灯盏乙素提纯工艺的正交设计实验优选

目的 通过提纯工艺的研究,提高灯盏乙素的纯度和得率.方法 采用正交设计实验方案,选择灯盏乙素纯化最佳条件,用高效液相色谱法测定纯化后样品中灯盏乙素的含量.结果 醇沉乙醇用量120 ml, 60%的乙醇溶解滤渣,酸化pH=1为最佳纯化工艺.结论 该方法简单,操作简便,且能获得很好纯度和产率.     

HPLC同时测定灯延颗粒中灯盏乙素、原阿片碱、芹菜素和延胡索乙素

目的: 建立HPLC同时测定灯延颗粒中灯盏乙素、原阿片碱、芹菜素和延胡索乙素含量的方法. 方法: 采用Zorbax Extend-C₁₈色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),流动相乙腈(A)-0.3%醋酸铵水溶液(B),梯度洗脱(0~25 min,15%A;25~70 min,15%~65%A;70~75 min,65%~15%A),流速0.8 mL·min^-1,柱温30 ℃,检测波长分别为280 nm(灯盏乙素、原阿片碱、延胡索乙素)、337 nm(芹菜素). 结果: 灯盏乙素、原阿片碱、芹菜素和延胡索乙素进样量分别在0.90~8.99,0.73~7.35,0.05~0.54,0.14~1.37 μg线性关系良好;平均回收率分别为 99.48%,98.17%,97.41%,98.33%,RSD分别为0.8%,1.2%,1.2%,0.5%. 结论: 该法适用于同时测定灯延颗粒中灯盏乙素、原阿片碱、芹菜素和延胡索乙素的含量.     

人血浆中痕量灯盏乙素SPE-HPLC/MS/MS的建立及药动学研究

 目的建立人血浆中微量灯盏乙素的SPE-HPLC/MS/MS分析方法,分析临床用药每人60 mg灯盏花素时,主要有效成分灯盏乙素的人体药动学过程和特征,评价受试制剂和参比制剂的生物等效性和相对生物利用度。方法含有内标黄芩苷的血浆经固相萃取预处理后,HPLC-MS/MS分离、分析。色谱系统:ODS柱(4.6 mm×250 mm,5μm),梯度洗脱,流速1.0 mL·min^-1,柱温35℃。质谱检测方式:选择反应检测(Selective Reaction Monitoring)。20名健康志愿者经随机交叉口服60 mg受试制剂或参比制剂后,测定血药浓度的变化,计算药动学参数。结果血浆中内源性杂质不干扰微量灯盏乙素分析。测定线性范围0.2～20.0μg·L^-1(r=0.999 5),最低定量限0.2μg·L^-1,日内、日间精密度(RSD<13%),灯盏乙素的提取回收率≥80%。受试制剂及参比制剂的生物半衰期分别为(2.27±0.58)和(2.25±0.44)h,达峰时间分别为(5.9±0.8)和(5.6±1.6)h,峰质量浓度分别为(12.02±2.23)和(11.68±2.67)μg·L^-1。受试制剂的相对生物利用度为(104.2±13.0)%。结论建立的方法专属、准确、灵敏、简便,测定了健康受试者口服60 mg小剂量灯盏花素制剂后的灯盏乙素血药浓度,估算灯盏乙素人体药动学参数。统计学结果表明,新制剂灯盏花素滴丸和市售灯盏花素片生物等效。     

