miR-502增强肺癌对替莫唑胺化疗敏感性的机制研究

摘要：目的:探讨miR-502对替莫唑胺化疗敏感性的影响及其作用机制。方法:用200μmol·L-1的替莫唑胺处理细胞A549作为替莫唑胺组,不作任何处理的细胞作为对照（Con）组;将miR-NC、miR-502、anti-miR-NC、anti-miR-502质粒分别转染至A549细胞中,分别记为miR-NC组、miR-502组、anti-miR-NC组、anti-miR-502组; miR-502转染至A549细胞后再用200μmol·L-1的替莫唑胺处理作为替莫唑胺+miR-502组;将miR-502质粒分别与pcDNA 3.1、pcDNA 3.1-ERCC1共转染至A549细胞中再用200μmol·L-1的替莫唑胺处理,分别记为替莫唑胺+miR-502+pcDNA 3.1组、替莫唑胺+miR-502+pcDNA3.1-ERCC1组;转染均采用脂质体法。实时荧光定量PCR（RT-qPCR）检测miR-502表达水平;蛋白质印迹（Western Blot）法检测p21、细胞周期素D1（Cyclin D1）、B细胞淋巴瘤/白血病-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、切除修复交叉互补基因1（ERCC1）表达;四甲基偶氮唑盐比色法（MTT）检测细胞活性;流式细胞术检测细胞凋亡;双荧光素酶报告实验检测miR-502和ERCC1的靶向关系。结果:与人胚肺成纤维细胞MRC5相比,肺癌细胞A549中miR-502表达水平显著降低。过表达miR-502、替莫唑胺处理以及替莫唑胺处理同时过表达miR-502,肺癌细胞A549中p21、Bax表达水平均显著升高,Cyclin D1、Bcl-2表达水平均显著降低,细胞活性均显著降低,细胞凋亡率均显著升高（P<0.05）。结论:过表达miR-502和替莫唑胺均可抑制细胞A549增殖,促进细胞凋亡,过表达miR-502可增强替莫唑胺对细胞A549增殖抑制和凋亡促进作用,其机制可能与ERCC1有关,将可为提高肺癌化疗效果提供新途径。     

LINC00691负调控miR-512-5p对非小细胞肺癌细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响

目的 探讨LINC00691对非小细胞肺癌（NSCLC）细胞恶性生物学行为的影响。方法 RT-qPCR检测30例NSCLC患者癌组织和对应癌旁组织中LINC00691和miR-512-5p的表达。双荧光素酶报告基因实验验证LINC00691和miR-512-5p的靶向关系。将A549细胞分为si-NC组、si-LINC00691组、miR-NC组、miR-512-5p组、si-LINC00691+anti-miR-NC组和si-LINC00691+anti-miR-512-5p组,MTT和克隆形成实验检测细胞增殖情况,流式细胞术、Transwell检测细胞凋亡、迁移和侵袭,Western blotting检测细胞中Ki67、Cleaved-caspase3、Ecadherin和N-cadherin蛋白表达。结果 LINC00691在NSCLC癌组织中表达水平上升（P<0.05）,而miR-512-5p表达水平下降（P<0.05）。LINC00691在A549细胞中负调控miR-512-5p。沉默LINC00691表达或过表达miR-512-5p可降低A549细胞的存活率、克...     

miR-214对人肺癌A549细胞增殖和侵袭能力的影响

目的:通过构建miR-214的真核表达载体,研究其对人肺癌A549细胞增殖和侵袭能力的影响。方法:以A549细胞基因组DNA为模板,扩增得到miR-214前体序列,插入表达载体pcDNA3.1(+)克隆获得pcDNA3.1(+)-miR-214。将真核表达载体pcDNA3.1(+)-miR-214转染到A549细胞中,并采用实时荧光定量PCR(real-time PCR)对其表达情况进行验证。采用MTT和transwell小室等方法分别检测转染重组质粒pcDNA3.1(+)-miR-214对A549细胞增殖能力和侵袭能力的影响。结果:成功构建了miR-214稳定过表达的真核表达载体pcDNA3.1(+)-miR-214;real-time PCR检测结果表明,转染pcDNA3.1(+)-miR-214后A549细胞中miR-214过表达(P<0.05)。miR-214过表达后A549细胞的增殖和侵袭能力均明显降低。结论:miR-214在A549细胞中过表达能够抑制细胞的增殖和侵袭能力,为进一步深入研究miR-214在肿瘤中的作用机制提供了实验依据。     

