA,体外培养人食管鳞癌TE-1细胞分为4组:A组用生理盐水处理,B组用DDP处理,C组用小干扰RNA处理,D组用小干扰RNA和DDP协同处理;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)半定量检测HIF-1α mRNA的表达,Western blot法检测HIF-1α蛋白的表达,流式细胞仪检测细胞凋亡.结果 RT-PCR法检测A、B、C和D组细胞的HIF1α mRNA表达分别为(0.5325±0.0809)、(0.5003±0.0726)、(0.0986±0.0171)和(0.0849±0.0133),Western blot法检测HIF-1α蛋白表达分别为(0.7280±0.0268)、(0.7115±0.1293)、(0.2362±0.0266)和(0.1917±0.0234),其中D组与A、B两组比较差异有统计学意义(P<0.01),与C组比较差异无统计学意义(P>0.05);A、B、C和D组的细胞凋亡率分别为(3.23±0.61)%、(29.88±3.48)%、(34.48±5.69)%、(56.37±7.99)%,其中D组与其他3组比较,差异有统计学意义(P<0.01).结论 HIF-1α小干扰RNA能够提高DDP的细胞毒性作用,两者联合能有效促进人食管鳞癌TE-1细胞的凋亡,显著提高化疗效果.     

增强顺铂对骨肉瘤疗效的体内外研究进展

骨肉瘤是骨骼系统常见的恶性肿瘤,目前其治疗以新辅助化疗结合保肢术为主。顺铂是骨肉瘤化疗的常用药物之一。本文综述了增强顺铂疗效的体内外研究新进展,包括自噬相关的化疗耐药、抑制DNA损伤修复、抑制原癌基因表达、增强细胞凋亡、热休克蛋白HSP90相关化疗敏感性、多药联合化疗等。这些新进展将有助于骨肉瘤新药的研发。     

Bcl-2在细胞自噬中的作用

细胞凋亡是一种生理性细胞死亡机制,它是由基因控制的细胞自主的有序的死亡过程.细胞自噬是一种自我消化过程,通过包裹细胞内成分,再与溶酶体溶合,进而降解细胞成分.细胞自噬与凋亡之间存在复杂联系,在一定条件下自噬是细胞对应激适应性反应从而避免发生死亡,而在其他环境中,自噬是细胞死亡的替代途径.Bel-2家族成员在细胞凋亡与自噬过程中发挥着交叉性作用.本综述主要总结Bcl-2家族成员在细胞自噬中研究进展.     

磁介导热疗联合顺铂化疗对肝癌细胞的影响及其机制

目的　探讨用电磁场诱导磁性微球热疗联合顺铂化疗对人肝癌细胞的影响及机制。方法　在体外培养的人肝癌细胞BEL 740 2中加入磁性微球 (5、10 g/L)和顺铂 (1、3mg/L) ,用 40kHz、2 4kA/min的电磁场诱导热疗 3 0min ,光纤温度仪监测温度的变化 ,与未加磁性微球和 /或顺铂组对照 ,采用细胞计数法绘制肝癌细胞的生长曲线 ,细胞集落形成计算集落形成率 ,流式细胞仪分析细胞周期及凋亡率。结果　磁场下 ,加入磁性微球各组的温度均升高 ,10 g/L磁性微球组的温度明显高于 5g/L磁性微球组 (4 4℃ :3 8.5℃ ,P <0 .0 1) ,随磁性微球和顺铂的浓度增加 ,肝癌细胞的生长曲线变低平 ,集落形成率降低 ,G0 /G1期下降 ,S期增加 ,凋亡率增加 (P <0 .0 1)。结论　磁介导热疗可抑制肝癌细胞的增殖 ,对顺铂的抗癌作用有明显的协同作用。磁介导热化疗的抗癌作用机制主要是诱导凋亡 ,S期阻滞。     

