鲍曼不动杆菌Ⅰ类整合子与多重耐药相关性研究

目的 了解临床分离鲍曼不动杆菌的耐药状况、Ⅰ类整合子的分布情况,探讨Ⅰ类整合子与多重耐药的关系.方法 检测20种临床常用抗菌药物对鲍曼不动杆菌临床分离株的最低抑菌浓度(MIC).PCR扩增Ⅰ类整合酶基因.对部分Ⅰ类整合酶阳性菌株进行耐药基因盒序列分析.结果 鲍曼不动杆菌呈现多重耐药,鲍曼不动杆菌对IMP和MRP耐药率分别为0.9%和1.8%,对CPZ/SB的耐药率为35.7%,对其它抗菌药物的耐药率均大于60%,多重耐药率为76.8%(86/112),但对COL和MIN均敏感.80.4%(90/112)的菌株检测出Ⅰ类整合子.Ⅰ类整合子阳性株对多种药物的耐药率均高于阴性株,且Ⅰ类整合子阳性株多重耐药率(90%)明显高于阴性株(22.7%)(P<0.01).Ⅰ类整合子基因盒序列分析显示,Ⅰ类整合子携带aacA4,catB8和aadA13种耐药基因.结论 Ⅰ类整合子在鲍曼不动杆菌中检出率很高并与其多重耐药性关系密切.     

细菌耐药整合子intⅠ分类的多重PCR方法的建立及应用

目的 建立快速筛选细菌耐药整合子的分类方法，并对21株来自临床的菌株进行整合子筛选和分类。方法 根据GenBank／EMBL内的第一、第二和第三类的整合酶序列，通过软件Clustal W的多重比对分析设计出各类整合子的特异性引物，用对照菌株建立多重PCR方法并对21株临床菌株进行PCR扩增，通过其PCR扩增产物片段大小的不同进行整合子分类。结果 对照菌株实验结果显示，21株临床分离菌株中，15株在565bp处有扩增片段，即为含有第一类整合酶基因；4株在403bp处有扩增片段，即含有第二类整合酶基因；1株在565bp和403bp处均有扩增片段，提示其同时含有第一、二类整合酶基因；1株没有得到任何扩增片段，即不含有这三类整合酶基因；在被测菌株中未发现第三类整合酶基因的阳性菌株。结论 本文报道的筛选细菌耐药整合酶基因分类的多重PCR方法效果良好，具有可行性，为更加全面细致研究整合子类型以及整合子介导的细菌耐药机制提供了一种简单易行、快捷有效的方法。     

细菌耐药整合子intI分类的多重PCR方法的建立及应用

目的建立快速筛选细菌耐药整合子的分类方法,并对21株来自临床的菌株进行整合子筛选和分类。方法根据G enB ank/EM BL内的第一、第二和第三类的整合酶序列,通过软件C lustalW的多重比对分析设计出各类整合子的特异性引物,用对照菌株建立多重PCR方法并对21株临床菌株进行PCR扩增,通过其PCR扩增产物片段大小的不同进行整合子分类。结果对照菌株实验结果显示,21株临床分离菌株中,15株在565bp处有扩增片段,即为含有第一类整合酶基因;4株在403bp处有扩增片段,即含有第二类整合酶基因;1株在565bp和403bp处均有扩增片段,提示其同时含有第一、二类整合酶基因;1株没有得到任何扩增片段,即不含有这三类整合酶基因;在被测菌株中未发现第三类整合酶基因的阳性菌株。结论本文报道的筛选细菌耐药整合酶基因分类的多重PCR方法效果良好,具有可行性,为更加全面细致研究整合子类型以及整合子介导的细菌耐药机制提供了一种简单易行、快捷有效的方法。     

临床药师会诊多重耐药及泛耐药细菌感染79例分析

目的:调查临床药师对多重耐药及泛耐药细菌感染病例进行会诊的效果,探讨多重耐药及泛耐药细菌感染的特点与治疗策略。方法:回顾性调查79例经临床药师会诊的多重耐药、泛耐药细菌感染病例,分析病原菌分布、耐药情况、治疗方案、治疗结果及药学监护相关情况。结果:临床药师提供的用药方案接受率为91.1%,其中临床有效率为93.94%,细菌清除率为67.42%,没有出现菌群失调;泛耐药菌以鲍曼不动杆菌及铜绿假单胞菌为主,多重耐药菌以产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的大肠埃希菌、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)及阴沟肠杆菌为主,对多种临床常用抗菌药物有高度耐药性;对多重耐药菌,亚胺培南/西司他丁、万古霉素、头孢西丁、左氧氟沙星、阿米卡星等有较好效果;4例泛耐药菌感染病例采用哌拉西林/他唑巴坦+左氧氟沙星、头孢美唑+阿米卡星、头孢西丁+磷霉素,取得了治愈的效果。结论:临床药师参与多重耐药感染病例治疗取得良好效果,应充分重视临床药师工作,发挥其重要作用;需高度重视泛耐药菌、多重耐药菌的耐药问题,可采用选择敏感率高的药物、联合用药、口服肠道活菌制剂等策略进行治疗,同时应加强抗菌药物合理应用和分级使用等管理措施,控制耐药细菌的蔓延。     