miR-200b 靶向DNMT3A 抑制非小细胞肺癌细胞增殖与诱导凋亡

摘要： 目的 探讨miR-200b是否通过靶向调控DNMT3A抑制人非小细胞肺癌A549细胞增殖与诱导凋亡。方法 运用qRT-PCR检测miR-200b在不同非小细胞肺癌细胞株中的表达; 将miR-200b mimics、 scramble、 DNMT3A-siRNA、 control-siRNA分别转染于A549细胞, 其中scramble与control-siRNA分别作为miR-200b mimics与DNMT3A-siRNA 的阴性对照组。采用 Western blot 检测 A549 细胞中 DNMT3A 蛋白表达; 采用 MTT 与 AnnexinV-FITC/PI 染色法分别检测 A549 细胞的增殖与凋亡, 比较 miR-200b mimics 与 DNMT3A-siRNA 对 A549 细胞增殖与凋亡的影响。结果 qRT-PCR 结果显示, miR-200b 在非小细胞肺癌 A549、 H1299、 L78、 H460 细胞中的表达均明显低于正常人支气管上皮 16HBE 细胞, 其中以 A549 细胞下调最为明显 （P < 0.05）。Western blot 结果显示, 外源过表达 miR-200b 或沉默 DNMT3A 能明显下调 A549 细胞中 DNMT3A 蛋白的水平。MTT 结果显示, 转染 miR-200b mimics 或沉默 DN⁃ MT3A 48 h、 72 h、 96 h 后, 反映细胞增殖的光密度 （OD） 值与各自阴性对照组比较明显减小 （P < 0.05）。AnnexinV- FITC/PI 染色结果显示, 转染 miR-200b mimics 或沉默 DNMT3A 后, A549 细胞的凋亡率分别为 （23.33%±0.90%、 20.41%±0.70%） 均高于各自阴性对照组 （5.28%±0.55%、 5.68%±0.47%, P < 0.05）。结论 miR-200b通过下调DNMT3A 抑制人非小细胞肺癌细胞增殖与诱导凋亡。     

秦艽多糖通过调控STMN1表达影响肺癌细胞增殖、迁移及侵袭

摘要：目的:探讨秦艽多糖是否可通过调控微管不稳定性蛋白1（STMN1）表达而抑制肺癌细胞增殖、迁移及侵袭。方法:体外培养肺癌细胞A549,随机分为对照组、秦艽多糖低、中、高浓度组(25,50,100μg·ml-1);采用甲基噻唑基四唑（MTT）与平板克隆形成实验检测细胞增殖能力; Transwell小室实验检测细胞迁移及侵袭; pcDNA 3.1-STMN1转染至A549细胞,采用上述方法检测细胞增殖、迁移及侵袭;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测STMN1、增殖标记蛋白细胞增殖核抗原-67（Ki67）、神经型钙黏蛋白（N-cadherin）、上皮型钙黏蛋白（E-cadherin）的表达量。结果:与对照组比较,秦艽多糖中、高浓度组细胞活力、克隆形成数、迁移细胞数、侵袭细胞数及STMN1、Ki67、N-cadherin蛋白水平显著降低（P<0.05）,E-cadherin蛋白水平显著升高（P<0.05）,且秦艽多糖各浓度组间的指标差异均有统计学意义（P<0.05）;与高浓度秦艽多糖+pcDNA 3.1组比较,高浓度秦艽多糖+pcDNA 3.1-STMN1组细胞活力、克隆形成数、迁移细胞数、侵袭细胞数及STMN1、Ki67、N-cadherin蛋白水平显著升高（P<0.05）,E-cadherin蛋白水平显著降低（P<0.05）。结论:秦艽多糖可能通过下调STMN1的表达从而抑制肺癌细胞增殖、迁移及侵袭。     