索拉菲尼对肝癌细胞HepG2自噬的抑制作用

目的：研究化疗药物索拉菲尼（Sorafenib）对肝癌细胞HepG2自噬的作用及自噬与细胞增殖、细胞凋r_的关系。方法：常规细胞培养,以10μmol／L的索拉菲尼作用不同时间,采用MDC染色,在荧光显微镜下观察自噬泡的情况：用Western印迹检测自噬相关蛋白LC3的动态变化;用3-MA抑制肝癌细胞中自噬的表达,并用CCK8法检测索拉菲尼及其联合3-MA对细胞生存率的影响,用AnnexinV／PI流式细胞仪检测抑制自噬后凋亡的变化。结果：HepG2经索拉菲尼作用后,自噬泡明显减少,LC3蛋白尤其是LC3-Ⅱ随着作用时间延长逐渐减弱;索拉菲尼联合3-MA可进一步抑制HepG2细胞中自噬的表达,抑制自噬后细胞死亡明显增加,特别是细胞凋亡明显增加。结论：索拉菲尼抗肝癌作用可能与抑制肝癌细胞自噬有关。     

自吞噬在脂多糖诱导HL-1心肌细胞损伤中的作用

目的 评价自吞噬在脂多糖(LPS)诱导HL-1心肌细胞损伤中的作用.方法 采用随机数字表法,将培养的HL-1细胞随机分为4组(n=15):正常对照组(C组)不予任何处理,继续培养24h;LPS组在细胞培养液中加入LPS(终浓度1 μg/ml);自吞噬诱导剂纳巴霉素组(R组)在细胞培养液中加入纳巴霉素(终浓度0.2 μg/ml),孵育48 h时加入LPS(终浓度1 μg/ml);自吞噬抑制剂三甲基嘌呤组(3-MA组)在细胞培养液中加入加入3-MA(终浓度10 mmol/L),孵育48 h时加入LPS(终浓度1μg/ml).各组孵育4h时测定自吞噬蛋白微管相关蛋白1轻链3Ⅱ(LC3Ⅱ)表达水平,并观察线粒体超微结构,计算自吞噬体数量,测定线粒体光密度值、线粒体膜电位(JC-1).于孵育24h时测定细胞凋亡率和Caspase-3活性.结果 与C组比较,LPS组LC3Ⅱ表达水平、线粒体光密度值、细胞凋亡率和Caspase-3活性升高,自吞噬体数量增加,JC-1降低(P＜0.05);与LPS组比较,R组LC3Ⅱ表达水平和JC-1升高,自吞噬体数量增加,线粒体光密度值、细胞凋亡率和Caspase-3活性降低,3-MA组LC3Ⅱ表达水平和JC-1降低,自吞噬体数量减少,线粒体光密度值、细胞凋亡率和Caspase-3活性升高(P＜0.05).R组线粒体超微结构损伤较LPS组减轻,3-MA组较LPS组加重.结论 自吞噬可减轻LPS诱导的HL-1心肌细胞损伤,机制可能与清除受损线粒体,改善线粒体功能,抑制细胞凋亡有关.     

塞来昔布协同顺铂P13K/Akt途径诱导骨肉瘤MG-63细胞凋亡的实验研究

目的 探讨环氧化酶-2(COX-2)选择性抑制剂塞来昔布对人骨肉瘤MG-63细胞增殖和凋亡的影响及作用机制.方法 塞来昔布(50 μmol/L或100 μmol/L)和(或)顺铂(10 μg/ml)作用骨肉瘤MG-63细胞48 h后,MTT法测定细胞增殖的抑制率,电子显微镜和流式细胞仪检测细胞凋亡,RT-PCR法检测基因水平COX-2表达变化,Western blot检测COX-2及凋亡相关蛋白表达变化.P13K抑制剂Wortmannin作用MG-63细胞48 h,检测蛋白表达变化.结果 塞来昔布导致MG-63细胞阻滞在G1期,通过激活半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase)-9的内源性凋亡途径诱导细胞凋亡;顺铂单药作用后骨肉瘤MG-63细胞凋亡率为5.93%,而联合应用塞来昔布50μmol/L或100 μmol/L后,凋亡率分别为6.66%和37.15%,与顺铂联合具有明显的协同作用;COX-2蛋白表达未降低.塞来昔布联合顺铂明显降低P13K/Akt、survivin、Bcl-2的表达,检测到caspase-9、caspase-3的激活和PARP裂解片段.Wortmannin作用MG-63细胞48 h,检测到pAkt(Thr308)、Bcl-2、survivin表达下调.结论 塞来昔布可通过非COX-2途径诱导骨肉瘤MG-63细胞凋亡,与P13K/Akt、survivin、Bcl-2蛋白相关,并且PI3K/Akt途径在survivin、Bcl-2表达调控中发挥重要作用.这可能是塞来昔布药物干预的中心环节.     

