血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1在人脐静脉内皮细胞表达CD40中的作用

目的研究氧化低密度脂蛋白对人脐静脉内皮细胞表达CD40中血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1的作用。方法在氧化低密度脂蛋白作用人脐静脉内皮细胞前预先用血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1阻断剂角叉(菜)胶(κ-carrageenan)和多聚肌苷酸(PIA)作用1h,应用亲合组织化学技术检测血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1的表达,流式细胞技术检测细胞表面CD40的表达。结果预先加入血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1阻断剂PIA和角叉(菜)胶的CD40的表达低于氧化低密度脂蛋白组(P<0.05)。结论在人脐静脉内皮细胞的炎症反应中,氧化低密度脂蛋白通过血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1途径激活了CD40的表达。     

氧化型低密度脂蛋白经血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1途径诱导血管内皮细胞损伤

探讨氧化型低密度脂蛋白致血管内皮细胞损伤的作用 ,并从血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体 1的途径探讨损伤作用的机制。用1 2 5I标记的氧化型低密度脂蛋白进行放射性配基结合实验及配基竞争性抑制实验检测培养的人脐静脉内皮细胞中存在的特异性氧化型低密度脂蛋白受体 ,2 ,4 二硝基笨肼法测定乳酸脱氢酶活性 ,台盼兰染色、相差显微镜下观察细胞的形态学变化并计数细胞的存活率。结果发现 ,人脐静脉内皮细胞膜上存在与氧化型低密度脂蛋白高亲和力的结合位点 ,Scatchard分析Kd为 38.4± 18.8mg L、Bmax为 181.5± 5 5 .5ng 10 6 cells。氧化型低密度脂蛋白与人脐静脉内皮细胞作用 2 4h ,随着氧化型低密度脂蛋白剂量的增加 ,不仅显著增加人脐静脉内皮细胞释放乳酸脱氢酶的量 ,而且使人脐静脉内皮细胞的存活率下降 ,血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体 1受体阻滞剂聚肌苷酸和爱兰苔胶可以阻断氧化型低密度脂蛋白的上述损伤作用。结果提示 ,血管内皮细胞表达氧化型低密度脂蛋白受体血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体 1,氧化型低密度脂蛋白诱导对血管内皮细胞的损伤作用可能是通过血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体 1的受体途径。     

辛伐他汀抑制TNF-α诱导的血凝素样氧化低密度脂蛋白受体表达

目的:观察辛伐他汀抑制TNF-α诱导血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体(LOX-1)表达。方法:培养并鉴定牛主动脉内皮细胞,以TNF-α进行诱导,部分用辛伐他汀作干预,通过逆转录聚合酶链反应和Westernblot蛋白印迹分析检测LOX-1mRNA和蛋白的表达。结果:TNF-α上调LOX-1表达(P<0.05),并呈浓度和时间依赖性(P<0.05);辛伐他汀明显抑制TNF-α诱导的LOX-1表达(P<0.05),且高浓度组较低浓度组的抑制作用更强(P<0.05)。结论:TNF-α可以通过LOX-1导致内皮功能障碍,辛伐他汀抑制TNF-α诱导LOX-1的表达可能是其非调脂抗动脉粥样硬化机制之一。     

靶向血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1基因的发卡样siRNA表达载体的构建及其效应

目的设计合成有效的靶向血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1基因的发卡样siRNA(shRNA)表达载体。方法根据siRNA的设计原则,以血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1为靶基因设计并合成小发卡结构两端配对的siRNA寡核苷酸链,再经变性、复性后形成双链血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1shRNA。采用DNA重组技术,将血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1shRNA双链与线性化pGenesil-1质粒表达载体连接,脂质体法转染人脐静脉内皮细胞株,半定量逆转录聚合酶链反应法检测血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1mRNA的表达。结果测序鉴定发现插入的发卡样序列正确,成功合成了发卡样血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1基因RNA干扰表达载体;靶向血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1基因的发卡样siRNA表达载体转染人脐静脉内皮细胞株后,其凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1mRNA的表达显著下调。结论成功构建了能有效抑制血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1mRNA表达的发卡样血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1基因RNA干扰表达载体,为进一步利用RNA干扰技术防治动脉粥样硬化提供一种研究基础。     