miR-199-3p过表达调控肺癌A549细胞生长、侵袭及上皮间质转化机制研究

目的 探究miR-199-3p过表达靶向抑制SOX5对肺癌A549细胞生长、侵袭及上皮间质转化(EMT)的影响。方法 荧光素酶实验检测miR-199a-3p与SOX5靶向关系。构建SOX5 pcDNA载体过表达SOX5,将miR-199-3p与pcDNA-SOX5单独或联合转染A549,将细胞随机分为对照组(Control组)、miR-199-3p过表达组(mimic组)、SOX5组和mimic+SOX5组进行后续实验。克隆形成法检测肺癌A549细胞增殖情况,流式细胞术检测肺癌A549细胞凋亡情况,Transwell检测肺癌A549细胞侵袭能力;荧光显微镜观察肺癌A549细胞EMT形态学变化;蛋白免疫印迹试验检测Ki-67、PCNA、Bax、Bcl-2、Caspase-3、E-cadherin、N-cadherin、Vimentin蛋白表达水平。结果 与SOX5组比较,mimic+SOX5组细胞克隆形成率降低,Ki-67、PCNA蛋白水平降低,细胞凋亡率升高,Bax/Bcl-2和cleaved Caspase-3/Caspase-3比值升高,细胞侵袭数降低,E-cadherin蛋白水平...     

LINC01123通过miR-449a调控HGF/c-MET通路参与宫颈癌发生发展的分子机制

摘要：目的　探讨长链非编码RNA（lncRNA）LINC01123对宫颈癌（CC）细胞增殖、迁移及侵袭的影响及可能的作用机制。方法　在GEPIA数据库分析CC组织中差异表达的lncRNA;体外培养人CC细胞系SiHa、HeLa、CaSki和人正常子宫颈上皮细胞HcerEpic,实时荧光定量PCR（qPCR）检测细胞中LINC01123、microRNA-449a（miR-449a）的表达水平。取对数生长期的CaSki细胞,分成对照组（NC）组、pcDNA3.1-NC组、LINC01123过表达组、si-NC组、LINC01123沉默组、LINC01123沉默+inhibitor-NC组、LINC01123沉默+miR-449a抑制剂组,转染48 h后,收集各组细胞用qPCR法检测转染效果;CCK-8法检测细胞增殖活性;流式细胞术分析细胞凋亡;划痕实验和Transwell小室实验检测细胞迁移、侵袭能力;Western blot检测细胞中肝细胞生长因子（HGF）/细胞间质上皮转化因子（c-MET）通路相关蛋白的表达;双荧光素酶报告基因验证LINC01123与miR-449a的靶向关系。结果　LINC01123在CC组织和细胞中的表达升高,而miR-449a在人CC细胞中呈低表达（P＜0.05）。与NC组比较,LINC01123沉默组LINC01123表达、细胞增殖活性、迁移和侵袭能力、HGF表达和磷酸化c-MET（p-c-MET）/c-MET比值降低,miR-449a表达、细胞凋亡率升高（P＜0.05）;下调miR-449a的表达可明显减弱LINC01123沉默对CaSki细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用（P＜0.05）。双荧光素酶检测结果显示,miR-449a是LINC01123的靶基因。结论　沉默LINC01123可通过上调miR-449a表达,抑制HGF/c-MET信号通路的激活,从而抑制CC细胞的生长和转移。     

