人乳头瘤病毒16型基因组体外转化活性的研究

目的应用重组的人乳头瘤病毒16型（HPV－16）基因组体外转化NIH／3T3细胞，以评价HPV－16的转化活性。方法将HPV－16基因组正向括人pSV2／neo质粒，构建成pSV2－neo／HPV－16真核细胞表达质粒；用磷酸钙转染法，将其导人体外培养的NIH／3T3细胞；对经转化的细胞进行G418选择培养和核酸杂交分析。结果经选择培养获得了具有恶性表型的转化细胞，其主要表现为接触性抑制消失和非锚地依赖性生长；核酸杂交证明，转化细胞内含有HPV—16DNA序列。结论HPV—16基因组具有体外转化NIH/3T3细胞的活性。     

人乳头瘤病毒16型体外感染HaCaT细胞的研究

目的研究人乳头瘤病毒(HPV)16型病毒颗粒体外感染HaCaT细胞后感染标志的表达。方法从临床CIN或宫颈癌中提取HPV16病毒颗粒,用于感染单层培养的HaCaT细胞,用PCR检测感染后HaCaT细胞中HPV DNA的存在。结果 PCR方法可检测到被HPV16型病毒颗粒感染的HaCaT内有HPV DNA的存在,而用保护性抗体中和后的病毒颗粒再感染的HaCaT细胞内则没有HPV DNA的存在。结论 HPV16可以在体外培养系统中感染HaCaT细胞。     

生物素化HPV 16 DNA探针与人宫颈癌组织DNA分子杂交的研究

作者运用分子生物学方法,制备了生物素标记人乳头状瘤病毒(HPV)16型DNA探针,用斑点杂交检测宫颈癌组织DNA中HPV 16 DNA相关序列。在28例宫颈癌组织中,有16例呈HPV 16 DNA杂交阳性,阳性率为57％;4例正常宫颈组织呈阴性反应;4例宫颈慢性炎症中有1例呈阳性反应。实验阳性对照HPV 16质粒DNA呈杂交强阳性,以λ-噬菌体DNA及NIH/3T3小鼠成纤维细胞DNA为实验阴性对照,均呈杂交阴性。结果证明,HPV的基因组存在于宫颈癌组织中,提示HPV的感染与宫颈癌的发生有关。本实验采用生物素标记HPV 16 DNA探针,检测特异性强,方法简便,为开展宫颈癌病毒病因的普查及其研究,提供了一个快速敏感的方法。     

用~(32)P标记的人乳头瘤病毒DNA检测宫颈病变组织DNA中病毒序列

使用Southern blot杂交方法对33例宫颈病变标本进行了检测,发现在26例宫颈癌中,6例存在HPV16DNA同源序列,占23％。HPV18同源序列占7.6％(2/26)。HPVX1同源序列为11.5％(3/26)。HPV16相关序列为27％(7/26)。而在4例慢性宫颈炎中仅有1例含HPV16相关序列,1例尖锐湿疣中含HPV16相关序列。     

用32P标记的人乳头瘤病毒DNA检测宫颈病变组织DNA中病毒序列

使用Southern blot杂交方法对33例宫颈病变标本进行了检测,发现在26例宫颈癌中,6例存在HPV16DNA同源序列,占23%。HPV18同源序列占7.6%(2/26)。HPVX1同源序列为11.5%(3/26)。HPV16相关序列为27%(7/26)。而在4例慢性宫颈炎中仅有1例含HPV16相关序列,1例尖锐湿疣中含HPV16相关序列。     

人乳头瘤病毒和人子宫颈鳞状上皮细胞癌关系的超微结构与基因分子

以人乳头瘤病毒(HPV)DNA为探针,通过核酸杂交方法,检测宫颈癌病人活体细胞DNA中的病毒相关序列,用透射电镜观察癌细胞的形态特点。32例宫颈癌组织中23例与HPV16型探针杂交呈阳性反应,阳性率为72％。杂交阳性的癌细胞核内小体的出现率增加。     

HPV16 E7“自杀性”DNA疫苗的构建及其体外表达特性研究

目的构建人乳头瘤病毒16型（HPV16）E7基因的“自杀性”DNA疫苗，并研究其体外表达能力及诱导细胞凋亡作用。方法以pET32／E7质粒为模板，用PCR方法扩增HPV16 E7基因，构建真核表达重组质粒pSCA／E7，经PCR、酶切和测序鉴定正确后，将重组质粒转染BHK-21细胞，然后用免疫荧光技术检测HPV16 E7在细胞中的表达，用dUTP缺口末端标记技术（TUNEL）进行染色检测其诱导细胞凋亡作用。结果PCR扩增得到约400bp的目的基因片段，测序结果与GenBank中的东亚型HPV16 E7基因序列100％同源。免疫荧光技术检测证实，pSCA／E7重组质粒能在BHK-21细胞中表达目的基因。TUNEL检测证实，pSCA／E7重组质粒能诱导被转染的BHK-21细胞发生凋亡。结论成功构建HPV16 E7基因的重组质粒pSCA／E7，该重组质粒可在BHK-21细胞中表达，并能诱导被转染的细胞发生凋亡。     

应用聚合酶链反应检测宫颈分泌物人乳头瘤病毒

聚合酶链反应(PCR)检测人乳头瘤病毒(HPV),研究比较多。本实验主要检测宫颈分泌物人乳头瘤病毒6、11、16、18、33型,因其各型所致疾病互有交叉,故挑选一段针对HPV,各型共同的DNA序列,用PCR技术检出该核酸片段。在宫颈炎、阴道炎、尖锐湿疣病人中阳性率达31.25％(20/64)。说明人乳头瘤病毒对已婚育妇女普遍易感。检测HPV对宫颈炎、阴道炎、尖锐湿疣等妇科疾病的诊断治疗及宫颈癌的防治具有重要意义。     