健康人群中大肠埃希菌耐药整合子的检测

目的 了解上海市浦东新区健康人群中肠道大肠埃希菌的耐药情况,并检测其耐药整合子的携带情况和结构.方法 采用纸片扩散法(E-B法)检测17种抗生素药物的敏感性;PCR法扩增1、2、3类整合酶,对1类整合酶阳性样本进一步扩增整合子;扩增产物经限制性内切酶分析测序后,分析其所携带的基因盒结构和可能的功能.结果 浦东新区健康人群中肠道大肠埃希菌多重耐药率为63.5%,耐药性主要集中在老一代抗生素,对较新的抗生素仍然敏感.1、2类整合酶的检出率分别为38.5%、4%,且有1%同时检测到1、2类整合酶,未检测到3类整合酶.结论 健康人群中肠道大肠埃希菌耐药现象已非常普遍,耐药整合子在人群中分布也比较广泛,已成为耐药基因的储存,但和临床相比还有差别.     

奇异变形菌中整合子分布及耐药性分析

目的 了解院内奇异变形菌中各类整合子的携带分布情况、阳性菌株可变区基因盒类型以及其与宿主菌耐药表型的相关性,从而为临床治疗和院内感染控制提供参考。方法 采用PCR扩增和琼脂糖凝胶电泳等方法,将本院2016年1月—2018年12月份从临床标本中分离得到的150株奇异变形菌进行第1、2和3类整合子的筛选,并对整合子阳性菌株可变区进行测序分析以及宿主菌的耐药性进行相关性分析。结果 150株奇异变形菌中携带整合子的菌株共有91株,阳性率为60.7%,其中第1类整合子阳性菌株有30株,占20.0%;第2类整合子阳性菌株22株,占14.7%;同时携带第1和2类菌株39株,占26.0%;未筛出第3类整合子;在91株整合子阳性菌株中,86株可变区出现扩增产物条带,其余5株可变区未见扩增产物;第1类整合子阳性菌株可变区携带的耐药基因盒主要为AadA2、DfrA32,第2类整合子阳性菌株可变区携带耐药基因盒主要为DfrA1;可变区携带AadA2的菌株对庆大霉素和妥布霉素的耐药率显著高于整合子阴性菌株(P<0.01),可变区携带DfrA1或DfrA32的菌株对复方磺胺甲噁唑(即甲氧苄啶/磺胺甲噁唑)的耐药率也明显高于整合子阴性菌株(P<0.01);91株整合子阳性菌株对氨苄西林/舒巴坦、复方磺胺甲噁唑、环丙沙星、庆大霉素、头孢曲松、妥布霉素和左氧氟沙星的耐药率均显著高于整合子阴性菌株(P<0.01)。结论 临床分离的奇异变形菌携带整合子的比例较高,其可变区所携带的耐药基因主要为编码氨基糖苷类和甲氧苄氨嘧啶类抗菌药物的基因,整合子的携带与宿主菌产生的耐药性呈高度相关。     

奇异变形菌中整合子分布及耐药性分析

目的 了解院内奇异变形菌中各类整合子的携带分布情况、阳性菌株可变区基因盒类型以及其与宿主菌耐药表型的相关性,从而为临床治疗和院内感染控制提供参考。方法 采用PCR扩增和琼脂糖凝胶电泳等方法,将本院2016年1月—2018年12月份从临床标本中分离得到的150株奇异变形菌进行第1、2和3类整合子的筛选,并对整合子阳性菌株可变区进行测序分析以及宿主菌的耐药性进行相关性分析。结果 150株奇异变形菌中携带整合子的菌株共有91株,阳性率为60.7%,其中第1类整合子阳性菌株有30株,占20.0%;第2类整合子阳性菌株22株,占14.7%;同时携带第1和2类菌株39株,占26.0%;未筛出第3类整合子;在91株整合子阳性菌株中,86株可变区出现扩增产物条带,其余5株可变区未见扩增产物;第1类整合子阳性菌株可变区携带的耐药基因盒主要为AadA2、DfrA32,第2类整合子阳性菌株可变区携带耐药基因盒主要为DfrA1;可变区携带AadA2的菌株对庆大霉素和妥布霉素的耐药率显著高于整合子阴性菌株(P<0.01),可变区携带DfrA1或DfrA32的菌株对复方磺胺甲噁唑(即甲氧苄啶/磺胺甲噁唑)的耐药率也明显高于整合子阴性菌株(P<0.01);91株整合子阳性菌株对氨苄西林/舒巴坦、复方磺胺甲噁唑、环丙沙星、庆大霉素、头孢曲松、妥布霉素和左氧氟沙星的耐药率均显著高于整合子阴性菌株(P<0.01)。结论     