miR-552通过PTEN/AKT信号通路促进非小细胞肺癌A549细胞的恶性生物学行为

目的 探讨miR-552通过调控PTEN/AKT信号通路促进人非小细胞肺癌A549细胞的恶性生物学行为及其相关机制。方法 通过qRT-PCR检测人肺癌组织样本和人非小细胞肺癌A549细胞系中miR-552、PTEN mRNA的表达情况;通过Western blotting检测PTEN、AKT、p-AKT蛋白的表达情况;通过CCK-8检测miR-552表达对A549细胞增殖能力的影响;通过Transwell小室检测miR-552表达对A549细胞迁移和侵袭能力的影响;通过流式细胞术检测miR-552表达对A549细胞凋亡能力的影响。结果 miR-552在肺癌组织和A549细胞中的表达显著上调。过表达miR-552可显著促进A549细胞的增殖、迁移和侵袭,并抑制细胞凋亡,而抑制其表达则结果相反。与癌旁组织相比,肺癌组织中PTEN表达显著下调。过表达miR-552可下调PTEN蛋白表达,上调p-AKT蛋白表达,对AKT蛋白无影响,而抑制其表达则结果相反。结论 miR-552可能通过PTEN/AKT信号通路促进人非小细胞肺癌A549细胞的恶性生物学行为。     

下调miR-19b表达对骨肉瘤MG63细胞侵袭、迁移及Wnt/β-Catenin通路的影响

摘要：目的:探讨下调miR-19b表达对骨肉瘤MG63细胞侵袭、迁移能力的影响,并探讨可能机制。方法:采用脂质体转染法转染人骨肉瘤MG63细胞,实验分为空白组、miR-19b inhibitor NC组、miR-19b inhibitor组,采用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法检测细胞增殖情况,通过Transwell小室法检测各组细胞侵袭、迁移情况,通过免疫印迹(WB)法检测侵袭、迁移以及Wnt/β-连环蛋白(β-Catenin)通路相关蛋白表达情况。结果:与空白组、miR-19b inhibitor NC组相比,miR-19b inhibitor组miR-19b相对表达量、转染后48 h、72 h吸光度(A)值、侵袭与迁移细胞数、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、Wnt、细胞核β-Catenin表达水平显著降低(P<0.05),细胞质β-Catenin表达水平显著升高(P<0.05)。结论:下调miR-19b表达可能通过抑制Wnt/β-Catenin信号通路激活,从而抑制骨肉瘤MG63细胞侵袭、迁移。     