HPV16 E7"自杀性"DNA 疫苗的构建及其体外表达特性研究

目的构建人乳头瘤病毒16型(HPV16)E7基因的"自杀性"DNA疫苗,并研究其体外表达能力及诱导细胞凋亡作用。方法以pET32/E7质粒为模板,用PCR方法扩增HPV16 E7基因,构建真核表达重组质粒pSCA/E7,经PCR、酶切和测序鉴定正确后,将重组质粒转染BHK-21细胞,然后用免疫荧光技术检测HPV16 E7在细胞中的表达,用dUTP缺口末端标记技术(TUNEL)进行染色检测其诱导细胞凋亡作用。结果PCR扩增得到约400 bp的目的基因片段,测序结果与GenBank中的东亚型HPV16 E7基因序列100%同源。免疫荧光技术检测证实,pSCA/E7重组质粒能在BHK-21细胞中表达目的基因。TUNEL检测证实,pSCA/E7重组质粒能诱导被转染的BHK-21细胞发生凋亡。结论成功构建HPV16 E7基因的重组质粒pSCA/E7,该重组质粒可在BHK-21细胞中表达,并能诱导被转染的细胞发生凋亡。     

人乳头状瘤病毒16E7在人喉癌细胞系中的转染及表达

目的:构建含人乳头状瘤病毒16E7(HPV16E7)基因的真核表达载体,观察HPV16E7对人喉癌HEp-2细胞系生物学特性的影响,为后续实验提供研究对象.方法:以含HPV16E7基因的中间质粒pET28a-HPV16E7为模板扩增出HPV16E7基因全长序列,将其克隆到真核表达载体pcDNA3.1/myc-His(-) B中,并进行序列分析和酶切鉴定.电穿孔法将重组体pcDNA3.1/myc-His-HPV16E7转染入喉癌HEp-2细胞中,Western 印迹法检测HPV16E7蛋白的表达,相差显微镜观察转染前后的HEp-2细胞系形态学变化,流式细胞仪检测转染前后细胞生长周期的改变.结果:成功构建并将pcDNA3.1/myc-His-HPV16E7转染入人喉癌HEp-2细胞中;转染后HEp-2细胞增生活跃,S期明显延长,并能够稳定表达HPV16E7蛋白.结论:HPV16E7有促进HEp-2细胞的致瘤活性;真核表达载体pcDNA3.1/myc-His-HPV16E7可为下一步建立动物模型和喉癌体外治疗实验提供研究工具.     

宫颈癌人乳头瘤病毒与人巨细胞病毒感染的病例对照研究

了解宫颈癌患者及对照患者宫颈组织中人乳头瘤病毒（HPV）与人巨细胞病毒（HCMV）的感染状况。应用聚合酶链反应方法检测宫颈新鲜活检组织HPV与HCMV。36例宫颈癌及38例子宫肌瘤患者的宫颈组织中，HPV合并入HCMV感染检测阴性率分别为2．8％和31.6％，HPV单独感染的检出率分别为25.0％和15.8％（P＜0.05），OR＝18.0；HCMV单独感染的检出率分别为83％和289％（P＞0.05），OR＝3．27；HPV合并HCMV感染的检出率分别为63.9％和30.7％（P＜0．01），OR＝30.7。在β-球蛋白基因阳性的27例宫颈癌及30例子宫肌瘤患者的宫颈组织中，HPV合并HCMV感染检测阴性率分别为3.7％和36.7％，HCMV单独感染的检出率分别为11.1％和20.0％（P＜0.05），OR=5．50。结论：HPV感染和江西的宫颈癌密切相关。HCMV感染可能在宫颈癌发生过程中与PIPV感染发生相关作用。     

人正常生育期子宫肌肉的鞘糖脂组成

从正常生育期人子宫肌肉组织分离、纯化了神经节苷脂(Gls)和中性鞘糖脂(N-GSL),测定了两类鞘糖脂的含量、对其组分进行 HPTLC 谱分析,并通过酶水解法对 Gls 主要成份作了鉴定。结果表明子宫肌肉组织的 Gls中 GD_3含量高达56. 6%,其次为 GM_3占16. 9%,GT_(1b)占9. 8%。此外,还有少量 GM_1、 GD_(1a)、与 GD_(1b)。N-GSL 主要组分为 CTH 和 CQH,各为30. 5%与35. 4%,次为 CDH 占16. 8%,CMH 与含多糖基(≥5个糖基)的组分各<10%。本样品每100克湿重神经节苷脂含量约3. 48mg(以唾液酸表示),N-GSL 为3. 71mg(以鞘氨醇表示)。     

人胆结石中提取胆红素研究

以人的胆结石为原料,根据其所含各种成分对不同溶剂溶解度的不同,用化学分离的方法,除去胆红素以外的其他成分,成功地将胆红素提取出来,从而为胆红素的来源开辟了新的途径。     

巨细胞病毒的分离

从3例正常孕妇的宫颈分泌物和2例有黄疸、肝脾肿大的病婴尿中分离到5株巨细胞病毒(CMV),在2BS细胞上引起CMV典型病变的时间分别是在接种后的7,9,10,28天,血清抗CMV效价:例1为1:32,其母>1:64,例3脐带血与母血均为1:16,例2为1:32,经SPA吸收后1:20的血清仍为++。