基因盒-整合子系统介导细菌多重耐药的研究进展

基因盒-整合子系统是一种可移动基因元件，可捕获表达耐药基因，并通过质粒或转座子在细菌中水平传播。现就整合子的发现、结构、分类；整合子对基因盒的捕获、表达；整合子与细菌耐药性的关系以及整合子的检测等方面进行综述。     

重症监护室多重耐药鲍曼不动杆菌整合子与耐药相关性研究

目的：了解鲍曼不动杆菌整合子分布情况,探讨发现的整合子与其耐药性的关系。方法：分离2014—2015年重症监护室（ICU）多重耐药鲍曼不动杆菌,用VITEK2全自动微生物鉴定系统进行菌种鉴定及药敏检测,聚合酶链反应（PCR）检测整合子可变区。结果：鲍曼不动杆菌对ICU常用药物除头孢哌酮舒巴坦外耐药率均超过50%,整合子结构的检出率为82.81%,可变区包含arr-3+aacA4和aacA4+catB8+aadA1,属于两种Ⅰ类整合子。结论：ICU的多重耐药鲍曼不动杆菌广泛存在Ⅰ类整合子结构,介导对氨基糖苷类、氯霉素和利福平耐药,对ICU多重耐药鲍曼不动杆菌的耐药基因有待进一步检测。     

鲍曼不动杆菌整合子阳性与多重耐药的相关性研究

目的在鲍曼不动杆菌中检测1~3类整合子,并分析整合子对细菌多重耐药性的影响。方法用琼脂二倍稀释法测定24种抗菌药物对临床分离68株鲍曼不动杆菌的抗菌活性,用聚合酶链反应进行整合子的初筛,对整合子阳性的菌株进行测序,并分析其多重耐药性。结果在68株临床分离多重耐药鲍曼不动杆菌中,发现19株I类整合子阳性,占27.9%;未检测到II、III类整合子。整合子阳性菌株对青霉素类(哌拉西林)、头孢菌素类(头孢噻肟、头孢哌酮、头孢曲松、头孢他啶、头孢吡肟)、氨基糖苷类、四环素类均呈现出高度耐药为86.7%~100%;对第3代头孢菌素类(头孢噻肟、头孢哌酮、头孢曲松)为100%耐药;对β内酰胺酶抑制剂复合制剂耐药率也达82.5%以上。比较整合子阳性与整合子阴性鲍曼不动杆菌耐药性,发现对氨基糖苷类、磺胺类抗菌药物耐药率差异有统计学意义。结论鲍曼不动杆菌耐药性严重,I类整合子广泛地存在于鲍曼不动杆菌中,I类整合子阳性菌株对氨基糖苷类、磺胺类抗菌药物的耐药率大于整合子阴性的菌株,提示整合子对细菌耐药性的播散有重要作用。     

反向PCR法扩增沙门菌第一类整合子旁翼基因序列

目的第一类整合子在介导细菌耐药中起重要作用。本研究采用反向PCR方法对第一类整合子旁翼序列进行分析。方法以具有典型第一类整合子结构的茨昂威沙门菌（S．tsh／ongwe）S191为研究对象，分别用EcoRV和Hind Ⅲ两种限制性内切酶对基因组DNA进行酶切。并对酶切产物进行自身环化，通过设计第一类整合酶基因的反向引物来扩增第一类整合子的旁翼序列。结果分别扩增得到1500和6000bp左右大小的第一类整合子旁翼序列。结论进一步明确了第一类整合子的结构，并为第一类整合子调控因子的分析和克隆奠定研究基础。     