微小 RNA-520a-5p通过靶向调控鼠双微体基因影响胶质瘤细胞的增殖、凋亡、迁移和侵袭

目的探讨微小 RNA-520a-5p(miR-520a-5p)在胶质瘤发生发展中的作用和机制。方法选取 2016年 5月至 2018年 11月在宝鸡高新人民医院治疗的胶质瘤病人肿瘤组织作 56例为研究对象。实时荧光定量 PCR(qRT-PCR)检测 56例胶质瘤组织和 56例正常脑组织中 miR-520a-5p表达水平。体外培养胶质瘤 U251细胞,转染 miR模拟对照序列( miR-NC)、 miR-520a-5p9模拟物( miR-520a-5p mimics)至 U251细胞,分别采用四甲基噻唑蓝染色法( MTT)、流式细胞仪、 Transwell和蛋白质印迹法检测过表达 miR-520a-5p对 U251细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭及细胞中鼠双微体基因( MDM2)、细胞周期蛋白 D1(cyclin D1)、 P21、B淋巴细胞瘤 -2相关蛋白( Bax)、 B淋巴细胞瘤 -2(Bcl-2)、基质金属蛋白酶 2(MMP-2)和 E-钙黏蛋白( E-cadherin)蛋白表达的影响。双萤光素酶报告基因实验验证 miR-520a-5p与 MDM2靶向关系,蛋白质印迹法检测转染 miR-520a-5p mimics、miR-520a-5p抑制剂( anti-miR-520a-5p)对 U251细胞中 MDM2蛋白表达的影响。共转染 miR-520a-5p mimics和 MDM2过表达载体( pcD. NA3.1-MDM2)至 U251细胞,上述相同方法观察过表达 MDM2能否逆转过表达 miR-520a-5p对 U251细胞增殖、迁移和侵袭及相关蛋白表达的影响。结果与正常脑组织相比,胶质瘤组织中 miR-520a-5p表达降低( P<0.05)。与转染 miR-NC的 U251细胞比较,转染 miR-520a-5p mimics的 U251细胞 24 h、48 h和 72 h的 OD值［(0.36±0.04)比( 0.50±0.05)、(0.49±0.05)比( 0.95±0.09)、(0.71±0.07)比( 1.36±0.13)］、迁移细胞数［(67±6.26)比( 144±13.38)］、侵袭细胞数［(59±5.47)比( 135±13.12)］均降低( P<0.05),凋亡率［( 21.17±2.06)%比( 7.82±0.77)%］升高( P<0.05)细胞中 cyclin D1、Bcl-2和 MMP-2的蛋白表达水平均降低( P<0.05)而 P21、Bax和 E-cadherin的蛋白表达水平均升高( P<0.05miR-520a-5p可与 MDM2的 3’UTR靶向结合,mimics的 U251细胞中 MDM2蛋白水平显著低于转染 miR-NC的细胞,而转染 anti-miR-520a-5p的 U251细胞中 MDM2的蛋白水平显著高于转染 anti-miR-NC的细胞。与共转染 miR-520a-5p mimics与 pcDNA3.1的 U251细胞比较,共转染 miR-520a-5p mim. ics与 pcDNA3.1-MDM2的 U251细胞 24 h、48 h和 72 h的 OD值、迁移细胞数、侵袭细胞数均升高( P<0.05)凋亡率降低( P< 0.05)。,同时转染miR-520a-5p,细胞中 cyclin D1、Bcl-2和 MMP-2的蛋白表达水平均升高( P<0.05),而 P21、Bax和 E-cadherin的蛋白表达水平均降低( P<0.05)。结论 miR-520a-5p在胶质瘤组织中表达降低,过表达 miR-520a-5p可能通过靶向负调控 MDM2抑制胶质瘤 U251细胞增殖、迁移和侵袭,并诱导其凋亡。     

LncRNA Linc00152靶向miR-193a-3p对胃癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响

目的 探讨LncRNA Linc00152靶向调控miR-193a-3p对胃癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响。方法 采用qRT-PCR法检测正常胃黏膜细胞GES-1及4种胃癌细胞(MGC803、BGC803、SGC7901、AGS)中Linc00152的表达水平。MGC-803细胞分为pcDNA3.1-GFP-Linc00152组、pcDNA3.1-GFP组;AGS细胞分为si-Linc00152组、si-NC组,分别转染相应的Linc00152过表达和抑制载体。qRT-PCR法检测Linc00152、细胞周期素D1(cyclin D1,CCND1)和miR-193a-3p基因的表达水平,CCK-8检测细胞的活性,细胞克隆试验检测细胞的克隆能力,Annexin VFITC/PI染色后采用流式细胞术检测转染细胞凋亡率,Transwell法检测细胞侵袭,荧光素酶报告试验检测Linc00152和miR-193a-3p靶向关系,Western blotting检测Bcl-2、Bax、CCND1、E-钙黏蛋白(E-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)的蛋白表达水平。并将si-Linc00152组、si-NC组细胞接种裸鼠,观察裸鼠体质量和一般状态,处死后称重记录肿瘤体积、质量,qRT-PCR法测定肿瘤组织Linc00152、CCND1和miR-193a-3p的表达水平。结果 与GES-1细胞相比,胃癌细胞MGC803、BGC803、SGC7901、AGS中Linc00152的表达升高,其中Linc00152在胃癌MGC803细胞中表达较低,而在胃癌AGS细胞中的表达较高,选用胃癌MGC803、AGS细胞进行后续试验。与pcDNA3.1-GFP组相比,pcDNA3.1-GFP-Linc00152组细胞的活性显著升高,克隆能力增强,细胞凋亡减少,侵袭能力显著上升,CCND1、Bcl-2、波形蛋白的表达显著升高,miR-193a-3p和E-钙黏蛋白的表达显著降低。双荧光素酶报告基因系统检测结果显示,Linc00152可直接调控miR-193a-3p的转录活性,且Linc00152可显著上调MGC-803细胞CCND1蛋白表达。与si-NC组相比,si-Linc00152组的裸鼠体内的异种移植瘤体积和体质量显著下降,CCND1和Linc00152的表达显著下降,miR-193a-3p的表达显著上升。结论 Linc00152可靶向作用于miR-193a-3p促进胃癌细胞增殖、侵袭和迁移,其作用机制与细胞周期、上皮细胞间充质转化以及细胞凋亡有关。     