氧化低密度脂蛋白通过血凝素样氧化低密度脂蛋白受体1诱导血管内皮细胞粘附分子的表达

目的探讨血凝素样氧化低密度脂蛋白受体1（LOX-1）在氧化低密度脂蛋白（ox—LDL）诱导血管内皮细胞粘附分子表达中的作用。方法用不同浓度ox-LDL培养人脐静脉内皮细胞（HUVECs）,用RrealtimeRT—PCR测定LOX-1 mRNA的表达;RT—PCR测定细胞间粘附分子1（ICAM-1）、血管细胞粘附分子1（VCAM-1）以及E选择素的mRNA表达;用Westernblot测定LOX-1、ICAM-1、VCAM-1以及E选择素蛋白的表达,观察ox-LDL对血管内皮细胞粘附分子表达的影响。HUVECs预先用聚肌苷酸[poly（I）]和爱兰苔胶处理,再用ox—LDL培养,再分别测定上述粘附分子的表达水平,比较加入LOX-1阻断剂前后粘附分子表达的变化。结果ox-LDL各剂量组皆可上调LOX-1、ICAM-1、E选择素的mRNA和蛋白表达（P〈0．01）,在10～50μm/ml剂量范围内呈现明显的剂量一效应关系（P〈0．01）,但ox—LDL对VCAM-1的表达没影响。HUVECs预先与250μg／ml的poly（Ⅰ）或爱兰苔胶作用2h,然后加入50μg/ml的ox—LDL作用24h。poly（Ⅰ）和爱兰苔胶都能抑制ox—LDL诱导的LOX-1、ICAM-1和E选择素的mRNA和蛋白表达水平,与未阻断组相比,差异皆有统计学意义（P〈0．01）。结论ox—LDL可以上调血管内皮细胞粘附分子的表达,LOX-1受体阻断剂可以部分阻断ox—LDL的上调作用,ox-LDL诱导血管内皮细胞粘附分子的表过是通过LOX-1介导的。     

同型半胱氨酸对血管内皮细胞血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1 mRNA表达及氧化型低密度脂蛋白摄取的影响

为了研究同型半胱氨酸对血管内皮细胞血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1mRNA表达及对氧化型低密度脂蛋白摄取的影响，分别在培养的人脐静脉内皮细胞中加入不同浓度的同型半胱氨酸孵育48h后，利用逆转录-聚合酶链反应检测血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1mRNA表达的改变；采用放射配基法检测细胞对氧化型低密度脂蛋白的摄取。结果发现，随着同型半胱氨酸浓度的增加。提示同型半胱氨酸能促进脐静脉血管内皮细胞血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1mRNA的表达和对氧化型低密度脂蛋白的摄取，此效应可能与同型半胱氨酸致动脉粥样硬化作用有关。     

辛伐他汀对高血压大鼠主动脉血凝素样氧化低密度脂蛋白受体1表达的影响

目的研究他汀类药物对自发性高血压大鼠主动脉血凝素样氧化低密度脂蛋白受体1(LOX1)表达的影响,以了解血凝素样氧化低密度脂蛋白受体1在高血压病血管中的表达及探讨他汀类药物在高血压病中预防动脉粥样硬化的可能作用。方法20只12周龄雄性自发性高血压大鼠随机分为SHR组(n=10)和辛伐他汀组(n=10),辛伐他汀组每只大鼠予以辛伐他汀5mg/kg·d灌胃,给药时间8周,同时取10只12周龄雄性京都种Wistar大鼠作为WKY组,利用免疫组织化学和逆转录聚合酶链反应检测各组动物主动脉LOX1的表达。结果与WKY组比较,SHR组LOX1表达显著增加(012±005vs086±011,P<005),与SHR组比较,辛伐他汀组经8周治疗后,LOX1表达显著降低(086±011vs054±013,P<005),SHR组及辛伐他汀组之间血压及血清总胆固醇、总甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇水平无明显差异(P>005)。结论高血压大鼠主动脉内皮层LOX1表达增加,辛伐他汀对高血压大鼠主动脉内皮层LOX1的表达具有抑制作用,此种作用可能是他汀类药物独立于降脂外抗动脉粥样硬化新的机制。     