HPLC-MS测定癃闭康泰片中贝母素甲、贝母素乙的含量

 目的建立癃闭康泰中贝母素甲、贝母素乙的高效液相色谱-质谱联用含量测定法。方法癃闭康泰片经碱化,用氯仿-甲醇(4∶1)提取生物碱有效部位,提取液浓缩,残渣用甲醇溶解后,进行高效液相色谱-质谱测定。色谱柱为Agilent Zorbax ex-tend C₁₈(2.1 mm×100 mm,5μm);流动相为乙腈和10 mmol·L^-1甲酸铵(pH 8.0),梯度洗脱(0～15 min:乙腈30%～55%;15～25min乙腈55%);流速0.2 mL·min^-1;柱温30℃。质谱条件为电喷雾电离源(ESI),以选择性正离子方式检测,贝母素甲和贝母素乙的选择性检测离子分别为m/z 432.4和m/z 430.4。结果贝母素甲和贝母素乙的的线性范围均为0.01～10 mg·L^-1,相关系数均大于0.999,检测限均为0.45μg·L^-1,方法回收率均大于95%,日内日间精密度(RSD)均小于5%。结论本方法专属性强,灵敏度高,线性关系良好,操作简便,适用于癃闭康泰中贝母素甲、贝母素乙的含量测定。     

蛴螬对激光损伤兔血-视网膜屏障后视网膜TekC、NGF表达的影响＊

目的 探讨蛴螬促进激光损伤兔血-视网膜屏障后的修复作用及机理。方法 30只实验性兔随机分为正常组、模型组、蛴螬组。采用激光损伤血-视网膜屏障动物模型，在屏障损伤后1周及2周两个时相，观察蛴螬对兔血-视网膜屏障损伤修复情况、血-视网膜屏障组织形态结构及神经营养因子受体TrkC、NGF表达及影响。结果 蛴螬能促进损伤的血-视网膜屏障修复，减轻激光导致的视网膜组织及细胞形态学损伤，促进TrkC、NGF的表达，抑制视网膜细胞增殖与变性，从而改善视网膜功能。结论 蛴螬可能通过改善视网膜组织能量代谢，清除氧自由基，促进神经营养因子受体的表达，抑制视细胞增殖，起到保护血-视网膜屏障组织结构的作用。     

延胡索甲素和延胡索乙素的电喷雾质谱研究

目的:对延胡索甲素和延胡索乙素在电喷雾质谱下的裂解途径进行研究。方法:采用高效液相-电喷雾串联质谱(HPLC-ESI-MSn)对其样品进行测定。结果:在正离子模式下,延胡索甲素和延胡索乙素围绕碳氮键进行开环裂解,碎裂成苯二亚甲基和四氢异喹啉两部分,形成其鉴定的主要碎片离子。结论:本实验为该类化合物的分析鉴定提供有效的质谱方法。     

灯盏花素分散片及灯盏花素原料的HPLC指纹图谱研究

目的:建立灯盏花素分散片及灯盏花素原料的HPLC指纹图谱分析方法.方法:采用HPLC法测定,色谱柱为Agilent TC-C18(4.6 mm× 250 mm,5μm),流动相乙腈-0.1 mol·L-1醋酸铵(磷酸调pH 3.0),梯度洗脱,检测波长335 nm,流速0.8 mL·min-1,柱温35℃.结果:应用“中药色谱指纹图谱相似度评价系统”对灯盏花素分散片及灯盏花素原料各批次进行了质量评价,相似度均≥0.99,方法精密度、稳定性和重复性良好.结论:所建立的液相色谱指纹图谱专属性和特征性强,可以有效地控制灯盏花素分散片及其原料的质量.     

反相高效液相色谱法测定花芪通脉颗粒中灯盏乙素的含量

目的建立测定花芪通脉颗粒中灯盏乙素含量的方法。方法采用反相高效液相色谱法RP-HPLC,ZORBAX-C18(4.6 mm×150 mm,5μm)色谱柱,甲醇-0.01 mol.L-1磷酸缓冲液PH为5.2(35∶65)为流动相,检测波长335 nm,流速0.8 m l.m in-1,柱温25℃。结果灯盏乙素在0.74~3.70μg范围内与峰面积呈良好线性关系,r=0.999 6,灯盏乙素平均加样回收率为97.4%,RSD为0.98%(n=5)。结论:该方法可靠性高,准确性和重现性好,适用于花芪通脉颗粒中灯盏乙素的含量测定。     