姜黄素通过调控miR-7641/PTPN14分子轴抑制乳腺癌发展进程的分子机制研究

目的 探讨姜黄素通过调控miR-7641/PTPN14分子轴抑制乳腺癌发展进程的分子机制。方法 采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测乳腺癌患者癌组织及细胞系中miR-7641表达情况;使用Kaplan-Meier方法作乳腺癌患者生存曲线;采用不同浓度的姜黄素处理细胞,或转染miR-7641 mimic、Anti-miR-7641及pcDNA-PTPN14载体,采用qRT-PCR检测miR-7641表达情况,MTT实验及克隆形成实验检测细胞增殖能力,Transwell小室法检测细胞迁移及侵袭,western blotting检测Ki67、pcDNA、CyclinD1、Bax、Bcl-2、caspase-3、caspase-8蛋白表达水平,采用双荧光素酶报告基因系统检测miR-7641与PTPN14靶向调控关系。结果 与癌旁组织或乳腺正常上皮细胞比较,miR-7641在乳腺癌患者癌组织及乳腺癌细胞系中高表达（P<0.01、0.001）,且miR-7641能够明显促进乳腺癌细胞的增殖、迁移及侵袭（P<0.05、0.01、0.001）,并促进Ki67、pcDNA、CyclinD1、Bcl-2蛋白表达,抑制Bax、caspase-3、caspase-8蛋白表达;miR-7641与PTPN14 3''-UTR靶向结合,姜黄素通过miR-7641/PTPN14分子轴抑制乳腺癌细胞的增殖、迁移及侵袭（P<0.01、0.001）,并抑制Ki67、pcDNA、CyclinD1、Bax蛋白表达,促进Bcl-2、caspase-3、caspase-8蛋白表达。结论 姜黄素可通过下调miR-7641促进PTPN14表达,进而抑制乳腺癌细胞的增殖、迁移及侵袭。     

miR-578调控长链脂酰辅酶A合成酶4表达对胃癌细胞增殖、侵袭的影响

目的 探讨miR-578调控长链脂酰辅酶A合成酶4（ACSL4）对胃癌细胞增殖及侵袭的影响。方法 选取人胃癌细胞MKN-45、SNU-1、MKN-7、KTAO3、N87及人正常胃黏膜细胞GES-1为研究对象,将MKN-45细胞分为对照组、miR-578 NC组、miR-578 mimic组、miR-578 mimic+pc-ACSL4组,测定各组MKN-45细胞活力及凋亡、侵袭、迁移能力,测定细胞中miR-578、ACSL4、凋亡相关蛋白（Bax、Caspase-3、Bcl-2）、侵袭相关蛋白（MMP-9、MMP-2）的表达,验证miR-578与ACSL4的靶向关系。结果 miR-578在人胃癌细胞中低表达;与对照组相比,miR-578 mimic组MKN-45细胞活力、侵袭、迁移能力、MMP-2、MMP-9、Bcl-2蛋白表达水平均显著降低（P<0.05）,凋亡能力、Caspase-3、Bax蛋白表达水平均显著升高（P<0.05）;与miR-578 mimic组相比,miR-578 mimic+pc-ACSL4组MKN-45细胞活力、侵袭、迁移能力、MMP-2、MMP-9、Bcl-2蛋白表达水平均显著升高（P<0.05）,凋亡能力、Caspase-3、Bax蛋白表达水平均显著降低（P<0.05）;荧光素酶实验结果显示,miR-578与ACSL4存在靶向调节关系。结论 miR-578可抑制人胃癌细胞MKN-45的增殖及迁移能力,可能是通过抑制ACSL4表达实现的。     