Quinolone resistance in bacteria: emphasis on plasmid-mediated mechanisms

Bacterial resistance to quinolones/fluoroquinolones has emerged rapidly and such resistance has traditionally been attributed to the chromosomally mediated mechanisms that alter the quinolone targets (i.e. DNA gyrase and topoisomerase IV) and/or overproduce multidrug resistance efflux pumps. However, the discovery of the plasmid-borne quinolone resistance determinant, named qnr, has substantially broadened our horizon on the molecular mechanisms of quinolone resistance. Several recent reports of Qnr or its homologues encoded by transferable plasmids in Gram-negative bacteria isolated worldwide highlight the significance of the emerging plasmid-mediated mechanism(s). This also alerts us to the potential rapid dissemination of quinolone resistance determinants. Qnr belongs to the pentapeptide repeat family and protects DNA gyrase from the action of quinolone agents including the newer fluoroquinolones. This protection interplays with chromosomal mechanisms to raise significantly the resistance levels. The qnr-bearing strains generate quinolone-resistant mutants at a much higher frequency than those qnr-free strains. Furthermore, the qnr-plasmids are integron-associated and carry multiple resistance determinants providing resistance to several classes of antimicrobials including β-lactams and aminoglycosides. The high quinolone resistance rates in Escherichia coli are used to address issues of quinolone resistance, and possible strategies for minimising quinolone resistance are discussed.     

临床分离革兰阴性菌整合子研究

目的 了解临床分离革兰阴性菌整合子的产生情况及整合子在细菌耐药中的作用.方法 E实验测定细菌对11种抗生奈及抗生素复合制剂的最低抑菌浓度,PCR扩增三种整合酶基因及Ⅰ型整合子的可变区,并对可变区的扩增产物进行克隆、测序.结果 16株革兰阴性菌中,6株含Ⅰ型整合子,所含基因盒主要是妒dfr/dhf及aadA基因盒.结论 整合子在不同革兰阴性菌中广泛存在,与细菌的多重耐药尤其是对氨基糖苷类抗生素的耐药密切相关.     

多重耐药泵抑制剂提高肠球菌对氟喹诺酮药物敏感性的研究

目的　研究临床分离肠球菌对诺氟沙星、环丙沙星、氧氟沙星等氟喹诺酮药物耐药的主动泵出机制。方法　收集临床分离肠球菌 ;用琼脂二倍稀释法测定多重耐药泵抑制剂利舍平或维拉帕米应用前后 ,菌株对氟喹诺酮药物 MIC的变化。结果　利舍平使所有被检测的 2 9株肠球菌对诺氟沙星的敏感性增加 (MIC下降至原值的 1/ 2或以下 ) ,使 2 3株肠球菌对环丙沙星的敏感性增加 ,但仅能增加 3株肠球菌对氧氟沙星的敏感性。应用利舍平以后 ,12株耐诺氟沙星粪肠球菌对诺氟沙星 MIC值均下降 ,11株耐环丙沙星粪肠球菌有7株对环丙沙星 MIC值下降。维拉帕米的抑制效果和利舍平相比略有差异。结论　诺氟沙星、环丙沙星的主动泵出机制普遍存在于临床分离肠球菌 ,并且是粪肠球菌对诺氟沙星、环丙沙星的耐药机制之一。     

硝酸银使临床分离多重耐药革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌重新对阿米卡星敏感（英文）

高浓度的硝酸银可抑制所有检测的临床分离耐多重药菌株（最小抑菌浓度为32–64μM）。本研究报道了阿米卡星与亚致死量（15μM）的硝酸银在体外联用对临床分离多重耐药菌的作用。硝酸银可使原本已对阿米卡星耐药的泛耐药鲍曼不动杆菌和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌重新变敏感（将原本都大于128μg/mL的最小抑菌浓度分别降低至2–16μg/mL和32μg/mL）。硝酸银同样可以将阿米卡星对能够产生超广谱β内酰胺酶的绿脓杆菌和大肠杆菌的最小抑菌浓度分别由16–32μg/mL和16μg/mL降至〈1–4μg/mL和〈1μg/mL。     

Development and characterization of a replicon-based phenotypic assay for assessing HCV NS4B from clinical isolates