灯盏乙素改善地塞米松致大鼠胰岛素抵抗的作用研究

目的 观察灯盏乙素对地塞米松(DEX)诱导的胰岛素抵抗(IR)大鼠的影响及其作用机制.方法 肌肉注射DEX诱导大鼠IR,同时ig 灯盏乙素进行治疗,检测大鼠空腹血糖(FBG)、空腹血清胰岛素(FINS)、血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、一氧化氮(NO)水平.结果 灯盏乙素能显著降低DEX诱导的IR大鼠FBG,FINS水平,升高胰岛素敏感指数(ISI),降低TC含量,对TG的升高有一定抑制作用,能升高血清NO含量.结论 灯盏乙素能改善DEX诱导的胰岛素抵抗,其机制与改善糖脂代谢紊乱、提高胰岛素敏感性、升高血清NO含量有关.     

苗族药飞龙掌血不同药用部位化学成分差异对比研究＊

目的 本研究建立飞龙掌血叶、茎皮和根皮HPLC指纹图谱，分析其化学成分差异，为不同药用部位应用合理性提供依据。方法 采用高效液相色谱法，色谱柱：Agilent SB C₁₈柱（250 mm × 4.6 mm，5 μm），波长：320 nm，体积流量：1.0 mL/min，柱温：28℃，乙腈-0.1%磷酸水溶液梯度系统。通过对飞龙掌血叶、根皮、茎皮对比研究，本研究建立飞龙掌血的指纹图谱，并运用相似度评价软件对指纹图谱进行相似度对比。结果 本研究发现相同药用部位的10批之间的相似度均大于0.93，其生成的对照指纹图谱具有代表性，可用于飞龙掌血指纹图谱比较。经对比叶、根皮、茎皮分别有14、15、15个共有峰。根皮与茎皮两者化学成分相近，叶与根皮和茎皮的化学成分差异明显。结论 飞龙掌血不同药用部位的内在质量存在一定差别，此法可用于飞龙掌血药材的的真伪鉴别和质量评价。     

冰片对BMSCs透过血脑屏障的影响

目的:探讨冰片对骨髓基质干细胞(BMSCs)透过血脑屏障(BBB)的影响。方法:复制脑缺血再灌注大鼠模型,将大鼠随机分为BMSCs+冰片组、BMSCs组、冰片组、模型组和正常组5个组;MCAO术后24小时,灌服冰片30min后,以3×106BMSCs经右颈总动脉注射入大鼠体内;分别于脑缺血再灌注后第1、14、28天检查各组大鼠的神经功能,并于实验结束时采血检测血象、肝肾功能。结果:BMSCs+冰片组和BMSCs组神经功能显著改善,而前者又优于后者;各组大鼠血象、肝肾功能都正常,主要器官组织未见肿块形成。结论:冰片能够促进BMSCs透过BBB,改善神经功能;血管内移植BMSCs未见明显的副作用。     

HPLC/MS/MS测定人血浆中的染料木素

目的建立人血浆中染料木素的高效液相色谱-串联质谱检测方法(HPLC/MS/MS)。方法血浆样品中加入内标物橙皮苷,用固相萃取法处理,采用AglientC18色谱柱(150mm×2.1mm,3.5μm)分离,以甲醇-10mmol·L-1乙酸铵溶液-乙腈(70∶20∶10)为流动相,流速180μL·min-1,质谱在正离子多反应监测模式(MRM)下进行特征母-子离子对信号采集,以m/z271.0→243.0(染料木素)和m/z611.2→303.2(橙皮苷)进行定量分析。结果染料木素在3～1000ng·mL-1浓度范围内线性关系良好,相关系数为r=0.9995,定量下限为3ng·mL-1,日内、日间RSD均小于10.73%(n=5),方法回收率在98.92%～104.30%。结论该方法简便、灵敏,适用于人体内染料木素血药浓度测定及临床药物动力学研究。     

一种新来源天然冰片与合成冰片的致突变性比较研究

目的与方法采用鼠伤寒沙门氏菌回复突变试验(Ames试验),比较天然冰片与合成冰片的致突变作用.结果在标准平板掺入法试验中,天然冰片与合成冰片在0.4～250.0μg/皿范围内,无论有或无S9活化系统,对鼠伤寒沙门氏菌突变株(TA97、TA98、TA100、TA102)的回变菌落数均无明显影响,且回变菌落背景正常.结论新来源天然冰片与合成冰片在该实验室条件下均不具致突变效应.     