血管紧张素II和缬沙坦对人脐静脉内皮细胞血凝素样氧化低密度脂蛋白受体表达的影响

目的　研究血管紧张素II(AngII)和AngIII型受体 (AT1)拮抗剂缬沙坦对人脐静脉内皮细胞 (HUVECs)血凝素样氧化低密度脂蛋白受体 (LOX 1)基因转录和蛋白表达的影响 ,以进一步探讨AngII和LOX 1在动脉粥样硬化 (AS)中的地位和相互关系 ,以及缬沙坦可能的抗AS作用。方法　将不同浓度AngII(1× 10 -5～ 1× 10 -10 mol/L)与HUVECs共孵育 2 4h ,以及将 1× 10 -6mol/L浓度的AngII与HUVECs作用不同时间 (0、3、6、12、2 4、36、4 8h)后 ,用细胞酶联免疫法和半定量RT PCR分别检测LOX 1蛋白和mRNA表达的情况 ,并观察缬沙坦对此的影响。结果　AngII呈浓度依赖方式诱导HUVECsLOX 1蛋白和mRNA表达增加 ;10 -6mol/L的AngII作用 3h ,内皮细胞LOX 1蛋白和mRNA表达即有显著增高 (P <0 0 0 1) ;随着时间延长 ,LOX 1蛋白和mRNA表达量逐渐增加 ,至 2 4～ 36h达最高峰。缬沙坦可显著抑制AngII诱导的HUVECsLOX 1表达 ,使LOX 1表达接近于正常水平。结论AngII能明显增强HUVECs表达LOX 1,并呈浓度和时间依赖性 ,这可能是AngII促进动脉粥样硬化发生、发展的机制之一 ;此作用可被AT1拮抗剂缬沙坦阻断 ,从而产生可能的抗AS作用。     

血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1基因沉默抑制人脐静脉内皮细胞表达分形趋化因子和单核细胞趋化蛋白1

目的探讨血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1基因沉默后能否抑制氧化型低密度脂蛋白诱导的分形趋化因子和单核细胞趋化蛋白1的表达。方法分别用不同浓度的氧化型低密度脂蛋白与人脐静脉内皮细胞共孵育,及预先对人脐静脉内皮细胞转染pGenesil-1 LOX-1 shRNA后再用氧化型低密度脂蛋白刺激,半定量RT-PCR、Western blot及酶联免疫吸附法检测血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1、分形趋化因子和单核细胞趋化蛋白1的mRNA和蛋白表达。结果氧化型低密度脂蛋白能呈浓度依赖性诱导血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1、分形趋化因子和单核细胞趋化蛋白1的mRNA和蛋白表达(P<0.01)。用RNA干扰抑制血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1的表达后,显著抑制了氧化型低密度脂蛋白诱导的分形趋化因子和单核细胞趋化蛋白1的mRNA和蛋白表达(P<0.01)。结论氧化型低密度脂蛋白能呈浓度依赖性诱导人脐静脉内皮细胞中分形趋化因子和单核细胞趋化蛋白1表达;这种诱导作用可以被血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1基因沉默抑制。     

血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1介导氧化型低密度脂蛋白促进血管平滑肌细胞表达白细胞介素6