The hepatitis C virus (HCV) NS4B inhibitors have shown potent inhibition of HCV replication in vitro. To assess the effect of viral diversity on the susceptibility to NS4B inhibitors, genotype (GT)-specific GT1a and GT1b replicon shuttle vectors were designed and created for cloning HCV NS4B genes from clinical isolates. For the GT1b NS4B shuttle vector, the S2204I adaptive mutation was introduced in NS5A to improve replication due to the replacement of the K1846T adaptive mutation in NS4B with NS4B from the clinical isolates. In addition to the adaptive mutations, a newly identified Huh-7 cell line, Huh-7-1C, which is highly permissive for both GT1a and GT1b replication, was used to further enhance the replication levels. HCV NS4B gene from clinical isolates was amplified and inserted into the corresponding GT1a and GT1b modified lab strain chimeric replicons. GT1a and GT1b chimeric replicons expressing diverse NS4B genes from corresponding subtypes of clinical isolates replicated at highly efficient levels for phenotypic analysis. Due to natural variation in their amino acid residues in NS4B, these isolates displayed varying drug susceptibilities to an NS4B inhibitor. In mixed populations with wild-type, the sensitivity of resistance detection of NS4B resistant mutants H94R and V105M was between 20% and 80%. The chimeric shuttle vectors can be used to characterize the activity of antiviral drugs targeting NS4B from diverse natural clinical isolates and aid in the development of novel compounds against HCV NS4B.     

2002年临床常见革兰氏阴性杆菌耐药性监测

目的　调查国家细菌耐药性监测网临床常见革兰氏阴性杆菌对各种抗菌药物的耐药性现状。方法　药物敏感性试验采用纸片扩散法 ,耐药性数据分析采用 WHONET5软件。结果　 2 0 0 2年国家细菌耐药性监测网 8个省、市、自治区的 5 7家三级甲等医院共收集患者首次分离株 2 4 82 6株 ;大肠埃希氏菌、铜绿假单胞菌和肺炎克雷伯氏菌是最常见菌。主要标本为痰、尿和伤口及分泌物 ,分别占全部标本的 4 7.9% ,16 .8%和 10 .4 %。绝大多数肠杆菌科细菌对亚胺培南和美罗培南敏感 ,其次为第三代头孢菌素、含酶抑制剂的头孢菌素及阿米卡星。 15 % (15 .6 %～ 5 1.2 % )的肠杆菌、柠檬酸杆菌、沙雷氏菌和普罗威登氏菌对第三代头孢菌素耐药。除大肠埃希氏菌外 ,环丙沙星和左氧氟沙星对其他肠杆菌科细菌的耐药率低于 30 % (6 .0 %～ 2 9.7% ) ;产超广谱β-内酰胺酶 (ESBL s)的大肠埃希氏菌和肺炎克雷伯氏菌株的检出率分别为 18.2 %和 2 2 .6 % ;铜绿假单胞菌对亚胺培南和美罗培南的耐药率分别为 19.1%和 15 .2 %。鲍氏不动杆菌对碳青霉烯类抗生素较敏感 ,但对头孢哌酮、头孢他啶和阿米卡星的耐药率分别为 5 2 .8% ,4 1.6 %和 31.8%。结论　细菌耐药性问题是抗感染治疗的主要威胁 ,合理使用抗菌药物以降低耐药性和采取有效措     

3390株临床分离菌分布及耐药性分析

目的：了解医院临床分离菌的构成及其耐药性,为临床合理使用抗菌药物提供参考依据。方法统计2013年医院临床分离菌,对其分布和耐药性进行分析。结果分离的3390株临床分离菌中,革兰阴性菌占63,1％;革兰阳性菌占27,1％;真菌占9,8％。革兰阴性菌中大肠埃希菌的比率最高,为24,5％,肺炎克雷伯菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌和鲍曼不动杆菌分别占13,3％、10,3％、9,5％和5,9％。肠杆菌科细菌对亚胺培南未出现耐药。铜绿假单胞菌对氨基糖苷类、碳青霉烯类抗生素、左氧氟沙星、头孢他啶耐药率均＜15％。鲍曼不动杆菌对多黏菌素和头孢哌酮舒巴坦的耐药率相对较低,分别为1,8％和23,6％,对亚胺培南和美罗培南的耐药率分别为48,6％和47,8％。金黄色葡萄球菌和凝固酶阴性葡萄球菌中对甲氧西林耐药株所占比率分别为42,1％和56,6％。未检出对利奈唑胺、万古霉素和替考拉宁耐药的革兰阳性球菌。红霉素、克林霉素、复方磺胺甲恶唑和头孢唑林等对葡萄球菌属耐药率＞50％,青霉素耐药率近100％,但对肺炎链球菌仍全敏感。呋喃妥因对粪肠球菌耐药率＜10％,而青霉素、氨苄西林、氯霉素、左氧氟沙星对其耐药率近30％。白色念珠菌对常用抗真菌药耐药率＜40％。结论医院临床分离菌耐药较严重,应采取有效干预措施加强监管,合理使用抗菌药物,减缓细菌耐药。