circ＿0000064靶向miR-503对甲状腺癌细胞生物学行为的影响

目的 探讨环状RNA 0000064(circ＿0000064)靶向微小RNA 503(miR-503)对甲状腺癌细胞生物学行为的影响。方法 实时定量PCR(RT-qPCR)分析21例甲状腺癌组织和对应癌旁组织中circ＿0000064和miR-503的表达水平。将circ＿0000064小干扰RNA(si-circ＿0000064)、miR-503模拟物、si-circ＿0000064+miR-503抑制物（anti-miR-503）分别转染甲状腺癌SW579细胞,采用平板克隆形成实验、细胞计数试剂盒（CCK-8）法检测SW579细胞增殖,Transwell实验检测SW579细胞迁移和侵袭,流式细胞术检测SW579细胞凋亡,蛋白质印迹法检测上皮型钙黏蛋白（E-cadherin）和神经型钙黏蛋白（N-cadherin）表达量。双荧光素酶报告实验和RT-qPCR分析circ＿0000064和miR-503的靶向调控关系。结果 甲状腺癌组织中circ＿0000064表达量显著高于癌旁组织（P<0.05）,miR-503表达量显著低于癌旁组织（P<0.05）。沉默circ＿000...     

lncRNA LINC00858靶向微小 RNA-363-3p促进肝癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的 探讨LINC00858通过靶向miR-363-3p对肝癌HCCLM3细胞生物学行为的影响.方法 选取2017年1月至2019年1月青海省第五人民医院收治的肝癌病人30例,获取其肝癌组织及其癌旁组织.设置si-NC组、si-LINC00858组、si-LINC00858+anti-miR-NC组和si-LINC00858+anti-miR-363-3p组.实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测LINC00858和miR-363-3p表达水平;双荧光素酶报告实验验证LINC00858和miR-363-3p的靶向关系;CCK-8检测细胞增殖活性;Transwell检测细胞迁移和侵袭;蛋白质印迹法(Western blotting)法检测相关蛋白表达.结果 肝癌组织中LINC00858高表达(2.85±0.27),miR-363-3p低表达(0.58±0.05).LINC00858靶向调控miR-363-3p;抑制LINC00858能够上调p21表达,下调细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)表达,降低细胞活力、迁移数、侵袭数(P<0.05).干扰miR-363-3p表达逆转了抑制LINC00858表达对肝癌HCCLM3细胞增殖、迁移和侵袭的影响.结论 抑制LINC00858通过靶向上调miR-363-3p抑制肝癌细胞的增殖、迁移和侵袭.     