观察氧化型低密度脂蛋白对血管平滑肌细胞白细胞介素 6表达的影响及血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体 1在其中的作用。人脐带动脉平滑肌细胞体外原代培养 ,传至 4～ 5代。氧化型低密度脂蛋白干预 ,观察不同时间点白细胞介素 6mRNA表达 ,及不同浓度氧化型低密度脂蛋白对白细胞介素 6和血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体 1mRNA表达的影响。并观察血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体 1抑制剂多聚肌酐酸对白细胞介素 6mRNA表达的影响。结果发现 ,(1)氧化型低密度脂蛋白作用后 ,白细胞介素 6mRNA表达显著升高 ,作用 6h出现峰值。随着氧化型低密度脂蛋白浓度升高 ,白细胞介素 6mRNA和血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体 1mRNA表达均明显升高 ,后两者呈正相关 (r=0 .94 3,P <0 .0 1)。 (2 )多聚肌酐酸抑制血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体 1后 ,白细胞介素 6mRNA表达明显下降。以上表明氧化型低密度脂蛋白明显促进血管平滑肌细胞白细胞介素 6的表达 ,血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体 1在此过程中起重要介导作用。     

氧化型低密度脂蛋白及阿托伐他汀对培养的人脐静脉内皮细胞血管紧张素转化酶2表达的影响

目的探讨氧化型低密度脂蛋白对人血管内皮细胞血管紧张素转化酶2表达的影响及阿托伐他汀的干预作用。方法用正常人新鲜血浆制备氧化型低密度脂蛋白,人脐静脉内皮细胞株复苏、传代后取生长良好3~6代用于实验。分为空白对照组、不同浓度氧化型低密度脂蛋白组(终浓度分别为20、40及80 mg/L)、不同浓度阿托伐他汀组(1、5和10μmol/L)、不同时间组(40 mg/L氧化型低密度脂蛋白和5μmol/L阿托伐他汀分别刺激6、12和24 h及混合刺激组(5μmol/L阿托伐他汀 40 mg/L氧化型低密度脂蛋白刺激24 h)。提取细胞总RNA及蛋白,逆转录聚合酶链反应检测血管紧张素转化酶2 mRNA的表达,免疫印迹法检测血管紧张素转化酶2蛋白的表达。结果氧化型低密度脂蛋白呈剂量和时间依赖性下调血管紧张素转化酶2 mRNA及蛋白的表达。与空白对照组比较,不同浓度氧化型低密度脂蛋白组血管紧张素转化酶2 mRNA的表达分别降低为73%、51%和33%,蛋白的表达降低为81%、50%及32%,不同浓度组间比较差异亦有显著性(P>0.01);氧化型低密度脂蛋白培养6、12和24 h时间组血管紧张素转化酶2 mRNA与对照组比较分别减少为66%、55%和50%,蛋白的表达与对照组比较降低为63%、53%及49%(P>0.01)。不同浓度阿托伐他汀及其培养不同时间组血管紧张素转化酶2 mRNA和蛋白的表达与对照组比较差异无统计学意义。阿托伐他汀能抑制氧化型低密度脂蛋白对血管紧张素转化酶2 mRNA和蛋白表达的下调,mRNA表达增加为1.63倍,蛋白表达增加为1.60倍(P>0.01)。结论氧化型低密度脂蛋白呈剂量和时间依赖性下调血管紧张素转化酶2 mRNA和蛋白的表达,阿托伐他汀能抑制这种作用。     