冰片对大鼠下丘脑组胺、5-羟色胺含量的影响

目的:观察冰片对大鼠下丘脑组胺、5-羟色胺含量的影响.方法:通过给大鼠灌服不同剂量的冰片,用高效液相色谱-电化学检测的方法分别测定给药前及给药后不同时间点大鼠下丘脑组胺和5-羟色胺的含量,研究冰片对组胺和5-羟色胺含量的影响.结果:大鼠服冰片后下丘脑的组胺含量均比给药前组增高,中剂量给药后20 min组与给药前组比较组胺含量显著升高(P＜0.01),中剂量给药后其它各组、高剂量给药后45 min组、低剂量给药后20 min、45 min组组胺含量显著高于给药前组(P＜0.05);大鼠服冰片后下丘脑5-羟色胺含量变化如下:高剂量给药后各组5-羟色胺的含量均比给药前组显著升高(P＜0.05或P＜0.05);中、低剂量给药后5 min、20 min、45 min三组的5-羟色胺含量显著升高(P＜0.05或P＜0.01).结论:冰片可升高大鼠下丘脑组胺和5-羟色胺的含量.     

鸡血藤在大鼠体内的排泄动力学研究

目的：研究大鼠灌胃鸡血藤水提取物的排泄动力学,为其临床应用提供科学依据。方法：给雄性SD大鼠灌胃鸡血藤水提取物(30 g·kg^–1,以生药量计),分别在给药后的2、4、6、8、12、24、48 h收集每组的粪便和尿液。采用超快速液相色谱-质谱法检测大鼠排泄物样品,通过与对照品比对后鉴定和定量鸡血藤水提取物中化合物。结果：在大鼠48 h排泄的尿液和粪便中可检测到20个原型化合物,即烟酸(1)、对羟基苯甲酸(2)、水杨酸(3)、6,9-二羟基大柱香波龙-4,7-二烯-3-酮(4)、大豆苷(5)、8,9-二羟基大柱香波龙-4,6-二烯-3-酮(6)、异落叶松脂素(7)、芒柄花素(8)、4′,8-二甲氧基-7-O-β-D-吡喃葡萄糖基异黄酮(9)、(+)-松脂酚(10)、(+)-表松脂酚(11)、8-甲雷杜辛(12)、芒柄花素钠(13)、3′-甲氧基大豆素(14)、鸡血藤黄醇A (15)、毛蕊异黄酮(16)、艳紫铆素A (17)、奥刀拉亭(18)、鹰嘴豆芽素A (19)和(6a R,11a R)-高丽槐素(20)。结论：鸡血藤中的一些原型化合物可通过大鼠尿液和粪便排出体外...     

超高效液相色谱-质谱对泻肺平喘灵水提物的成分研究

目的 建立泻肺平喘灵水提物的超高效液相色谱-质谱(ultra performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry,UPLC-MS)检测方法 ,分析水提物主要成分.方法采用UPLC-MS法,通过与对照品的保留时间和质谱数据比对,鉴定部分成分;通过质谱数据分析,推测部分化合物结构;流动相为乙腈-0.2%甲酸水溶液,梯度洗脱;柱温30℃;流速0.8 ml/min;检测波长254 nm.结果 从泻肺平喘灵水提物中共检出18种成分,鉴定出盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱、丹酚酸B、大黄酸、芦荟大黄素、大黄酚6种成分.结论 所建立的色谱方法稳定性高、重现性好,适于泻肺平喘灵水提物的分析.     