芬太尼通过 ILF3-AS1/miR-132对卵巢癌细胞生长和转移的影响

目的探讨芬太尼对卵巢癌细胞生长和转移的影响及分子机制。方法 2018年 8月至 2019年 10月,体外培养卵巢癌细胞 A2780,用浓度分别为 0、0.5、5、50、500 ng/mL的芬太尼处理,作为不同浓度芬太尼处理组。将过表达的白细胞介素增强结合因子 3反义 RNA1(ILF3-AS1)(pcDNA3.1-ILF3-AS1、对照 pcDNA3.1)、抑制微小 RNA(miRNA/miR)-132表达(抗 -miR-132、对照 anti-miR-NC)的载体分别转染 A2780细胞,并以 500 ng/mL芬太尼处理,记为芬太尼 500+pcDNA3.1-ILF3-AS1组、芬太尼 500+pcDNA3.1组、芬太尼 500+anti-miR-132组、芬太尼 500+anti-miR-NC组。将 pcDNA3.1、pcDNA3.1-ILF3-AS1、si-NC、si-ILF3AS1转染至 A2780细胞中,记为 pcDNA3.1组、 pcDNA3.1-ILF3-AS1组、 si-NC组、 si-ILF3-AS1组。四甲基偶氮唑盐比色法( MTT)检测细胞存活率;克隆形成实验检测细胞克隆形成数; Transwell检测细胞迁移和侵袭;实时荧光定量 PCR(RT-qPCR)检测 ILF3-AS1和 miR-132的表达水平;荧光素酶报告实验检测 ILF3-AS1和 miR-132的靶向关系。结果与 0 ng/mL芬太尼处理组相比, 5、50、500 ng/mL的芬太尼处理的 A2780中 miR-132表达水平显著升高［( 1.39±0.13)、(1.68±0.17)、(2.34±0.23)比( 1.00±     

miR-125a-5p对卵巢癌细胞的增殖迁移和侵袭能力的影响

目的 探讨miR-125a-5p对卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其作用的靶基因。方法 购入正常人卵巢上皮细胞HOSEpiC,卵巢癌细胞SKOV3、A2780、ES2和HO8910各1株,通过实时定量聚合酶链式反应（RT-PCR）检测人卵巢上皮细胞HOSEpiC以及卵巢癌细胞SKOV3、A2780、ES2和HO8910中miR-125a-5p的表达水平。利用生物信息学方法预测miR-125a-5p的靶基因,构建预测靶基因3’端非编码区（3’-UTR）的野生型（WT）和突变型（mut）荧光素酶报告基因质粒,通过双荧光素酶报告基因法验证miR-125a-5p与预测靶基因的靶向作用。利用慢病毒感染的方法建立稳定过表达miR-125a-5p的SKOV3细胞,使用荧光定量PCR和Western blot检测靶基因的表达水平。利用细胞计数试剂盒-8（CCK-8）分析过表达miR-125a-5p的SKOV3细胞增殖能力的变化,通过Transwell迁移和侵袭试验分析过表达miR-125a-5p的SKOV3细胞迁移和侵袭能力的变化。结果 正常人卵巢上皮细胞HOSEpiC中miR-125a-5p的表达水平高于卵巢癌细胞SKOV3、A2780、ES2和HO8910中miR-125a-5p的表达水平,其中SKOV3中miR-125a-5p的表达水平最低,差异均有统计学意义（P<0.05）,选择SKOV3进行后续实验。生物信息学分析显示,miR-125a-5p能够靶向结合Rab3D的3’-UTR;双荧光素酶报告基因分析证实miR-125a-5p能够靶向作用于Rab3D的3’-UTR。筛选稳定表达miR-125a-5p和si-Rab3D及相应对照的SKOV3细胞,分别命名为SKOV3/miR-125a-5p组,SKOV3/si-Rab3D组,SKOV3/miR-NC组和SKOV3/si-NC组。在SKOV3/miR-125a-5p组中,Rab3D的表达水平低于SKOV3组和SKOV3/miR-NC组,差异均有统计学意义（P<0.05）。细胞增殖能力检测结果显示,与SKOV3组和SKOV3/miR-NC组相比,SKOV3/miR-125a-5p组在72小时和96小时细胞增殖能力降低,差异有统计学意义（P<0.05）。Transwell迁移和侵袭试验结果显示,SKOV3/miR-125a-5p组分别与SKOV3组和SKOV3/miR-NC组相比,细胞迁移和侵袭能力均显著下降,差异有统计学意义（P<0.05）。结论 miR-125a-5p能够靶向作用Rab3D,抑制卵巢癌细胞的增殖、迁移和侵袭。