5脂氧合酶激活蛋白介导人脐静脉内皮细胞氧化损伤

目的探讨5脂氧合酶激活蛋白在人脐静脉内皮细胞氧化损伤中的机制。方法体外分离、培养人脐静脉内皮细胞,分别用10、50、100和200mg/L氧化型低密度脂蛋白处理细胞24h,采用酶联免疫吸附法检测细胞上清液白三烯C4水平,MTT法检测细胞活力,以及实时荧光定量PCR和Western blot检测细胞5脂氧合酶激活蛋白mRNA及蛋白表达的变化。结果100mg/L和200mg/L氧化型低密度脂蛋白作用人脐静脉内皮细胞24h细胞活力显著下降(P<0.01),白三烯C4分泌显著增加(P<0.01),回归分析显示白三烯C4释放量与氧化型低密度脂蛋白浓度显著相关(r=0.953,P<0.01)。PCR和Western blot分析发现,5脂氧合酶激活蛋白mRNA表达和蛋白表达均显著增强(P<0.01和P<0.05)。结论氧化型低密度脂蛋白促进人脐静脉内皮细胞分泌白三烯C4,导致人脐静脉内皮细胞氧化损伤可能与5脂氧合酶激活蛋白异常表达有关。     

相关炎症因子与动脉粥样硬化

动脉粥样硬化(atherosclerosis,As)是一组主要累及全身大、中型弹力型动脉的血管硬化性疾病,以主动脉、冠状动脉和脑动脉多见,其特征是动脉内膜的脂质沉积和粥样斑块形成,且发病机制与高血压、血脂紊乱及血管内皮损伤等因素密切相关。近年来,各种细胞炎症因子与动脉粥样硬化的关系引起愈来愈多研究者的重视,现谨就择要作综述。     

凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体1与糖尿病大血管病变

糖尿病患者倾向于早期发生广泛弥漫的动脉粥样硬化,而其确切机制尚未完全阐明.有研究提示低密度脂蛋白的氧化加速了糖尿病大血管病变的进程,凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体1是一种新型氧化型低密度脂蛋白受体,糖尿病中血管内皮细胞凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体1呈表达上调状态,而且可溶性凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体1有可能成为血管性疾病的生物学指标.多项研究提示治疗2型糖尿病的相关药物可抑制凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体1的表达.本文就凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体1在糖尿病大血管病变中的作用、调节机制及干预措施作一综述.     

白细胞介素10对血管内皮细胞E选择素和血凝素样低密度脂蛋白受体1表达的影响

目的研究白细胞介素10对人血管内皮细胞表面黏附分子E选择素、细胞间黏附分子1及血凝素样低密度脂蛋白受体1表达的影响,探讨白细胞介素10抗动脉粥样硬化可能的机制。方法将人脐静脉内皮细胞随机分为四组进行不同处理24 h:即空白对照组、氧化型低密度脂蛋白组、白细胞介素10组和白细胞介素10与氧化型低密度脂蛋白联合刺激组。采用流式细胞术检测细胞表面黏附分子E选择素和细胞间黏附分子1表达的变化;采用实时定量PCR和Western Blotting分别检测血凝素样低密度脂蛋白受体1的mRNA和蛋白表达。结果与空白对照组比较,细胞经氧化型低密度脂蛋白刺激24 h后,其表面的黏附分子E选择素表达量显著增加了20%,血凝素样低密度脂蛋白受体1的表达量也显著增加了25%,而同时加入白细胞介素10联合刺激组E选择素和血凝素样低密度脂蛋白受体1的表达量与氧化型低密度脂蛋白组比较均出现显著下降(分别为20%和40%),回到基线水平。而单独使用白细胞介素10对E选择素及血凝素样低密度脂蛋白受体1的表达没有影响;本实验未能检测到氧化型低密度脂蛋白对细胞间黏附分子1表达的影响。结论抗炎因子白细胞介素10能通过下调内皮细胞表面黏附分子的表达抑...     