开窍法对骨髓基质干细胞颈动脉内移植治疗缺血性中风的增效作用

目的探讨冰片对骨髓基质干细胞（BMSCs）透过脑缺血模型血脑屏障的影响。方法复制脑缺血再灌注大鼠模型,将大鼠随机分为BMSCs＋冰片组、BMSCs组、冰片组、模型组和正常组;大脑中动脉阻塞（MCAO）术后24h,灌服冰片30min后,以3×106BMSCs经右颈总动脉注射入大鼠体内;分别于脑缺血再灌注后第1、14、28日检查各组大鼠的神经功能,并于实验结束时采血检测血象、肝肾功能。结果BMSCs＋冰片组和BMSCs组神经功能显著改善,而前者又优于后者;各组大鼠血象、肝肾功能都正常,主要器官组织未见肿块形成。结论冰片能够促进BMSCs透过血脑屏障,改善神经功能;血管内移植BMSCs未见明显的副作用。     

LC/MS/MS测定人血浆中茚地那韦的浓度

 目的建立LC/MS/MS测定人血浆中茚地那韦的浓度。方法以利托那韦为内标,采用10 mmol·L^-1乙酸胺缓冲液(pH 4.10)-含0.1%甲酸的乙腈溶液(20:80)为流动相,以ZORBAX Eclipse XDB-C₈色谱柱为分析柱,通过电喷雾电离源(ESI),以选择离子反应监测(SRM)方式进行检测。用于定量分析的离子反应分别为m/z 614.4→421.2(茚地那韦)和m/z 721.3→296.0 (利托那韦)。结果茚地那韦线性范围0.009～30.0 mg·L^-1,定量下限为(0.010±0.001)mg·L^-1(n=5)。日内、日间精密度(RSD)小于4%,平均回收率大于90%。结论本法专属性强,样品处理方便,灵敏度高,适用于茚地那韦临床药动学研究。     

LC-MS/MS测定人血浆中格列本脲的浓度

 目的建立LC-MS/MS测定人血浆中格列本脲浓度的方法。方法以格列齐特为内标,采用0.1%甲酸-乙腈(35∶65)为流动相,以ZORBAX Eclipse XDB-C₁₈色谱柱为分析柱,通过电喷雾电离源(ESI),以选择离子反应监测(SRM)方式进行检测。用于定量分析的离子反应分别为m/z 494.2→368.9(格列本脲)和m/z 324.0→126.9(格列齐特)。结果格列本脲线性范围6.67～500μg·L^-1,定量下限为(6.67±0.3)μg·L^-1(n=5)。日内、日间精密度(RSD)小于8%,平均回收率大于90%。结论本法专属性强,样品处理方便,灵敏度高,适用于格列本脲临床药动学研究。     

血浆中去羟肌苷测定与制剂生物等效性评价

 目的建立测定人血浆中去羟肌苷的液相色谱-质谱/质谱联用法(LC-MS/MS),并应用于药物制剂生物等效性评价。方法18名中国健康男性志愿者单剂量随机交叉po200 mg去羟肌苷参比制剂和受试制剂,血浆样品经沉淀蛋白处理,通过LC-MS/MS测定其浓度,采用非隔室模型计算药动学参数和相对生物利用度,并对参数进行方差分析和双单侧t检验。结果LC-MS/MS测定血浆中去羟肌苷的线性范围为5.0～2 000μg·L^-1,定量下限为5.0μg·L^-1。日内、日间精密度(RSD)均小于6%,准确度(RE)在±4%之内。应用本法测得18名中国健康男性志愿者po 200 mg去羟肌苷参比制剂后主要药动学参数为:t_max为(0.65±0.30)h,ρ_max为(1 052±353)μg·L^-1,t_1/2为(1.53±0.38)h,用梯形法计算,AUC_0-t为(1 628±479)μg·h·L^-1,服用受试制剂后主要药动学参数为:t_max为(0.47±0.13)h,ρ_max为(1 090±531)μg·L^-1,t_1/2为(1.44±0.46)h,AUC_0-t为(1 520±661)μg·h·L^-1。以AUC_0-t计算相对生物利用度为(95.8±20.8)%。结论该法灵敏、快速、准确,操作简便、线性范围宽,适用于去羟肌苷制剂的生物等效性评价。