Smo小干扰RNA对人食管癌EC9706细胞增殖及凋亡的影响

目的 通过Smoothened (Smo)基因位点阻断Hh信号通路抑制食管癌细胞增殖,并诱导其凋亡.方法 运用Smo小干扰RNA(siRNA)转染食管癌EC9706细胞,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot技术检测各组细胞Smo和Glil mRNA及蛋白表达,并以噻唑蓝(MTT)法和流式细胞术检测SmosiRNA对细胞增殖及凋亡的影响.结果 (1)Smo siRNA转染细胞24、48和72 h后,Smo mRNA相对表达量分别为4.20±1.10、2.80±1.10和1.00±0.71;GlilmRNA相对表达量分别为4.60±1.34、3.00±0.71和1.20 ±1.10,与各对照组比较均明显降低(P＜0.05);(2) Smo siRNA转染细胞72 h后,Smo和Glil蛋白相对表达水平分别为0.330±0.016和0.324±0.021,与各对照组比较均明显下降(P＜0.05);(3)SmosiRNA转染细胞72 h后,细胞生长抑制率为(88.06±7.56)％,明显高于各对照组,并随转染时间延长抑制率升高(P＜0.05);(4)SmosiRNA转染细胞72h后,早期凋亡细胞所占的比例均明显增高.结论 Smo基因具有调控食管癌细胞增殖和凋亡的作用.     

自噬在吉西他滨诱导胰腺癌细胞凋亡中的作用

目的:研究自噬在吉西他滨(gemcitabine,Gem)诱导胰腺癌细胞SW1990凋亡中的作用,并以氯喹特异性抑制自噬,以探讨其可能机制。方法:采用CCK8法检测Gem对胰腺癌细胞增殖的影响,并用实时定量PCR检测自噬相关基因LC3的表达,以p62免疫荧光染色检测细胞内自噬泡,通过Western印迹法检测自噬相关蛋白LC3、Beclin 1的表达,并用AnnexinⅤ/PI流式细胞方法检测Gem诱导后细胞凋亡的变化。进一步通过氯喹抑制自噬,检测自噬抑制前后细胞增殖、自噬及凋亡的变化。结果:Gem对胰腺癌细胞SW1990增殖具有部分抑制作用,Gem作用能迅速激活细胞自噬从而产生耐药。LC3的mRNA表达升高1.4~2.2倍(P<0.05),LC3-Ⅱ蛋白水平升高1.5~2.7倍(P<0.05)。Gem和氯喹联合用药组较Gem单药组细胞凋亡蛋白Caspase-3表达升高,细胞存活率从64.3%±3.1%降低为35.2%±3.4%(P<0.05)。结论:自噬在Gem诱导胰腺癌细胞凋亡的过程中可能起到保护作用,氯喹抑制自噬后可增强Gem的促凋亡作用。     

重构型天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶对人肺癌A549细胞的凋亡作用

目的　探讨天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶 (Caspase) 3基因对人肺癌A5 49细胞的凋亡诱导作用。方法　构建Caspase 3的真核表达载体pEGFP Caspase 3 ,转染A549细胞株。用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR )、免疫组织化学等方法检测转染后A549细胞中Caspase 3基因的表达。用荧光显微镜、电镜、四甲基偶氮唑盐 (MTT)比色方法观察Caspase 3对A5 49细胞的抑制、凋亡作用。结果　Caspase 3基因在A5 49细胞中有表达 ;形态学观察证实转染后 48h的细胞株有细胞凋亡 ;转染Caspase 3后 2 4～ 48h细胞生长明显受到抑制。结论　重构型Caspase 3基因对人肺癌A5 49细胞有致凋亡作用。     

环状RNA-7靶向微小RNA-7促进食管鳞癌细胞放疗抵抗的实验研究

目的:探讨环状RNA-7(circularRNA, ciRS)-7在食管鳞癌细胞放疗抵抗中的作用及生物学机制。方法:采用慢病毒转染食管鳞癌细胞系KYSE410和KYSE510构建ciRS-7敲降细胞系(分为正常对照组和sh#1组、sh#2组)。不同剂量射线(2 Gy组、4 Gy组、8 Gy组)照射上述细胞,收集各组细胞...