氧化型低密度脂蛋白通过下调TET2抑制人脐静脉内皮细胞增殖和迁移

目的　探讨TET2在氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）抑制人脐静脉内皮细胞（HUVEC）增殖和迁移中的作用及其机制。方法　分别以0、25、50、75　mg/L　ox-LDL孵育HUVEC　24　h,Western　blot检测ox-LDL对HUVEC　TET2表达的影响。噻唑蓝法检测TET2对ox-LDL处理的HUVEC增殖的影响;Transwell实验和划痕实验检测TET2干预对HUVEC迁移的影响;免疫荧光法检测TET2干预对HUVEC细胞骨架的影响;Western　blot检测HUVEC总Rac1及磷酸化Rac1的表达。结果　ox-LDL呈浓度依赖性地下调TET2的表达。过表达TET2改善ox-LDL对HUVEC增殖和迁移的抑制,低表达TET2进一步抑制HUVEC增殖和迁移。免疫荧光结果表明,ox-LDL促进HUVEC周边致密带的形成,过表达TET2抑制致密带的形成,低表达TET2进一步加强致密带的形成。Western　blot结果表明,ox-LDL抑制HUVEC　Rac1蛋白的表达,过表达TET2上调HUVEC总Rac1及磷酸化Rac1的水平,低表达TET2进一步降低总Rac1及磷酸化Rac1的水平。结论　ox-LDL通过下调TET2的表达影响细胞骨架,从而抑制HUVEC的增殖和迁移。     

氧化型低密度脂蛋白对人脐静脉内皮细胞功能及膜表面超微结构的影响

目的 观察人脐静脉内皮细胞在发生脂质过氧化过程中细胞功能及超微结构改变的规律和特点.方法 用100 mg/L氧化型低密度脂蛋白诱导人脐静脉内皮细胞作为实验组,以与氧化型低密度脂蛋白等体积的PBS替代作为对照组,两组均连续培养0、4、8及16 h;用MTT比色法测定并比较各组细胞的增殖状态,用硝酸还原法测定各组细胞上清液中一氧化氮含量,用原子力显微镜对比观察各组贴壁人脐静脉内皮细胞表面的超微结构.结果 随着氧化型低密度脂蛋白诱导时间的延长,实验组人脐静脉内皮细胞的增殖和功能明显减低,细胞表面隆起逐渐增大,分布越来越不规则,并伴随有凹陷或空洞出现;对照组随着培养时间的延长细胞表面结构变化不大.实验组0、4、8及16 h粗糙度分别为13.666±2.196 nm、15.904±2.203 nm、17.688±2.076 nm及21.609±1.867 nm,亚组间两两相比均存在显著性差异(P＜0.05);而对照组0、4、8及16 h粗糙度分别为13.627±2.218 nm、13.659±2.183 nm、13.665±2.175 nm及13.974±2.478 nm,亚组间两两相比无显著性差异(P＞0.05);与对照组相比,实验组细胞培养4 h后膜表面粗糙度存在显著性差异(P＜0.05).结论 内皮细胞在发生脂质过氧化过程中功能逐渐减退,且表面超微结构在较早期就发生了改变,并随时间推移呈现动态变化.     

糖基化终产物对凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体1表达的影响

目的 研究长期高血糖所致糖基化终产物对巨噬细胞凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体1表达的影响.方法 U937细胞经佛波酯诱导分化,并将不同浓度或同一浓度糖基化终产物与诱导分化48 h后的U937细胞共同孵育,用Western Blotting法检测凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体1蛋白的表达.同时应用ELISA法测定24例2型糖尿病患者及22例正常对照者血清可溶性氧化型低密度脂蛋白受体1的含量.结果 100、200和400 mg/L 糖基化终产物刺激后细胞表面凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体1蛋白表达量分别是对照组的1.85、3.22和4.65倍(P<0.05);400 mg/L的糖基化终产物作用12、24、48 h后,U937巨噬细胞该受体蛋白表达量分别为0 h的2.85、3.89和4.3倍(P<0.05).糖尿病患者血清氧化型低密度脂蛋白受体1及糖基化终产物含量较正常对照者显著升高(P<0.01),两者呈正相关(P<0.001). 结论糖基化终产物可增加U937巨噬细胞凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体1蛋白表达且呈浓度和时间依赖性.这可能与糖尿病患者加速泡沫细胞形成而易致动脉粥样硬化有关.